胚胎植入前遗传学检测技术的临床应用现状分析

胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)是在体外受精-胚胎移植技术(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)的基础上,对卵母细胞(极体)或胚胎(卵裂期或囊胚)进行活检并行染色体和(或)基因检测,选择不致病和(或)染色体整倍体的胚胎进行移植,避免下一代发生相关的遗传性疾病或因染色体异常导致的流产,从而达到优生优育的目的。程德华等[1]详细总结了PGT应用范围,主要包括单基因疾病、染色体异常、高龄、反复种植失败以及复发性流产患者,还可应用于人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)分型、线粒体相关疾病以及携带严重疾病易感基因的人群。

CD7抗原表达与急性髓系白血病临床特征、细胞遗传学特点及预后的关系

目的探讨CD7抗原表达与急性髓系白血病(AML)临床特点、免疫分型、细胞遗传学改变及预后关系。方法选择2012年1月至2014年9月濮阳市安阳地区医院收治的AML患者154例,对CD7阳性AML与CD7阴性AML患者的临床特点、免疫表型、染色体分析及治疗效果进行比较。结果 154例患者中,CD7阴性表达123例(CD7-组),CD7阳性表达31例(CD7+组)。CD7+组与CD7-组患者性别、年龄、肝脾大比例、白细胞计数、血小板计数及骨髓原始细胞计数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。2组患者CD13、CD33、髓过氧化物酶、CD117及CD38阳性表达率比较差异均无统计学意义(P>0.05),但CD7+组患者CD34、人白细胞DR抗原(HLA-DR)阳性表达率显著高于CD7-组(P<0.05)。CD7+组多对应预后中等及预后差的染色体核型。CD7-组与CD7+组患者治疗缓解率分别为68.3%和40.9%;CD7+组治疗缓解率显著低于CD7-组(P<0.05)。结论 CD7阳性AML常伴CD34及HLADR等早期抗原高表达,相对应的染色体核型为预后中等或差者,临床治疗缓解率低;CD7抗原表达是AML预后不良的一项指标。

胚胎植入前单基因遗传学检测结合HLA配型诊疗X连锁高IgM综合征1例

目的 探讨胚胎植入前单基因遗传学检测(PGT-M)基因突变结合人类白细胞抗原(HLA)配型在X连锁高IgM综合征(X-HIGM)患者临床诊疗中的应用效率及可行性。方法 应用多重PCR结合二代测序技术针对X-HIGM的致病基因CD40LG及临近区域特异性单核苷酸多态性(SNP)位点进行鉴别构建单体型,另外针对HLA-A、HLA-B、HLA-DRA、HLA-DQB1及临近区域特异性SNP位点进行鉴别构建单体型。经本中心常规促排卵、体外受精及胚胎培养,随后进行胚胎活检;对于目标基因CD40LG进行PGT-M,包括直接突变检测和间接单体型连锁分析;对于HLA采用HLA复合体中多个位点的连锁分析来选择相合的胚胎。结果 先证者男孩,临床诊断为X-HIGM,基因检测分析显示其X染色体上的CD40LG基因有1个半合子突变,c.49_59del(p.L17Hfs*28)。该基因突变会导致X-HIGM。经家系验证发现,先证者母亲在该位点存在和先证者相同的杂合变异。对该家系通过单体型连锁分析之后进行CD40LG基因检测+HLA配型双重PGT。由于先证者母亲卵巢储备不足,只获得3枚卵子,受精后养成的囊胚也只有1枚,这枚囊胚的PGT结果为整倍体+未携带CD40LG基因突变+HLA配型半相合。此枚胚胎发育出生的婴儿没有患上X-HIGM,而且他的半相合的造血干细胞成功移植给了先证者。结论 PGT-M技术在该类血液遗传病家系中不仅可以阻断基因突变垂直传递,同时HLA相合胚胎的选择也为先证者儿童的造血干细胞移植治疗提供了新的曙光。

人类白细胞抗原G的表观遗传学调控机制在子痫前期中的研究进展

子痫前期(PE)是引起围生期孕产妇和胎儿死亡的主要原因,但其具体的发病机制还未完全阐明,胎盘浅着床是目前子痫前期发病的一个重要理论。滋养细胞侵袭不足,螺旋动脉重铸障碍导致胎盘缺血缺氧是子痫前期发病的根本原因。人类白细胞抗原G(HLA-G)有维持母胎免疫耐受、促进滋养细胞侵袭功能,但子痫前期患者胎盘HLA-G表达明显下降。表观遗传学重点讨论DNA序列不变的情况下基因发生的可遗传性的改变,其中DNA甲基化、微小RNA、组蛋白修饰直接参与HLA-G表达调控。

视神经脊髓炎谱系疾病的遗传学进展

视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorders,NMOSD)是一种主要累及视神经和脊髓的中枢神经自身免疫疾病,自身免疫性水通道蛋白4(AQP4)的IgG抗体是其特异性抗体。人类主要组织相容性复合体(human leucocyte antigen,HLA)与多种疾病有关,尤其是自身免疫性疾病。目前认为不同国家、地区和种族,人类白细胞抗原基因多态性与视神经脊髓炎(NMO)的相关性有差异,不同人群的NMO相关基因多态性不同。对AQP4基因多态性与NMO的关系有所争议。多种细胞因子被认为与NMO相关,但其基因多态性与NMO的关系尚未明确,本文基于前期文献的综述,研究NMOSD的基因易感性。

鼠疫杆菌pH6抗原:一种与腺鼠疫发病有关的蛋白质的遗传学、生物化学与毒力特征

鼠疫杆菌是一种兼性细胞内寄生菌,是引起腺鼠疫的病原体。鼠疫杆菌能够在巨噬细胞的吞噬溶酶体内存活并繁殖,其他细菌在这种环境中被迅速杀死。尽管在血液和组织中存在着具有氧化杀伤作用的单核细胞和名形核中性白细胞。

从猪分离的H_1N_1人流感病毒的抗原性及遗传学特性

１９９２年在日本北部，从猪体内分离到两株甲型流感病毒，血清学试验表明其血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）抗原同新近分离到的人Ｈ１Ｎ１病毒和猪Ｈ１Ｎ１病毒的ＨＡ和ＮＡ相比，与前者的关系更为密切。Ａ／猪／带／５／９２分离株的ＨＡ和ＮＡ基因与流行的人Ｈ１Ｎ１病毒的ＨＡ和ＮＡ基因关系非常密切。

HPV16E7抗原HLA-A2限制性CTL表位预测及其合成

目的 预测、合成、纯化及鉴定人乳头瘤病毒E7抗原的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位 ,为表位抗原特异性鉴定和临床研究提供靶肽。方法 采用超模体、多项式和量化模体方案相结合的方法 ,对靶抗原HPV16E7的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlymphocyte ,CTL)表位进行预测 ,并运用固相合成法合成多肽 ,经RP HPLC纯化及纯度分析 ,用质谱进行定性鉴定。结果 分别预测出了 16个、10个和 3个九肽表位 ,确定其中 5个九肽为候选合成表位 ,各合成肽的纯度都在 95 %以上。经质谱分析 ,各肽的分子量测定值与理论值相符。结论 超模体、多项式和量化模体方案联合应用可提高预测效率 ,避免了在研究E7抗原表位时盲目合成多肽 ;所合成的多肽为高纯度靶肽 。

mPEG修饰淋巴细胞HLA-A_2抗原的研究

目的用甲氧基-聚乙二醇(mPEG)修饰淋巴细胞表面HLA-A2抗原,阻断它与相应抗体的特异性结合。方法在不同温度、不同pH的磷酸缓冲液(PBS)中分别使用终浓度为12 mmol/L不同种类的mPEG对淋巴细胞表面HLA-A2抗原进行修饰。结果4 ℃及室温对淋巴细胞表面HLA-A2抗原修饰效果无明显影响,30 ℃及37 ℃条件下不利于修饰;高浓度mPEG在碱性环境中对HLA-A2抗原的修饰效果较好,且不同mPEG对修饰效果亦有影响。结论室温下,在pH7.4的PBS介质中mPEG-BTC(benzotriazole carbonate)对淋巴细胞表面HLA-A2抗原的修饰效果最好,其次为mPEG-丙酸-琥珀酰亚胺,mPEG-马来酰亚胺无修饰能力。

HLA-A_2相关肝癌抗原肽的初步研究

目的寻找肝癌细胞表达的肿瘤抗原肽。方法应用0.2mol/Lph3.0柠檬酸缓冲液酸洗肝癌细胞系HHCC,经SephadexG-25过滤及反向高效液相色谱分离纯化,获得可与HLA-I类分子结合的不同组分短肽。将其与抗原加工缺陷的HLA-A2+T2细胞反应,进行肿瘤细胞特异性表位测定,同时进行CTL杀伤鉴定。结果获得4个可与HLA-A2结合的组分,其中2个可以激发较强的CTL杀伤反应。结论肝癌细胞系HHCC中存在能够激发CTL特异性反应的肿瘤抗原肽,并证实上述寻找肿瘤抗原肽的技术路线具有可行性。

肿瘤抗原MAGE-3HLA-A2限制性CTL表位的预测

目的预测肿瘤抗原 MAGE- 3的 HL A- A2限制性 CTL 表位。方法以肿瘤特异性抗原 MAGE- 3为研究目标 ,采用基序方案和二级锚点相结合的 CTL 表位预测方法。结果预测出了 MAGE- 3的 6个 HL A- A2限制性 CTL 表位。结论所预测出的 6个 HL A- A2限制性 CTL 表位经后续实验筛选、鉴定后 ,可用于基于 MAGE-

肝癌相关肿瘤抗原HLA-A2限制性CTL表位的预测

目的 :预测肝癌肿瘤抗原的HLA A2限制性CTL表位 .方法 :选择与肝癌相关的肿瘤抗原MAGE 1,MAGE 3 ,MAGE 8,p5 3及AFP为研究目标 ,采用SYFPEITHI基序法远程预测系统和量化基序多项式法结合的预测方法进行HLA A 0 2 0 1限制性CTL表位预测 .结果 :共预测出与肝癌相关的肿瘤相关抗原的 3 5个HLA A2限制性CTL表位 .结论 :两种预测方法结果的一致性较好 ,所预测的 3 5个肿瘤抗原HLA A2限制性CTL表位经实验筛选、鉴定后 ,可望用于新型肝癌治疗性多肽疫苗的设计研究 。

sHLA-A*0201-抗原肽四聚体的构建与功能检测

目的:构建有功能的sHLA-A*0201-抗原肽四聚体,建立一套HLAⅠ类分子/抗原肽的四聚体制备技术。方法:利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A*0201-LMP2A426-434复合物分子,并在BirA酶的作用下生物素化,与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4∶1结合而形成HLA-A*0201-LMP2A426-434四聚体。获得的四聚体对长期混合淋巴细胞培养中增殖的抗原特异性CTL进行检测,同时用细胞毒实验验证。结果:荧光标记的亲和素与生物素化的HLA-A*0201-抗原肽复合物分子正确结合,制备的四聚体能够与长期混合淋巴细胞培养出的特异性T细胞结合。结论:从结构与功能上证实成功地获得有功能的HLA-A*0201-抗原肽复合物四聚体。为进一步研究T细胞识别机制与功能奠定了基础,也为过程复杂的HLA-抗原肽四聚体制备提供了可行的免疫学监控方法。

原发性高血压的免疫遗传学研究的探讨

对有高血压遗传家族史患者５０例（Ａ组），无遗传史高血压患者２１例（Ｂ组）以及正常健康人１００例（Ｃ组）进行免疫遗传学的部分检查：①人类白细胞抗原（ＨＬＡ）的检查结果显示，Ａ组Ｂ７５－ＤＱ７抗原频率明显升高，Ｂ７５－ＤＱ７呈连锁不平衡；Ｂ组Ｂ８抗原频率增加，Ａ２４－ＤＱ２连锁。家系单倍型分析发现，Ａ组的同胞中父母单倍型呈非随机分布。②遗传度分析结果显示，Ａ组的平均遗传度为５９．８８±８．１０％，表明遗传因素在高血压易患变异上起重要作用。③遗传方式的研究发现，原发性高血压属多基因遗传。④淋巴细胞亚群分析结果显示，ＣＤ４／ＣＤ８比值升高，淋巴Ｂ细胞百分率增高，同时伴有免疫循环复合物增加。因此，本研究认为，原发性高血压的形成与发展与免疫遗传的变化有关。

用顺序特异引物聚合酶链反应技术行HLA-A抗原DNA分型

作者采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ），建立了汉族人群ＨＬＡ－Ａ位点ＤＮＡ分型方法。研究采用ＰＣＲ－ＳＳＰ对３４５例肾移植供受者样本ＤＮＡ行ＨＬＡ－Ａ位点基因分型均获得成功。共检出Ａ位点等位基因总数６３５个，其中纯合子５５例，杂合子２９０例；可准确分辨ＨＬＡ－Ａ位点等位基因２０个，无假阳性和假阴性出现，重复率１００％，总耗时５小时。分型结果经标准ＤＮＡ验证和美国加州大学配型中心双盲验证完全符合。与标准血清学方法比较显示，６９份血清学空白位点中１６份存在第二个位点，１３份血清学分型错误，血清学总误差率９．０％。由此表明，用该研究建立的ＰＣＲ－ＳＳＰ方法行ＨＬＡ－Ａ位点ＤＮＡ分型，具有高分辨度、高特异性和简捷快速的特点，分型结果较血清学方法更加精确可靠，适合于临床应用。

别嘌醇严重不良反应的药物遗传学研究进展

别嘌醇可引起Stevens-Johnson综合征(SJS)和中毒性表皮坏死松解症(TEN)等严重的药物不良反应(SAR),而且很难预防,死亡率达10%～40%。近年药物遗传学研究发现SJS/TEN与人类白细胞抗原(HLA)-B基因之间存在强烈的关联,如别嘌醇引起的SJS和TEN证实与HLA-B*5801有着明显的相关性,而且其关联性具有种族特异性和专一性。HIA-B基因可以呈递抗原性药物活化特异性T细胞启动SJS/TEN的免疫反应,而且T细胞和天然杀伤(NK)细胞可以释放颗粒溶解素诱导角质形成细胞的广泛凋亡坏死。据此可以预测个体服用别嘌醇后是否容易引发重症药疹,指导临床安全用药。

免疫遗传学分子基础及在输血等领域的应用(续二)

免疫遗传学分子基础及在输血等领域的应用（续二）美国国立卫生研究院赵桐茂２血小板血型抗原血小板除了带有ＡＢＨ及ＨＬＡ－ＡＢＣ抗原外，本身还具有同种抗原，它们位于血小板膜糖蛋白（ＧＰ）上。抗原多态性由糖蛋白中氨基酸的排列顺序所决定。１９９０年国际血液学标...

TIL识别的HLA-A2限制性人黑色素瘤特异抗原肽的研究

目的探讨TIL识别的人黑色素瘤HLA-A2限制性的肿瘤抗原肽特性。方法通过亲和层析柱从三种肿瘤细胞系(624-Mel、Chap-Mel和JY)中纯化HLA-A2蛋白和结合的多肽分子,经弱酸高温处理和离心超滤后,应用反相-高效液相色谱层析(RT-HPLC)分离各多肽组份,并将其各组份与T2细胞共同孵育、进行重建TIL识别的人黑色素瘤特异表位试验,鉴定肽分子生物活性,通过质谱分析所获活性肽分子特性,参照活性肽序列,制备人工合成肽加以进一步证实。结果从RT-HPLC层析的624-Mel的肽组份,经特异表位鉴定发现3个活性峰(P19、P25和P31)。其中P31,TIL杀伤率达67%,质谱分析表明肽分子量为948,氨基酸序列为H+Ala Lue Trp Lue Phe Phe Gly Val Lue OH-的9肽分子。经特异表位测定表明人工合成肽具有纯化活性肽的生物活性特征。结论分离鉴定的这一9肽分子是一种TIL识别的HLA-A2限制性肿瘤抗原肽,为肿瘤防治、合成肽疫苗的研究奠定了可靠的实验基础。