人类白细胞抗原G(HLA-G)与非小细胞肺癌的研究进展

人类白细胞抗原G(HLA-G)属于非经典主要组织相容性复合体Ⅰb(MHCⅠb)类分子,包括膜结合型和可溶性HLA-G两种形式,通过相应受体调节多种免疫细胞的功能,是形成母胎耐受、肿瘤免疫逃逸的重要免疫学机制之一。非小细胞肺癌(NSCLC)在肺癌中占比最高且预后差,研究发现HLA-G的基因多态性及表达水平与NSCLC发生发展密切相关,提示HLA-G可作为NSCLC早期诊断、亚型区分、治疗及预后等潜在的生物标志物,具有辅助诊断依据的临床价值,对其机制的深入研究更可能提供NSCLC诊疗的新策略。

HLA-E、HLA-G及P16蛋白与宫颈癌患者高危型HPV感染的相关性

目的研究人类白细胞抗原(HLA)-E、HLA-G及P16蛋白与宫颈癌患者高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的相关性。方法前瞻性选择2019年1月至2022年11月于湖北民族大学附属民大医院接受治疗的宫颈癌患者82例纳入宫颈癌组,选择同期于本院接受治疗的宫颈上皮内瘤变(CIN)患者64例为CIN组,选择同期于本院健康体检的正常女性60名纳入对照组。3组均行血清HLA-E、HLA-G水平、P16蛋白及HPV分型检测。观察3组HR-HPV分布、血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白表达情况;观察不同CIN分级患者血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白表达情况;观察HR-HPV感染宫颈癌不同病理特征患者血清HLA-G、HLA-E及P16蛋白表达情况;分析HLA-E、HLA-G及P16蛋白与HR-HPV感染宫颈癌患者HPV的相关性。结果宫颈癌组HR-HPV检出率大于CIN组、对照组,CIN组HR-HPV检出率大于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组ⅡA期患者HR-HPV感染率高于CIN组Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级及对照组患者,宫颈癌组IB期患者HR-HPV感染率高于CIN组Ⅰ级、Ⅱ级及对照组患者,CIN组Ⅲ级、Ⅱ级患者HR-HPV感染率高于CIN组Ⅰ级及对照组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白阳性表达率均高于CIN组、对照组,CIN组血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白阳性表达率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CINⅡ级、CINⅢ级患者血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白阳性表达率均高于CINⅠ级患者,CINⅢ级患者血清HLA-E、HLA-G水平及P16蛋白阳性表达率均高于CINⅡ级患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。HR-HPV感染宫颈癌不同年龄、病理类型及是否绝经患者血清HLA-G、HLA-E水平及P16蛋白阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不同FIGO分期、分化程度、HPV阳性分级患者血清HLA-G、HLA-E水平及P16蛋白阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析,血清HLA-G、HLA-E水平及P16蛋白与宫颈癌患者HR-HPV感染呈正相关(P<0.05)。结论高危型HPV持续感染是导致宫颈良性病变并进展为宫颈癌的重要因素。血清HLA-E、HLA-G水平升高及P16蛋白高表达是宫颈癌患者的重要特征。血清HLA-G、HLA-E水平及P16蛋白与宫颈癌患者HR-HPV感染正相关。

类风湿关节炎患者血浆sHLA-G表达及其与Treg细胞的相关性研究

目的探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血浆sHLA-G表达水平及其与Treg细胞水平和RA临床特征的相关性。方法选择40例RA患者和40例健康对照者,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆sHLA-G表达水平,流式细胞术检测外周血CD3+HLA-G+T细胞、Treg细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞)含量。结果 RA患者血浆sHLA-G水平显著低于健康对照组(P<0.001);RA患者外周血CD3+HLA-G+T细胞百分比明显低于健康对照组(P<0.001);Treg细胞百分比也较对照组明显降低(P<0.01)。相关性分析显示,RA患者Treg细胞百分比与sHLA-G水平存在明显正相关性(P<0.01),而与CD3+HLA-G+T细胞百分比无显著相关(P>0.05);RA患者sHLA-G水平及CD3+HLAG+T细胞百分比均与患者DAS28评分显著负相关(P<0.05),而与患者RF、ESR、CRP、抗CCP抗体和ANA水平等均无明显相关性(P>0.05)。结论 RA患者血浆sHLA-G表达异常降低,其可能参与了RA的发生和疾病进展;血浆sHLA-G水平与外周血Treg细胞百分比呈明显正相关,二者之间可能存在相互诱导和调节的信号途径,在诱导和维持机体自身免疫耐受中起着重要的协同作用。

非经典HLA Ⅰ类分子(HLA-G和HLA-E)在人肿瘤细胞系的表达及IFN-γ的调节作用

目的：探讨非经典HLA Ⅰ类分子在人肿瘤细胞系的表达及IFN－γ的调节作用。方法：用RT－PCR法检测12种肿瘤细胞系和人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织标本HLA－G和HLA－E mRNA的表达。结果：人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织均有HLA－G和HLA－E mRNA的表达；12株肿瘤细胞中仅人T细胞淋巴瘤Karpas存在HLA－G3的mRNA表达，经IFN－γ处理后，Karpas出现HLA－G1／G5和HLA－G2／G4的表达，宫颈癌Hela细胞、黑色素瘤M21细胞和膀胱癌T24细胞出现HLA－G3 mRNA的表达；12株肿瘤细胞中有9株表达HLA－E mRNA。结论：肿瘤存在HLA－G和HLA－E mRNA的表达，IFN－γ可促进HLA－G mRNA的表达。肿瘤细胞HLA－G和HLA－E的表达可能是肿瘤逃避免疫系统监视的机制之一。

卵巢浆液性癌中HLA-G的表达及临床意义

目的探讨人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)在卵巢浆液性癌(ovarian serous carcinoma,OSC)中的表达及意义。方法运用免疫组化En Vision法检测108例OSC中HLA-G的表达,分析其与临床病理特征的关系。结果 OSC中HLA-G阳性率为58.33%(63/108),HLA-G表达与肿瘤淋巴结转移、复发、发生部位、FIGO分期和MDACC分级相关(P<0.05)。生存分析显示,HLA-G阳性组生存期明显低于阴性组(P=0.015),HLA-G表达是影响预后的重要因素(P=0.01)。结论 HLAG表达提示为晚期高级别OSC,且患者预后较差,检测HLA-G表达可辅助鉴别诊断高、低级别浆液性癌。

正常妊娠和原因不明习惯性流产者HLA-G基因14bp缺失多态性研究

为研究HLA-G基因3’非翻译区14 bp缺失多态性在习惯性流产患者和正常妊娠妇女中的差异,分别提取患者蜕膜和正常女性外周血DNA。PCR扩增HLA-G基因第8外显子,产物经9%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并经EB染色后在凝胶成像仪下观察。显著性检验用SAS软件包进行四格表χ2分析。结果显示:(1)-14 bp和+14 bp等位基因频率在两组间无显著性差异;(2)与正常对照组相比,RSA患者组中-14 bp/+14 bp杂合子的比例显著升高(χ2=4.7690,P=0.0290)。结果提示,中国人群HLA-G 14 bp缺失多态性在维持正常的妊娠中可能有重要作用。

云南傣族、汉族HLA-G基因14bp插入/缺失多态性研究

14bp插入/缺失多态性是指存在于HLA-G基因第8外显子3′非翻译区(3′UTR)的一个插入/缺失多态,因其能影响HLA-GmRNA的稳定性,并进一步影响HLA-G蛋白的翻译而受到广泛关注。文章采用PCR和电泳技术对云南傣族和汉族两个人群进行了HLA-G基因14bp插入/缺失多态性的检测分析,结果显示傣族和汉族人群+14bp等位基因频率分别为31.97%和40.87%,+14bp/+14bp基因型频率分别为8.20%和17.31%,+14bp/-14bp基因型频率分别为47.54%和47.11%。与国内外已报道的其他人群的数据比较表明:云南汉族群体中HLA-G基因14bp插入/缺失的分布与其他群体相似;傣族则有自己独特的基因型和等位基因分布特点,推测其可能受到了遗传漂变的作用,但不排除自然选择作用的影响。

中国4个民族群体HLA-G基因14bp插入/缺失多态的分布特征及其HLA-A位点的相关性

近年来,位于HLA-G基因第8外显子3′UTR的一个14 bp插入/缺失多态位点与复发性流产、自身免疫性疾病和肝癌等疾病相关而引起广泛关注。本实验室前期的研究表明,不同群体的HLA-G基因14 bp插入/缺失频率具有群体语系分布特点。文章对土族、裕固族、傈僳族和怒族进行HLA-G基因14 bp插入/缺失的基因分型,结合HLA-A基因分型数据,分析土族、裕固族、傈僳族和怒族4个民族群体中14 bp插入/缺失与HLA-A等位基因的关系。研究结果显示:(1)尽管HLA-G基因14 bp插入频率在不同群体中的分布具有各自群体的特点,但遵循着按语系及语族分布的规律,除汉藏语系汉语族与阿尔泰语系蒙古语族无差异外,语族间差异明显;(2)不同群体中,14 bp插入与不同的HLA-A等位基因相关联。

HLA-G在生殖系统癌中的检测:免疫组织化学研究

为检测生殖系统癌有无 HL A- G表达 ,采用免疫组化 L DP法对 2 2 3例生殖系统癌手术切除标本进行了鼠抗 HL A-G单克隆抗体染色 ,观察了 HL A- G在乳腺癌 (n=10 0 )、卵巢癌 (n=30 )、子宫颈癌 (n=30 )、子宫内膜癌 (n=40 )、前列腺癌 (n=2 0 )和睾丸胚胎癌 (n =3)中的表达与分布。结果发现 ,除睾丸胚胎癌外 ,生殖系统其余部位癌标本可见到 40～5 7.5 %的 HL A- G阳性表达。HL A- G阳性反应物在癌细胞内呈颗粒状及均质状 ,主要分布于细胞浆。结果提示 ,HL A- G表达可能是肿瘤生物学中的普遍现象 ,生殖系统癌细胞在发生和发展过程中其基因表达有可能出现反分化现象 ,开始表达HL A- G ,从而使癌细胞产生免疫耐受 。

母儿中HLA-G 14bp插入/缺失多态性在早发型、晚发型重度子痫前期和正常妊娠中分布的差异

目的:探讨早发型、晚发型重度子痫前期和正常妊娠中母儿HLA-G 14bp插入/缺失多态性分布的差异。方法:(1)分析早发型重度子痫前期31例,晚发型重度子痫前期25例,正常妊娠组30例;(2)采用聚合酶链反应技术(PCR),对3组母儿进行HLA-G基因第8外显子14bp插入/缺失多态性的等位基因分型,分别比较3组母亲之间和3组新生儿之间等位基因及基因型的频率分布,通过母/儿基因型配伍,比较3组间基因型配伍频率分布的差异。结果:(1)早发型重度子痫前期组母/儿基因型配伍为母缺失纯合子(-/-14bp)/儿杂合子(+/-14bp)出现的几率要高于晚发型组(χ2=5.034,P=0.025),其和正常妊娠组相比有升高的趋势(χ2=3.685,P=0.055);早发型重度子痫前期组母/儿基因型配伍为母杂合子(+/-14bp)/儿缺失纯合子(-/-14bp)出现的几率要低于正常妊娠组(χ2=3.985,P=0.046);(2)正常妊娠新生儿组HLA-G 14bp缺失多态性等位基因频率分布高于早发型组(χ2=6.270,P=0.012),缺失纯合子(-/-14bp)基因型频率分布高于早发型组(χ2=6.139,P=0.013)。结论:(1)早发型重度子痫组母/儿HLA-G 14bp插入/缺失多态性基因型配伍的不同可能引起母儿之间免疫耐受异常,导致了早发型重度子痫前期的发生;(2)胎儿HLA-G 14bp缺失多态性可能降低了早发型重度子痫前期的发生。

HLA-G多态性与妊娠高血压综合征相关性研究

目的 :探索HLA G与妊娠高血压综合征的发生是否存在关联。方法 :采用非同位素地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术 ,对上海地区 5 4例妊娠高血压综合征 (Pregnancy inducedHypertension ,PIH)病人和 14 6例正常孕妇对照进行HLA G等位基因分型。结果 :在正常对照组及妊高征组中均可检出 9种HLA G等位基因 :G 0 10 11、G 0 10 12、G 0 10 13、G 0 10 18、G 0 10 3、G 0 10 4 1、G 0 10 4 2、G 0 10 4 3、G 0 10 5N。其中G 0 10 11在PIH病人和正常对照组中均是最常见的等位基因 ,各占31 4 8%和 37 33% ,其次是G 0 10 13分别为 2 5 0 0 %和 2 0 2 1% ,G 0 10 4 1分别占 18 5 2 %和 18 4 9%。检出的各等位基因在两组之间比较均无显著性差异。结论 :HLA

HLA-G调控自然杀伤细胞免疫功能的研究进展

人白细胞抗原G(HLA-G)属于非经典的HLAⅠ类分子,正常情况下主要表达于母胎界面绒毛外滋养层细胞。一些肿瘤细胞系、肿瘤组织、感染的组织细胞及正常组织细胞也可检测到HLA-G的表达。自然杀伤(NK)细胞是重要的固有免疫细胞,在免疫应答与免疫调节过程中发挥重要作用。HLA-G参与免疫调控引发了越来越多的关注,其功能由最初的"母胎耐受"逐渐扩展到肿瘤免疫逃逸、器官移植耐受等多个方面,本文重点回顾了HLA-G参与调控NK细胞免疫功能的各种机制:通过与受体相互作用抑制NK细胞的杀伤作用、调节NK细胞表面受体及细胞因子的表达、通过胞啃作用(trogocytosis)广泛引发免疫抑制、引发NK细胞凋亡。

表达HLA-G1的K562细胞抵抗外周血NK细胞杀伤作用的研究

目的研究 HL A- G1分子对 NK细胞杀伤活性的影响。方法借助脂质体介导的 DNA转染技术 ,将本室构建的真核表达质粒 pc DNA3 - HL A- G1转染人 K5 62细胞 ;通过 G4 18筛选 ,获得克隆化细胞株 K5 62 - G1;应用 RT- PCR及流式细胞术分别在 RNA水平和蛋白质水平检测 HL A- G1的表达 ;最后 ,应用 MTT比色法检测转染细胞对不同个体外周血 NK细胞杀伤活性的抑制效应。结果与转染了空质粒的对照组相比 ,外周血 NK细胞对 K5 62 - G1的杀伤率降低 3 2 .4 3 % ( P <0 .0 1)。结论靶细胞表达 HL A - G1分子可明显抑制 NK细胞的杀伤效应。

药物对卵巢癌裸鼠移植瘤组织中HLA-G和HLA-E表达的影响

目的探讨天花粉蛋白、米非司酮、顺铂在卵巢恶性肿瘤治疗中的作用机制。方法培养卵巢癌OVCAR3细胞株。制备人卵巢癌裸鼠移植瘤模型。将裸鼠随机分为5组:对照组、天花粉蛋白组、米非司酮组、顺铂组、顺铂和米非司酮联合用药组。观察各组裸鼠皮下移植瘤体积,采用RT-PCR方法和流式细胞技术检测其中人类白细胞抗原G(HLA-G)、人类白细胞抗原E(HLA-E)mRNA和蛋白表达情况。结果(1)各用药组移植瘤体积均明显小于对照组(P<0.01),米非司酮组和顺铂组对肿瘤的抑制率明显低于联合组(P<0.01)。(2)和对照组比较,HLA-G、HLA-E、mRNA和蛋白表达在顺铂组无明显改变(P>0.05),在其余各组都显著降低(P<0.01)。HLA-GmRNA和蛋白表达之间呈正相关(r=0.692,P<0.01)。HLA-EmRNA和蛋白表达之间呈正相关(r=0.472,P<0.01)。HLA-GmRNA和蛋白表达与HLA-E呈正相关(r分别为0.388和0.668,P<0.05)。结论与顺铂不同,天花粉蛋白和米非司酮的抗肿瘤作用机制之一是能够明显下调肿瘤组织中HLA-G和HLA-E的表达水平,同顺铂联合使用,有望取得更好的治疗效果。

HLA-G蛋白及基因在子宫内膜异位症在位和异位内膜中的表达

目的探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)基因及蛋白在子宫内膜异位症(EM)在位和异位内膜组织中的表达及其生物学意义。方法应用免疫组化法和原位杂交法检测38例子宫腺肌症、30例卵巢子宫内膜异位症异位内膜及在位内膜、20例子宫肌瘤患者(对照组)在位子宫内膜中HLA-G蛋白和基因的表达。结果HLA-G蛋白和基因在子宫内膜异位症患者异位和在位内膜组织中的表达均明显高于对照组(P<0·01),但在异位内膜和在位内膜的表达无明显差异(P>0·05)。HLA-G蛋白在EM不同临床分期的表达无明显差异(P>0·05),在增生期和分泌期子宫内膜的表达无差异(P>0·05)。结论HLA-G的表达可能与子宫内膜异位症的发病有关。

重组蛋白sHLA-G1的原核表达与纯化

为了进一步在蛋白质水平对人白细胞抗原HLA-G进行分析,利用已经构建好的克隆质粒pGEM-T-HLA-G1,进一步构建了重组原核表达质粒pET28a-sHLA-G1。SDS-PAGE检测表明,重组蛋白sHLA-G1在大肠杆菌(E.coli)中得到稳定表达,原核表达的重组蛋白sHLA-G1主要以包涵体形式存在。包涵体蛋白经充分洗涤、尿素溶解后用钴离子树脂纯化,并用SDS-PAGE和Western印迹进行了分析,鉴定结果表明,该蛋白纯度达到90%以上,并能与HLA-G特异性抗体87G反应。该研究结果为进一步的复性工作奠定了基础。

汉族人HLA-G基因多态性与胃癌相关性研究

目的探讨汉族人HLA-G基因多态性与胃癌相关性方法将123例胃癌患者作为研究对象(经过病理学确诊为胃癌的患者),同时选取同期健康体检患者150例作为对照组。采用聚合酶链反应序列特异性引物方法(PCR SSP)对以上患者的HLA-G和HLA-DRB1等位基因亚型进行检测,观察2组患者HLA-G和HLA-DRB1等位基因亚型分布频率。结果与对照组比较,观察组中HLA-DRB1*03和HLA-DRB1*15检出率显著高于对照组(P<0.05),且RR分别为1.427和2.209;2组HLA-G*01012分布存在显著差异(P<0.05),且RR值为1.75。结论胃癌发生可能与HLA-G*01012、HLA-DRB1-03和HLA-DRB1-15等位基因频率有较强的相关性,且均为保护性基因。

膜表达的HLA-G1对同种反应性PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响

目的研究人脐静脉内皮细胞系(ECV304)表达的HLA-G1对同种异体外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2型细胞因子分泌的影响。方法采用脂质体介导的基因转染技术将pcDNA3-HLA-G1转入ECV304,以间接免疫荧光技术在蛋白质水平上检测HLA-G1分子在ECV304上的表达;以表达HLA-G1的ECV304作为刺激细胞,灭活后,与健康人PBMC共同培养,用ELISA检测上清液中Th1/Th2型细胞因子的浓度,观察HLA-G1对同种异体抗原激活的PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响。结果与转染pcDNA3空质粒的对照组相比,HLA-G1能使PBMC的IL-10分泌增加(P<0.05),而IL-2,IFN-γI、L-4分泌无明显影响。结论HLA-G1能引起由同种异体抗原激活的PBMC分泌IL-10增加,提示HLA-G1有可能使Th1/Th2型细胞因子向Th2型偏移。

RNA干扰技术抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达

目的:以人类白细胞抗原G基因(HLA-G)为靶基因,采用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达。方法:针对HLA-G基因设计一段小干扰RNA(siRNA),由Ambion公司化学合成,用脂质体lipofectamine2000将该siRNA转染JEG-3细胞,采用RT-PCR、流式细胞术和Westernblot分别从mRNA和蛋白质水平检测该siRNA对HLA-G表达的影响。结果:针对HLA-G的siRNA能够明显下调JEG-3细胞中HLA-G的表达水平,并具有良好的特异性。结论:在JEG-3细胞系中采用RNAi技术特异性下调了HLA-G基因的表达,为进一步研究HLA-G在人类的母胎免疫耐受、正常妊娠的维持及助孕技术应用等方面的作用奠定了实验基础。