HLA-loss参与单倍体相合移植后白血病复发的机制

单倍体相合造血干细胞移植(haploidentical hematopoietic stem cell transplantation,haplo-HSCT)的快速发展有效解决了供者来源的问题,逐渐成为高危急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者的主要治疗方法之一^([1]),可以用于治疗有移植指征但缺乏人类白细胞抗原相匹配或需要紧急移植的恶性血液病患者。

恶性血液病异基因造血干细胞移植后复发单中心临床分析

目的:分析恶性血液病患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发的生存情况、预后影响因素及复发的防治,探讨免疫重建、人类白细胞抗原丢失等与移植后复发的关系。方法:回顾性分析2012年7月至2020年6月行allo-HSCT后复发的47例恶性血液病患者临床资料,同胞HLA全合移植(MSD)20例,亲缘单倍体移植(HID)26例,非血缘HLA全合移植(MUD)1例,对可能影响复发后总生存率(PROS)的危险因素进行多因素分析。结果:47例患者均成功植入,移植后Ⅱ-Ⅳ和Ⅲ/Ⅳ度急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生率分别为40.4%和10.6%,慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的发生率为31.9%。HID组Ⅱ-Ⅳ度aGVHD、Ⅲ/Ⅳ度aGVHD发生率分别为42.3%、11.5%,全合(MD)组分别为38.1%、9.5%(P=0.579,P=1.000),两组cGVHD发生率分别为34.6%、28.6%(P=0.659)。移植后30 d NK细胞绝对值计数>190 cells/μl的患者比≤190 cells/μl的患者PROS高(P=0.021)。全部患者移植后1、3年PROS分别为68.1%、28.4%,HID组分别为78.9%、40.3%,MD组分别为54.4%、14%(P=0.048)。多因素分析结果显示,发生Ⅱ-Ⅳ度aGVHD、复发时间<3个月是影响PROS的危险因素(P<0.05)。结论:恶性血液病allo-HSCT后复发患者行单倍体移植疗效比全相合移植好,移植后30 d NK细胞绝对值计数高可提高PROS,移植后发生Ⅱ-Ⅳ度aGVHD、复发时间<3个月对移植后复发患者的长期生存具有预后意义。

移植前白血病患者HLA区域杂合性缺失对HLA分型的影响

目的:研究移植前白血病患者初诊时期和缓解期HLA区域杂合性缺失(LOH)对HLA分型的影响。方法:用3种HLA基因分型常用的方法(SBT、SSO和SSP方法)分别对1例急性混合细胞白血病(MPAL)患者初诊静脉血样本1(骨髓原始细胞为81.7%)、样本2(骨髓原始细胞为93.07%)和缓解期静脉血样本3(骨髓原始细胞为<0.01%)进行HLA-A、B、C、DQB1、DRB1基因分型;通过2种DNA混合实验进一步确定SBT方法检测HLA杂合峰的检出阈值和检测HLA分型时对静脉血原始细胞比例的要求。结果:样本1和样本2的HLA-A、B、C、DQB1、DRB1均为纯合位点,其中样本1有些HLA位点的测序背景峰偏高,无法确定位点的具体结果;样本3的5个HLA座位除了C座位外均为杂合位点。DNA混合实验结果表明,用SBT方法检测HLA双等位基因杂合峰的最低检出限为20%;移植前白血病患者采用SBT方法检测HLA分型的要求是静脉血原始细胞<75%,若≥75%,则可能因为原始细胞HLA区域出现LOH,从而导致HLA位点漏检。结论:对于白血病初诊患者,特别是原始细胞≥75%,如果HLA某一位点分型结果为纯合位点,应该再次采集患者缓解期静脉血或者正常体细胞,如口腔黏膜细胞,重新对该位点进行复核,排除HLA区域发生LOH造成假性纯合的可能,以免HLA配型结果发生错误,影响移植供者的选择和最终的移植效果。

HLA-Ⅰ基因微卫星变异与宫颈癌相关性的分析

目的 对宫颈癌组织进行HLA Ⅰ基因微卫星变异的分析与作图。方法 采用 8个位于HLA Ⅰ区域的微卫星多态性标记分析 30例宫颈癌活检标本微卫星变异的情况。结果 微卫星变异总的发生率为86 7% (2 6 / 30 ) ,微卫星位点C32 11的杂合性缺失频率最高 ,可达 5 0 0 % (15 / 30 ) ,并发现了一个微小缺失区域 ;位点D6S2 5 8的MSI频率最高 ,达 4 0 0 % (12 / 30 )。结论 HLA Ⅰ基因微卫星变异在宫颈癌的发生和发展过程中起着重要作用 ,位点C12 5～C32 11之间的微小缺失区域可能存在有宫颈癌相关抑癌基因。

一例白血病患者HLA位点杂合性丢失的分析

目的分析1例白血病患者人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)杂合性丢失情况。方法采用聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸探针法和聚合酶链反应测序方法对患者移植后外周血、头发毛囊、口腔黏膜拭子及其父母外周血进行HLA分型。采用23位点短串联重复序列(short tandem repeat,STR)测定试剂盒和本实验室建立的HLA区域内的6个STR位点方法对患者移植后的外周血、口腔黏膜拭子及其父母外周血进行STR位点检测。结果患者经父亲源单倍型造血干细胞移植后,外周血标本HLA基因型与父亲完全一致。患者头发毛囊标本HLA结果为HLA-A*02:01,24:02,C*03:03,03:04,B*13:01,15:01,DRB1*08:03,12:02,DQB1*03:01,06:01。口腔黏膜拭子为HLA纯合子,只存在父亲单倍型HLA-A*24:02-C*03:03-B*15:01-DRB1*08:03-DQB1*06:01,丢失了母亲单倍型HLA-A*02:01-C*03:04-B*13:01-DRB1*12:02-DQB1*03:01。患者移植后外周血23个STR位点与父亲完全一致。口腔黏膜拭子23位点短串联重复位点无丢失,但6号染色体上HLA区域的6个STR位点至少有4个发生了丢失。结论发现1例单倍型造血干细胞移植白血病患者的口腔黏膜拭子发生HLA杂合性丢失。

常染色体短串联重复序列基因座复合扩增等位基因丢失现象的研究

目的探讨常染色体短串联重复序列（STR）基因座复合扩增等位基因丢失现象的特征和原因，以及亲子鉴定中STR基因座等位基因疑似突变的确认策略。方法选择2017年1月至6月，于深圳市血液中心接受三联体亲子鉴定的3个家庭的9例家庭成员为研究对象。研究对象纳入标准：STR基因座等位基因初检结果不符合孟德尔遗传规律，疑为STR基因座等位基因丢失者。采用美国ABI公司生产的GlobalFiler Express试剂盒对受试者血斑片样本的21个常染色体STR基因座等位基因进行分型。采用美国Promega公司生产的PowerPlex 21复合扩增系统对受试者血斑片样本的STR等位基因分型结果进行验证。采用PCR-直接测序（SBT）法，检测受试者DNA样本人类白细胞抗原（HLA） -A/-B/-C/-DR/-DQB1基因座等位基因，并且对受试者HLA基因座单倍型进行分型，作为个体识别的补充验证。本研究所遵循的程序符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》，并且与受试者或其监护人签订知情同意书。结果①本研究3个家庭的三联体亲子鉴定中，6例受试者丢失的等位基因分别发生在STR的3个基因座CSF1PO、D1S165和TH01，并且突变步数均不相同。上述丢失的等位基因，既可能为父源性，亦可能为母源性。②家庭1中，对母亲和孩子的CSF1PO基因座等位基因分型的初检结果显示，等位基因均为纯合子；验证结果显示，等位基因均为杂合子；二者的CSF1PO基因座等位基因初检结果均丢失等位基因10。③家庭2中，对父亲和孩子的D1S1656基因座等位基因分型的初检结果显示，等位基因均为纯合子；验证结果显示，等位基因均为杂合子；二者的D1S1656基因座等位基因初检结果均丢失等位基因16。④家庭3中，对母亲和孩子的TH01基因座等位基因分型的初检结果显示，等位基因均为纯合子；验证结果显示，等位基因均为杂合子；二者的TH01基因座等位基因初检结果均丢失等位基因9。⑤于3个家庭的9例受试者DNA标本中，共检出12种HLA-A/-B/-C/-DRB1/-DQB1基因座单倍型，并且HLA基因座单倍型遗传方式符合孟德尔遗传规律。结论对于疑似存在STR等位基因突变的STR基因座复合扩增中，采取单一的检测方法，可能存在漏检等位基因的风险，采用不同试剂盒进行验证其等位基因突变的真实性，能获得更加可靠的鉴定结果。