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可溶性HLA-G-肽复合物的体外制备与纯化 被引量:1
1
作者 钟茂华 翁秀芳 +4 位作者 梁智辉 夏芳珍 李佳楠 陈雪玲 吴雄文 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期377-379,共3页
目的探讨可溶性HLA-G-肽复合物的体外制备与纯化。方法原核高效表达的HLA-G重链及轻链(β2m)在抗原肽(人工合成九肽NH2-KGPPAALTL-COOH)的存在下,通过稀释复性折叠成HLA-G-肽复合物,采用凝胶过滤层析对折叠复合物进行纯化。利用特异性抗... 目的探讨可溶性HLA-G-肽复合物的体外制备与纯化。方法原核高效表达的HLA-G重链及轻链(β2m)在抗原肽(人工合成九肽NH2-KGPPAALTL-COOH)的存在下,通过稀释复性折叠成HLA-G-肽复合物,采用凝胶过滤层析对折叠复合物进行纯化。利用特异性抗体(mAb W6/32和兔抗人β2m抗体)进行ELISA和Western blot对纯化产物进行鉴定。结果折叠复合物中,主要含有HLA-G重链聚合体、HLA-G-肽复合物及β2m3种成分,纯化后主要为HLA-G-肽复合物。结论成功地获得纯度较高的可溶性HLA-G-肽复合物单体,为进一步研究HLA-G的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 hla-g-肽复合物 稀释复性 凝胶过滤层析
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胶原蛋白肽-焦磷酸铁复合物的构建及其补铁效果评价
2
作者 刘宁 王薇 +2 位作者 贺人杰 姚晓琳 张琨 《陕西科技大学学报》 北大核心 2025年第1期29-34,共6页
铁复合物是一种将铁元素与食品大分子结构进行组装的新型铁强化剂,具有化学稳定性和生物利用度高的优点.本课题采用均质、超声和透析处理,在焦磷酸铁(FP)的合成过程中,引入胶原蛋白肽(CPs).红外光谱测定发现,该方法成功制得CPs-FP复合物... 铁复合物是一种将铁元素与食品大分子结构进行组装的新型铁强化剂,具有化学稳定性和生物利用度高的优点.本课题采用均质、超声和透析处理,在焦磷酸铁(FP)的合成过程中,引入胶原蛋白肽(CPs).红外光谱测定发现,该方法成功制得CPs-FP复合物.与FP相比,CPs-FP的胃肠释放率提高.缺铁性贫血大鼠实验表明,CPs-FP能够有效改善大鼠体重、血红蛋白含量、组织铁含量和其他指数,呈现浓度依赖效应.同等剂量下,CPs-FP复合物具有更高的生物利用度. 展开更多
关键词 焦磷酸铁 胶原蛋白 复合物 胃肠消化 缺铁性动物
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藜麦多肽与食品多酚复合物的制备、表征及功能性研究
3
作者 俞瑜媛 周青青 +2 位作者 周柳莎 胡香莲 施永清 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第6期83-96,共14页
研究常用食品多酚(茶多酚(TPs)、竹叶抗氧化物(AOB))对藜麦多肽(QPs)结构、抗氧化性和抑菌性的影响。采用荧光分光光度计、傅里叶红外光谱仪探究QPs和多酚复合过程的结构变化,运用ANS探针分析QPs表面疏水性,并通过粒径、电位等指标对复... 研究常用食品多酚(茶多酚(TPs)、竹叶抗氧化物(AOB))对藜麦多肽(QPs)结构、抗氧化性和抑菌性的影响。采用荧光分光光度计、傅里叶红外光谱仪探究QPs和多酚复合过程的结构变化,运用ANS探针分析QPs表面疏水性,并通过粒径、电位等指标对复合胶粒进行表征。荧光光谱结果表明,QPs与多酚复合后,QPs的固有荧光发生猝灭,且随多酚添加量的增加而降低,固有荧光光谱的最大发射波长发生红移。QPs与TPs复合后,表面疏水性显著降低(P<0.05),QPs∶TPs添加比例为1∶2时,ANS荧光强度由(74.13±1.67)AU,降低至(62.14±1.36)AU;而QPs与AOB复合后,表面疏水性无显著变化(P>0.05)。二级结构分析表明,所有复合样品中QPs的β-折叠、α-螺旋、无规则卷曲的百分含量下降,β-转角的百分含量增加。QPs∶TPs为1∶2时,β-折叠、α-螺旋、无规则卷曲和β-转角的百分含量分别为43.58%,17.20%,12.92%和26.30%;QPs∶AOB为1∶2时,β-折叠、α-螺旋、无规则卷曲和β-转角的百分含量分别为49.60%,14.99%,9.79%和25.62%。此外,QPs与TPs、AOB复合后能够显著提高QPs的抗氧化活性和对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制活性(P<0.05)。这些发现表明TPs和AOB在改善QPs功能特性方面可行,以及QPs-多酚复合物在食品配料及功能性食品体系中具有潜在用途。 展开更多
关键词 藜麦多-多酚复合物 二级结构 抗氧化活性 抑菌活性
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鱼卵肽钙复合物对大鼠体内促钙吸收作用的研究 被引量:16
4
作者 黄海 李八方 +3 位作者 刘尊英 慕现敏 聂瑞艳 曾名湧 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期331-335,共5页
通过构造缺钙大鼠模型,研究鱼卵肽钙复合物(EPP-Ca)对缺钙大鼠的补钙效果。结果表明,经过4周的补钙,EPP-Ca使缺钙大鼠增重25.53%,钙吸收率达65.28%,血清钙和血清碱性磷酸酶分别恢复到2.58mmol/L和177.13U/L,股骨重量、骨密度和骨钙含量... 通过构造缺钙大鼠模型,研究鱼卵肽钙复合物(EPP-Ca)对缺钙大鼠的补钙效果。结果表明,经过4周的补钙,EPP-Ca使缺钙大鼠增重25.53%,钙吸收率达65.28%,血清钙和血清碱性磷酸酶分别恢复到2.58mmol/L和177.13U/L,股骨重量、骨密度和骨钙含量分别达到877.31mg、0.22g/cm2和254.75mg/g,补钙效果显著优于无机钙,与酪蛋白磷酸肽钙复合物(CPP-Ca)效果相当。EPP-Ca有望成为新型的补钙制剂。 展开更多
关键词 鱼卵复合物 促钙吸收 补钙制剂
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气相条件下金属离子/肽复合物电喷雾串联质谱研究 被引量:7
5
作者 崔勐 刘志强 +1 位作者 宋凤瑞 刘淑莹 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2001年第7期1111-1113,共3页
Electrospray ionization(ESI) and tandem mass spectrometry have been used to investigate the gas phase interactions of five metal ions and seven dipeptides. For silver ion, two complexes( + and +) were obtained as well... Electrospray ionization(ESI) and tandem mass spectrometry have been used to investigate the gas phase interactions of five metal ions and seven dipeptides. For silver ion, two complexes( + and +) were obtained as well as the one complex ( +) for transition metal ions. Upon collision activation, there is an obvious difference in MS/MS data between metal ion complex and the protonated molecule. The fragment pathway of each complex is related to the structures of dipeptide and the nature of metal ion which suggest that there are several interaction between the metal ions and dipeptides in gas phase. 展开更多
关键词 电喷雾质谱 金属离子/复合物 串联质谱 金属离子 相互作用机理
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谷胱甘肽与D型氨基酸非共价复合物的质谱 被引量:9
6
作者 储艳秋 潘婷婷 +3 位作者 戴兆云 俞卓伟 郑松柏 丁传凡 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1981-1987,共7页
为了研究谷胱甘肽和D型氨基酸的非共价相互作用,将一定化学剂量比的还原型谷胱甘肽与D-苯丙氨酸、D-组氨酸或D-谷氨酰胺在室温下混合后,温育1h,使反应达到平衡.电喷雾质谱测量结果表明,在生理pH条件下,谷胱甘肽可以和D型氨基酸经反应生... 为了研究谷胱甘肽和D型氨基酸的非共价相互作用,将一定化学剂量比的还原型谷胱甘肽与D-苯丙氨酸、D-组氨酸或D-谷氨酰胺在室温下混合后,温育1h,使反应达到平衡.电喷雾质谱测量结果表明,在生理pH条件下,谷胱甘肽可以和D型氨基酸经反应生成非共价复合物.串级质谱中的碰撞诱导解离(CID)以及紫外光谱进一步确认了非共价复合物的生成.为了避免严重的离子化效率和质谱信号相互抑制作用,对谷胱甘肽和D-谷氨酰胺的相互作用作了定量的评估.配制一系列不同初始浓度的谷胱甘肽和D型氨基酸的混合溶液,并用电喷雾质谱测定混合溶液中不同质点的质谱峰强度,计算了谷胱甘肽与三个D型氨基酸结合形成的复合物的解离常数.计算结果表明,谷胱甘肽可以和D型氨基酸结合形成不同键合强度的非共价复合物,其稳定性按照D-谷氨酰胺、D-苯丙氨酸、D-组氨酸的次序逐渐增大. 展开更多
关键词 D-氨基酸 谷胱甘 非共价复合物 电喷雾质谱 解离常数
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HSP70多肽复合物修饰DCs疫苗抗胰腺癌荷瘤小鼠的实验研究 被引量:12
7
作者 张晓娟 董坚 +2 位作者 吴振林 洪敏 邢海霞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期792-796,共5页
目的:探讨负载热休克蛋白70多肽复合物(HSP70-PC)抗原的树突状细胞(DCs)疫苗对胰腺癌荷瘤小鼠的免疫治疗作用。方法:采用低渗裂解、ConA-Sepharose亲和层析及ADP-Agarose亲和层析法,从小鼠胰腺癌(MPC83)肿瘤组织中纯化HSP70-PC,修饰小... 目的:探讨负载热休克蛋白70多肽复合物(HSP70-PC)抗原的树突状细胞(DCs)疫苗对胰腺癌荷瘤小鼠的免疫治疗作用。方法:采用低渗裂解、ConA-Sepharose亲和层析及ADP-Agarose亲和层析法,从小鼠胰腺癌(MPC83)肿瘤组织中纯化HSP70-PC,修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DCs),制备树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗,用MTT法检测混合淋巴细胞反应(MLR)中HSP70-PC致敏DC对CTL的增殖及活化效果;建立MPC83荷瘤小鼠模型,观察树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗对荷瘤小鼠治疗的效果和小鼠存活期。结果:经上述方法分离、纯化获得了较高纯度的HSP70-PC蛋白质;HSP70-PC在1.5~2.0μg/ml范围内可达到刺激树突状细胞最强效果,用HSP70-PC修饰的DCs能增强T细胞的增殖和活化能力;应用树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗治疗荷瘤小鼠能显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠存活期。结论:采用低压亲和层析柱可从胰腺癌瘤块中获得较高纯度HSP70多肽复合物,其修饰的DCs疫苗用于荷瘤小鼠免疫治疗有显著疗效,为临床胰腺癌生物免疫治疗奠定基础。 展开更多
关键词 胰腺癌 热休克蛋白70多复合物 树突状细胞 肿瘤免疫
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可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化 被引量:10
8
作者 翁秀芳 陈浩 +4 位作者 吴雄文 梁智辉 韩军艳 黄亚非 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期265-268,共4页
目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作... 目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作用下进行生物素化 ,使生物素结合到HLA A2 抗原肽复合物中的H链C端。利用特异性抗体 (mAbW6 / 32和兔抗人 β2m抗体 )及链霉亲合素进行ELISA和Westernblot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果 :折叠复合物中 ,主要含有HLAH链聚合体、HLA A2 肽复合物单体及 β2m3种成分 ,其中H链聚合体与HLA A2单体可生物素化。结论 :成功地获得生物素化的HLA A2 抗原肽复合物单体 ,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础 ,也为过程复杂的HLA 展开更多
关键词 HLA—A2-抗原复合物 生物素化 BirA酶
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多价精子抗原表位多肽-免疫刺激复合物的抗生育作用研究 被引量:6
9
作者 何畏 史常旭 +1 位作者 梁志清 李玉清 《重庆医学》 CAS CSCD 2002年第7期555-556,共2页
目的 提高多价小鼠精子抗原表位多肽的免疫性避孕效应。方法 应用固相化学合成法合成具有两种精子抗原蛋白关键表位的 35肽 ,纯化后的多肽与皂甙QuilA及磷脂、胆固醇混合 ,透析制备多肽 免疫刺激复合物 (ISCOMs) ,并用于免疫雌性C5 7... 目的 提高多价小鼠精子抗原表位多肽的免疫性避孕效应。方法 应用固相化学合成法合成具有两种精子抗原蛋白关键表位的 35肽 ,纯化后的多肽与皂甙QuilA及磷脂、胆固醇混合 ,透析制备多肽 免疫刺激复合物 (ISCOMs) ,并用于免疫雌性C5 7小鼠。结果 合成后的 35肽经纯化后纯度大于 95 % ,经质谱仪鉴定质荷比与理论值一致 ;透析法制备的多肽 ISCOMs在电镜下呈规则的蜂巢样、由多个亚单位构成的开放型结构 ;免疫后小鼠的血清及阴道冲洗液中特异性IgG和IgA最高分别为 1∶180 0 0和 1∶16 0 0 ;同时受孕率降为 2 0 0 % ,显著低于对照组 (P≤ 0 0 1)。结论 多肽 ISCOMs复合物具有独特的蜂巢样结构 ,其应用可显著提升多肽的免疫效应 ,尤其是粘膜免疫 ,获得较好的免疫性避孕效果 。 展开更多
关键词 精子抗原 ISCOMS 免疫性避孕 免疫刺激复合物
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一种适于多肽复合物分析的血红素测定方法 被引量:9
10
作者 苏冰 王友联 +5 位作者 张枢 王宇 龙伟浩 李婷 张瞳 麦荫乔 《食品与药品》 CAS 2011年第3期117-119,共3页
目的建立测定多肽复合物血红素含量的方法。方法将血红素转变为氯化血红素,用紫外分光光度法测定,检测波长399 nm。结果供试品取样量在2~10μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率(n=6)99.40%,RSD=4.00%。结论该方法简便... 目的建立测定多肽复合物血红素含量的方法。方法将血红素转变为氯化血红素,用紫外分光光度法测定,检测波长399 nm。结果供试品取样量在2~10μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率(n=6)99.40%,RSD=4.00%。结论该方法简便、灵敏、准确,可作为控制血红素多肽产品质量的方法。 展开更多
关键词 复合物 血红素 紫外分光光度法
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酪蛋白非磷酸肽对大豆多肽的修饰及复合物的乳化性表征 被引量:4
11
作者 黄文秀 郭庆启 +1 位作者 石彦国 张娜 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第9期157-161,共5页
通过Plastein反应利用酪蛋白非磷酸肽(casein non-phosphopeptides,CNPPs)对大豆多肽进行修饰,对制备出的CNPPs-大豆多肽复合物进行电泳、乳化性质和微观结构分析。结果表明:反应最佳工艺参数为:反应温度42℃、pH 4.8、时间3 h、凝乳酶... 通过Plastein反应利用酪蛋白非磷酸肽(casein non-phosphopeptides,CNPPs)对大豆多肽进行修饰,对制备出的CNPPs-大豆多肽复合物进行电泳、乳化性质和微观结构分析。结果表明:反应最佳工艺参数为:反应温度42℃、pH 4.8、时间3 h、凝乳酶添加量5 g/100 mL,该最优条件下产物的产率为(45.26±0.62)%,电泳结果证实CNPPs和大豆多肽发生了组合。对复合物功能性评价发现,CNPPs-大豆多肽复合物乳化性为0.28±0.02,乳化稳定性为(13.44±0.47)min,均高于大豆多肽的乳化性和乳化稳定性。微观结构较未修饰的大豆多肽呈现出更多的、均一的球形乳化微粒,证实通过CNPPs对大豆多肽的修饰可以有效提高蛋白质的乳化性和乳化稳定性。 展开更多
关键词 酪蛋白非磷 大豆多 复合物 乳化性 微观结构
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可溶性PD-1协同HSP70-肽复合物抑制荷瘤小鼠肝癌的研究 被引量:6
12
作者 王小红 张桂梅 +2 位作者 贺宇飞 张慧 冯作化 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期655-658,共4页
目的 :研究基因转染和表达的可溶性PD 1(solubleprogrammeddeath 1,sPD 1)对HSP70 肽疫苗抗肿瘤效果的影响及协同机制。方法 :以HSP70 肽疫苗免疫BALB/c小鼠后 ,用半定量RT PCR技术检测和分析HSP70 肽疫苗对小鼠脾细胞上PD 1及其配... 目的 :研究基因转染和表达的可溶性PD 1(solubleprogrammeddeath 1,sPD 1)对HSP70 肽疫苗抗肿瘤效果的影响及协同机制。方法 :以HSP70 肽疫苗免疫BALB/c小鼠后 ,用半定量RT PCR技术检测和分析HSP70 肽疫苗对小鼠脾细胞上PD 1及其配体基因表达的影响。体内转染表达sPD 1,用MTT比色法检测HSP70 肽疫苗免疫小鼠对肿瘤生长的抑制作用以及脾淋巴细胞的细胞毒活性。结果 :单独的sPD 1就有抗肿瘤效应。HSP70 肽疫苗不仅能预先在动物体内诱导肿瘤特异性的CTL ,而且可使脾细胞上抑制性共刺激受体PD 1及其配体的表达显著升高。用sPD 1与HSP70 肽疫苗联合治疗荷瘤小鼠 ,能提高脾CTL的杀伤效率并延长HSP70 肽疫苗的免疫效果。结论 :sPD 1可通过阻断PD 1与其配体的结合作用 ,及减弱PD 1的负反馈抑制作用 ,而增强HSP70 展开更多
关键词 共刺激分子 PD-1 B7-H1 HSP70-复合物
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热休克蛋白gp96肽复合物诱导的抗肿瘤免疫 被引量:5
13
作者 张天一 牛纪晓 +2 位作者 林琳 黄晓春 顾君一 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期17-20,共4页
目的: 用不同种类肿瘤提取的热休克蛋白 (HSP)gp96 肽复合物纯化后免疫动物,观察其诱导抗肿瘤免疫的效应,并初步探讨其机制。方法: 从肿瘤细胞中制备HSPgp96 肽复合物, 观察其免疫诱导作用。用不同剂量及不同来源的gp96 肽复合物免疫 6... 目的: 用不同种类肿瘤提取的热休克蛋白 (HSP)gp96 肽复合物纯化后免疫动物,观察其诱导抗肿瘤免疫的效应,并初步探讨其机制。方法: 从肿瘤细胞中制备HSPgp96 肽复合物, 观察其免疫诱导作用。用不同剂量及不同来源的gp96 肽复合物免疫 6组小鼠后, 用H22癌细胞攻击, 观察各组小鼠的肿瘤发生率、瘤重及瘤组织的形态学变化并与对照组相比较。观察gp96 肽复合物对小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮 (NO)和杀瘤活性的影响。结果: 获得的纯化HSPgp96 肽复合物的Mr为 96 000。gp96 肽复合物的免疫效果与其剂量有关, 以 18μg/只的效果最明显。交叉免疫实验证明, 免疫小鼠能抵抗同种肿瘤细胞的攻击, 而对异种肿瘤细胞的则无免疫保护作用。gp96 肽复合物可刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO同时杀瘤活性增高。结论: 从肿瘤细胞中分离纯化的HSPgp96 肽复合物免疫小鼠后, 可获得特异性的抗肿瘤作用; 其对肿瘤细胞的杀伤作用与gp96 肽复合物能增强小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO增多有关。 展开更多
关键词 GP96-复合物 抗肿瘤免疫 巨噬细胞 一氧化氮
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电喷雾质谱法研究谷胱甘肽与L型芳香性氨基酸非共价复合物 被引量:7
14
作者 储艳秋 戴兆云 +3 位作者 蒋公羽 郑松柏 陈玺 丁传凡 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第5期869-875,共7页
为探索谷胱甘肽和L型芳香性氨基酸的非共价相互作用,将一定化学剂量比的还原型γ-谷胱甘肽分别与L型芳香性氨基酸(包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸)在室温和生理pH条件下混合后,温育1 h,生成非共价复合物,并使反应完全.电喷雾质谱测量结... 为探索谷胱甘肽和L型芳香性氨基酸的非共价相互作用,将一定化学剂量比的还原型γ-谷胱甘肽分别与L型芳香性氨基酸(包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸)在室温和生理pH条件下混合后,温育1 h,生成非共价复合物,并使反应完全.电喷雾质谱测量结果揭示谷胱甘肽和L型芳香性氨基酸反应可以生成非共价复合物.在二级串级质谱MS2测得的复合物碎片离子峰中,除芳香性氨基酸离子峰外,还包括谷胱甘肽及其它再次碎裂产生的b2和y2碎片离子,进一步确认了非共价复合物的形成.紫外光谱也证实了电喷雾质谱的实验结果.为避免严重的离子化效率差异和质谱信号的相互抑制作用,定量评估了谷胱甘肽和酪氨酸的相互作用,结果显示反应物的初始浓度应该选择在5×10-5~3.00×10-4mol/L范围内.用质谱滴定法测定了谷胱甘肽与3个芳香性氨基酸非共价复合物的解离常数,结果表明,谷胱甘肽复合物的稳定性按Tyr,Trp和Phe次序依次增大. 展开更多
关键词 L型芳香性氨基酸 谷胱甘 非共价复合物 质谱滴定法 解离常数
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热休克蛋白gp96-肽复合物的提取及纯化 被引量:3
15
作者 张天一 牛纪晓 +2 位作者 周欣阳 林琳 顾君一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期690-693,共4页
目的:建立从H22肝癌细胞中提取、纯化热休克蛋白gp96肽复合物的方法。方法:①制备H22肝癌细胞蛋白:将H22肝癌细胞裂解、离心、过滤及透析后获得。②gp96肽复合物的纯化:上述可溶性H22肝癌细胞蛋白经分级硫酸铵盐析后,依次用ConASepharos... 目的:建立从H22肝癌细胞中提取、纯化热休克蛋白gp96肽复合物的方法。方法:①制备H22肝癌细胞蛋白:将H22肝癌细胞裂解、离心、过滤及透析后获得。②gp96肽复合物的纯化:上述可溶性H22肝癌细胞蛋白经分级硫酸铵盐析后,依次用ConASepharose亲和层析、SephadexG25更换缓冲液及DEAESephacel离子交换层析分离纯化。③gp96肽复合物的鉴定和浓度测定:所得蛋白经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernblot进行蛋白分子量及性质鉴定,Lowry法测定蛋白浓度。结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染鉴定为单一带,分子量为96kD;Westernblot结果证实为HSPgp96。每20ml压积H22细胞最终获得1mg的HSPgp96。结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度HSPgp96肽复合物。 展开更多
关键词 HSP GP96-复合物 纯化 H22肝癌 小鼠
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可溶性HLA-G1抗原肽复合物的体外折叠及其功能研究 被引量:4
16
作者 杨敬宁 吴雄文 +3 位作者 梁智辉 韩军艳 黄亚非 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期265-268,共4页
目的:体外折叠形成可溶性HLA G1抗原肽复合物,并研究其生物学功能。方法:以原核表达的可溶性HLA-G1的重链及轻链β2m,与人工合成的抗原九肽体外进行共折叠复性。将折叠产物通过SephadexG75层析柱纯化,经Westernblot进行构象鉴定。探讨... 目的:体外折叠形成可溶性HLA G1抗原肽复合物,并研究其生物学功能。方法:以原核表达的可溶性HLA-G1的重链及轻链β2m,与人工合成的抗原九肽体外进行共折叠复性。将折叠产物通过SephadexG75层析柱纯化,经Westernblot进行构象鉴定。探讨可溶性HLA-G1分子对NK细胞杀伤活性的影响,对混合淋巴细胞培养中T细胞增殖的影响,以及对活化T细胞凋亡的影响。结果:折叠产物可与mAbW6/32特异性结合,在Westernblot的鉴定中呈阳性反应。可溶性HLA-G1可有效地抑制NK细胞的细胞毒作用,抑制混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖,促进活化T细胞发生凋亡。结论:体外折叠成功地形成可溶性HLA-G1抗原肽复合物,该复合物具有抑制NK细胞和T细胞的活性。 展开更多
关键词 sHLA-G1-抗原复合物 折叠复性 细胞毒作用 增殖 凋亡
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丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6上调新生多肽相关复合物α多肽基因的表达 被引量:11
17
作者 杨倩 刘妍 +4 位作者 成军 李克 王建军 洪源 张树林 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第7期959-962,共4页
目的:探讨HCV核心蛋白结合蛋白6对新生多肽相关复合物α多肽启动子的激活作用.方法:以基因表达谱芯片技术筛选HCBP6表达质粒转染HepG2细胞后的差异表达基因为基础,利用生物信息学技术确定NACA的启动子区域(NACA-p),聚合酶链反应(PCR)扩... 目的:探讨HCV核心蛋白结合蛋白6对新生多肽相关复合物α多肽启动子的激活作用.方法:以基因表达谱芯片技术筛选HCBP6表达质粒转染HepG2细胞后的差异表达基因为基础,利用生物信息学技术确定NACA的启动子区域(NACA-p),聚合酶链反应(PCR)扩增NACA-p,克隆至真核表达载体pCAT3中,构建pCAT3-NACA-p表达载体;以该质粒转染COS-7、NIH3T3细胞系,用酶联免疫黏附方法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;与pcDNA3.1(-)-HCBP6共转染NIH 3T3细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果:质粒pCAT3-NACA-p在NIH 3T3、COS-7细胞中能够激活CAT的表达;共转染实验中pCAT3-NACA-p+pcDNA3.1(-)-HCBP6组CAT的表达活性是pCAT3-NACA-p的4倍.结论:pCAT3-NACA-p具有启动子活性;HCV核心蛋白结合蛋白6对NACA-p有激活作用.本研究为探讨HCV核心蛋白结合蛋白6的功能提供新的实验及理论基础. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白结合蛋白6 相关复合物 基因表达 α多 启动子 聚合酶链反应
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热休克蛋白-抗原肽复合物疫苗预防肝癌术后复发32例 被引量:7
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作者 赵子粼 鄢莉 +2 位作者 崔建东 师建国 龙桂宁 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第22期2076-2078,共3页
目的:探讨热休克蛋白-抗原肽复合物(HSP)疫苗预防肝癌术后复发的效果.方法:回顾性分析32例应用HSP疫苗的原发性肝癌患者,并检测治疗前后T细胞亚群、NK细胞活性和血清IL-2受体水平的变化,计算3 a内的生存率,并与对照组比较.结果:治疗组术... 目的:探讨热休克蛋白-抗原肽复合物(HSP)疫苗预防肝癌术后复发的效果.方法:回顾性分析32例应用HSP疫苗的原发性肝癌患者,并检测治疗前后T细胞亚群、NK细胞活性和血清IL-2受体水平的变化,计算3 a内的生存率,并与对照组比较.结果:治疗组术后3 mo CD3+,CD8+,CD4+/CD8+水平与术前和对照组比较有显著性差异(P<0.05),NK细胞活性较治疗前明显升高(P<0.01);治疗组3a生存率为68.8%,与对照组37.5%比较明显升高(P<0.05).结论:肝癌术后应用HSP疫苗能明显提高患者免疫功能,且可预防术后复发、提高远期生存率. 展开更多
关键词 肝细胞 复发 热休克蛋白-抗原复合物 肿瘤疫苗
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HSP70-肿瘤肽复合物的纯化及其对肝癌细胞株HepG-2增殖的作用 被引量:5
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作者 隋春阳 李航宇 +3 位作者 胡勇 宗志红 李洪秀 郭仁宣 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第18期1775-1779,共5页
目的:应用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统从肝癌组织中分离和纯4EHSP70-肽复合物,并研究其对肝癌细胞系HepG-2增殖的影响.方法:将组织进行匀浆、高速离心提取总蛋白后依次进行ConA-Sepharose亲和层析和 DEAE-Sephacel子交换层析分离纯化,... 目的:应用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统从肝癌组织中分离和纯4EHSP70-肽复合物,并研究其对肝癌细胞系HepG-2增殖的影响.方法:将组织进行匀浆、高速离心提取总蛋白后依次进行ConA-Sepharose亲和层析和 DEAE-Sephacel子交换层析分离纯化,所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子质量及性质鉴定,Bradford 法测定蛋白浓度;利用MTT方法检测HSP70- 肽复合物对HepG-2细胞增长的情况.结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、考马斯量蓝鉴定为单一带, 分子质量为70 kDa;Western blot结果证实为 HSP70,每10 g组织最终获得1.5 mg的HSP70; HSP70刺激组12,48,72 h与对照组的A值之间有显著差异(0.1 mg/L:t=-0.2500,P=0.00; t=-0.1777,P=0.001:t=-0.3094,P=0.001; 0.5 mg/L:t=-0.2878,P=0.00;t=-0.2044,P= 0.00;t=-0.3285,P=0.00;1 mg/L:t=-0.3118, P=0.00;t=-0.2592,P=0.00;t=-0.1994, P=0.025;5 mg/L:t=-0.4007,P=0.00;t= -0.1302,P=0.016;t=-0.2537,P=0.005),细胞存活率明显高于对照组(P<0.01).结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度 HSP70肽复合物;HSP70肽复合物可以促进 HepG-2细胞的生长. 展开更多
关键词 HSP70-肿瘤复合物 纯化 肝癌 HepG-2细胞系 WESTERN BLOT MTT
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Hsp70-肿瘤抗原肽复合物修饰的DC疫苗体内外特异性抗瘤作用 被引量:17
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作者 黄波 冯作化 张桂梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期614-617,共4页
目的 :探讨树突状细胞 (DC)及Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的体内外特异性抗瘤作用。方法 :采用一定的生化技术 ,从H2 2肝癌细胞中提取肿瘤抗原肽 ,并在体外与Hsp70进行结合 ;采用细胞培养技术 ,培养rmGM CSF、rmIL 4诱导的小鼠骨髓细... 目的 :探讨树突状细胞 (DC)及Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的体内外特异性抗瘤作用。方法 :采用一定的生化技术 ,从H2 2肝癌细胞中提取肿瘤抗原肽 ,并在体外与Hsp70进行结合 ;采用细胞培养技术 ,培养rmGM CSF、rmIL 4诱导的小鼠骨髓细胞 ,体外获取大量的DC ,后者经Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后刺激小鼠脾淋巴细胞 ,通过MTT法进行检测淋巴细胞的激活 ;收集上述刺激传代培养的淋巴细胞 ,检测其对H2 2瘤细胞和艾氏腹水癌细胞的杀伤功能 ;采用H2 2瘤细胞肌肉接种和H2 2瘤细胞、艾氏腹水癌细胞腹腔接种 ,对接种小鼠给予经体外修饰的DC回输 ,观察其抑制肿瘤的效果。结果 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物可使DC成熟 ,大量分泌IL 12、TNF α、IL 1β等细胞因子 ,并能够使DC激活小鼠脾淋巴细胞 ;激活后传代培养的淋巴细胞对H2 2瘤细胞能够特异性地杀伤 ,而对艾氏腹水癌细胞无效 ;经Hsp 70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的DC可作为一种有效的瘤苗 ,体内能特异性地抑制小鼠H2 2肿瘤生长。结论 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物能够很好地修饰体外诱导获取的DC ,使后者成为一种有效的瘤苗 ,体外能够特异性地激活淋巴细胞 。 展开更多
关键词 树突状细胞 肿瘤免疫学 Hsp70-肿瘤抗原复合物 DC疫苗 特异性抗瘤作用
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