新等位基因HLA-DRB*116:36的鉴定及确认

目的:鉴定和确认中国人群HLA新等位基因DRB1*16:36。方法:应用PCR-SBT技术对新疆维吾尔族人群血液提取的DNA进行分型,对可能的新等位基因采用组序列特异性引物和单链测序基因分型技术进行测序,与已知同源性最相似基因的序列进行对比,分析两组序列的差异。结果:新等位基因与其同源性最相似的等位基因DRB1*16:23相比,其差异在于第227和236位碱基由A→T和T→C,分别引起第47位氨基酸由酪氨酸→苯丙氨酸、第50位氨基酸由缬氨酸→丙氨酸。结论:确认了该等位基因为HLA-DRB1的一个新等位基因,并被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-DRB1*16:36。

安罗替尼通过调控miR-16-5p/PD-1轴抑制人非小细胞肺癌细胞系增殖并促进凋亡

目的 探讨安罗替尼对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 将非小细胞肺癌细胞系A549和H1299分别采用安罗替尼、miR-16-5p激动剂和/或PD-1过表达载体进行处理。CCK-8实验和EDU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-16-5p相对表达量;Western blot检测程序性细胞死亡-1蛋白(PD-1)的表达。双荧光素酶报告实验确定miR-16-5p和PD-1的靶向关系。用A549细胞构建裸鼠成瘤模型,检测安罗替尼对体内肿瘤生长的影响。结果 安罗替尼在A549和H1299细胞中以剂量依赖的方式显著增加miR-16-5p表达,同时降低PD-1表达,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p能靶向PD-1,且负调控PD-1表达。siRNA下调PD-1表达后明显抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PD-1则可逆转安罗替尼介导的miR-16-5p对A549和H1299细胞的促增殖和抗凋亡作用(P<0.05)。体内实验证实,安罗替尼能够明显抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论 安罗替尼可有效抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,减少体内肿瘤生长,其作用机制与miR-16-5p/PD-1信号轴相关。

HLA-DRB1*08/16等位基因与广西肝癌家族聚集性的相关性

目的:探讨广西肝癌高发区HLA-DRB1*08/16等位基因与广西原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)家族聚集性的关系.方法:在广西肝癌高发区配对选择肝癌高发家族成员、无癌家族成员各200例作为研究对象.应用聚合酶链反应/序列特异性引物(polymerase chain reaction/sequence specific p r i m e r,P C R-S S P)检测研究对象中H L ADRB1*08/16等位基因的频率,分析其与广西肝癌高发区肝癌家族聚集性的关系.结果:(1)HLA-DRB1*08等位基因在肝癌高发家族成员组携带率(6.0%)及无癌家族成员组的携带率(5.5%)经比较差别无统计学意义(2=0.046,P=0.830),而HLA-DRB1*16等位基因在肝癌高发家族成员组携带率(24%)明显高于无癌家族成员组(15.5%),该基因在两组中分布有显著差异(2=4.559,P=0.033);(2)随着高发家族中肝癌患者人数的增加,HLA-DRB1*08等位基因的表达频率无差别(5.4%vs 6.5%,2=0.120,P=0.729),而HLA-DRB1*16等位基因的表达频率明显升高(17.2%vs 29.9%,2=4.401,P=0.036).结论:HLA-DRB1*08可能与广西肝癌家族聚集无明显关系,HLA-DRB1*16可能与广西肝癌家族聚集有关.

DNA测序鉴定新等位基因HLA-DRB1*1609

目的鉴定HLA新等位基因DRB1*1609。方法应用分子克隆和DNA测序的技术测定HLA新等位基因的核苷酸序列,进行HLA等位基因序列比对分析和新等位基因的血清学分型及家系分析。结果新等位基因DRB1第二外显子(exon2,Ex2)序列与所有已知的HLA等位基因序列均不相同,与同源性最高的HLA-DRB1*160101相比,第127位碱基由A→T,引起相应编码第47位氨基酸由酪氨酸Tyr(Y)→苯丙氨酸Phe(F)。血清学分型表明抗原特异性为DR16。家系分析提示该志愿者DRB1*1609等位基因遗传自母亲。结论DNA测序表明被测标本含有HLA-DRB1新等位基因,被WHO HLA因子命名委员会正式命名为HLA-DRB1*1609。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血清甘油磷脂代谢物LPC18∶3,LPE 16∶1水平变化与临床预后相关性研究

目的探索慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者血清甘油磷脂代谢物溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylctholine,LPC)18∶3,溶血磷脂酰乙醇胺(lysophosphatidylethanolamine,LPE)16∶1水平及两者对临床预后的相关性研究。方法选取2019年1月~2022年1月唐山市人民医院诊治的112例AECOPD患者为AECOPD组,根据随访3个月预后分为生存组(n=90)和死亡组(n=22)。以同期60例COPD稳定期患者为稳定期组,60例健康人群为对照组。应用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测各组血清LPC18∶3和LPE16∶1水平。相关性采用Pearson相关性分析。Logistic回归分析AECOPD患者预后影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析LPC18∶3,LPE16∶1的预后评估价值。K-M曲线比较不同血清LPC18∶3和LPE16∶1表达组AECOPD患者预后差异。结果AECOPD组血清LPC18:3(21.67±4.35μmol/L)、LPE16∶1(16.20±5.17μmol/L)、峰值呼气流速占预计值的百分比(PEF%pred)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%pred),1秒钟用力呼气容积占用力肺活量百分比(FEV1/FVC%)低于稳定期组(43.24±6.17μmol/L,32.19±5.98μmol/L)和对照组(68.14±8.78μmol/L,44.82±7.44μmol/L),差异具有统计学意义(F/χ^(2)=461.240~1102.534,均P<0.05)。AECOPD组血清LPC18∶3,LPE16∶1水平与肺功能指标PEF%pred,F%pred,FEV1/FVC%呈显著正相关(r=0.603~0.756,均P<0.05)。死亡组AECOPD患者COPD病程、降钙素原高于生存组(t=3.961,2.509),PEF%pred,FEV1%pred,FEV1/FVC%,血清LPC18:3(17.20±4.11μmol/L)和LPE16:1(10.15±3.03μmol/L)低于生存组(22.76±4.35μmol/L,17.68±5.22μmol/L),差异具有统计学意义(t=4.141~6.490,均P<0.05)。血清LPC18:3(OR=0.691,95%CI:0.519~0.920),LPE16:1(OR=0.586,95%CI:0.382~0.901)是影响AECOPD患者预后独立保护因素;COPD病程(OR=1.510,95%CI:1.203~1.895)、降钙素原(OR=1.759,95%CI:1.159~2.671)是危险因素。血清LPC18∶3,LPE 16∶1二者联合对AECOPD患者预后评估的曲线下面积(95%CI)为0.866(0.822~0.907),优于血清LPC18∶3,LPE16∶1单独预测的0.794(0.748~0.830),0.786(0.739~0.836),差异具有统计学意义(Z=3.957,4.195,P=0.002,<0.001)。血清LPC18∶3,LPE16∶1低表达组AECOPD患者的死亡风险高于血清LPC18∶3,LPE16∶1高表达组,差异具有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=4.475,5.763,P=0.034,0.016)。结论AECOPD患者血清甘油磷脂代谢物LPC18:3,LPE16:1水平显著降低,与肺功能状况有关,两者联合能够有效评估AECOPD患者预后。

儿童1p与16q共缺失相关性肾母细胞瘤1例

患者女性,2岁6个月,2021年11月检查发现右侧腹部肿块就诊。B超示:右后腹膜探及一低回声包块,大小14.8 cm×11.8 cm×11.7 cm,边界清,形态不规则,内回声不均匀,内见少量细小钙化斑及散在细小无回声区,与右肾关系密切,包块左下切缘可见残余肾组织,包块上缘紧贴肝右叶,与肝脏分界尚清,肝脏受压向左移位。包块后缘紧贴脊柱,左侧缘紧贴腹腔干及肠系膜上动脉,血管受压向左移位。包块边缘可见多枚低回声结节,皮髓质分界不清。下腔静脉局部受压变窄。

AIFM1分子与猪伪狂犬病病毒UL16蛋白互作抑制病毒的增殖机制研究

凋亡诱导因子1(AIFM1)是一个结构复杂的线粒体蛋白,能优化线粒体呼吸链的功能、参与氧化还原代谢,是第一个被发现的caspase非依赖性的凋亡蛋白。本研究发现AIFM1能与猪伪狂犬病病毒(PRV)pUL16相互作用,过表达以及RNA干扰试验结果表明,AIFM1能抑制PRV的增殖,且pUL16能减弱这种抑制作用。激光共聚焦和流式试验表明,PRV感染细胞时,AIFM1从线粒体易位至细胞核,且AIFM1增强了PRV引起的细胞凋亡。本研究通过对PRV pUL16和宿主蛋白相互作用机制研究,部分地解析了这两种蛋白在PRV复制、包装以及与宿主互作中发挥的作用,为进一步阐明PRV感染机制奠定了基础。

重组CC16蛋白质抑制香烟烟雾提取物诱导人支气管上皮细胞衰老的初步研究

目的探讨重组人CC16蛋白质(rhCC16)对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)衰老的抑制作用及机制。方法CCK-8法检测CSE(0%、1%、2.5%、5%、7.5%和10%)及rhCC16(0、10、100、250和500 ng/mL)对HBECs细胞活力的影响;β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测对照组、CSE组以及CSE+rhCC16组细胞β-半乳糖苷酶活性;实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞P16、P21 mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞P16、P21、p-P53、P38、p-P38、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平。结果与对照组相比,5%CSE刺激细胞72 h对HBECs细胞活力无显著影响;500 ng/mL及以下浓度rhCC16对HBECs细胞活力无显著影响;与对照组相比,5%CSE刺激HBECs细胞72 h致β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率明显升高(P<0.05),且P16和P21蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05),p-P53、p-P38与p-ERK1/2蛋白表达量显著增加(P<0.05);与CSE组相比,250 ng/mL rhCC16干预下,HBECs细胞β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率显著下降(P<0.05),P16和P21蛋白和mRNA表达水平显著下降(P<0.05),p-P53、p-p38和p-ERK1/2的表达量降低(P<0.05)。结论rhCC16蛋白质抑制香烟烟雾诱导的HBECs衰老,抑制P38 MAPK和ERK1/2信号通路可能是其作用机制。

血清SDC-1、HDAC6、CC16水平联合检测对慢性阻塞性肺疾病患者预后不良的预测价值

目的:探讨血清多配体蛋白聚糖1(SDC-1)、组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、克拉拉细胞分泌蛋白16(CC16)水平联合检测对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者预后不良的预测价值。方法:选取2020年11月至2023年11月该院收治的147例COPD患者进行横断面研究,设为研究组;选取同期于该院体检的147名健康者设为对照组。比较两组、不同COPD病情程度患者、不同预后COPD患者血清SDC-1、HDAC6、CC16水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析入院时血清SDC-1、HDAC6、CC16水平单项及联合检测预测COPD患者预后不良的价值。结果:研究组血清SDC-1、HDAC6水平均高于对照组,血清CC16水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度COPD患者血清SDC-1、HDAC6水平高于中重度、中度、轻度患者,且中重度高于中度、轻度患者,中度高于轻度患者;重度COPD患者血清CC16水平低于中重度、中度、轻度患者,且中重度低于中度、轻度患者,中度低于轻度患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良COPD患者入院时血清SDC-1、HDAC6水平高于预后良好患者,血清CC16水平低于预后良好患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,入院时血清SDC-1、HDAC6、CC16水平联合检测预测COPD患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.938,高于三者单项检测诊断(AUC=0.774、0.771、0.716)。结论:入院时血清SDC-1、HDAC6、CC16水平联合检测预测COPD患者预后不良的价值高于三者单项检测。

血清Aβ1-42、CXCL16、VILIP-1联合对帕金森病患者认知障碍的预测价值

目的探究血清β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、趋化因子配体16(CXCL16)、视锥蛋白样蛋白1(VILIP-1)联合对帕金森病(PD)患者认知障碍的预测价值。方法选取2021年12月至2022年12月玉林市红十字会医院神经内科收治的81例PD患者为PD组。另选同期健康体检者(n=81)为对照组。再次根据PD患者MoCA评分分为认知正常组(≥26分,n=44)、认知障碍组(<26分,n=37)。采用ELISA测定血清Aβ1-42、CXCL16、VILIP-1表达水平;采用Logistic回归分析影响PD患者认知障碍的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Aβ1-42、CXCL16、VILIP-1对PD患者认知障碍的预测价值。结果与对照组相比,PD组血清Aβ1-42表达水平显著降低(P<0.05),CXCL16、VILIP-1表达水平显著升高(P<0.05)。与认知正常组相比,认知障碍组血清Aβ1-42表达水平显著降低(P<0.05),CXCL16、VILIP-1表达水平显著升高(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,Aβ1-42是影响PD患者认知障碍的保护因素(P<0.05),CXCL16、VILIP-1是影响PD患者认知障碍的危险因素(P<0.05)。ROC显示了血清Aβ1-42、CXCL16、VILIP-1三者联合预测PD患者发生认知障碍的AUC最高,其评估效能显著优于血清Aβ1-42、CXCL16、VILIP-1各自单独预测(Z三者联合-Aβ1-42=2.056、P=0.040,Z三者联合-CXCL16=2.716、P=0.007,Z三者联合-VILIP-1=2.394、P=0.017)。结论PD患者血清Aβ1-42表达水平显著降低,CXCL16、VILIP-1表达水平显著升高,三者联合可以更好地预测认知障碍的发生。

HPV16-E6、ID-1及Pin1在宫颈癌组织中的表达及相关性分析

目的:分析人乳头瘤病毒16型E6蛋白(Human papillomavirus type 16 E6 protein,HPV16-E6)、细胞分化抑制因子-1(Inhibitor of intracellular differentiation-1,ID-1)及脯氨酰顺反异构酶1(Prolylcis-trans isomerase1,Pin1)在宫颈癌组织中的表达及相关性。方法:选择2017年3月至2022年3月莆田学院附属医院收治的宫颈癌65例,所有患者均在我院进行手术切除癌组织,并留取宫颈癌组织和距离癌组织边缘2 cm以上癌旁组织。通过免疫组化法对癌组织、癌旁组织标本HPV16-E6、ID-1、Pin1阳性表达率进行检测。分析HPV16-E6、ID-1、Pin1与临床特征的关系。结果:与癌旁组织相比,癌组织中HPV16-E6、ID-1、Pin1阳性率较高(P<0.05)。HPV16-E6、ID-1、Pin1与肌层浸润深度、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、肿瘤直径呈正相关(P<0.05)。将年龄、病理类型等因素控制后,HPV16-E6、ID-1、Pin1与肌层浸润深度、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、肿瘤直径相关(P<0.05)。结论:HPV16-E6、ID-1、Pin1在宫颈癌患者中均呈高表达,且HPV16-E6、ID-1、Pin1与宫颈癌患者肌层浸润深度、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、肿瘤直径相关。

ERβ、HAX1及LRP16在子宫内膜癌组织中表达水平及与预后相关性分析

目的:探讨雌激素受体-β(ERβ)、造血干细胞特异性相关结合蛋白-1(HAX1)和白血病相关蛋白16(LRP16)在子宫内膜癌组织中表达水平,并分析其与预后的相关性。方法:选取我院2019年1月—2020年2月收治的73例子宫内膜癌患者作为研究组,选取同期的73例良性子宫内膜肿瘤患者作为对照组。对研究组患者随访36个月根据实体瘤疗效标准分为预后良好组(n=59)与预后不良组(n=14)。获取所有患者的子宫内膜组织标本,采用免疫组化检测方法检测ERβ、HAX1及LRP16在各组的表达水平。比较研究组与对照组ERβ、HAX1及LRP16阳性表达率的差异。运用单因素分析研究组患者预后不良的相关因素和logistic回归模型分析影响子宫内膜癌预后的危险因素;并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析其预后效果。结果:研究组患者的ERβ阳性表达率低于对照组,而HAX1及LRP16阳性表达率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素结果提示ERβ、HAX1、LRP16表达水平及肿瘤位置、FIGO分期均是子宫内膜癌预后的影响因素(P<0.05)。多因素分析结果显示ERβ、HAX1、LRP16水平及肿瘤位置、FIGO分期均是影响子宫内膜癌预后的独立危险因素。最终模型H-L检验χ^(2)=2.389,P=0.793,(P子宫内膜癌预后风险)=-4.035+1.821×X_(ERβ)+1.806×X_(HAX1)+1.312×X_(LRP16)+1.585×X_(肿瘤位置为宫底、后壁)+1.614×X_(FIGO分期为Ⅲ、Ⅳ期)拟合度较好;ROC曲线下面积(AUC)为0.813,95%Cl为0.679~0.947(P<0.05),灵敏度为71.40%,特异度为84.70%。结论:ERβ、HAX1、LRP16、肿瘤位置和FIGO分期在子宫内膜癌患者预后有明显影响,临床可将以上指标作为子宫内膜癌患者预后的评估指标。

基于16S rRNA测序的1型和2型糖尿病大鼠肠道菌群差异

通过16S rRNA测序分析T1DM与T2DM大鼠肠道菌群的差异。Alpha多样性分析显示,T1DM组和T2DM组肠道菌群多样性和均匀度均高于对照组,Beta多样性分析显示不同组样本间存在差异且有很好的聚类。在门水平上,T1DM和T2DM大鼠肠道菌群以Firmicutes和Bacteroidetes为主,Firmicutes/Bacteroidetes(F/B)比例相比于对照组增加,且T2DM组高于T1DM组。与对照组相比,T1DM组Actinobacteria丰度显著增加,Anaerofustis丰度显著降低。在T2DM大鼠中,Proteobacteria、Oscillospira丰度显著增加。Oscillospira丰度在T2DM组增加,在T1DM组无明显差异。Rhodococcus为T1DM组的特有属,Coprobacillus和Roseburia为T2DM组的特有属。研究结果表明大鼠肠道菌群失调与T1DM和T2DM密切相关,可为T1DM和T2DM患者的个性化治疗提供科学依据。

X-pert联合NOD2、ATG16L1在活动性肺结核患者疾病转归评估中的应用价值

目的 分析X-pert联合核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(NOD2)、自噬相关蛋白16样蛋白1(ATG16L1)在活动性肺结核患者疾病转归评估中的应用价值。方法 前瞻性选取2023年4月至2024年4月池州市人民医院收治的110例活动性肺结核患者为研究对象。所有患者均行抗结核治疗、疾病转归评估,将转归患者60例作为转归组,未转归患者50例作为未转归组。收集两组患者的临床资料(年龄、体重指数、性别、吸烟史、贫血、累及肺野数、肺部空洞病变、利福平耐药)。治疗前行X-pert、NOD2、ATG16L1检测,比较两组X-pert阳性率及NOD2、ATG16L1表达水平。采用多因素Logistics回归分析分析活动性肺结核患者疾病转归的影响因素,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析X-pert、NOD2、ATG16L1对活动性肺结核患者疾病转归的预测价值。结果 两组体重指数、吸烟史、贫血、累及肺野数、利福平耐药比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与转归组相比,未转归组患者年龄较大[(56.15±19.34)vs.(63.18±12.84)岁],男性(71.67 vs. 90.00)%、肺部空洞病变(11.67 vs. 32.00)%比例较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与转归组相比,未转归组患者X-pert阳性率(75.00 vs. 90.00)%、NOD2[(164.31±15.55)vs.(199.29±24.63)ng/L]、ATG16L1[(8.95±1.1.74)vs.(12.15±2.26)ng/L]表达水平均较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistics回归分析结果显示,年龄、性别、肺部空洞病变、X-pert、NOD2、ATG16L1为活动性肺结核患者疾病转归的危险因素(P<0.05)。与X-pert、NOD2、ATG16L1单项诊断相比,X-pert、NOD2、ATG16L1联合检测对活动性肺结核患者疾病转归的预测价值较高(P<0.05)。结论 疾病未转归活动性肺结核患者X-pert阳性率、NOD2、ATG16L1表达水平均高于转归患者,X-pert、NOD2、ATG16L1为活动性肺结核患者疾病转归的危险因素,X-pert联合NOD2、ATG16L1对活动性肺结核患者疾病转归的预测价值较高,为活动性肺结核患者疾病转归评估提供了有效依据。

苯并[a]芘恶性转化16HBE细胞元素组分析及铜与顺铂或长春瑞滨联用对细胞增殖的作用

目的研究苯并[a]芘(BaP)致细胞恶性转化中元素组的变化,探讨铜与顺铂或长春瑞滨联用对细胞增殖的影响。方法以16HBE细胞和BaP恶性转化细胞T-16HBE-C1细胞为研究对象,采用电感耦合等离子质谱分析44种元素在2种细胞中的含量,采用偏最小二乘回归分析元素含量对2种细胞的区分能力,采用MTT法检测铜(0,237,340,487,1000和1432μmol·L^(-1))、顺铂(0,4.4,6.1,8.6,12.0和16.8μmol·L^(-1))和长春瑞滨(0,3.8,9.8,25.0,40.0和64.0μmol·L^(-1))对2种细胞存活率的影响,计算半数抑制浓度(IC_(50))。根据IC_(50)比例制备铜与顺铂混合物和铜与长春瑞滨混合物,采用MTT法检测其对细胞存活率的影响,并采用等效线图法分析铜与顺铂或长春瑞滨的联合作用。采用MTT法检测铜(0,50,100,200,400和800μmol·L^(-1))与IC_(50)的顺铂或长春瑞滨联用对T-16HBE-C1细胞存活率的影响。结果在2种细胞中共检出29种元素,其中铜、锌、银、硒和铷含量在T-16HBE-C1细胞中较16HBE细胞降低(P<0.01,P<0.05),钼、砷、锂、锗、锶、镍、镧、汞、铁和铯含量升高(P<0.01,P<0.05)。元素含量可用于区分16HBE和T-16HBE-C1细胞。铜可抑制16HBE和T-16HBE-C1细胞增殖,IC_(50)分别为(613±16)μmol·L^(-1)和(776±15)μmol·L^(-1)(P<0.01)。铜与顺铂混合物(1∶69.5)和铜与长春瑞滨混合物(1∶33.4)抑制T-16HBE-C1细胞增殖,且铜与顺铂和长春瑞滨具有相加作用。与单独IC_(50)浓度的顺铂(11.2μmol·L^(-1))或长春瑞滨(23.2μmol·L^(-1))相比,当铜>400μmol·L^(-1),其与IC_(50)浓度的顺铂或长春瑞滨联合作用可抑制T-16HBE-C1细胞增殖。结论16HBE细胞经BaP恶性转化后元素含量和相关关系发生改变。铜可抑制T-16HBE-C1细胞增殖,且在高浓度时与顺铂和长春瑞滨具有相加的联合作用。

PR结构域在PRDM16抑制结直肠癌迁移中的作用研究

目的探究PRDM16及其PR结构域在结直肠癌增殖迁移中的作用。方法应用TCGA数据库和生物信息学分析总PRDM16(tPRDM16)与结直肠癌的相关性;免疫组化及PCR检测结直肠癌组织中PRDM16表达;Westernblot检测结直肠癌细胞株中PRDM16本底表达水平,然后在高表达株敲低结肠癌细胞株中总tPRDM16,在低表达株中分别过表达全长PRDM16(fPRDM16)与短型PRDM16(sPRDM16),然后通过CCK8、平板克隆实验以及划痕实验、Transwell迁移实验检测fPRDM16与sPRDM16对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果生信分析结果显示,总tPRDM16水平(包括fPRDM16、sPRDM16)是结直肠癌的危险因素,也是免疫检查点抑制剂疗效的预测因素。临床研究结果显示,与正常组织相比,tPRDM16、fPRDM16和UCP1在结直肠癌组织中高表达,且UCP1mRNA水平与fPRDM16、sPRDM16mRNA均成正相关。敲低SW480细胞中PRDM16,发现tPRDM16与fPRDM16皆下调,伴细胞迁移能力下降,但对细胞增殖并无明显影响。在HCT116细胞中进行fPRDM16过表达则可抑制肿瘤细胞迁移,伴线粒体解偶联蛋白UCP1的蛋白表达水平升高;而过表达sPRDM16则可降低UCP1蛋白水平且促进细胞迁移。进一步研究发现,敲低UCP1可促进HCT116细胞的迁移。结论PR结构域是PRDM16抑制结直肠癌迁移的功能结构域,其机制可能与维持UCP1蛋白的正常表达水平有关。

SLC16A8通过正调控FN1促进结直肠癌细胞增殖、迁移及血管生成

目的探讨溶质载体家族16成员8(SLC16A8)通过上调纤维连接蛋白1(FN1)表达促进结直肠癌(CRC)细胞增殖和血管生成的作用机制。方法通过癌症基因体图谱(TCGA)的数据分析SLC16A8在CRC中的表达及与患者预后的关系,通过CancerSEA数据库对SLC16A8的功能进行分析。实时定量PCR法(RT-qPCR)检测CRC细胞中SLC16A8的表达水平,将培养CRC细胞分为SLC16A8过表达组,空白对照组和阴性对照组;CCK8法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移能力;小管形成实验检测血管生成能力。通过生物信息学方法分析SLC16A8的下游基因,蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析SLC16A8对FN1蛋白表达的影响。过表达SLC16A8并抑制FN1表达,将培养CRC细胞分为SLC16A8过表达组,SLC16A8过表达+FN1 siRNA组,空白对照组和阴性对照组,分析SLC16A8是否通过正调控FN1促进CRC细胞增殖和血管生成。结果SLC16A8在CRC中高表达,并且高表达SLC16A8的CRC患者预后较差。SLC16A8功能主要与血管生成相关。SLC16A8在CRC细胞中高表达并可促进CRC细胞增殖、迁移和血管生成。FN1可能是SLC16A8的下游基因并且两者表达呈正相关。SLC16A8可促进FN1蛋白表达,并且SLC16A8通过正调控FN1促进CRC细胞增殖、迁移和血管生成。结论SLC16A8在CRC中高表达,并且SLC16A8通过正调控FN1促进CRC细胞增殖、迁移和血管生成。

2021—2023年安徽省手足口病柯萨奇病毒A组16型分子分型研究

目的了解安徽省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)发病情况、柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)基因型别分布情况和VP1基因进化特征。方法通过中国疾病预防控制信息系统对2021—2023年安徽省HFMD发病情况和病原学检测情况进行统计。收集HFMD患者咽拭子样本,分离得到CVA16毒株,对其VP1区进行PCR扩增和基因序列测定,使用肠道病毒在线分型工具鉴定基因亚型,运用MegAlign比较核苷酸和氨基酸同源性,利用MEGA 6.0构建进化树,并分析VP1区氨基酸变异位点。结果2021—2023年安徽省累计报告HFMD病例155640例,年均报告发病率为84.83/10万。2021—2023年安徽省16个地市共报告HFMD实验室确诊病例12643例,其中CV-A16占18.16%(2296/12643),各年度构成比分别为25.81%(1127/4366)、33.69%(782/2321)和6.50%(387/5956)。2021—2023年安徽省共分离到HFMD CV-A16毒株72株,其中B1a和B1b基因亚型分别为58株(占80.56%)、14株(占19.44%)。两种亚型毒株与CV-A16原型株G-10的核苷酸和氨基酸同源性分别为73.80%~76.20%和90.60%~92.30%。进化树显示B1a基因亚型流行株在遗传进化上分为4个分支簇,B1b基因亚型流行株形成3个分支簇。72条VP1区基因序列与原型株比较发现了26个氨基酸位点发生变异。结论2021—2023年安徽省HFMD CV-A16主要流行的基因亚型为B1a和B1b,B1a为优势基因亚型,应加强对CV-A16流行毒株的分子监测。

云南省昆明地区2022年柯萨奇病毒A16型的VP1区分子特征

目的对昆明市某医院2022年从手足口病患儿分离的柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)的全VP1基因区分子特征分析。方法对昆明市某医院2022年从手足口病(hand foot mouth disease,HFMD)患儿200份临床样品粪便标本进行处理,分别通过RD细胞和Vero细胞分离,对经3次培养后仍产生细胞效应(cytopathogenic effect,CPE)的细胞培养液提取病毒核酸,然后用通用引物222/224经RT-PCR扩增并测序,序列经BLAST比对确定其血清型,对鉴定为柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)的再用特异引物CA16VP1F/CA16VP1R扩增其全VP1区并测序和拼接。下载CVA16病毒标准序列,采用Geneious 5.4.1和MEGA 6.05等软件对本研究CVA16的全VP1区的核苷酸和氨基酸序列分析。结果经鉴定后共检出22株从Vero细胞分离CVA16和6株RD细胞分离的CVA16毒株,进一步通过特异引物扩增获得21株可用的CVA16VP1全长序列,基于全VP1基因系统进化分析,这21株CVA16全属于B1a基因型。21株CVA16全长VP1基因之间的核苷酸和氨基酸序列同源性均较高,分别为91.9%~99.6%和89.2%~99.3%;与中国CVA16 B1a基因型的其他株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为89.7%~96.3%和89.2%~97.0%。与CVA16 B1b其他参考株对比,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别在84.3%~87.2%和89.2%~97.0%。与其它CVA16的B1a基因亚型相比较发现21个氨基酸位点出现变异。结论2022年中国云南省昆明某医院引起HFMD的CVA16毒株属于B1a基因型,应继续监测以明确其流行特征。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-16-5p/CREB1轴减轻缺氧/复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧6 h),然后将H/R组细胞分别进行转染,分为oe-NC组、oe-FGD5-AS1组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic-NC组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测细胞中FGD5-AS1、miR-16-5p、CREB1的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;CCK-8法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶活性实验分别验证miR-16-5p和FGD5-AS1、CREB1的靶向关系。结果:与对照组比较,H/R组细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-16-5p mRNA水平、细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组和oe-NC组比较,转染过表达FGD5-AS1基因的H9c2细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达增高,凋亡率及miR-16-5p、cleaved Caspase-3、Bax水平下降(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了FGD5-AS1、CREB1均与miR-16-5p有结合位点。结论:过表达FGD5-AS1可能通过靶向下调miR-16-5p表达,上调CREB1表达,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。