新疆维吾尔族HLA-Cw基因座遗传多态性调查

采用序列特异性寡核苷酸探针杂交技术(PCR SSOP)对146位新疆维吾尔族无关个体HLA Cw基因座进行基因分型,研究该民族HLA Cw基因座遗传多态性,建立新疆维吾尔族HLA Cw基因频率数据库。检出18种等位基因,基因频率分布在0.0069～0 2460,其中HLA Cw 04、07、08、14基因频率比较高,基因频率分别为0 2460、0.1151、0.1010、0.1202,共占新疆维吾尔族可检出等位基因的58.23%,PCR SSOP分型技术使新疆维吾尔族HLA Cw基因座空白基因频率降至0.0064。经χ2检验,基因型分布符合Hardy Weinberg平衡定律。建立民族HLA Cw基因座基因频率数据库,为临床器官移植配型、人类学、法医学提供重要的群体遗传学资料。

PCR-SSP分型检测上海汉族人群HLA-Cw位点血清学和非血清学鉴定的等位基因

应用补体介导的微量淋巴细胞毒实验可检出ＨＬＡＣｗ１～１０，但有２０％～５０％的空白（ｂｌａｎｋ）不能检出。利用ＰＣＲＳＳＰ对７０例上海汉族样本进行ＨＬＡＣｗ等位基因分型，首次在中国汉族人群中检出Ｃｗ１２０１／１２０２、１２０３、１３０１、１４、１６０１、１６０２、１７０１等非血清学鉴定的抗原，并对血清学鉴定抗原的基因进行分型，依次为Ｃｗ０１、０２、０３０２／０３０４、０３０３、０４、０５０１、０６０２、０７０１／０７０２／０７０３及０８。ＰＣＲＳＰ分型使上海汉族人群ＨＬＡＣｗ位点空白基因频率从０．３０７下降到０．０２８。１２例样本检出Ｃｗ０８，与原来认为中国人群中Ｃｗ８罕见的观点不符。结果证明，ＰＣＲＳＳＰ用于ＨＬＡＣｗ基因分型是快速、准确的。

79例广东汉族人群HLA-Cw及其KIR分析

目的:了解HLA-Cw与相应刺激性KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)和抑制性KIR在广东汉族人群中的分布。方法:对79例广东汉族骨髓移植供者,以DNA技术检测HLA-Cw和KIR表型。根据对KIR识别的特异性,将HLA-Cw分为HLA-Cwlys、HLA-Cwasn,分析个体HLA-Cw与相应刺激性或抑制性KIR的识别情况。结果:本组人群中,HLA-Cwlys、HLA-Cwasn的频率分别为26.6%、97.5%。表达KIR2DL1而无相应配体者62.0%,表达2DS1而无相应配体者15.1%。27.8%表达HLA-Cwasn而不表达相应KIR。25.3%、55.6%有抑制性HLA-Cwlys或HLA-Cwasn配体受体对,1.3%和14.0%的个体单独表达刺激性HLA-Cwlys或HLA-Cwasn配体受体对。15.1%的个体表达KIR2DS1而不表达HLA-Cwlys。结论:在广东汉族人群中,存在KIR表型与自身HLA表型分离现象。抑制性HLA-Cw-KIR配对表达高于刺激性配对,约1/5单独表达刺激性HLA-Cw-KIR配对。

中国北方汉族人群HLA-Cw^＊高分辨等位基因频率分析

本研究从基因水平了解HLA-Cw*位点在中国北方汉族人群中的分布频率,分析HLA-Cw*等位基因的群体遗传学特点及基因频率分布的地区差异。采用PCR-SSP分型技术对420名中国北方汉族人群HLA-Cw*位点进行高分辨基因分型,并对其分布规律进行统计学分析。结果表明:共检出30个HLA-Cw*等位基因,分布频率最高的有Cw*0102;0702;0602(0.1776;0.1217;0.1150),其他频率较高的等位基因依次为Cw*0304,0801,0303,0302,0401,1402。首次在该人群中检测到HLA-Cw*0506,0810,1510,1601和1701较少见等位基因。统计分析表明,HLA-Cw位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(p>0.05)。结论:采用高分辨等位基因分型,可准确了解HLA-Cw*位点等位基因在我国北方汉族群体中的分布规律和特征,为HLA-Cw*座位的相关研究提供了依据。

西安汉族HLA-Cw基因座遗传多态性研究

目的研究西安汉族HLA-Cw基因座遗传多态性,建立西安汉族HLA-Cw基因座基因频率数据库。方法采用序列特异性寡核苷酸探针杂交技术(PCR-SSOP)对130位西安汉族无关个体HLA-Cw基因座进行基因分型。结果共检出16种等位基因,基因频率分布在0.0077～0.1588,其中HLA-Cw*01、03、07基因频率较高,PCR-SSOP分型技术使西安汉族HLA-Cw空白频率降至0.0182。结论西安汉族HLA-Cw基因座基因型分布符合Handy-Weinberg平衡定律,所得到的基因频率数据可为临床器官移植配型、人类学、法医学提供重要的群体遗传学资料。

汉族人群中22个HLA-Cw等位基因全长序列单核苷酸多态性分析

为探讨HLA-Cw(Human leukocyte antigen-Cw)基因全长序列分子遗传多态性,文章对28个HLA-Cw基因型已知的汉族个体样本,采用长距离PCR技术和高保真性的Pfu酶,扩增HLA-Cw基因全长序列4.5kb,进行分子克隆和单倍体测序。采用群体遗传学研究方法分析了HLA-Cw等位基因全长序列中各亚区的单核苷酸多态性。结果表明:在28个样本中共检测出22种等位基因,序列均已提交GenBank和国际IMGT/HLA数据库并获得了认可;其中Cw*0706、Cw*030301、Cw*140201的全长序列为首次报道,尤其是Cw*0706内含子序列的获得,能够重新设计对该等位基因测序分型的引物,避免测序分型中可能对这一等位基因的漏检。将28个样本的56条单倍体序列用Clustal软件进行序列排比,输入到DnaSP4.0进行多态性分析,共发现244个SNPs,10处插入/缺失多态性。对HLA-Cw等位基因各亚区多态性的分析,发现第4内含子及以前并没有受到关注的第5外显子受到平衡选择的作用,在进化中受到了选择压力,预示着它们在免疫系统的进化过程中可能扮演着重要的角色。

深圳汉族人群HLA-Cw,-DQB1基因座等位基因的多态性

背景:HLA复合体是极其复杂的遗传系统,对其多态性的研究在法医学个体识别和亲权鉴定、群体遗传学、移植免疫、疾病相关等医学领域有重要的应用价值。目的:了解HLA-Cw,-DQB1基因座的等位基因在深圳汉族人群中的分布规律。设计、时间及地点:样本基因型的统计学分析,于2007-01/2008-06深圳市血液中心免疫遗传研究室完成。材料:样本来自中国造血干细胞捐献者资料库深圳地区志愿捐献者,使用EDTA-K2抗凝管采集外周血。方法:采用聚合酶链式反应-序列测定方法对深圳地区226名无关供者HLA-Cw,-DQB1基因座的2,3外显子进行序列测定与分析。等位基因频率采用直接计数法计算,Hardy-Weinberg平衡检验采用x2检验。主要观察指标:样本HLA-Cw,-DQB1基因座的基因型。结果:226个样本中共检测到25个Cw等位基因。其中Cw*0102,Cw*0702的频率最高(0.1881),其他频率较高的等位基因依次为Cw*0304,Cw*0302,Cw*0401及Cw*0801,Cw*0303,Cw*0602。该位点基因型观察值与期望值经χ2检验符合Hardy-Weinberg平衡定律(x2=116.00,u=1.78,ν=91,P>0.05)。226个样本中共检测到17个DQB1等位基因。其中DQB1*0301占绝对优势,其基因频率为0.2124。其他频率较高的等位基因依次为DQB1*0303,DQB1*0601,DQB1*0502,DQB1*0602,DQB1*0302,DQB1*0401。该位点基因型观察值与期望值经χ2检验符合Hardy-Weinberg平衡定律(x2=101.34,u=0.78,ν=91,P>0.05)。经计算HLA-Cw位点的杂合度为0.8878,个体识别力为0.9769,非父排除率为0.7731,多态性信息含量为0.8757;HLA-DQB1位点的杂合度为0.8894,个体识别力为0.9762,非父排除率为0.7533,多态性信息含量为0.9659。结论:深圳汉族人群HLA-Cw及DQB1基因座是高度杂合、具有较高鉴别力和丰富信息含量的遗传标记,能较好地反映群体遗传特征。

中国壮族群体人类白细胞抗原HLA-Cw基因遗传多态性的测序分型研究

本研究探讨壮族人群HLA-Cw基因的遗传多态性。采用自行建立的HLA-Cw基因测序分型方法,对150份壮族非血缘个体血样HLA-Cw基因的第2、3、4外显子进行序列测定;测序反应产物用ABI PrismTM 3730测序仪电泳检测,用Assign3.5分析软件分析结果。结果表明:经Assign3.5软件分析,能直接分析出明确的HLA-Cw基因型的样本占33.33%;排除罕见等位基因后,可判定HLA-Cw基因型的样本占63.33%;其余的5份样本(3.33%)经PCR-SSP高分辨分型试剂盒检测后,可判定基因型;共检出了16种HLA-Cw等位基因,频率大于10%的4种常见等位基因为Cw*0304>Cw*0102>Cw*0801>Cw*0702,基因多样性(gene diversity,GD)为0.9297。Cw*01,03,07,08,12,14(Cw1组)与Cw*02,04,05,06,15,16,17,18(Cw2组)的频率分别为0.8967和0.1032,与KIR的识别方式以Cw1组等位基因为主。在检出的51种基因型中,纯合子比例占9.33%(14/150),基因型频率的分布符合Hardy-Weinberg定律。结论:本研究所得到的壮族群体HLA-Cw位点的等位基因频率及其分布特点,可为人类学、HLA-Cw基因与疾病关联等研究提供基础数据。

银屑病易感基因HLA-Cw*0602的构建

目的扩增银屑病易感基因HLA-Cw* 0602,为进一步利用该易感基因制备银屑病转基因动物模型提供试验基础。方法以银屑病患者全血基因组为模板,用HLA-Cw* 0602特异性引物筛选含有该基因的阳性模板,根据HLA-Cw*0602基因全长序列设计引物,利用聚合酶链式反应,扩增出相应基因片段,并克隆至质粒载体pMD-19T Simple Vector。结果PCR鉴定、酶切鉴定和测序鉴定结果显示HLA-Cw* 0602基因构建成功。结论成功构建HLA-Cw* 0602基因,为后续银屑病转基因动物的制备奠定基础。

中国南京地区汉族献血者HLA-Cw及其KIR2D基因型频率分析

目的:对中国南京地区汉族献血人群HLA-Cw与其配体KIR2D基因型频率分别进行调查,并分析两者的配对和识别方式,为今后研究其在疾病发展中的作用提供依据。方法:应用PCR-SSP技术对江苏省血液中心241名汉族合格无偿献血者进行HLA-Cw和KIR2D基因分型,根据HLA-Cw与KIR2D基因的识别方式,分析个体HLACw与相应激活型或抑制型KIR2D受体的识别情况。结果:南京地区献血人群中HLA-C1的表达频率为76.35%,远高于HLA-C2的表达频率(23.65%),C1/C2等位基因的表达符合Hardy-Weinberg平衡;与HLA-Cw配对的5个KIR2D(L1、L2、L3、S1和S2)的表达频率分别为:97.93%、29.05%、98.34%、29.05%和21.16%;HLA-C1/C1和2DL1+/2DL2-/2DL3+/2DS1-/2DS2-的配对组合最多(75/214)。结论:本研究初步提供了本地区献血人群HLACw和5个KIR2D受体基因多态性数据。通过配对分析发现,抑制型HLA-Cw-KIR配对表达高于活化型配对,提示HLA-Cw第80位密码子、KIR2D受体基因的组合层面上存在着以抑制型信号通路为优势的共同特点。

HLA-B27、HLA-Cw、KIRs与强直性脊柱炎

强直性脊柱炎(AS)是一种慢性进行性炎症性关节炎,具有明显的家族倾向。虽然,人类白细胞抗原B27(HLA-B27)被认为与AS的发病密切相关,但是由于AS发病机制复杂,HLA-B27仅为导致AS易感的主要基因之一。近年来研究发现,自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIRs)和HLA-Cw基因与AS的发生发展也有一定的相关性,且HLA-Cw与活化性/抑制性KIRs之间的失衡可能是影响AS发病机制的关键因素。

HLA-Cw6基因对生物制剂治疗银屑病疗效影响的Meta分析

目的:Meta分析评价HLA-Cw6基因阳性对生物制剂治疗银屑病疗效的影响。方法:检索1976年1月至2018年12月Pubmed、Embase、The Cochrane Library、中国生物医学文献数据库、万方数据库及中国知网等数据库中关于HLA-Cw6基因与生物制剂疗效关联的文献,对最终符合入选标准的文献进行Meta分析。结果:符合入选标准的文献共11篇,涉及三种生物制剂,包括:2项关于IL17A拮抗剂Secukinumab研究,3项抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)拮抗剂的研究及6项IL-12/IL-23拮抗剂Ustekinumab的研究。对Ustekinumab疗效关联的6项研究Meta分析显示治疗后HLA-Cw6阳性患者中PASI评分下降75%的比例(PASI75)高于HLA-Cw6阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05 )。Secukinumab的2项研究及TNF-α拮抗剂治疗的3项研究Meta分析显示HLA-Cw6阳性患者中PASI75较HLA-Cw6阴性者无明显增高,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:携带HLA-Cw6基因患者对IL-12/IL-23拮抗剂Ustekinumab的疗效优于未携带者,HLA-Cw6对Secukinumab和TNF-α拮抗剂疗效无明显影响。

吉林省汉族154例正常人HLA-Cw及KIR基因型频率的分析

目的:了解中国人HLA-Cw与KIR的识别方式,为今后研究其在疾病中的作用提供理论基础。方法:对154例吉林汉族无偿献血者,以PCR-SSP技术进行KIR和HLA-Cw基因分型。根据HLA-Cw与KIR识别方式,分析个体HLA-Cw与相应激活性或抑制性KIR受体的识别情况。结果:吉林汉族人群中,HLA-C2Lys80+2DL1的组合频率最高为27.27%,其次分别HLA-C1Asn80+2DL2/2DL3为68.83%,2DS2+HLA-C1Asn80为9.74%,2DS1+HLA-C2Lys80为9.74%,分别有72.08%和21.43%的观察对象表达KIR2DL1、KIR2DS1而无相应HLA-Cw表达;21.43%的个体表达KIR2DS1而不表达HLA-Cwlys-KIR2DL1配对。2.60%的个体表达KIR2DS2而不表达HLA-Cwasn-KIR2DL2/L3配对。结论:在吉林汉族人群中,抑制性HLA-Cw-KIR受配体对表达高于活化性受配体对,约20%的个体单独表达激活性HLA-Cw-KIR受配体对。

反复自然流产夫妇HLA-Cw等位基因多态性分析

目的:探讨免疫遗传因素在反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)发病中的作用。方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,分析80对RSA患者夫妇和75对正常夫妇HLA-Cw等位基因的多态性。结果:病例组和对照组间Cw01-08各个等位基因阳性率均无统计学差异,但RSA组中夫妇双方均检测到Cw第Ⅱ组等位基因(Cw分子α重链上第80位为赖氨酸)者显著少于对照组,而RSA组中夫妇双方均未检测到Cw第Ⅱ组等位基因者显著多于对照因缺失可能与早期反复自然流产的发病有关。组,差异有统计学意义(P=0.013)。

HLA-Cw基因测序分型的研究

目的建立HLA-Cw位点测序分型技术,以用于无关供/受者HLA-Cw基因配型等基础应用研究。方法对HLA-Cw位点的第2和第3外显子,设计、合成一对PCR引物和4条测序引物,探索最佳的PCR反应体系和扩增条件,采用PCR引物扩增HLA-Cw基因的第2、第3外显子和第2内含子,扩增产物经纯化后作为测序模板,进行4个测序反应,产物经酒精/EDTA/NaAc法纯化,用ABIPrismTM3100测序仪电泳检测,相关的分析软件分析HLA基因型。检测分型结果的可靠性采用基因型已知的U-CLA国际HLA室间质控的DNA样本进行验证。结果检测6例UCLA国际HLA室间质控的DNA样本,HLA-Cw等位基因型与UCLA公布的结果完全一致。结论本文的HLA-Cw基因测序分型方法准确、可靠,具有广泛的应用前景。

新疆地区HLA-Cw基因多态性与宫颈癌的相关性研究

目的了解新疆地区健康人群及宫颈癌(cervical cancer,CC)患者HLA-Cw等位基因分布情况,探索HLA-Cw等位基因与CC的相关性。方法选取2012-06-01至2014-06-01期间新疆医科大学附属肿瘤医院收治的308例CC患者(其中维吾尔族患者198例,汉族患者110例)及同时期204例健康人群(其中维吾尔族健康人群101例,汉族健康人群103例),采集外周血并分离提取DNA,检测HLA-Cw基因,计算各等位基因的基因表现频率,比较不同亚组人群及临床特征之间基因表现频率的差异。结果 1.健康人群及CC患者均检出13种相同HLA-Cw等位基因。2.维族健康对照组HLA-Cw05基因表现频率明显高于汉族健康对照组,差异有统计学意义(Pc<0.05);维族宫颈癌组HLA-Cw05基因表现频率明显低于维族健康对照组,差异有统计学意义(Pc<0.05);维族宫颈癌组HLA-Cw01、HLA-Cw03、HLA-Cw08基因表现频率明显低于汉族宫颈癌组,差异有统计学意义(Pc<0.05);维族宫颈癌组HLA-Cw06、HLA-Cw12基因表现频率明显高于汉族宫颈癌组,差异有统计学意义(Pc<0.05)。3.宫颈癌HLA-Cw基因表现频率在HPV16感染状态、年龄及病理类型的分布上差异无统计学意义(Pc<0.05)。结论同HLA-Cw等位基因在不同民族之间起着不同的作用,HLA-Cw05可能是维族宫颈癌保护性基因。

吉林省汉族154例正常人HLA-Cw及KIR基因型频率的分析

目的了解中国人HLA-Cw与KIR的识别方式,为今后研究其在疾病中的作用提供理论基础。方法对154名吉林汉族无偿献血者,以PCR-SSP技术进行和HLA-Cw基因分型。根据HLA-Cw与KIR识别方式,分析个体HLA-Cw与相应激活性或抑制性KIR受体的识别情况。结果吉林汉族人群中,HLA-C2Lys80+2DL1的组合频率最高为27.27%,其次分别HLA-C1Asn80+2DL2/2DL3为68.83%,2DS2+HLA-C1Asn80为9.74%,2DS1+HLA-C2Lys80为9.74%。分别有72.08%和21.43%的观察对象表达KIR2DL1、KIR2DS1而无相应HLA-Cw表达;21.43%的个体表达KIR2DS1而不表达HLA-Cwlys-KIR2DL1配对。

HLA-Cw*0602与银屑病的关联研究

为研究HLACw*0602与DRB1*07两个基因在银屑病发病中的作用,采用PCRSSP基因分型方法,用一对引物扩增DRB1*073对引物扩增Cw*0602,扩增引物在含溴乙锭的1%琼脂糖凝胶电泳后,紫外灯下定型。结果,病人组和对照组Cw*0602阳性数分别为63.0%和7.4%,RR=21.3P<0.00001DRB1*07为54.3%和18.5%,RR=5.2P<0.0003。表明HLACw*0602是与银屑病关联的基因之一。

HLA-Cw在广东汉族人群中的分布频率及其意义的初步分析

目的 :检测HLA Cw在广东汉族人群的分布频率 ,初步分析该人群中KIR与HLA Cw之间识别方式的特点及意义。方法 :骨髓移植供者 12 2例 ,ACD抗凝血提取DNA ,半量全自动PCR RSSO分型检测Cw。结果 :广东汉族人群HLA Cw基因频率分布由高至低依次为 :Cw 0 3(0 2 371) >Cw 0 7(0 2 15 9) >Cw 0 1(0 175 2 ) >Cw 0 8(0 112 9) >Cw 0 4 (0 0 5 0 5 ) >Cw 14、15(0 0 4 19) >Cw 12 (0 0 376 ) >Cw 0 6 (0 0 333) >Cw 0 5 (0 0 0 82 ) >Cw 16 (0 0 0 4 1)。第一组Cw 0 2 ,0 4 ,0 5 ,0 6识别KIR分子中2DL 2DSI;第二组Cw 0 1,0 3,0 7,0 8识别KIR分子中 2DL2 2DL3;2DS2 2DS3。两组分布频率相比有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :广东汉族人群HLA Cw 0 1,0 3,0 7,0 8出现频率较高 ,其与KIR的识别方式均属第二组。

皖籍汉族人寻常型银屑病与HLA-Cw*0602等位基因的关联研究

为探讨皖籍汉族人寻常型银屑病(PV)与HLA-Cw0602等位基因的关联性,运用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法,检测了安徽籍汉族人166例PV患者HLA-Cw0602等位基因频率,分析了携带该等位基因的PV患者与其家族史的相互关系,并与248例健康对照相比较。结果:病例组HLA-Cw0602等位基因频率较对照组显著升高(17.9%vs5.4%,OR=4.13,95%可信限2.38～7.16,P<0.001),且无性别差异;携带HLA-Cw0602等位基因的PV患者发病年龄早于不具有该等位基因的PV患者;有PV家族史患者携带HLA-Cw0602等位基因的频率显著高于无PV家族史患者(37.4%vs11.5%,OR=5.62,95%可信限2.54～12.57,P<0.001)。表明皖籍汉族人PV与HLA-Cw0602等位基因高度关联,且携带该等位基因的PV患者易发生早发型(发病年龄<40岁)银屑病,并有家族倾向性。