黄连解毒汤全方及拆方有效部位群主成分研究

研究黄连解毒汤全方及其拆方有效部位群主要成分溶出变化规律。采用HPLC方法分析全方及不同拆方的有效部位群,色谱柱为Agilent TC-C18(4.6 mm×250 m,5μm),以乙腈(A)-0.2%磷酸水B)为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长为260 nm。黄连解毒汤经大孔树脂50%醇洗脱后能使方中主要成分含量增加。本实验为黄连解毒汤新药研究提供参考。

黄连解毒汤对小鼠S_(180)移植性肿瘤的抑制作用

为研究黄连解毒汤(HLJDT)体内抗肿瘤作用,将健康雌性昆明种小鼠50只(体重18～22 g),随机分为对照组,环磷酰胺组(CTX),黄连解毒汤大、中、小剂量组(22.0、11.0、5.5 g·kg-1)。通过建立小鼠S180肉瘤模型,观察黄连解毒汤对小鼠生存质量、胸腺指数、脾脏指数和肿瘤细胞形态影响,并测定荷瘤小鼠生存期、生存率。结果表明,黄连解毒汤大剂量组抑瘤作用显著(P<0.05),可延长荷瘤小鼠寿命,改善生存质量;黄连解毒汤大、中、小剂量组脾脏(胸腺)指数与对照组相比没有显著差异;细胞形态学观察显示黄连解毒汤大、中剂量组肿瘤细胞变形严重;中剂量组与大剂量组小鼠生存率明显高于对照组。

黄连解毒汤来源及用药剂量换算的考证

黄连解毒汤作为清热泻火的经典方剂,广泛应用于中医临床。本方立意在于清热泻火解毒,主治一切火毒至盛病证,不论表里上下,皆可加减用之。对于黄连解毒汤的研究和应用屡见不鲜,但是对于其处方来源文献报道混乱;用药品种不明确;处方用量换算基础不清晰。本文通过文献的查阅和整理,对于黄连解毒汤的来源、用药品种及剂量换算进行了整理和确证,阐明了黄连解毒汤方的经方用法,为临床及研究上黄连解毒汤更加合理有效的运用提供了依据。

黄连解毒汤对小鼠S_(180)肉瘤血管生成抑制作用的试验研究

研究黄连解毒汤（HLJDT）对肿瘤生长的抑制作用及其对肿瘤组织COX-2、VEGF、bFGF的影响。将健康雌性昆明种小鼠50只（体重18-22 g）随机分为对照组，环磷酰胺组（CTX），黄连解毒汤大、中、小剂量组（22.0、11.0、5.5 g·kg^-1）。通过皮下注射S180细胞悬液建立小鼠S180肉瘤模型，观察抑瘤率，并采用免疫组化的方法研究黄连解毒汤对肿瘤组织COX-2、VEGF、bFGF的作用。结果表明，黄连解毒汤大剂量组对小鼠S180肉瘤具有明显的抑制作用，免疫组化染色显示黄连解毒汤各剂量组对肿瘤组织中COX-2、bFGF表达有明显抑制作用，同时大、中剂量组对VEGF表达有明显抑制作用。说明黄连解毒汤对S180肉瘤具有抑制作用，其可抑制肿瘤组织中血管生成相关因子COX-2、VEGF、bFGF的表达，抑制肿瘤血管生长，抑制肿瘤生长，抗血管生成可能是其发挥治疗作用的另一种机制。

超微粉碎对黄连解毒汤中黄芩苷溶出的影响

应用高效液相色谱法(HPLC)测定比较了普通粉碎和超微粉碎对黄连解毒汤中黄芩苷溶出量的影响.采用Nova-PakC18色谱柱(3.9mm×150mm),以甲醇∶重蒸水∶磷酸=47∶53∶0.2为流动相,流速1mL·min-1,UV检测波长为280nm.结果表明,超微粉碎未改变黄连解毒汤固有的药效学成分,并可增加黄芩苷的溶出量,在超声提取下超微细粉中黄芩苷含量比细粉提高32.51%;而在简化提取(开水冲搅)下,超微细粉中黄芩苷含量比细粉提高51.23%.

黄连解毒汤对脑缺血动物的促智作用及机制探讨

目的 :研究黄连解毒汤对脑缺血动物的促智作用并初步探讨其作用机制。方法 :采用结扎小鼠双侧颈总动脉合并低血压法制造小鼠脑缺血模型 ,考察了黄连解毒汤对脑缺血小鼠学习记忆行为 (跳台实验、避暗实验 )的影响 ;测定了小鼠脑中丙二醛 (MDA)的含量 ;进一步地测定了大鼠大脑皮质和海马组织中脑血流量。结果 :在跳台、避暗实验中 ,黄连解毒汤能改善脑缺血小鼠学习记忆行为 ,能显著减少脑缺血小鼠脑中 MDA的含量。黄连解毒汤股静脉给药能增加大鼠大脑皮质和海马组织中脑血流量。结论 :黄连解毒汤能促进脑缺血动物学习记忆行为 ,其作用机制与减少脑中自由基终产物 MDA含量。

黄连解毒汤对脑缺血小鼠的抗氧化作用研究

目的 :研究黄连解毒汤提取物对脑缺血小鼠的抗氧化作用。方法 :测定了脑缺血小鼠大脑皮质及海马组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽 (GSH)的含量及超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)、过氧化氢酶 (CAT)的活力。结果 :黄连解毒汤提取物 2 0 g/kg、4 0g/kg或 8 0 g/kg能显著降低脑缺血小鼠大脑皮质及海马组织中MDA的含量 ,显著增加脑缺血小鼠脑中GSH的含量 ;能显著提高脑缺血小鼠大脑皮质及海马组织中SOD、GSH Px和CAT的活力。结论 :黄连解毒汤提取物对脑缺血小鼠脑组织有很强的抗氧化作用。

黄连解毒汤体内外抗肿瘤作用的实验研究

目的观察黄连解毒汤的体内、体外抗肿瘤作用。方法采用小鼠肉瘤S180和小鼠前胃癌MFC等移植性肿瘤模型进行体内实验,通过检测抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数等指标观察黄连解毒汤的体内抑瘤作用及对免疫器官的影响。并用MTT方法检测黄连解毒汤对小鼠S180、小鼠MFC、人胃癌SGC-7901、人肝癌SMMC-7721等4种瘤株的抑制作用。结果黄连解毒汤大、中剂量组中对S180荷瘤小鼠有抑制作用,大剂量组对MFC荷瘤小鼠有抑制作用,抑瘤率分别为48.38%、33.77%、30.74%;对S180、MFC、SGC-7901和SMMC-7721细胞均有一定的细胞毒作用,IC50分别为99.73mg.L-1、84.47mg.L-1、153.32mg.L-1和102.87mg.L-1。结论黄连解毒汤体内对S180、MFC小鼠移植瘤有一定的抗肿瘤活性,体外对4种肿瘤细胞也具有抑制作用。

黄连解毒汤对尼莫地平在大鼠脑内处置动力学的影响

目的在整体和离体水平上研究黄连解毒汤对尼莫地平脑处置动力学的影响。方法测定大鼠单独给予尼莫地平以及尼莫地平与黄连解毒汤合用的血浆、脑组织中的尼莫地平经时过程,并在离体水平上采用原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞(rBMEC)模型考察ig黄连解毒汤后的大鼠血清、黄连解毒汤中的指标成分黄芩苷和小檗碱对尼莫地平在血脑屏障上转运的影响。结果整体实验中,合用黄连解毒汤组,尼莫地平在血浆和脑组织中的Cmax和AUC均显著高于单独给予尼莫地平组;离体实验中,ig黄连解毒汤后的大鼠血清、黄芩苷(5μg/mL)、小檗碱(>10ng/mL)促进rBMEC对尼莫地平的摄取,小檗碱(10ng/mL)对尼莫地平的摄取没有影响。结论在合用黄连解毒汤时,尼莫地平在大鼠血浆和脑组织中的药动学行为均发生改变;合用组尼莫地平在大鼠脑组织中分布增加,可能部分源于黄连解毒汤中黄芩苷的作用。

黄连解毒汤的镇痛、抗炎及体内抗肿瘤作用

目的:研究黄连解毒汤的镇痛、抗炎及体内抗肿瘤作用。方法:通过小鼠热板实验及耳肿胀实验研究黄连解毒汤的镇痛和抗炎作用;建立小鼠S180腹水瘤模型,观察黄连解毒汤对小鼠胸腺指数、脾脏指数和S180癌细胞形态的影响,并测定荷瘤小鼠生存率。结果:黄连解毒汤高、中、低剂量组的痛阈及耳廓肿胀率与对照组比较差异有显著性(P<0.01);高剂量组脾脏、胸腺指数与对照组相比有所降低,差异有显著性(P<0.05或0.01);细胞形态学观察显示黄连解毒汤高、中剂量组S180癌细胞变形严重;黄连解毒汤各剂量组小鼠生存率明显高于对照组。结论:黄连解毒汤具有显著的镇痛、抗炎活性,体内对S180小鼠移植瘤有一定的抗肿瘤活性,可延长荷瘤小鼠寿命。

黄连解毒汤细粉及超细微粉组织特征扫描电镜观察

目的:比较黄连解毒汤中药细粉和超细微粉形态学上的差异。方法:黄连解毒汤中药分别进行普通粉碎和超微粉碎,利用扫描电镜对两种不同粉碎方式得到的粉末进行观察。结果:超细微粉碎颗粒大小均匀,电镜下观察基本无完整细胞存在。结论:黄连解毒汤经超微粉碎后,粉末颗粒细微均匀,复方均质度明显改善,绝大多数细胞破壁。

超微粉碎对黄连解毒汤中黄芩苷溶出的影响

目的:比较普通粉碎和超微粉碎对黄连解毒汤中黄芩苷溶出量的影响。方法:用HPLC法测定。色谱柱为Nova-PakC18(3.9mm×150mm),流动相为甲醇-重蒸水-磷酸(47∶53∶0.2),流速为1ml/min,柱温为30℃,波长为280nm。结果:超微粉碎可增加黄芩苷的溶出,在超声提取下超细微粉中黄芩苷溶出量比细粉提高32.5%;而在简化提取(开水冲搅)下,超细微粉中黄芩苷溶出量比细粉提高51.15%。结论:超微粉碎没有改变黄连解毒汤固有的药效学物质,但提高了黄连解毒汤中黄芩苷溶出量。

加味黄连解毒汤抗心肌缺血作用

目的评价加味黄连解毒汤耐缺氧及抗心肌缺血损伤的效果,为临床应用提供药理学依据。方法采用密闭缺氧实验,观察不同剂量加味黄连解毒汤对小鼠耐缺氧存活时间的影响;另外采用冠脉结扎致急性心肌缺血模型,观察不同剂量加味黄连解毒汤对大鼠血清心肌酶AST、LDH-L与CK-MB的活力和心电图ST段位移的影响。结果加味黄连解毒汤中、高剂量连归清心组小鼠密闭缺氧的存活时间分别为(1 153.3±100.9)s和(1 196.3±137.3)s,明显长于空白对照组(1 005.3±125.5)s(P<0.05);加味黄连解毒汤中、高剂量可有效抑制急性心肌缺血模型组大鼠血清心肌酶AST、LDH-L与CK-MB异常升高的活力(P<0.01),并显著降低冠脉结扎后不同时间段心电图ST段的抬高幅度(P<0.05)。结论加味黄连解毒汤可增强小鼠耐缺氧能力,并对心肌缺血具有明显的保护作用。

黄连解毒汤调节HIF-1α/VEGF信号通路改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的作用机制

目的:基于缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路探讨黄连解毒汤(HLJDT)对淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠学习记忆的影响。方法:40只5月龄APP/PS1小鼠,分为模型组、多奈哌齐组(0.001 g·kg^(-1)·d^(-1))、黄连解毒汤低、中、高剂量(1.5、3、6 g·kg^(-1)·d^(-1)),C57BL/6小鼠8只为正常组。连续给药45 d,进行Morris水迷宫实验,测定脏器指数,透射电镜观察小鼠脑血管内皮细胞形态结构,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马区APP、HIF-1α、VEGF、VEGFA及脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测APP、HIF-1α、VEGF mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠潜伏期明显延长(P<0.05),目标平台周围路程及时间明显缩短(P<0.05),脑和脾脏的脏器指数明显降低(P<0.05),血管内皮细胞核固缩,胞质不丰富,海马区APP、HIF-1α、VEGF、VEGFA蛋白表达增加(P<0.05),BDNF蛋白表达降低(P<0.05),APP、HIF-1α、VEGF mRNA表达增加(P<0.05)。与模型组比较,HLJDT高剂量组潜伏期明显缩短(P<0.05),目标平台周围路程及时间延长(P<0.05),脑和脾脏的脏器指数明显升高(P<0.05),血管内皮细胞细胞器结构较清晰,海马区APP、HIF-1α、VEGF、VEGFA蛋白表达降低(P<0.05),BDNF蛋白表达增加(P<0.05),APP、HIF-1α、VEGF mRNA表达降低(P<0.05)。结论:HLJDT可通过降低HIF-1α和VEGF表达来提高小鼠学习记忆能力,从而发挥对神经的保护作用。

黄连解毒汤有效组分通过激活Caspase-11靶点抗脓毒症的研究

目的探讨黄连解毒汤有效组分通过激活Caspase-11靶点抗脓毒症的作用机制。方法实验分为脂多糖(LPS)组、对照组及黄连解毒汤上清液醇洗(HLJDT-7)40、80、120 mg/mL组和黄连解毒汤沉淀水洗(HLJDT-5)40、80、120 mg/mL组。MTT实验检测各组对细胞活力的影响,Western blotting检测Caspase-1和Caspase-11蛋白在黄连解毒汤组分各浓度中的相对表达量。结果黄连解毒汤组分对LPS处理的RAW264.7细胞进行干预后能够明显的降低LPS对细胞的抑制。当Caspase-11和Caspase-1蛋白敲除后,HLJDT-7120 mg/mL组和HLJDT-540、80、120 mg/mL组对Caspase-11和Caspase-1蛋白表达水平具有明显的抑制作用(P<0.05、0.01)。结论黄连解毒汤有效组分可降低细胞内的LPS,进而抑制Caspase-11,降低Caspase-11介导的Caspase-1依赖的细胞焦亡作用。

黄连解毒汤通过诱导自噬减轻脓毒症小鼠肝损伤

目的:探讨黄连解毒汤对盲肠结扎穿孔术(CLP)诱导的脓毒症小鼠肝损伤保护作用中自噬相关蛋白的表达。方法:将60只8周龄C57BL/6小鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组、黄连解毒汤低、高剂量组(1.44,2.88 g·kg^(-1))共4组(n=15)。连续给药3 d,末次给药1 h,盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型。观察小鼠24 h生存率;另取5只,术后12 h处死小鼠,收集血清和肝组织。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中炎症因子白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;生化法检测血中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织的病理变化;TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色观察肝细胞凋亡指数(AI);蛋白免疫印迹法检测肝组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1),自噬效应蛋白1(Beclin1),自噬标志物微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(LC3-Ⅱ/Ⅰ)的表达。结果:与假手术组比较,模型组小鼠12,24 h生存率明显降低,血清中炎症因子IL-6,TNF-α,IL-1β水平明显升高(P<0.05),AST,ALT活性明显增加(P<0.05),肝细胞肿胀、炎症细胞浸润,肝细胞凋亡,HMGB1表达明显增加(P<0.05),自噬相关蛋白Beclin1的表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ增加(P<0.05);与模型组比较,各给药组脓毒症小鼠12,24 h生存率明显提高,炎症因子IL-6,TNF-α水平及AST,ALT活性明显降低(P<0.05),肝组织损伤明显减轻,肝细胞凋亡减少(P<0.05),HMGB1的表达明显减少(P<0.05),Beclin1的表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ明显增加(P<0.05)。结论:黄连解毒汤可能通过诱导自噬、抑制凋亡等机制,减轻CLP所致脓毒症小鼠肝损伤。