稳定表达HLA-A33蛋白细胞系的建立

旨在构建能稳定表达HLA-A33蛋白的细胞系,并观察其在细胞中的表达水平。首先克隆取得HLA-A33基因,并将其插入慢病毒载体,经酶切和测序鉴定,确定载体构建正确。通过慢病毒系统感染正常RD细胞,将HLA-A33基因整合进RD细胞的基因组。提取构建细胞系的基因组做PCR鉴定,并通过免疫荧光和蛋白免疫印迹法检测,结果显示,HLA-A33基因成功整合入RD细胞基因组中,且在重组细胞系中成功表达。该细胞系可为A33等位基因与HBV感染后的慢性化以及EV71感染的相关研究提供试验参考。

基因测序鉴定新等位基因A33:03:14

目的鉴定一个广东省结直肠癌患者人群中发现的HLA新等位基因并检测分析其核苷酸序列。方法采用Qiagen试剂盒提取样本DNA,聚合酶链式反应-直接测序分型技术(PCR-SBT)获得HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DRB1的核苷酸序列及HLA高分辨率分型结果,并分析其与HLA-A*33:03:01基因序列的异同。结果发现1个与HLA-A*33:03:01核苷酸序列高度相似的新等位基因,与已知HLA-A*33:03:01相比,该等位基因在外显子3的碱基位置492出现T→A点突变,密码子位置149由GCT→GCA,所对应编码的氨基酸均为丙氨酸,为同义突变。结论基因测序结果表明该基因序列为新的HLA等位基因,已提交GeneBank,并于2013年2月被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*33:03:14。Genbank注册号为HWS10017874。