Lovastatin对HL-60细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达及细胞增殖功能的影响

目的 探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (lovastatin ,LOV)对HL 60细胞HMG CoA还原酶mRNA表达及细胞增殖功能的影响。方法 采用MTT比色法、生长曲线测定、计算细胞生长抑制率、流式细胞仪分析、以及RT PCR等技术方法 ,观察LOV对HL 60细胞体外增殖能力、细胞周期分布及HMG CoA还原酶mRNA表达的影响。结果 HL 60细胞经LOV处理后 ,生长减慢 ,细胞周期被阻滞在G0 /G1 期 ,LOV剂量越大 ,时间越长 ,增殖抑制作用越明显 ;LOV处理HL 60细胞 1～ 3d ,低剂量组 ( 4 μmol /L)HMG CoA还原酶mRNA表达上调 ;而中剂量组 ( 8μmol/L)和高剂量组 ( 16μmol/L)第 1天有增加趋势 ,第 2～ 3天明显降低。结论 LOV能显著抑制HL 60细胞增殖 ,使细胞受阻于G0 /G1 期 ,该作用有明显剂量 效应和时间依赖关系 ;随洛伐他汀处理剂量和时间的不同 ,HL 60细胞HMG

2型糖尿病伴周围神经病变患者外周血单个核细胞中醛糖还原酶mRNA水平测定

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)中醛糖还原酶(AR)mRNA水平与2型糖尿病并发周围神经病变的关系。方法用RT-PCR法检测32例2型糖尿病患者及35名正常对照者PBMC中ARmRNA水平,用肌电图检测腓神经传导速度,根据神经传导速度有无减慢将糖尿病患者分为普通糖尿病组和糖尿病神经病变组。结果2型糖尿病患者PBMC中ARmRNA的表达量(0.59±0.56)高于正常对照组(0.30±0.11),P=0.003;糖尿病是否伴神经病变患者之间ARmRNA的表达量无差别。结论2型糖尿病患者PBMC中ARmRNA表达水平增高与是否伴神经病变无关。

丙酸钠对肥育猪肝脏HMG-CoA还原酶活性和mRNA丰度的影响

将 96头体重约 4 5 .4kg的杜长加肥育猪分成 4组 ,分别饲喂添加 0 ,0 .5 % ,1.0 %和 1.5 %丙酸钠的饲粮 4 5d ,每组设三个重复 ,每个重复 8头。结果表明 :(1)添加 1.0 %和 1.5 %丙酸钠使血清中总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇显著降低 ,使高密度脂蛋白胆固醇 /低密度脂蛋白胆固醇的比率显著提高 ,添加 1.5 %丙酸钠使血清中极低密度脂蛋白胆固醇显著降低 ;(2 )添加 1.0 %和 1.5 %丙酸钠使肝脏中 β 羟基 β 甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG CoA)还原酶活性和mRNA丰度显著降低。结果提示 :丙酸钠可以降低肝脏HMG CoA还原酶mRNA丰度和酶活性 ,有效地降低肝脏胆固醇的合成 ,从而改善肥育猪胆固醇代谢。

5α还原酶抑制剂对老年大鼠5α还原酶mRNA表达的影响

目的 探讨5α还原酶抑制剂对老年大鼠5α还原酶mRNA表达的影响.方法 取50只健康的20周龄雄性SPF级SD大鼠,分为依立雄胺组（20只,喂饲依立雄胺3mg·kg^-1·d^-1）、非那雄胺组（20只,喂饲1 mg·kg^-1·d^-1）、正常对照组（10只,喂饲0.9%氯化钠溶液）.检测所有大鼠前列腺组织中Srd5a1、Srd5a2基因及bcl-2的表达情况,并作组间比较分析.结果 依立雄胺组、非那雄胺组、正常对照组Srd5a1的表达相对量分别为1.46±1.98、2.18±2.53、1.97±2.43,Srd5a2的表达相对量分别为1.31±0.37、1.29±0.47、1.05±0.36,bcl-2的表达分别为148±42、152±59、216±52;3组间Srd5a1、Srd5a2基因的表达并无明显差异（P〉0.05）,而依立雄胺组及非那雄胺组bcl-2的表达均明显低于正常对照组（均P〈0.05）,但依立雄胺组与非那雄胺组并无明显差异（P〉0.05）.结论 5α还原酶抑制剂可以减少凋亡抑制因子bcl-2的表达,从而促进前列腺增生组织细胞凋亡的发生,但可能并不能影响5α还原酶mRNA的表达.

外周血单个核细胞中醛糖还原酶mRNA水平与2型糖尿病患者视网膜病变的关系

目的 探讨外周血单个核细胞 (PBMC)中醛糖还原酶 (AR)mRNA水平与2型糖尿病患者发生视网膜病变危险性的关系。方法 运用RT-PCR技术检测54例2型糖尿病患者 (40例无视网膜病变和14例伴视网膜病变 )和35名正常对照者PBMC中ARmRNA水平。结果 2型糖尿病伴视网膜病变组PBMC中ARmRNA水平(1.07±0.94)高于正常对照组 (0.29±0.10,P<0.01)及2型糖尿病无视网膜病变组 (0.64±0.46 ,P<0.01)。糖尿病患者PBMC中ARmRNA水平与血压、血糖、血脂及病程均无显著相关。结论 PBMC中ARmRNA水平与2型糖尿病视网膜病变有密切关系。

男性雄激素性秃发患者毛囊中5α-还原酶的同工酶mRNA的表达及其临床意义

目的:探讨男性雄激素性秃发(AGA)患者毛囊中5α-还原酶的同工酶mRNA的表达及其临床意义。方法:研究对象为63例男性AGA患者和30例健康对照者。提取毛囊中的总RNA,经反转录后采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测5α-还原酶的同工酶[Ⅰ型5α-还原酶(SRD5A1);Ⅱ型5α-还原酶(SRD5A2);Ⅲ型5α-还原酶(SRD5A3)]的基因表达。对AGA患者口服非那雄胺(保法止)连续治疗6个月,然后判断疗效。结果:拔发和毛囊单位提取术(FUE)两种方式获得的标本中都检测到3种5α-还原酶的表达,并且两种方法获取的标本检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。SRD5A3在毛囊中的表达高于SRD5A1和SRD5A2的表达,3种5α-还原酶之间均呈正相关(P<0.05)。结论:可以通过拔发获取标本检测毛囊中的5α-还原酶mRNA表达。毛囊的内外毛根鞘中存在SRD5A3,其表达量与SRD5A1和SRD5A2的表达量相关,并且高于SRD5A1和SRD5A2的表达。

耐力训练和一次性力竭运动对大鼠心肌和骨骼肌硫氧还蛋白还原酶的影响

目的:观察运动对大鼠心肌、骨骼肌硫氧还蛋白还原酶(TR)的影响。方法:SD大鼠30只,随机分成安静对照组、耐力训练组和力竭组。训练组进行6周渐增游泳训练,5次/周。最后1次训练后2 4小时,断头处死安静对照组和训练组大鼠,力竭组大鼠在一次性力竭运动后即刻处死。DTNB法检测心肌、骨骼肌TR活性,RT -PCR法观察TRmRNA水平变化。结果:6周耐力训练大鼠心肌TR活性显著高于安静对照组,一次性力竭组大鼠心肌TR活性显著低于安静对照组。各组大鼠心肌TRmRNA均无显著性差异。结论:6周耐力训练显著提高大鼠心肌TR活性,而在mRNA水平上无显著性差异。

抗氧化剂和低氧诱导醌氧化还原酶1基因的表达及其机制

目的 探讨低氧和抗氧化剂诱导醌氧化还原酶1(NQO1 )基因表达及其与细胞增殖的关系和诱导表达的调节机制。方法 人肝癌细胞SMMC 772 1经抗氧化剂[酪醇(p Ty) ,丁基羟茴香醚(BHA) ,β萘黄酮(βNF) ]、低氧或两者共同处理2 4h ,分别采用微孔板测定法、RT PCR、结晶紫显色法、电泳迁移率变动试验(EMSA)测定MQO1 活力,NQO1 mRNA表达,细胞增殖和细胞核蛋白与抗氧化反应元件(ARE)的结合情况。结果 常氧下BHA ,βNF和p Ty均能诱导NQO1 比活力增加,酪醇诱导NQO1 mRNA表达呈剂量依赖性增加,且与酶比活力存在明显的相关性;酪醇在一定范围内,其抑制细胞增殖的能力呈剂量依赖性,且细胞增殖与酶比活力存在负相关。低氧与抗氧化剂共同处理比常氧下抗氧化剂诱导NQO1 比活力有增加(r=-0 41,P <0 0 1)。EMSA试验表明,ARE能与低氧、抗氧化剂或低氧+抗氧化剂诱导的核蛋白特异结合。结论 抗氧化剂在常氧下可诱导人肝癌细胞NQO1 活力增加,低氧加强其诱导能力。其中酪醇诱导NQO1 活力与NQO1 mRNA表达量增加相关,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活力诱导增加有关。ARE参与介导抗氧化剂和低氧诱导NQO1 基因表达的调节。

天然产物在新药开发中的应用——HMG-CoA还原酶抑制剂新药的发现对天然产物研究与开发的启示

自1973年发现第一个作用于HMG-CoA还原酶的化合物mevastatin以来,多个具有HMG-CoA还原酶抑制活性的抗高血脂新药被开发成功,并成为治疗高血脂症的首选药物。在此简单介绍该类新药的发现与开发过程,并就天然产物的研究与开发提出一点个人见解。

不同硒浓度日粮对小鼠肝脏和睾丸组织中部分硒蛋白mRNA水平的影响

选取80只7周龄雄性BALB/c小鼠,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组20只,使Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组基础日粮中硒含量达到0.045、0.1、0.4和0.8mg/kg。结果表明:①Ⅰ组能显著降低小鼠肝脏中硒的沉积量(P<0.05);②Ⅰ组谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)的mRNA相对表达量明显低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),且Ⅱ、Ⅲ组在肝脏中差异显著(P<0.05),在睾丸中差异不显著(P>0.05);③Ⅰ、Ⅲ组肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPx4)的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),但均显著低于Ⅱ组(P<0.05),而各试验组间在睾丸中差异均不显著(P>0.05);④随着日粮中硒添加量的增加,肝脏和睾丸中硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase 2,TrxR2)的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。因此,在肝脏和睾丸组织中,饲喂低硒饲料能显著降低硒的沉积量和GPx1、GPx4、TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05);而饲喂高硒饲料能显著降低GPx1的mRNA相对表达量(P<0.05),同时显著增加TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05)。提示,硒对GPx1、GPx4和TrxR2mRNA相对表达量的调节存在组织差异性。

家族性胆固醇结石患者肝组织HMGCR和SCP_2mRNA的表达

目的:研究家族遗传性胆囊胆固醇结石患者、非家族遗传性胆囊胆固醇结石患者和非胆固醇结石患者肝组织HMGCoA还原酶(HMGCR)、固醇携带蛋白2(SCP2)基因mRNA的表达情况,进而明确二者在胆石形成中的作用.方法:选取2003-08/2004-08天津市南开医院外科住院病例90例,均取得患者及家属知情同意,其中家族遗传性胆囊胆固醇结石患者28例,非家族遗传性胆囊胆固醇结石患者30例,非胆固醇结石患者32例,术中肝活检,行肝组织总RNA提取,逆转录反应合成cDNA,设计引物,进行聚合酶链反应(PCR)扩增HMGCR和SCP2基因的目的片段,检测肝组织mRNA的表达水平的不同.结果:家族遗传性和非家族遗传性胆固醇结石组HMGCR,SCP2mRNA表达水平较非胆固醇结石组升高;其中HMG(:RmRNA表达在家族遗侉}生胆固醇结石组为1.9269±0.2134,非家族遗传性组为1.9791±0.2524,二者均高于非胆固醇结石组0.7730±0.1530,差异有显著性(P<0.05);SCP2mRNA表达在家族遗传性胆固醇结石组为0.8908±0.1649,非家族遗传性组为0.7503±0.1004,二者均高于非胆固醇结石组0.5205±0.1900,差异有显著性(P<0.05);家族遗传性胆固醇结石SCP2mRNA表达水平较非家族遗传性胆固醇结石组升高,差异有显著性(P<0.05),而HMGCRmRNA在家族遗传性和非家族遗传性胆固醇结石组两组间无统计学差别.结论:胆囊胆固醇结石患者肝组织HMGCR,SCP2mRNA表达水平升高是胆囊胆固醇结石形成的重要原因.

氟骨症患者血清一氧化氮含量和外周血白细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的意义

目的 探讨氟骨症患者患者外周血白细胞诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthaseiNOS)mRNA表达的意义。方法 选择3 5例氟骨症患者患者及3 0例正常人的外周血白细胞。iNOS -mRNA表达采用原位杂交方法。血浆一氧化氮(nitricoxideNO)水平采用硝酸还原酶比色法测定。结果 正常人外周血白细胞未见iNOS -mRNA表达,而氟骨症患者外周血白细胞iNOS -mRNA表达高度增强,其阳性率达40 .82 %。AR组血清NO水平显著高于对照组(t =2 7.89,P <0 .0 1)。结论 氟骨症患者病人血清NO水平与外周血白细胞iNOS -mRNA表达高度增强有关。提示iNOS-NO通路在氟骨症的发病过程中可能起重要作用。本研究为检测体内某些信号提供了简便易行的原位杂交试验方法。

mRNA翻译起始区二级结构优化提高(R)-羰基还原酶的表达及催化效率

为了提高近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis CCTCC M203011)的(R)-羰基还原酶在大肠杆菌中的表达水平及催化效率,对酶编码基因mRNA翻译起始区中+1～+78区进行二级结构的优化,并构建了相应的突变体。优化后mRNA翻译起始区的发夹结构明显减少,自由能显著下降(由原始的?9.5kcal/mol降至?5.0kcal/mol),使酶蛋白的表达水平及粗酶比活力分别比优化前提高了4～5倍和61.9%。在高底物浓度(5.0g/L2-羟基苯乙酮)下,优化突变株不对称转化效率较高,产物(R)-苯基乙二醇的光学纯度和产率分别为93.1%e.e.和81.8%,比优化前提高了27.5%和40.5%。研究结果表明:优化mRNA翻译起始区的二级结构,克服蛋白翻译启动的空间位阻,不仅能促进翻译的顺利进行,使目标蛋白得到高效表达,而且有利于蛋白空间结构的正确折叠,有效提高酶蛋白活力及生物催化功能。

2型糖尿病患者外周血单个核细胞中醛糖还原酶mRNA水平与糖尿病肾病危险性的关系

以RT PCR法检测外周血单个核细胞 (PBMC)中醛糖还原酶 (AR)mRNA水平。 2型糖尿病患者的PBMCARmRNA水平与尿白蛋白排泄率呈正相关 ,提示AR活性与糖尿病肾病的发病机制有关。

蜂蜡素对HepG_2细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达及蛋白质水平的影响

目的:探讨蜂蜡素对HepG2细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达及蛋白质水平的影响。方法:采用MTT比色法,Western Blot,RT-PCR等技术方法,观察蜂蜡素对HepG2细胞存活能力、HMG-CoA还原酶mRNA表达及蛋白质水平的影响。结果:当蜂蜡素浓度为100mg·L-1或以下时,对细胞存活能力无影响,为本研究可选择的剂量范围;蜂蜡素处理HepG2细胞,随着蜂蜡素浓度升高(低、中、高浓度为0.8,8,80mg·L-1),HMG-CoA还原酶蛋白质水平和mRNA的表达均逐渐降低,呈现明显的浓度依赖关系。结论:蜂蜡素可抑制HepG2细胞HMG-CoA还原酶蛋白质及mRNA的表达。

食管癌表达上调基因NADH氧化还原酶MLRQ亚基的研究及临床意义

目的研究在食管癌中差异表达明显的NADH氧化还原酶MLRQ亚基基因在食管癌中的表达,并探讨它在食管癌发生发展过程中的可能机制。方法利用微陈列技术方法获得一个在食管癌中的表达显著上调的NADH氧化还原酶MLRQ亚基基因,用RT PCR及Northern印迹从mRNA水平检测其在38对食管癌、7对贲门癌、14对胃癌、11对结肠癌和7对肝癌等消化系统肿瘤中的表达情况。结果(1)MLRQ基因在食管癌、贲门癌、胃癌、结肠癌和肝癌中显著上调者,分别为81.6%(31/38)、57.1%(4/7)、85.7%(12/14)、65.6%(7/11)、57.1%(4/7)。用X2检验,各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。(2)在38对食管癌配对组织中,MLRQ基因上调与临床分期、肿瘤浸润程度、淋巴结转移及分化程度无相关性(均P>0.05)。结论MLRQ亚基基因在消化道肿瘤中表达上调。

邻苯二甲酸二酯诱导果蝇脑组织基因差异表达谱的研究

[目的]获得邻苯二甲酸二(2- 乙基己基)酯[di(2 -ethylhexyl)phthalate ,DEHP]诱导果蝇脑组织的基因差异表达谱。[方法]设喂饲0 .2 %DEHP浓度的果蝇为实验组,乳化剂为对照组,2周后断头进行总RNA抽提,DNaseΙ消化去除DNA污染;用OligotexmRNAMiNiKit(QIAGEN)得到纯的mRNA ;合成双链cDNA ;采用体外转录的方法获得大量cRNA与Affymetrix的果蝇表达谱芯片进行杂交,计算机扫描处理数据。[结果]差异表达的基因片段共计3 5个:①上调的基因有2 0个,包括CYP6A2、CYP6A8、CYP6W1、CYP4P1、UGT3 6Bb、GST、羧酸酯酶、转甲基酶、氧化还原酶、EST10、JHEH1、KEAP1、CG690 8、CG1942、CG10 5 60、CG115 2 9、CG10 5 5 3、CG12 83、CG12 5 0 5等;②下调的基因有15个,包括MST5 7Da、MST5 7Db、ACP95EF、OS E、OS C、PBPRP3、PBPRP1、A10、CG1862 8、CG113 91、CG182 84、CG842 4、CG5 2 90、CG13 947、CG15 2 63等。差异表达基因中大多数与信号传导、细胞代谢、生长、发育、组织分化及转录因子等功能相关,尚有一些基因功能未知。[结论]运用高通量基因芯片技术获得DEHP诱导果蝇脑组织的基因差异表达谱,为从分子水平系统研究DEHP的毒性机制提供有益的线索。

水稻硝酸还原酶活力的调节

水稻品种原丰早(籼稻)和京引127(粳稻)的NR在分子量、亚基组成、体外稳定性、免疫学特性、最适pH以及对底物的K_m值等是相同的。在部分纯化的酶液中,原丰早的酶活力衰减速率比京引127慢20％左右。火箭免疫电泳和抗血清滴定结果指出原丰早NR的量比京引127多1.5倍。~3H-氨基酸体内参入NR的试验表明在诱导条件下原丰早NR的从头合成量明显高于京引127。原丰早中NR-mRNA的体外翻译产物也大大高于京引127。可见水稻体内NR活力受酶的合成和酶的钝化系统的调节,酶的合成又受NR-mRNA转录的控制。

高血压病人细胞胞浆抗氧化酶反应不足引起氧化应激

未治疗的高血压病人单核细胞氧化应激增加，抗氧化酶活性下降，该文目的在于证明高血压病人单核细胞抗氧化酶活性降低的原因。35名用药与不用药的高血压病人与38名对照组同时测定单核细胞多种抗氧化酶的mRNA水平，包括Cu—Zn与Mn-超氧歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化酶1型、谷胱甘肽还原酶。未治疗高血压病人的单核细胞氧化应激增加，胞浆内酶的活性下降，包括Cu—Zn超氧歧化酶，谷胱甘肽还原酶mRNA水平明显下降，谷胱甘肽过氧化酶-1型mRNA轻度下降。