HLA-DRB1^(*)11:01与HCV感染的病毒选择压力及与CD4+T细胞表位的关系探讨

目的我们前期研究显示,无论在汉族人群还是黎族人群中,HLA-DRB1^(*)11∶01均是与机体自发清除HCV相关联的HLA-Ⅱ类基因,因此,本研究的目的是探讨HLA-DRB1^(*)11∶01基因与HCV感染的病毒选择压力及与CD4+T细胞表位的关系。方法对广东地区常见的HCV 6a慢性感染者HLA-DRB1^(*)11∶01阳性组和阴性组的E1E2和NS3基因进行病毒选择压力以及病毒群体扩张的分析。采用覆盖我国常见HCV基因型保守区的CD4+T细胞表位的重叠肽段刺激HCV自发清除组和慢性感染组,通过ELISPT实验,根据每孔的斑点形成细胞数以及在不同组出现的频次评估HLA-DRB1^(*)11∶01基因与CD4+T细胞表位的关系。结果广东地区常见的HCV 6a感染者HLA-DRB1^(*)11∶01阴性组E1E2和NS3的阳性选择位点以及位于CD4+T细胞表位的位点数均大于HLA-DRB1^(*)11∶01阳性组;两组HCV 6a感染者在广东地区均具有群体扩张趋势,且HLA-DRB1^(*)11∶01阴性组的扩张趋势明显高于HLA-DRB1^(*)11∶01阳性组。HCV自发清除组对其中5条肽段(C-52 E2691-707、C-119 NS31545-1560、C-134 NS4A1669-1684、C-154 NS4B1912-1927和C-159 NS4B1929-1944)刺激的应答率较高,HCV慢性感染组对其中的2条肽段(C-111 NS31497-1512和C-130 NS31650-1665)刺激的应答率较高。当考虑HLA-DRB1^(*)11∶01分型时,在慢性感染组和自发清除组HLA-DRB1^(*)11∶01阳性和HLA-DRB1^(*)11∶01阴性PBMCs产生的HCV特异性免疫应答均无统计学差异。结论研究揭示了HLA-Ⅱ类基因HLA-DRB1^(*)11∶01与HCV感染的病毒选择压力及与CD4+T细胞表位的关系,同时,获得HCV泛基因型CD4+T细胞抗原候选表位,为研发适合HCV泛基因型的T细胞疫苗提供基础数据。

HLA-DRB1基因多态性与早发型重度子痫前期遗传易感性的研究

目的探讨HLA-DRB1基因rs3135388、rs114293611和rs142804168位点的单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphism,SNP)与早发型重度子痫前期(severepreeclampsia,sPE)的相关性。方法收集102例早发型sPE产妇及其新生儿(sPE组)和120例血压正常产妇及其新生儿(对照组)的血液标本进行Sanger测序,比较两组产妇及新生儿HLA-DRB1基因rs3135388、rs114293611和rs142804168位点基因型分布和等位基因频率及母婴配伍后基因型分布的差异。结果HLA-DRB1基因rs114293611位点的基因型分布在sPE组和对照组产妇及新生儿之间差异均有统计学意义(P<0.05)。sPE组新生儿rs114293611位点T等位基因频率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而在两组产妇间差异无统计学意义(P>0.05)。rs114293611位点基因型母婴配伍后显示sPE组和对照组在基因型分布上差异有统计学意义(P<0.05)。HLA-DRB1基因rs3135388和rs142804168位点的基因型分布和等位基因频率在两组产妇及新生儿之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论HLA-DRB1基因rs114293611位点SNP可能与产妇早发型sPE的发生相关。HLA-DRB1基因rs114293611位点母婴基因型配伍异常可能是产妇患早发型sPE的易感因素。

湖北汉族人群对乙肝疫苗免疫应答能力与HLA-DRB1等位基因相关性的研究

目的分析HLA-DRB1等位基因型别与个体乙肝疫苗免疫应答水平的相关性。方法对37名湖北汉族健康自愿者进行HBV血源型疫苗标准全程接种,共3次(0,1,6月),末次接种后8周用酶免疫法(EIA)检测血清抗-HBs抗体水平(S/N≥2.1为应答者,S/N<2.1为无应答者);同时,对全部受试者进行HLA-DRB1基因分型。结果37名个体中无应答者7名(19%),应答者30名(81%),无应答与HLA-DRB*1001等位基因具有显著相关性,RR=21.75,X2=5.55,P<0.05。结论在湖北汉族人群中。

云南澜沧拉祜族HLA-DRB1基因多态性研究

采用我们改进的高分辨率基于内含子的PCR -SBT分型方法 ,首次检测云南拉祜族HLA DRB1基因多态性。在 5 5例拉祜族个体中共检出 16种HLA DRB1等位基因 ,最常见的DRB1等位基因是HLA DRB1 12 0 2 1、0 90 12、15 0 11,基因频率分别为 30 .90 9%、15 .45 5 %、13.6 36 % ,共占拉祜族可检出等位基因的 6 0 % ,其中DRB1 0 413、110 81、1312、1418、15 0 4首次在我国人群中检出 ,并且在世界各地人群中也比较罕见。对拉祜族和世界各地人群的HLA DRB1频率进行了比较 ,分析了HLA DRB1等位基因在各人种中的分布特点 ,并用Neighbor -join ing法进行了聚类分析。比较分析的结果显示拉祜族明显属于中国南方族群 ,未显示出其族源来自北方的痕迹。对此遗传数据和民族学、历史学研究的矛盾 。

应用SSP-PCR/SSO方法进行中国辽宁汉族人HLA-DRB1基因的遗传多态性研究

对１５９名中国辽宁汉族个体的基因组ＤＮＡ进行分析，共检出４２种等位基因，其中以ＤＲＢ１０９０１２（１２．８％）、０７０１（１０．７％）、１５０１（１０．４％）最为常见，其次为ＤＲＢ１１２０１（７９％）、１２０２（７５％）、１１０１（６６％）、０３０１（５．０％）。并发现辽宁汉族人ＤＲＢ１等位基因频率与白种人间存在明显差异，揭示不同人种有其自己的主要等位基因。

HLA-DRB1*07,13等位基因对乙肝疫苗免疫效果影响的研究

目的:探讨机体HLA-DRB1*07,13等位基因对基因重组乙肝疫苗免疫效果的影响。方法:选取完成基因重组乙肝疫苗全程接种(10μg/次,0、1、6月)的广西籍汉族健康大学生896名,于末次接种疫苗后的第6个月采血检测血清抗-HBs水平,对无或低应答者再次接种基因重组乙肝疫苗20μg,4周后筛选出无或低应答者99名及初次检测中或强应答者136名作为研究对象,应用PCR-SSP技术对研究对象外周血HLA-DRB1*07,13等位基因进行检测。结果:HLA-DRB1*07在无或低应答组中的表达频率为16.16%,显著高于中或强应答组的表达频率(4.41%)(P<0.05);HLA-DRB1*13在无或低应答组和中或强应答组的表达频率分别为1.01%和3.68%,两组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:基因重组乙肝疫苗无或低应答与HLA-DRB1*07基因密切相关;而HLA-DRB1*13对乙肝疫苗的免疫应答无明显影响。

HLA-DRB1、DQB1基因与汉族哮喘的相关性研究

探讨 HL A- DRB1、DQB1位点基因在中国汉族哮喘家系中与哮喘的相关性。用序列特异性引物 -聚合酶链反应 (PCR- SSP)方法 ,对 10 1例哮喘家系成员和 6 0例正常对照者进行了 HL A- DRB1、DQB1等位基因的分型 ,并分析了 DRB1、DQB1基因在两组中的分布。结果示 ,与正常对照组比较 ,哮喘患者组 DRB1* 15等位基因频率 (2 0 .93% )较正常对照组 (6 .6 7% )明显增高 (χ2 =10 .95 ,P<0 .0 5 ) ;DQB1* 0 6 0 1等位基因频率在哮喘患者组(31.4 0 % )较正常对照组 (7.5 % )明显增高 (χ2 =2 3.0 8,Pc<0 .0 1)。同时发现 HL A- DRB1* 0 7等位基因频率在对屋尘螨抗原皮试阳性家系成员中 (2 7.4 2 % )较家系中皮试阴性者 (5 .36 % )显著增高 (χ2 =10 .83,Pc<0 .0 5 )。HL A- DRB1* 15和 DQB1* 0 6 0 1可能是汉族哮喘的遗传等位易感基因 ,HL A- DRB1* 0 7在限定对屋尘螨抗原特异性 Ig

HLA-DRB1基因多态性与高血压肾病的关系

目的:探讨HLA-DRB1基因rs2308765和rs9269186 2个位点的单核苷酸多态性(SNPs)与高血压肾病的关系,为高血压肾病的遗传学机制研究提供理论依据。方法:采用病例-对照的研究方法,收集45例高血压肾病患者和52例对照为研究对象。应用聚合酶链反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)技术进行SNPs突变检测。采用拟合优度χ2检验分析基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律,病例组与对照组基因型和等位基因频数分布分析应用χ2检验。结果:rs2308765位点呈G/T二态性,本研究群体中出现G/G和G/T 2种基因型,病例组和对照组rs2308765位点的基因型和等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05);rs9269186位点呈C/G二态性,本研究群体中出现了C/C、G/G和C/G 3种基因型,病例组和对照组的rs9269186位点的基因型分布和等位基因分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rs2308765位点的SNPs可能与高血压肾病无关,而rs9269186位点的SNPs可能与高血压肾病有关。

HLA-DRB1、DQA1、DQB1基因与上海地区类天疱疮的易感性

目的 为探讨HLA Ⅱ类基因与类天疱疮 (BP)的相关性 ,了解BP的免疫遗传发病背景。方法 采用PCR SSOP方法对上海地区汉族 5 6例BP患者和 15 0例健康对照者进行了HLA DRB1、DQA1、DQB1位点等位基因分型。结果 发现HLA DRB1 10 0 1与DQB1 0 5 0 1紧密连锁 ,其基因频率BP组与对照组比较明显增高 ;DRB1 0 4与DQB1 0 3 0 2紧密连锁 ,其基因频率与对照组比较也明显增高 ;DRB1 12基因频率BP组与对照组比较明显降低 (P =0 .0 0 7,RR =0 .3 5 8)。结论 DRB1 10 0 1、DRB1 0 4可能为上海地区BP患者的易感基因 ,而DRB1 12 ( 12 0 1, 12 0 2 )

西安骨髓库北方汉族人群HLA-DRB1高分辨多态性

目的了解西安骨髓库北方汉族人群HLA-DRB1基因高分辨多态性分布特点。方法从11755名北方汉族造血干细胞捐献者中随机抽取167名,采用PCR-SSP方法进行高分辨HLA-DRB1基因分型。结果共检出36种等位基因,DRB1*03、DRB1*07、DRB1*09、DRB1*16等未检出多态性,DRB1*03全部表现为0301,DRB1*07全部表现为0701,DRB1*09全部表现为090102,DRB1*16全部表现为160201。等位基因频率最高的前三位是DRB1*15(0.1677)、DRB1*09(0.1407)和DRB1*04(0.1317),等位基因高度集中,DRB1*15多态性以1501为主(87.5%),DRB1*04最具多态性,但很集中,27.27%表现为0405,36.36%表现为0406。结论西安骨髓库北方汉族人群中HLA-DRB1等位基因分布相对集中,多态性分布与白种人和黑人存在差异。

中国人群HLA-DRB1基因多态性与慢性乙型肝炎关系的Meta分析

目的:用Meta分析的方法综合评价中国人群HLA-DRB1基因多态性与慢性乙型肝炎的关系.方法:检索中国生物医学文献数据库、维普数据库和Medline数据库,依据选择标准收集所有相关的病例对照研究,应用RevMan4.2软件对符合条件的研究结果进行Meta分析.结果:符合纳入标准的共8篇文献,包含慢性乙型肝炎组501例和正常对照组855例.经综合分析:HLA-DRB1*03和HLA-DRB1*08可能为中国人群慢性乙型肝炎的易感性基因型(OR=2.44,95%CI:1.65-3.61,P<0.00001;OR=1.57,95%CI:1.08-2.28,P=0.02);HLA-DRB1*13和HLA-DRB1*15可能是我国人群慢性乙型肝炎的保护性基因型(OR=0.40,95%CI:0.21-0.79,P=0.008;OR=0.64,95%CI:0.46-0.90,P=0.01).结论:中国人群慢性乙型肝炎的发生与HLADRB1基因的多态性有关,与其他国家人群既有相同点,也有其自身特点.

HLA-DRB1等位基因与吉林地区汉族乙肝疫苗免疫应答的关联研究

目的:探讨HLA-DRB1等位基因与吉林地区汉族乙肝疫苗免疫应答的关联性。方法:采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)分型技术,对84例乙肝疫苗无或低应答者HLA-DRB1等位基因进行检测,与78例乙肝疫苗中或强应答者人群进行对照。结果:①HLA-DRB1*14等位基因频率在无或低应答组为23.8%,中或强应答组为5.13%,两组之间比较有统计学差异(P<0.05);②HLA-DRB1*12、HLA-DRB1*15等位基因频率分别在无或低应答组为4.76%和7.14%,在中或强应答组为23.1%和24.4%,两组之间比较也存在统计学差异(P<0.05)。③等位基因HLA-DRB1*07(2.38%和5.12%),HLA-DRB1*08(9.52%和8.97%),HLA-DRB1*09(7.14%和10.3%),HLA-DRB1*11(7.14%和7.69%),HLA-DRB1*13(4.76%和6.41%)及HLA-DRB1*16(4.76%和5.13%),在无或低应答组和在中或强应答组之间基因频率分布没有统计学差异(P>0.05)。结论:吉林地区汉族乙肝疫苗接种后,①HLA-DRB1*14等位基因可能与无或低应答相关;②HLA-DRB1*12、15等位基因可能与中或强应答相关;③未检测到HLA-DRB1*07、08、09、11、13、16等位基因与免疫应答水平之间有明显的相关性。

新疆汉族HLA-DRB1基因多态性与再生障碍性贫血的相关性

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)DRB1与再生障碍性贫血(AA)的相关性。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)DNA分型技术对43例新疆汉族AA患者(AA病例组)和200例新疆汉族人群作为健康对照者(健康对照组)进行HLA-DRB1基因分型,研究HLA-DRB1基因多态性与新疆汉族AA患者的相关性。结果 AA病例组和健康对照组的等位基因频率有相同之处,均表现为DRB1*15表达最高,同时DRB1*4、DRB1*7、DRB1*9、DRB1*12表达均较高,频率最低的均为DRB1*17;AA病例组中DRB1*8等位基因频率(13.73%)显著高于对照组(6.99%),差异有统计学意义(OR=2.202,P<0.05);AA病例组DRB1*12、DRB1*14等位基因频率低于对照组,差异无统计学意义。其中AA病例组女性等位基因DRB1*12(5.41%vs 10.00%,OR=0.2079,P<0.05)和AA病例组男性DRB1*14等位基因频率(2.11%)显著低于对照组(7.53%),差异有统计学意义(OR=0.1403,P<0.05);AA病例组女性DRB1*15等位基因频率(27.45%)显著高于对照组(14.56%),差异有统计学意义(OR=2.433,P<0.05)。结论 DRB1*08可能是AA患者的易感基因;DRB1*12可能是女性AA患者拮抗基因;DRB1*14可能是男性AA患者的拮抗基因;DRB1*15可能是女性AA患者的易感基因。

HLA-DRB1基因分型新方法的建立

目的改进以测序为基础(sequencing based typing,SBT)的HLA-DRB1基因分型方法,从而降低其分型成本和工作量。方法根据序列比对结果将DRB1基因分为6个簇(cluster),并设计6对簇特异引物(cluster specific primer,CSP),依据其对应的等位基因簇在人群中的频率高低,利用巢式PCR和CSPs渐进式地扩增,PCR产物纯化后进行测序分型。我们将此方法命名为以频率为基础的CSP-SBT法(Frequency based-CSP-SBT,FB-CSP-SBT)。结果用FB-CSP-SBT法对224个中国南方汉族冠心病患者临床样本进行HLA-DRB1等位基因分型,总共鉴定出31个等位基因型,覆盖了所有的HLA-DRB1等位基因谱系。其中,4个在人群中频率最高的簇依次为DR52(47.99%,包含DRB1*03、DRB1*08、DRB1*11、DRB1*12、DRB1*13和DRB1*14等6个DRB1等位基因谱系)、DR15(19.20%,包括DRB1*15和DRB1*16)、DR79(18.53%,包括DRB1*07和DRB1*09)和DR04(12.72%),占整个人群的98%以上。观察到的杂合性(heterozygosity)为0.9107,与前人报道的HLA-DRB1基因位点的杂合性相似,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P=0.3517)。对于每个样本,利用此方法对DRB1基因进行测序分型比传统的SBT至少减少6～8个PCR反应,同时还减少了测序反应的数目。结论用FB-CSP-SBT法可以准确地对HLA-DRB1基因进行分型,比传统的SBT法减少了工作量并降低了分型成本。

PCR-SBT法检测北京地区人群HLA-DRB1遗传多态性

目的调查北京地区人群HLA-DRB1基因座多态性,并探讨HLA的聚合酶链反应-直接测序分型(PCR-SBT)在法医物证学中的应用价值。方法应用PCR-SBT分型方法对北京地区人群中494名健康无关个体进行HLA-DRB1基因座高分辨分型。结果检出233种HLA-DRB1基因型、102种DRB1等位基因型,基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,该位点的观察杂合度(Ho)为0.9210,期望杂合度(He)为0.9342,多态信息量(PIC)为0.9333,匹配概率(Pm)为0.0104,个体识别率(DP)为0.9896,非父排除率(PPE)为0.7776。结论使用PCR-SBT对HLA进行精确分型在法医学领域具有重要的应用价值。

HLA-DRB_1基因配型与高危角膜移植排斥关系的回顾性研究

目的 评价 HL A基因配型在减少高危角膜移植免疫排斥反应中的作用。方法 对 91例高危穿透性角膜移植病例 ,术后双盲法进行供受体 HL A - DRB1 基因分型和临床观察 ,随访 12～ 2 6 mo,对其基因配型情况和术后排斥反应的关系进行回顾性分析。结果 91例患者中 6 1例随访资料完整。其中 16例供受体有 1个基因位点相符 ,在这些配型良好的病例中 ,5例 (31.2 4% )发生免疫排斥反应 ,但随访期间无植片混浊 ;45例配型不好的患者中 ,术后 2 3例 (5 1.11% )发生免疫排斥反应 ,其中 5例发生了植片混浊。结论 HL A-

HLA-DRB1等位基因与湖北汉族急性淋巴细胞白血病相关性的研究

目的探讨HLA-DRB1等位基因与湖北汉族急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的关联性。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法,对154名湖北汉族ALL患者(ALL组)和181名健康人(对照组)进行HLA-DRB1等位基因分型。结果ALL组HLA DRB112基因频率显著高于对照组(15.58%vs10.50%,χ2=4.27,RR=2.24,P<0.05),而HLA DRB107基因频率显著低于对照组(7.79%vs12.7%,χ2=4.57,RR=0.55,P<0.05)。结论HLA-DRB112等位基因可能对湖北汉族ALL有遗传易感作用,而HLA-DRB107等位基因可能对湖北汉族ALL患者有遗传拮抗作用。

HLA-DRB1基因多态性与慢性髓性白血病的相关性研究

目的:探讨HLA-DRB1等位基因多态性与慢性髓性白血病(CML)关联性。方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)DNA分型技术对762例慢性髓性白血病患者(男性492例,女性270例)及2 264例正常对照进行了HLA-DRB1基因分型。结果:正常人群的HLA-DRB1*15等位基因频率最高(17.25%),其次为DRB1*09(14.05%)、DRB1*12(11.73%)和DRB1*04(10.98%),DRB1*10等位基因频率最低(1.39%)。CML患者HLA-DRB1*08等位基因频率显著高于正常对照组(7.48%vs 5.39%,χ2=8.963,OR=1.023,P=0.004),男性患者的DRB1*08基因频率也明显高于正常对照(7.72%vs 5.39%,χ2=8.059,OR=1.025,P=0.007)。女性患者的DRB1*08基因频率也高于正常对照(7.04%vs 5.39%,χ2=0.115,OR=0.995,P=0.774),但没有统计学差异。结论:CML男性患者HLA-DRB1*08的表达明显高于正常人群,提示DRB1*08可能是男性CML患者的易感基因。

HLA-DRB1等位基因分型与类风湿关节炎相关性研究

目的探讨HLA-DRB1等位基因在皖籍江淮地区类风湿关节炎患者的分布及意义。方法采用SSP(序列特异性引物)多重PCR技术扩增106例RA患者和340例正常对照HLA-DRB1等位基因,先对HLA-DRB1位点进行低分辨率分型,再进一步对低分亚型HLA-DRB1*04,DRB1*10,DRB1*01和DRB1*14做高分辨率分型。计算并比较两组等位基因携带率。结果低分结果共13个亚型,其中HLA-DRB1*04,DRB1*09和DRB1*10在RA组的频率显著高于正常对照组(P=0.005,0.039,0.000)HLA-DRB1*11,DRB1*15和DRB1*07的频率显著低于对照组(P=0.005,0.036,0.001)。HLA-DRB1*01,DRB1*14在两组差别无显著意义(P=0.432和P=0.359)。高分结果HLA-DRB1*0405和DRB1*1001在RA组的频率显著高于正常对照组(P=0.001和P=0.000)。结论 HLA-DRB1位点在皖籍江淮地区类风湿关节炎患者中的分布具有丰富的多态性,共同表位等位基因(SE等位基因)HLA-DRB1*0405、DRB1*1001及非SE等位基因HLA-DRB1*09可能是皖籍江淮地区类风湿关节炎患者的易感基因,HLA-DRB1*11,DRB1*15和DRB1*07可能是保护性等位基因。

HLA-DRB1基因芯片与PCR-SSP分型的比较

目的 比较基因芯片和PCR SSP用于汉族南方人群HLA DRB1基因分型的结果 ,评价分型芯片的准确性。方法 77份待分型样本 ,分别用等位基因特异的PCR SSP和基因分型芯片对DRB1分型。芯片分型通过组间特异引物扩增基因组DNA ,扩增中用荧光标记。扩增标记后的产物与分型芯片的探针杂交 ,通过杂交产生的荧光信号确定样品的HLA DRB1基因亚型 ,比较两种方法分型所获得的结果 ,不吻合的样本全部经第三方验证或测序。结果 77份样本 ,两种方法分型全部成功。分型结果的吻合率为 93 %。不吻合样本 6份 ,其中SSP定型纯合子 4份 ,芯片分型全部为杂合子。经第三方验证 ,证实芯片对纯合子和杂合子的分型全部正确。另外 2份不吻合的样本经测序 ,证实SSP分型错误 1份 ,芯片分型错误 1份。芯片的重复率为 96%。结论 基因芯片是一种理想的分型方法 ,具有特异性高、重复性好、操作简便、所需样本量少。