基底细胞型乳腺癌患者肿瘤内树突状细胞呈HLA-DR抗原表达细胞的临床意义

目的:观察基底细胞型乳腺癌患者肿瘤内树突状细胞、呈HLA-DR抗原表达细胞引起的抗肿瘤免疫并探讨其临床意义。方法:应用免疫组织化学二步法检测基底细胞型乳腺癌患者肿瘤组织内S-100蛋白阳性的树突状细胞及呈HLA-DR抗原阳性表达的细胞。结果:基底细胞型乳腺癌患者肿瘤组织内缺乏树突状细胞(2/22,占9.09%),数量明显少于非基底细胞型乳腺癌患者(138/138,占100%),癌细胞的HLA-DR抗原阳性表达(4/22,占18.1%)明显少于非基底细胞型乳腺癌(106/138,占76.8%)。结论:基底细胞型乳腺癌患者肿瘤组织缺乏由树突状细胞、淋巴细胞及HLA-DR抗原阳性表达的癌细胞引起的特异性抗肿瘤免疫。

正常年轻恒牙髓中HLA-DR抗原表达细胞的免疫组织化学研究

目的 探讨正常年轻恒牙发育过程中HLA -DR阳性细胞阳性细胞抗原呈递细胞的变化特点 ,为HLA -DR参与牙髓局部免疫防御及生长发育提供重要的理论基础 ;为临床上选择保存活髓的时机提供实验依据。方法 用免疫组织化学染色的方法标记牙髓HLA -DR阳性细胞 ,并进行定量研究。结果 根尖孔的闭合组与未闭合组的牙髓组织中均存在HLA -DR阳性细胞 ,闭合组阳性细胞数少于未闭合组阳性细胞数 (P <0 0 5 )。结论 正常年轻恒牙牙根发育的不同阶段牙髓中均存在HLA -DR阳性牙髓树突状细胞 ,呈递外界抗原产生免疫应答 ,保证了牙齿的正常发育 ;随着牙根尖孔的闭合 ,髓腔的减小 ,HLA -DR细胞数量下降 ,保持自身稳定 ,维持牙髓的生理平衡。

幽门螺杆菌及其vacA基因亚型和cagA基因与胃上皮HLA-DR抗原表达的关系

【目的】探讨幽门螺杆菌及其空泡毒素基因 (vacA)亚型、细胞毒素相关基因 (cagA)与胃上皮HLA DR抗原表达间的关系。【方法】①自 39例幽门螺杆菌阳性患者中分离培养出 39株幽门螺杆菌菌株 ,采用PCR方法鉴定 39株菌株的ca gA及vacA亚型 ;②采用HLA DR小鼠抗人单克隆抗体 ,对上述已行cagA及vacA亚型鉴定的幽门螺杆菌阳性患者及 2 2例阴性患者的胃窦活检标本行免疫组化染色。【结果】①幽门螺杆菌阳性患者胃上皮HLA DR表达较阴性患者更显著 ;②幽门螺杆菌定植密度与胃上皮HLA DR抗原表达程度间存在正相关 ;③感染cagA+ 菌株患者较感染cagA-株者胃上皮HLA DR抗原表达更明显 ;④本研究中vacAs1a/m2亚型占 90 % ,故未对不同vacA亚型与胃上皮HLA DR表达间的关系进行统计分析。【结论】①幽门螺杆菌感染可诱导胃上皮HLA DR抗原异常表达 ;②cagA+ 菌株可能通过胃上皮HLA Ⅱ类分子介导而与宿主发生更为密切的相互作用 ,从而较cagA-菌株引起更为显著的胃上皮损伤。

卵巢早衰患者卵巢组织HLA-DR抗原表达及意义

目的:探讨卵巢早衰患者卵巢组织HLA-DR抗原表达及意义。方法:应用免疫组化技术检测40例卵巢早衰患者及45例生育年龄女性卵巢组织中HLA-DR抗原的表达。结果:⑴45例正常卵巢组织中各级卵泡周围颗粒细胞HLA-DR抗原均呈阴性表达;240例POF卵巢组织HLA-DR抗原表达明显高于正常卵巢组织,13例可见颗粒细胞上HLA-DR表达,其中次级卵泡周围复层颗粒细胞为灶状阳性。结论:POF患者卵巢组织颗粒细胞上HLA-DR抗原异常表达,证实自身免疫是卵巢早衰的致病因素之一。

蕈样肉芽肿患者外周血淋巴细胞HLA-DR抗原表达的研究

目的探讨蕈样肉芽肿（ＭＦ）患者外周血淋巴细胞的ＨＬＡＤＲ抗原表达及其意义。方法应用流式细胞术及免疫双荧光染色法，共检测１０例ＭＦ。结果ＭＦ患者外周血ＨＬＡＤＲ＋淋巴细胞数及ＣＤ＋３ＨＬＡＤＲ＋淋巴细胞数与正常对照的差异均有显著性意义（Ｐ分别＜０．０１，＜０．００１），ＨＬＡＤＲ＋淋巴细胞数及ＣＤ＋３ＨＬＡＤＲ＋淋巴细胞数与疾病临床分期均呈显著正相关（ｒ值分别为０．７９６、０．７６７，Ｐ均＜０．０１）。ＣＤ＋４ＨＬＡＤＲ＋Ｔ细胞、ＣＤ＋８ＨＬＡＤＲ＋Ｔ细胞均高于正常对照，差异非常显著（Ｐ分别＜０．０５、＜０．００１）。结论ＭＦ患者外周血淋巴细胞ＨＬＡＤＲ抗原表达普遍存在异常，与ＭＦ的发病密切相关。

红斑狼疮皮损中浸润细胞免疫表型和角质形成细胞HLA-DR抗原表达的研究

应用抗ＨＬＡＤＲ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０的单克隆抗体和ｓｔｒｅｐｔｒａｖｉｄｉｎｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｓｔａｉｎｉｎｇ（ＳＰ）技术对１０名正常人皮肤，１６例ＳＬＥ皮损和１９例ＤＬＥ皮损进行了免疫组化研究。观察到正常人皮肤角质形成细胞未见ＨＬＡＤＲ抗原表达，而ＳＬＥ（６／１６），ＤＬＥ（８／１９）皮损处角质形成细胞可以表达ＨＬＡＤＲ抗原。在ＳＬＥ、ＤＬＥ真皮内浸润细胞主要为Ｔ淋巴细胞（ＣＤ３＋浸润细胞），且以ＴＨ细胞（ＣＤ４＋浸润细胞）占优势。另外，还发现在两种ＬＥ表皮角质形成细胞表达ＨＬＡＤＲ抗原处，真皮内可见ＣＤ３＋浸润细胞和激活的Ｔ淋巴细胞（ＨＬＡＤＲ＋浸润细胞）。讨论了ＬＥ皮损角质形成细胞ＨＬＡＤＲ抗原表达及其与病损内浸润细胞免疫表型的关系。ＬＥ皮损处ＨＬＡＤＲ＋角质形成细胞可能具有抗原递呈作用，而角质形成细胞异常表达ＨＬＡＤＲ抗原则可能与真皮内浸润单个核细胞或淋巴细胞释放的ＩＦＮα，ＴＮＦγ等有关。

葡萄球菌性超抗原与角朊细胞HLA-DR抗原表达的研究

目的进一步探讨银屑病（PS）发病与超抗原（SA）的关系。方法采用流式细胞（FACS）定量分析葡萄球菌肠毒素B（SEB）活化的PS和正常人外周血淋巴细胞（PBLC）24h培养上清液对角朊细胞（KC）表达HLA－DR抗原的影响。结果其上清液可明显诱导KC表达HLA－DR抗原，且PS组诱导表达作用强于正常人组（P＜0．05）。结论诱导KC表达HLA－DR抗原可能是SA活化的淋巴细胞作用于KC，诱发PS的途径。

几种受体激动剂对IFN-γ诱导人单核细胞HLA-DR抗原表达的影响

用细胞体外培养的方法，探讨了几种受体激动剂对人外周血单核细胞ＨＬＡＤＲ抗原表达的影响。结果显示：①去甲肾上腺素（ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎｅ，ＮＡ）对ＩＦＮγ诱导ＨＬＡＤＲ抗原表达具有双向调节作用。１０－１２，１０－１０ｍｏｌ／ＬＮＡ具有促进作用；１０－６，１０－４ｍｏｌ／ＬＮＡ呈现抑制作用。相应α受体阻断剂１０－５ｍｏｌ／Ｌ酚妥拉明（ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ）可以完全阻断其促进作用，而对抑制作用的阻断则不明显。②１０－１０～１０－４ｍｏｌ／Ｌ异丙肾上腺素（ｉｓｏｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ，ＩＳＯ）对ＩＦＮγ诱导ＨＬＡＤＲ抗原表达具有抑制作用，抑制程度随ＩＳＯ浓度的增加而加强，且这种作用可被１０－５ｍｏｌ／Ｌ普洛萘尔（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）完全或部分阻断。③毛果芸香碱（ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ）１０－１１～１０－３ｍｏｌ／Ｌ对ＩＦＮγ诱导ＨＬＡＤＲ抗原表达无明显影响。

心内直视术患者CD3^+T淋巴细胞及CD14^+单核细胞HLA-DR抗原表达的动态变化及其意义

目的探讨心内直视术患者手术前、中、后外周血CD3+T淋巴细胞人白细胞抗原-DR(HLA-DR)抗原表达及CD14+单核细胞HLA-DR抗原表达的动态变化及意义。方法用全自动血液分析仪测定18例心内直视术患者术前、手术即刻及术后1 d外周血中白细胞总数、中性粒细胞及单核细胞比值;并用流式细胞术测定CD3+T淋巴细胞及CD14+单核细胞HLA-DR抗原的表达。结果与手术前相比,手术时CD3+T淋巴细胞HLA-DR抗原表达显著下调(<0.05),单核细胞在白细胞中的比值也下调(<0.05),而CD14+单核细胞HLA-DR抗原表达无显著差异。与手术时相比,术后CD3+T淋巴细胞HLA-DR抗原表达上升(<0.05),单核细胞比值也上升(<0.05),CD14+单核细胞HLA-DR抗原表达无显著差异。术前、术中及术后白细胞总数及中性粒细胞比值差异均无统计学意义(均>0.05)。结论 CD3+T淋巴细胞HLA-DR抗原表达和单核细胞能反映心内直视术前后患者机体的免疫功能和炎症变化,动态监测T淋巴细胞表面HLA-DR抗原的表达可作为判断预后的一项指标。

胃癌及癌前病变中树突状细胞浸润、HLA-DR抗原表达的临床意义

目的 探讨S 10 0 + DC浸润、HLA DR抗原的表达在胃癌发生、发展中的作用及临床意义。方法 应用免疫组织化学方法对 4 3例胃癌、2 4例癌前病变组织中的S 10 0 + DC、HLA DR进行检测。结果 S 10 0 + DC、HLA DR在胃癌组、癌前病变组中的表达均显著高于正常胃粘膜组 (P <0 .0 5 )。在低分化、淋巴结转移和远处转移胃癌患者中S 10 0 + DC数目明显减少 (P <0 .0 1)。HLA DR在低分化胃癌中的阳性表达率显著降低 (P <0 .0 5 )。S 10 0 + DC与HLA DR的表达有正相关性。结论 胃粘膜中S 10 0 + DC与HLA DR的变化反映了胃癌局部免疫状态 ,二者在胃癌发生、发展中起重要作用。

急性非淋巴细胞白血病与HLA-DR抗原表达关系的研究

应用免疫酶标染色法检测了５７例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）患者的ＨＬＡ－ＤＲ和其它细胞免疫类型，其中３８例（６６７％）表达ＨＬＡ－ＤＲ抗原，表达ＨＬＡ－ＤＲ抗原的ＡＮＬＬ常伴有ＣＤ７的表达，而较成熟的髓系细胞表面标记ＣＤ１５则不表达，ＨＬＡ－ＤＲ＋的ＡＮＬＬ与ＦＡＢ亚型Ｍ１、Ｍ５ａ有密切关系。ＨＬＡ－ＤＲ－组缓解机会大于ＨＬＡ－ＤＲ＋组（Ｐ＜００５），检测ＨＬＡ－ＤＲ抗原不仅有利于ＡＮＬＬ的诊断而且有助于判断预后。

白血病细胞HLA-DR抗原表达的研究

主要组织相容性抗原(MHC抗原)在免疫反应中有着重要作用,人类MHC-Ⅰ类抗原主要为HLA-DR抗原。为探讨白细胞抗原表达与肿瘤细胞分化程度、转移性及预后的关系,本文对92例白血病患者骨髓或末梢血肿瘤细胞进行了HLA-DR抗原测定并作了临床观察。 对象及方法 一、对象:92例白血病患者,男性81例,女性11例,年龄12～74岁,平均年龄39岁。其中急性白血病70例(急非淋52例,急淋18例,初发者61例,复发者9例),慢性淋巴细胞性白血病3例,慢性粒细胞性白血病急性变9例。本组病人均经血液专科临床和实验室确诊。

再生障碍性贫血患者T细胞亚群及HLA-DR抗原表达的意义

目的 :检测再生障碍性贫血患者外周血T淋巴细胞亚群CD4 + 、CD8+ 及HLA DRT抗原的表达 ,探讨再生障碍性贫血发病的免疫机制 ,为再障的临床诊断和治疗提供理论依据。方法 :采用免疫组化斑点印迹技术进行检测 ,并用薄层扫描仪对所有班点印迹信号进行扫描。结果 :再障患者CD4 + 降低 ,CD8+ 升高 ,CD4 + /CD8+ 比值倒置 ,HLA DR表达增高。结论 :T淋巴细胞亚群比例失衡及HLA

内皮素3、黑色素瘤优先表达抗原表达水平与子宫内膜癌临床特征及预后的关系

目的探究内皮素3(EDN3)、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)表达水平与子宫内膜癌临床特征及预后的关系。方法选取郑州大学第二附属医院2018年9月至2020年9月收治的80例子宫内膜癌患者为研究对象,在术中收集癌组织和癌旁组织;采用定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组化法检测EDN3、PRAME表达;EDN3、PRAME与子宫内膜癌患者预后的关系采用Kaplan-Meier生存曲线分析;子宫内膜癌患者预后的影响因素采用COX回归分析。绘制受试者操作特征曲线分析EDN3、PRAME对子宫内膜癌预后不良的预测价值。结果子宫内膜癌组织EDN3信使核糖核酸(mRNA)表达水平和阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.05),PRAME mRNA表达水平和阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。子宫内膜癌组织中EDN3、PRAME表达与国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。EDN3阳性患者生存率高于阴性患者(P<0.05);PRAME阳性患者生存率低于阴性患者(P<0.05)。预后不良组患者EDN3 mRNA表达水平显著低于预后良好组,PRAME mRNA表达水平显著高于预后良好组(P<0.05)。根据受试者操作特征曲线得知,EDN3和PRAME二者联合预测子宫内膜癌预后不良优于各自单独预测(Z_(联合vsEDN3)=2.667、Z_(联合vsPRAME)=2.682,P<0.05)。多因素COX回归分析结果显示,PRAME、FIGO分期、分化程度、淋巴结转移是影响子宫内膜癌患者预后的危险因素(P<0.05),EDN3是保护因素(P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中EDN3表达显著降低,PRAME表达显著升高,二者与临床特征及预后密切相关。

蓝舌病病毒VP7抗原在重组杆状病毒表达系统中的表达与鉴定

本试验通过在重组杆状病毒表达系统中制备、纯化与鉴定蓝舌病病毒VP7抗原,为开发蓝舌病病毒免疫学抗体检测方法提供科学依据。利用SignalP与TMHMM在线软件分析VP7序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pFastBacHTA载体上,并构建相应的重组杆粒Bacmid-VP7-DH10Bac,转染sf9昆虫细胞后获得重组杆状病毒Bacmid-BTV-VP7株,利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达制备蓝舌病病毒VP7抗原。结果显示,重组杆粒Bacmid-VP7-DH10Bac转染sf9昆虫细胞并连续盲传5代后,成功获得重组杆状病毒Bacmid-BTV-VP7株,并成功表达纯化出VP7蛋白,大小约为43 kDa,蛋白纯度约为94%;VP7重组蛋白与其他疫病抗体无非特异性交叉。综上,重组VP7蛋白能够与BTV阳性血清呈现特异性反应,具有良好的反应原性,蛋白纯度高,并且具有病毒蛋白的生物学活性,将其作为诊断抗原,后期可用于开发系列免疫学抗体诊断检测技术。

非洲猪瘟病毒CD2v蛋白胞内域与胞外域的原核表达及其抗原性分析

【目的】应用大肠杆菌表达系统表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白胞外域(N-端,CD2v-N)与胞内域(C-端,CD2v-C)并分析两者的抗原性,为ASFV检测方法的研发提供试验依据和指导。【方法】构建CD2v-N和CD2v-C的重组原核表达质粒,在体外表达并纯化CD2v-N和CD2v-C蛋白,通过Western blotting对表达蛋白进行鉴定;用表达的CD2v-N和CD2v-C蛋白分别肌内接种免疫新西兰大白兔,共免疫3次,每次间隔2周;每次免疫后14 d,应用ELISA方法测定CD2v-N或CD2v-C的特异性抗体水平;用纯化后的CD2V-N和CD2v-C蛋白作为包被抗原,通过ELISA方法检测95份ASFV感染猪的血清CD2v-N或CD2v-C特异性抗体,比较CD2v-N和CD2v-C在猪体内诱导的免疫反应水平。【结果】重组蛋白CD2v-N和CD2v-C分别以包涵体和可溶性形式表达,分子质量分别为22.9和34.0 ku,均能与猪抗ASFV血清特异性结合;用CD2v-N蛋白首免家兔后14 d,血清中未检测到特异性抗体,而在CD2v-C首免的家兔血清中检测到了高滴度的特异性抗体;三免后14 d,CD2v-N和CD2v-C蛋白免疫家兔的血清特异性抗体效价分别为1∶125000和1∶107;ELISA检测结果显示,ASFV感染猪的血清中CD2v-C特异性抗体水平显著高于CD2v-N(P<0.05)。【结论】本研究表达了ASFV CD2v蛋白胞内域和胞外域,前者的抗原性比后者高,CD2v胞内域作为ASFV免疫学检测技术研究与开发的靶标更具优势。该研究结果对ASFV检测方法的研究与开发具有重要指导意义。

猪等孢球虫顶膜抗原蛋白AMA1的生物信息学分析及原核表达

[目的]预测分析猪等孢球虫顶膜抗原蛋白AMA1的生物学特性、结构及功能,并构建AMA1基因的原核表达载体,表达、纯化AMA1蛋白。[方法]本研究从NCBI数据库中获得猪等孢球虫AMA1基因序列,使用相关生物信息学预测工具对AMA1基因编码的蛋白进行分析。构建原核表达载体pET23a-AMA1,并将其转入至大肠埃希菌表达菌株BL21 (DE3)中,对诱导时间、温度及IPTG浓度进行优化,确定最佳诱导表达条件。采用镍柱亲和层析法进行蛋白纯化,获得AMA1重组蛋白并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定分析。[结果]生物信息学预测显示,AMA1蛋白由317个氨基酸组成,蛋白分子式为C1 512H2 310N394O490S14,是不稳定的亲水性蛋白;其二级结构α螺旋占17.74%,β折叠占30.65%,转角占30.65%,无规则卷曲占20.96%;属于无信号肽的跨膜蛋白,具有5个B细胞抗原表位。成功构建pET23a-AMA1重组表达质粒,经诱导表达条件优化后,确定最佳诱导表达条件为0.2 mmol/L IPTG浓度下于28℃诱导12 h,主要以可溶性蛋白形式存在,蛋白相对分子质量约为25 800,纯化蛋白质量浓度为0.25 mg/mL。[结论]阐明了猪等孢球虫AMA1蛋白的结构特征,通过原核诱导表达获得了重组蛋白,为建立猪等孢球虫病的免疫学诊断方法奠定了基础,并为后续疫苗的研发提供了新的候选基因。

血清乙型肝炎病毒表面抗原水平与血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸载量在不同阶段乙型肝炎病毒感染肝衰竭患者中的表达

目的分析血清乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)水平与血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量在不同阶段乙型肝炎病毒(HBV)感染肝衰竭患者中的表达意义。方法回顾性选取龙岩市第二医院于2020年9月至2021年9月收治的64例HBV感染肝衰竭患者作为研究对象,按照病情阶段分为慢性肝衰竭(CLF)组35例和慢加急性肝衰竭(ACLF)组29例,两组均通过电化学发光法和荧光定量法(Q-PCR)检测血清中HBsAg和HBV-DNA水平,并比较两组的因子表达情况。结果ACLF组中的HBsAg与HBV-DNA水平以及CD4+、CD8+均高于CLF组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床可通过分析患者血清中的HBsAg与HBV-DNA水平的表达情况,掌握不同病程阶段HBV感染患者的病情进展情况,为病症的预防和干预治疗提供参考依据。