EXPRESSION OF HLA-CLASS Ⅱ GENESOF IDDM PATIENTS ON THE SURFACE OF THE LTK- CELLS

To investigate the function of HLA-class Ⅱ genes in the autoimmune response of insulin dependent diabetes mellitus(DDM),the HLA-class Ⅱ gene of IDDM patients was introd uced into Ltk^-cells with pSV2-neo plas-mid,using the calcium phosphate precipitation technique.We obtained a stable cell line expressing the HLA-class Ⅱ gene from lymphocytes of IDDM patients.Expression was identified by direct ox erythocyte-CrCl3-HLA DR monoclonal antibody rosetting.

人类白细胞抗原-I类在错配修复缺陷型子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的分析人类白细胞抗原(HLA)-I类在错配修复缺陷/高度微卫星不稳定(MMRd/MSI-H)型子宫内膜癌中的表达情况,及其与细胞毒性T淋巴细胞在肿瘤中的浸润情况以及其它临床病理特征的关系。方法从我院病理科筛选出90例MMRd型子宫内膜癌。根据HLA-I类的表达状态将MMRd肿瘤分为HLA-I类正常48例和HLA-I类缺失的肿瘤42例。比较两组CD8^(+)肿瘤浸润T淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs)密度及其它临床病理特征,并用TCGA数据验证子宫内膜癌中HLA-I类和CD8^(+)TILs浸润情况的关联。随后分析用HLA-I类的表达状态来预测CD8^(+)TILs浸润情况的价值。结果46.7%的MMRd肿瘤存在不同程度的HLA-I类缺失。HLA-I类正常肿瘤比HLA-I类缺失肿瘤具有更多的CD8^(+)TILs(P<0.05)。HLA-I类的表达状态和肿瘤的组织学类型、肿瘤级别、肿瘤分期以及缺失的错配修复蛋白肿瘤无相关性。TCGA数据显示在mRNA水平,构成HLA-I类的分子HLA-A、HLA-B以及HLA-C均和CD8A成正相关。HLA-I类预测CD8^(+)TILs浸润情况的AUC为0.7613。结论HLA-I类缺失在MMRd子宫内膜癌中普遍存在。HLA-I类可能作为一种结合MMRd/MSI-H的补充性生物标志物,用于筛选接受免疫治疗的患者。

有无家族史白癜风与HLA-Ⅰ类抗原的关联性研究

目的 探讨HLA Ⅰ类抗原与中国北方汉族人群中有及无家族遗传史白癜风的相关性。方法 家族史阳性及阴性白癜风患者各 2 0例 ,采用HLA血清学分型技术检测HLA A、B位点的抗原特异性。结果 与 10 0例正常对照比较 ,有明确家族史的白癜风患者HLA A10、B13、B15抗原频率显著增高 ,而无家族史的患者HLA A3 0 + 3 1、B15显著增高 (Pc均 <0 .0 1) ,非节段型HLA A10、A3 0 + 3 1、B13、B15显著增高 (Pc均 <0 .0 1) ,成年及未成年发病型HLA B13、B15显著增高 ,儿童发病型则仅HLA B13显著增高 (Pc均 <0 .0 1)。结论 该结果为进一步揭示白癜风的易感基因及免疫遗传发病机制提供了线索。

HLA-I类抗原及CD8分子在宫颈癌组织中的表达及意义

目的通过检测HLA-I类抗原及CD8分子在不同宫颈病变组织中的表达,探讨HLA-I类抗原及CD8分子的表达与宫颈癌之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及慢性宫颈炎组织中HLA-I类抗原及CD8分子的表达,并分析其与各临床病理指标的相关性。结果HLA-I类抗原在有核细胞中均有表达,其在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及慢性宫颈炎组织中的阳性表达率分别为22.6%、100.0%及100.0%,宫颈癌中的表达率明显降低(P<0.01),HLA-I类抗原在I期宫颈癌组织中的阳性表达率为46.7%明显高于II期0.0%(P<0.01);CD8分子在淋巴细胞中表达,其在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及慢性宫颈炎组织的阳性表达率与HLA-I类抗原相似,分别为22.6%、95.5%及100.0%,宫颈癌中的表达率明显降低(P<0.01),CD8分子在I期和II期宫颈癌组织中的阳性表达率分别为46.7%和0.0%(P<0.01)。HLA-I类抗原和CD8分子随着临床病理分期的升高而逐渐的表达减少甚至无表达。而二者与宫颈癌患者的组织分化程度和有无淋巴结转移无关(P>0.05)。HLA-I类抗原和CD8分子的表达存在正相关(Spearman秩相关系数rs=0.808,P<0.0005)。结论HLA-I类抗原和CD8分子在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中表达减少甚至无表达,二者在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的发生、发展中可能起着重要的保护作用。

Eplets配型方法在HLA-Ⅰ类抗体所致血小板输注无效患者中的应用评价

目的了解Eplets配型方法在HLA-Ⅰ类抗体所致血小板输注无效（PTR）患者中的适用性。方法以PCR-SBT方法检测24名PTR患者及血小板供者的HLA基因型;利用Luminex技术平台、采用抗-HLA检测试剂（LSA）检测患者的HLA特异性抗体（DSA）;再借助HLA Matchmaker软件获得患者的预存HLA-Ⅰ类抗体对应的表位（Eplets）及DSA荧光指数中值（MFⅠ）;最后统计分析Eplets错配数对PTR的影响。结果对DSA不同MFⅠ阈值（1 000—3 000）的统计分析：DSA MFⅠ〈1 000时的血小板输注效果最佳,且随着DSA MFⅠ的增加,血小板输注效果均出现不同程度的下降。本组32次输注有效与PTR患者的DSA MFⅠ平均值分别为1 289.67±1 121.83 vs 4 078.60±2 578.57（P〈0.01）,Eplets错配数0—5的患者与错配数〉5的患者输注效果分别为29.38±22.47 vs 18.47±15.38（P〉0.05）。结论 Eplets配型方法结合DSAMFⅠ水平可筛选到适合的血小板供者,从而避免对于HLA-Ⅰ类抗体所致的PTR,保证输注效果。

中国壮族和裕固族群体HLA Ⅰ类区域Alu插入多态性及其与HLA-A位点的相关性

近年来研究发现：位于HLAI类基因区域的Alu插入是研究不同群体HLAI类基因区域祖先单倍型和HLAI类基因多样性产生、进化和重组的理想工具。文章对中国壮族和裕固族群体HLAI类基因区域5个Alu插入多态性（AluMICB、AluTF、AluHJ、AluHG和Alu月-进行研究，结合HL4基因分型数据，分析壮族、裕固族、哈尼族、布朗族和傣族5个民族群体中Alu插入与m4卅等位基因的关系。研究结果显示：（1）壮族和裕固族人群中5个Alu插入频率范围分别为1．5％～35．8％和9．2～34．8％，AluMICB、AIuTF和AluHF插入频率在这两个群体中有统计学差异（P〈0．05）；（2）在5个研究的群体中，AluHG插入与H幽卅＊02的不同亚型关联；AluHJ插入与HLA-A＊2402在5个群体中都关联，但AluHJ与HLA-A＊1101和HLA-A＊2407只在布朗族中关联。表明不同群体HLAI类基因区域内Alu插入具有各自的特征，且Alu插入与不同的m4卅等位基因相关联。这种Alu插入及其与肌爿．爿的关联特征可作为研究群体中HLAI类基因和单倍型系谱变化的重要遗传标记。

慢性乙型肝炎患者HBV感染外周血淋巴细胞对HLA-I类抗原表达的影响

目的 探讨慢性乙型肝炎患者HBV感染外周血淋巴细胞 (PBL)对HLA I类抗原的影响及在乙型肝炎慢性化机制中的作用。方法 36例慢性乙型肝炎 ,2 0例正常对照 ,用荧光定量PCR(FQ PCR)法测定PBLHBVDNA水平 ;用流式细胞术 (FCM)检测PBLHLA I类抗原的表达情况 ,并对PBLHBVDNA阳性患者HBVDNA含量与相应HLA I类抗原表达的相关性进行分析。结果 慢性乙型肝炎患者PBLHLA I类抗原的表达率 (% )和平均荧光强度 (MFI)均低于正常对照组 (P <0 .0 1) ;PBLHBVDNA阳性组与阴性组比较 ,HLA I类抗原的表达率和MFI显著降低 (P <0 .0 1) ;17例PBLHBVDNA阳性者的PBLHBVDNA含量对数值与相应HLA I类抗原表达率和MFI均呈负相关 ,相关系数分别为 - 0 .8893和 - 0 .86 89。结论 HBV感染PBL可能是慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞HLA I类抗原表达降低的重要影响因素之一。

卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子表达异常和TAP,LMP基因表达的关系

目的:肿瘤细胞表达MHCⅠ类分子是激发肿瘤抗原特异性CTL进行肿瘤免疫治疗的关键,肿瘤细胞HLAⅠ类分子表达异常是肿瘤逃脱免疫监视的重要机制.我们探讨了卵巢癌细胞HLAⅠ类分子表达异常的分子基础.方法:本文以West-ern blot、免疫组化和流式细胞术检测卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子的表达,以RT-PCR检测TAP,IMP基因的表达,探讨肿瘤细胞HLA Ⅰ类分子表达异常的分子基础.结果:卵巢癌中HLA Ⅰ类分子表达异常相当普遍(5/8),并涉及抗原加工相关基因TAP,LMP基因表达异常.25℃培养肿瘤细胞可部分诱导Ⅰ类分子的表达;结论:卵巢癌HLA Ⅰ类分子表达异常与其Ⅰ类抗原加工途径异常有关.

肝癌组织中HLAⅠ类抗原及相关分子的表达

目的研究在抗原提呈过程中HLAⅠ类抗原各相关分子的表达水平及临床意义。方法利用免疫组织化学法(ABC法)对165例肝癌的石蜡组织标本中HLAⅠ类分子的重链、轻链及抗原提呈相关分子calnexin、LMP2等的表达情况进行研究,并分析各表达分子的相关性。结果HLAⅠ类分子(A和B/C位点)的表达为膜型,β_2M的表达为膜浆型,以膜为主,而LMP2和calnexin的表达为浆型。肝癌组织除LMP2分子外,HLAⅠ类各分子均有明显的上调(上调率≥40%),其中以HLAⅠ类分子A位点上调最明显(54%)。肝癌组织中HLAⅠ类各分子之间表达趋势一致。结论肝癌表面HLAⅠ类分子表达增加与抗原提呈过程中多分子的表达增加和协同作用有关,而并非由其中某种单一分子的改变来决定。

肾透明细胞癌和卵巢癌与HLAI类抗原关联性研究

目的 分析HLAI类抗原与肾透明细胞癌和卵巢癌的关联性 ,为确定与这些肿瘤的易感性和抵抗性有关的基因 ,并为寻找肿瘤特异性的抗原肽 ,开展肿瘤免疫诊断和治疗奠定基础。方法 实验采用微量淋巴细胞毒试验 ,分析 82例肾透明细胞癌和 2 1例卵巢癌患者外周血HLA A抗原和 B抗原的抗原频率。结果 与肾透明细胞癌和卵巢癌关联的HLAI类完全不同 ,其中与肾透明细胞癌关联的位点大大多于卵巢癌的位点 ,有A9、A11、A2 8、B15、B2 2、B2 7和B40 ;而与卵巢癌关联的HLAI类抗原位点只有A10、A36和B12 ,且卵巢癌关联位点的P值大于与肾透明细胞癌关联的HLAI类抗原的P值。经过校正P值计算后只有卵巢癌中的HLA A10抗原保持显著关联。结论 HLAI类抗原关联性研究显示 ,HLA A10可能为卵巢癌提供抵抗性。

β_2-微球蛋白mRNA低表达在肝细胞癌免疫逃逸中的作用

目的:研究肝细胞癌(HCC)组织中人白细胞抗原(HLA)Ⅰ类分子轻链β2-微球蛋白(β2-m)在肿瘤免疫逃逸中的作用,探讨肝硬化背景对肝癌组织内β2-m的mRNA水平的影响。方法:RT-PCR法检测40例肝癌和癌旁组织中β2-m的mRNA水平,并从不同角度进行分析。结果:肝癌组织中β2-m基因mRNA水平显著低于非癌组织,肝硬变背景下肝癌组织内β2-m的mRNA水平低于无肝硬化背景的肝癌组织。结论:肝癌组织中β2-m基因mRNA水平下调,可致肝癌细胞表面HLA-Ⅰ类分子低表达,这一变化与肿瘤细胞的免疫逃逸相关;HCC病人的肝硬变背景在这一机制中可能起到了某种程度的促进作用。

原癌基因Bmi-1 B细胞抗原表位及HLAⅠ类限制性CTL表位的生物信息学分析

目的:预测原癌基因Bmi-1(B-cell-specific Moloney murine leukemia virus insertion site 1)的B细胞抗原表位及HLAⅠ类限制性细胞毒性T细胞(cytotoxic T cell)表位。方法:采用Ellipro(http://tools.immuneepitope.org/ellipro/)预测Bmi-1蛋白中可能存在的线性B细胞表位和构象B细胞表位;采用Prot Param、Net CTL等软件和方法预测Bmi-1中可能存在的HLAⅠ类限制性CTL表位。结果:Bmi-1蛋白中含有6个线性B细胞表位和8个构象B细胞表位;结合HLA结合力、蛋白酶体切割效率和TAP转运效率,经过Net CTL程序预测表明:针对不同的HLAⅠ类分子,原癌基因Bmi-1中都存在多个HLAⅠ类分子的限制性CTL表位。结论:综合运用多个程序预测了原癌基因Bmi-1中的B细胞抗原表位及HLAⅠ类分子的限制性CTL表位,为下一步开展针对Bmi-1的免疫靶向治疗等研究打下了基础。

可溶性HLA-G1-肽复合物的体外折叠和鉴定

目的合成可溶性HLA-G1-肽复合物。方法利用原核高效表达的可溶性HLA-G1重链和轻链(β2m),在人工合成的HLA-G1限制性九肽(KGPPAALTL)存在的条件下,通过稀释复性折叠成可溶性HLA-G1-肽复合物。利用特异性抗体(W6/32及兔抗人β2m抗体)进行免疫印迹及酶联免疫吸附试验,检测稀释复性的折叠产物。结果折叠复合物含有35%可溶性HLA-G1-肽复合物、5%可溶性HLA-G1重链聚合体及60%复性的β2m3种成分。结论通过原核表达、体外折叠能够获得大量可溶性HLA-G1-肽复合物。

吲哚胺2,3-双加氧酶下调HLA-I类分子的表达

目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)对细胞表面HLA-I类分子的影响。方法:用脂质体法将含IDO基因的重组质粒pEGFP-IDO转染293T细胞,用Western blot检测IDOGFP在转染细胞中的表达,荧光抗体染色结合流式细胞术检测细胞表面的HLA-I类分子的表达。结果:Western blot证实转染重组质粒的细胞表达IDO。转染空载体的细胞与转染重组质粒的细胞HLA-A,B,C-PE染色的平均荧光强度分别为299.46±62.65及42.51±8.19,两者相比有显著性差异(P<0.01);转染重组质粒的细胞,未加色氨酸组与色氨酸组HLA-A,B,C-PE染色的平均荧光强度分别为309.17±34.89及692.12±33.42,两者相比亦有显著性差异(P<0.01)。结论:IDO下调细胞表面HLA-I类分子的表达,色氨酸能够逆转IDO所致的HLA-I类分子的下调。

转染CD80(B7-1)基因前后人肿瘤细胞系表面标志表达

动物实验证实协同刺激分子CD80(B7-1)是促进抗肿瘤免疫应答的重要分子.本文应用RT-PCR,FACS技术检测了人肿瘤细胞系及EBV转化的B细胞CD80的表达,结果表明除Raji细胞、EBV转化的B细胞CD80阳性外,3AO、MCF-7、MDA-453、MKN-45、Hela细胞均为阴性.用我室建立的CD80逆转录病毒载体转染包装细胞PA317,筛选高滴度病毒上情感染人肿瘤细胞,得到CD80阳性表达的肿瘤细胞克隆.利用转染前后的人乳腺癌细胞系MDA-453作ICAM-I、HLA class Ⅰ、classⅡ分子表达的分析,结果表明转染有CD80基因的MDA-453细胞ICAM-Ⅰ、HLA classⅠ分子表达上调,class Ⅱ分子的表达未见改变.

恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎过程中可溶性HLA-I类分子的变化及意义

目的测定可溶性HLA-I类分子的含量在慢性乙型肝炎治疗中的变化,并分析其意义。方法慢性乙型肝炎患者随机分为恩替卡韦治疗组、甘利欣治疗组和恩替卡韦加甘利欣联合治疗组;血清可溶性HLA-I类分子的含量用夹心ELISA方法测定。结果治疗3个月,恩替卡韦治疗组患者可溶性HLA-I类分子的含量显著高于治疗前(P<0.01),甘利欣治疗组患者可溶性HLA-I类分子的含量显著低于治疗前(P<0.05),联合治疗组患者可溶性HLA-I类分子的含量与治疗前相比无显著变化;治疗6个月,三组患者可溶性HLA-I类分子的含量均显著低于治疗前(P<0.05)。结论可溶性HLA-I类分子的含量可反映慢性乙型肝炎治疗中患者免疫功能的调节。

拉米夫定对慢性乙型肝炎患者可溶性HLA-1类分子含量的影响

目的:测定可溶性HLA-Ⅰ类分子的含量在慢性乙型肝炎治疗中的变化,并分析其意义。方法:将60例慢性乙型肝炎患者随机分为拉米夫定治疗组,甘利欣治疗组和拉米夫定加甘利欣联合治疗组每组均20例;血清可溶性HLA-Ⅰ类分子的含量用夹心ELISA方法测定。结果:治疗两个月,拉米夫定治疗组患者可溶性HIA-Ⅰ类分子的含量显著高于治疗前(P<0.01),甘利欣治疗组患者可溶性HLA-Ⅰ类分子的含量显著低于治疗前(P<0.05),联合治疗组患者可溶性HLA-Ⅰ类分子的含量与治疗前相比无显著变化;治疗4个月,3组患者可溶性HLA-Ⅰ类分子的含量均显著低于治疗前(P<0.01)。结论:可溶性HAL-Ⅰ类分子的含量反映了慢性乙型性肝炎治疗中患者免疫功能受到的调节。

同种异体NK细胞对AML细胞体外杀伤活性及初步机制

目的探讨同种异体自然杀伤细胞(NK细胞)对急性髓系白血病(AML)细胞株KG1a的杀伤活性及其分子机制。方法以NK敏感的K562细胞株为对照,免疫磁珠法分离5例健康志愿者NK细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定在不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性,并用流式细胞仪检测KG1a细胞表面人类白细胞抗原I(HLA-I)类分子和NKG2D的配体主要组织相容性复合体(MIC)A/B、ULBP1-3的表达情况。结果效靶比1∶1、5∶1、10∶1、20∶1时NK细胞杀伤K562和KG1a细胞的活性不同,NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性较K562细胞明显减低(P<0.01);K562细胞低表达HLA-I类分子,高表达NKG2D配体MIC可溶性Ⅰ类分子相关蛋白A(MICA)、MICA有亲源性的蛋白(MICB)、ULBP1、ULBP2、ULBP3,而KG1a细胞高表达HLA-I类分子,低表达NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3。结论同种异体NK细胞对AML细胞株KG1a的杀伤率低于K562细胞;其杀伤率不同的分子基础与其分子表面配体表达差异和HLA-I分子表达率不同有关。

ELISA测定血清可溶性HLA-I类抗原

目的 建立定量测定可溶性HLA I类抗原的ELISA方法。方法 测定上海地区汉族正常人群血清可溶性HLA I类抗原的含量 ,并进一步研究可能影响这一含量的因素。结果 测得 116例上海地区汉族正常个体血清可溶性HLA I类抗原的含量为 5 2 9 3 2±2 82 88ng/ml。结论 性别和常见HLA A位点抗原型别对血清可溶性HLA I类抗原的含量未造成显著影响。

HLAⅡ类基因区与1型糖尿病

目的 :综述HLAⅡ类基因区与1型糖尿病的关系。方法 :查阅国外有关文献20余篇加以综述。结果 :HLAⅡ类基因区内的DQ、DR基因位点与1型糖尿病具有相关性。结论