斑节对虾Sox基因HMG盒的PCR扩增及SSCP分析

SRY基因是人类及哺乳动物睾丸决定因子的最佳候选基因,HMG盒是SRY基因编码蛋白质的唯一功能区,在性别决定中极其重要且高度保守,许多进化程度上明显不同的物种中都能检测出SRY基因的HMG盒,即Sox基因。斑节对虾是一种重要经济虾类,其性别决定机制研究薄弱,至今未找到性染色体。本研究根据人的SRY基因的HMG盒保守区的核苷酸序列,设计了1对兼并引物,通过PCR扩增出斑节对虾的Sox基因,并对扩增产物进行SSCP分析。结果表明,斑节对虾雌雄个体均存在Sox基因,从雌雄个体中均扩增出约350bp和220bp两条基因片段,推测其中350bp片段含内含子,SSCP结果显示斑节对虾内存在Sox基因家族的不同成员,且雌雄存在差异。最后我们讨论了对虾性别决定可能的机制。

Sox8基因HMG盒区内含子剪接位点分析

Sox基因参与广泛的发育调控过程。为了确定Sox8基因HMG盒区内含子的大小及剪接位点 ,通过计算机分析本室克隆得到的泥鳅Sox8基因包括HMG盒区在内的一段基因组序列 ,推测在HMG盒区可能存在一个内含子 ,进一步通过RT -PCR方法 ,克隆泥鳅Sox8基因HMG盒区cDNA片段 ,与基因组序列比较分析 ,确认在泥鳅Sox8基因的HMG盒区存在一个内含子 ,并确定了该内含子的序列及剪切位点。同时 ,比较分析了人和泥鳅Sox8在HMG盒区的内含子的剪切位点。结果显示 ,Sox8基因HMG盒区内含子剪切位点在进化上是保守的。

三疣梭子蟹Sox基因HMG盒的克隆分析

利用能扩增人类SRY基因HMG盒的一对简并引物,分别对三疣梭子蟹雌雄个体基因组DNA进行扩增,均得到216 bp和约400 bp的两条带,不存在性别差异,通过PCR-SSCP分析,未发现雌蟹或雄蟹所特有的Sox基因。对216 bp的带进行克隆测序得到6个Sox基因,分别命名为PTSox21、PTSox12、PTSox11a、PTSox11b、PTSox11c和PTSox4。其中,PTSox21、PTSox12和PTSox4氨基酸序列与人类Sox21、Sox12和Sox4基因的同源性分别为90%、66%和63%,PTSox11a、PTSox11b和PTSox11c氨基酸序列均与人类Sox11基因有63%的同源性。此外,PTSox11a和PTSox11b的氨基酸序列之间的同源性达到了98.6%,只在第44位氨基酸残基不同。与其他物种Sox基因氨基酸序列的同源性比较发现,PTSox21与饰纹姬蛙Sox2a有92%的同源性,而PTSox12、PTSox11a、PTSox11b和PTSox11c均与意大利蜜蜂的Sox1有73%的同源性,PTSox4与意大利蜜蜂的Sox1有72%的同源性。

HMG盒转录因子1(HBP1)参与H_2O_2诱导的细胞衰老过程

为探讨HMG盒转录因子1(HBP1)在过氧化氢(H2O2)诱导的细胞衰老中所起的作用,通过慢病毒感染得到稳定表达HBP1的MDA-MB-231细胞,以H2O2处理细胞.采用Western免疫印迹杂交试验和实时PCR检测HBP1、p16和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达水平的变化.用荧光免疫试验检测H2O2对HBP1表达的影响,以及HBP1在H2O2的诱导下对于p16和细胞周期蛋白D1启动子的影响.用细胞增殖试验检测H2O2对于细胞增殖的影响.用基因敲减实验和衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测在H2O2诱导的细胞衰老中HBP1所起的作用.Western和免疫荧光实验结果显示,细胞经H2O2处理后,HBP1表达增高的同时促进了p16的表达,降低了细胞周期蛋白D1的表达.细胞增殖实验结果显示,H2O2显著抑制了细胞的增殖.基因敲减实验和SA-β-Gal染色实验说明,H2O2可诱导HBP1表达正常的MDA-MB-231细胞衰老,而HBP1的敲减则抑制了H2O2诱导的细胞衰老过程.本研究结果提示,在H2O2诱导的衰老中,HBP1的表达显著增加,并通过促进衰老相关基因p16的表达和抑制生长因子cyclinD1的表达来阻碍细胞增殖,促进细胞衰老.HBP1在H2O2诱导的细胞衰老过程中起着重要作用,H2O2诱导的细胞衰老必须在HBP1存在的情况下才能发生.

HMG盒蛋白1抑制巨噬细胞移动抑制因子启动子的转录激活

HMG盒蛋白1(HMG box-containing protein 1,HBP1)是一种转录抑制因子.HBP1表达上调可抑制肿瘤细胞的增殖和转移,并且在肿瘤细胞中HBP1常常发生丢失或转位,这表明HBP1是一种抑癌基因.HBP1所调节的靶基因无疑将为HBP1的肿瘤抑制机制提供新的线索.本研究通过生物信息学分析发现,在促细胞增殖基因-巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)启动子区域-811 bp至-792 bp发现高亲和力的HBP1反应元件.缺失和突变分析表明,HBP1通过该元件抑制MIF启动子活性.此外,免疫共沉淀研究显示,HBP1在细胞内与该元件结合,并且抑制MIF的转录.功能分析进一步证实,在细胞培养液中加入重组MIF可部分消除HBP1对大肠癌细胞LOVO的抑制作用.这些结果提示,MIF是HBP1的一个靶基因.HBP1通过抑制促细胞增殖基因MIF的表达抑制肿瘤细胞生长.

一个在中华绒螯蟹性腺中特异表达的Sox基因HMG盒区的克隆与鉴定

根据人的睾丸决定因子(SRY)的高速泳动组蛋白区设计简并引物,以中华绒螯蟹雌雄个体的基因组DNA为模板进行PCR扩增,从雌雄体均扩出220bp左右的条带,说明中华绒螯蟹中存在SRY基因的同源体,且无性别差异.经克隆、测序后得到两条SRY盒区相关基因(Sox基因)片段,ES1和ES2,其序列与人相应Sox基因保守区的最高同源性分别为66%和93%.ES1和ES2在成体8种组织中的检测结果表明,ES1在精巢、肌肉、心脏、肝脏、鳃、胸神经团、不同时期的卵巢及排出的成熟卵等组织中均表达,而ES2只在精巢、成熟的卵巢以及排出的成熟卵中有表达,说明ES2基因可能参与性腺的发育和早期胚胎发育过程.

性别决定基因相关HMG盒基因4、β-连环蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义

目的观察结直肠癌组织中性别决定基因相关HMG盒基因4（Sox4）、β-连环蛋白（β-catenin）的表达，探讨Sox4、β-catenin在结直肠癌组织中表达的意义及其相关性。方法采用免疫组织化学染色方法检测80例结直肠癌组织及20例其邻近正常结直肠组织中Sox4、B—catenin的表达，分析其在结直肠癌组织中的表达与临床病理参数问的关系。结果Sox4在正常结直肠组织黏膜中未见Sox4表达，在结直肠癌组织中高表达，阳性表达率为68．75％（55／80），Sox4在结直肠癌组织中的表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、浸润深度、分化程度无明显相关（P〉0．05），Sox4在伴有淋巴结转移、Ⅲ--Ⅳ期的结直肠癌组织中的表达率分别明显高于无淋巴结转移、I～Ⅱ期的表达率（51．2％，P〈0．05）。β-catenin在正常结直肠组织黏膜中主要表达于细胞膜，在结直肠癌组织中异位表达，异位表达阳性率为63．75％（51／80）；B．catenin在结直肠癌组织中异位表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、浸润深度无明显相关（P〉0．05）。β-catenin在伴有淋巴结转移、中高分化、Ⅲ一Ⅳ期的结直肠癌组织中的表达率分别明显高于无淋巴结转移、低分化、I一Ⅱ期（P〈0．05）。结直肠癌组织中Sox4表达与β-catenin表达两者呈明显正相关（r=0．501，P〈0．01）。结论Sox4和β-catenin在结直肠癌组织中异常表达，参与结直肠癌的发生、发展，两者之间密切相关。

性别决定基因相关HMG盒基因4和细胞核增殖抗原在胃癌组织的表达及临床意义

目的观察胃癌组织中性别决定基因相关HMG盒基因4（SOX4）和细胞核增殖抗原（Ki-67）的表达，探讨SOX4和Ki-67在胃癌组织表达的临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测60例胃癌组织及60例其邻近正常胃组织中SOX4和Ki-67的表达，分析其在胃癌组织中的表达与临床病理特征间的关系。结果SOX4在胃癌组织中呈高表达，阳性表达率为71.7%（43/60），在正常胃组织中未见SOX4表达，Ki-67在胃癌组织中呈高表达，阳性表达率为86.7%（52/60），两者呈明显正相关（r＝0.615, P＝0.003）；SOX4和Ki-67在胃癌组织中的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度无明显相关（χ^2＝0.056，P＝0.821；χ^2＝0.572，P＝0.461；χ^2＝0.131，P＝0.882；χ^2＝1.479，P＝0.223；χ^2＝0.652，P＝0.482；χ^2＝0.567，P＝0.512；χ^2＝0.545，P＝0.652；χ^2＝0.781，P＝0.691），SOX4和Ki-67表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期明显相关（χ^2＝6.522，P＝0.016；χ^2＝7.681，P＝0.005；χ^2＝9.205，P＝0.003；χ^2＝6.761，P＝0.012；χ^2＝5.521，P＝0.032；χ^2＝5.857，P＝0.017），SOX4和Ki-67在低分化、淋巴结转移、Ⅲ～Ⅳ期胃癌组织中的表达水平明显增高。结论SOX4和Ki-67在胃癌组织中呈高表达，参与胃癌的发生、发展，两者之间密切相关。

人HMG盒转录因子1基因shRNA质粒的构建及其功能鉴定

目的构建人HMG盒转录因子1(HMG-box transcription factor 1,HBP1)基因shRNA质粒,并探讨该基因的相关功能。方法合成HBP1基因干扰序列,将其插入至慢病毒表达载体pLL3. 7中,构建重组质粒pLL3. 7-shHBP1,经TurboFectTM脂质体介导转染HEK293T细胞,收集含病毒的培养基,分别感染HeLa及HepG2细胞,经puromycin持续筛选,获得稳定转染细胞株。Real-time PCR及Western blot法分别检测HeLa及HepG2细胞中HBP1基因m RNA转录及蛋白表达水平,MTT及流式细胞术分别检测HBP1基因抑制对HeLa细胞增殖及凋亡的影响。结果经测序鉴定,重组质粒pLL3. 7-shHBP1构建正确。HeLa及HepG2细胞中HBP1基因mRNA转录及蛋白表达水平均明显下调(P <0. 01);HBP1基因抑制后,HeLa细胞的增殖速度明显加快(P <0. 01),细胞凋亡明显减少(P <0. 01)。结论成功构建了HBP1基因shRNA质粒,抑制HBP1表达后可使HeLa细胞的增殖速度加快,细胞凋亡减少。本实验为HBP1基因相关功能的进一步研究奠定了基础。

沉默性别决定基因相关HMG盒基因-6对调控胶质瘤细胞增殖的研究

目的 观察小分子干扰RNA（siRNA）沉默性别决定基因相关HMG盒基因-6（SOX-6）对体外胶质瘤细胞增殖能力的影响.方法 人胶质瘤母细胞细胞瘤LN229细胞株体外培养后,分为3组,实验组、对照组分别以SOX-6 siRNA、Control siRNA-A转染后培养,空白组常规培养,采用免疫组织化学染色和免疫荧光法鉴定SOX-6 siRNA转染成功率,采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖改变.结果 实验组和对照组SiRNA转染率＞80％;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）结果显示,与对照组及空白组比较,实验组SOX-6表达显著降低（0.427±0.032比0.612±0.055比0.609±0.049）,CCK-8实验检测结果显示,与对照组和空白组比较,实验组吸光度（A450）值在24、48、72 h均明显降低（P＜0.01）.结论 采用siRNA沉默SOX-6基因可调控胶质瘤细胞的体外增殖.

AR、SKP2、SOX10、PD-L1及TIL表达在三阴性乳腺癌中的意义

目的:探索雄激素受体(androgen receptor,AR)、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,SKP2)、性别决定区Y相关的HMG盒含因子10(sry-related HMG box-containing factor 10,SOX10)、程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)及肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)表达与临床病理特征和预后的关系。方法:根据苏木精-伊红染色(hematoxylineosin, HE)染色切片评判109例TNBC瘤巢内TIL的比例,采用Leica Bond-Max全自动免疫组化仪检测TNBC组织中AR、SKP2、SOX10、PD-L1的表达。分析以上各生物指标与临床病理特征间的关系,并采用kaplan-Meier、Log-rank进行生存分析。结果:95例患者获得随访,中位随访时间为48个月,中位无病生存时间(disease-free survival, DFS)为42个月,中位总生存时间(overall survival, OS)48个月。在TNBC中,AR阳性表达与淋巴结转移阴性(P=0.009)、肿瘤最大径<2 cm(P=0.008)相关,TIL高表达与低级别TNBC相关(P=0.007),SKP2阳性表达与神经/脉管侵犯阳性(P=0.011)、高级别TNBC相关(P=0.002),SOX10阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.022)、高级别TNBC(P=0.005)相关,PD-L1阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.020)、神经/脉管侵犯阳性(P=0.006)、高级别TNBC(P=0.042)相关。生存分析显示,SKP2、SOX10阳性表达与更差的DFS(P=0.007、P<0.001)和OS(P=0.013、P<0.001)相关,TIL高表达与更好的DFS(P=0.016)及OS(P=0.004)相关。在生物表志物的联合表达中,AR+/SKP2-、AR+/SOX10-与更好的DFS(P=0.004、P<0.001)及OS(P=0.007、P=0.001)相关,SOX10+/低TIL、PD-L1+/低TIL与更差的DFS(P<0.001、P=0.008)及OS(P=0.001、P=0.002)相关,AR-/低TIL者具有更差的OS(P=0.014)。SKP2(HR=4.143,95%CI为1.578~10.875)、SOX10(HR=7.578,95%CI为2.067~27.782)的阳性表达是影响TNBC患者DFS的独立预后因子,SKP2(HR=3.758,95%CI为1.400~10.084)、SOX10(HR=5.131,95%CI为1.316~20.000)及TIL(HR=0.375,95%CI为0.154~0.917)的阳性表达是TNBC患者OS的独立预后因子(P均<0.05)。结论:在TNBC中,AR阳性、TIL高表达与具有更好预后的临床病理特征相关,SKP2、SOX10和PD-L1与具侵袭性的临床病理特征相关。SKP2、SOX10及TIL表达与TNBC预后相关,提示这些生物指标可能成为TNBC新的预后因子,同时它们也有可能成为潜在的治疗靶点。

脊椎动物Sox基因家族的系统发生分析

脊椎动物Sox基因是一类高度保守的基因家族 ,它们编码一类转录因子 ,参与多种发育过程的调控。这个家族的共有特征是Sox蛋白具有一个约 79个氨基酸 ,可与DNA特异结合的HMG盒区。该基因家族成员众多复杂 ,对它们的基因结构、功能及进化关系的研究有助于对该基因家族的全面认识。利用已克隆的全部脊椎动物全长核苷酸 /蛋白质数据 ,对这些数据进行序列比对及进化树的构建 ,分析Sox基因家族成员的分类及分子进化模式。

Sox基因家族功能的研究进展

Sox(Sry-related high mobility group box)基因是由众多具有HMG-box保守基序构成的超基因家族,是与位于雄性动物Y染色体上的Sry基因同源的家族基因,在很多动物中都有表达。由于其编码的蛋白质具有结合DNA的能力,因而认为Sox基因家族是一类重要的转录调控因子。在个体发育过程中,Sox基因广泛参与了动物的早期胚胎发育、性别决定和分化、神经系统发育、软骨及多种组织器官的形成,具有重要的生物学功能。主要对Sox家族基因的功能及其研究进展进行简要的综述。

锯缘青蟹Sox基因的PCR扩增(英文)

SRY基因(sex-determining region of the Y chromosome)是人类及哺乳动物睾丸决定因子TDF(testisdetermining factor)的最佳候选基因。SRY蛋白含有204个氨基酸,其中1个约79个氨基酸区域即HMG盒(high mobility group box)是SRY基因编码蛋白质的唯一功能区。由于SRY的发现,人们进而发现了1个庞大的与性别决定有关的SRY盒-Sox(SRY-related HMG box gene)基因家族。锯缘青蟹是我国重要的海洋经济蟹类之一,其性染色体和性别决定机制仍处于进化的早期阶段,在分子水平上探讨其性别决定机制尚不多见。通过采用PCR技术,以特异扩增人SRY基因HMG盒保守区的1对兼并引物,扩增了锯缘青蟹基因组的Sox基因。结果表明锯缘青蟹雌雄个体与人一样,均能扩增出1条大小约为216bp左右的基因片段,显示出该基因在进化上的高度保守性,为探索锯缘青蟹的性别决定机制及Sox基因的进化提供了分子资料。

大鳞副泥鳅Sox基因保守区的克隆与特征分析

为探讨大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)的性别决定与分化机制,采用Sox基因HMG盒保守区的2对简并引物,SoxN与Sox9,用以扩增大鳞副泥鳅的基因组DNA,并对其性腺组织进行RT-PCR分析。SoxN引物扩增基因组DNA共获得pdSox1、pdSox2、pdSox3、pdSox4、pdSox11、pdSox14、pdSox19、pd-Sox21等13个Sox基因,分属SoxB与SoxC类群;Sox9引物扩增基因组DNA共获得pdSox8、pdSox9等5个Sox基因,属于SoxE类群,这5个Sox基因均含有一个内含子,且内含子的起始位置一致。基于Sox基因HMG盒蛋白质的遗传距离构建的NJ系统进化树表明,大鳞副泥鳅18个Sox基因在小鼠或斑马鱼中均能找到相应的Sox直系同源基因,其中,pdSox4、pdSox8、pdSox9、pdSox11、pdSox14、pdSox19等6个基因存在基因加倍现象,具有2个或2个以上的拷贝。用Sox9引物对大鳞副泥鳅的性腺进行RT-PCR扩增和测序分析,结果表明,在精巢中表达的是pdSox9a,在卵巢中表达的是pdSox8a。以上结果表明,pdSox8与pdSox9是大鳞副泥鳅的性别相关基因,它们可能在大鳞副泥鳅的性别分化中发挥作用。

46,XY女性性反转患者SRY基因的两个新突变类型(英文)

Y染色体上的性别决定区域———SRY基因作为睾丸决定因子,可以调控男性性别发育过程。SRY基因是一种转录因子,属于带有高迁移率族蛋白家族,该家族成员包含能与DNA结合的HMG盒基序。已知SRY基因的缺失和点突变是造成XY女性性反转的病因之一。通过筛查10位中国46,XY女性性反转病人SRY基因的开放阅读框区域,探寻新的突变类型。用标准方法从外周血中抽提gDNA,通过聚合酶链式反应扩增SRY基因中部的609bp的DNA片段。扩增后的PCR片段被克隆到pUCm T载体中,在ABI3773自动测序仪上完成测序。运用限制性内切酶酶切分析的方法验证DNA测序的结果。结果表明,在两个患者的SRY基因中分别发现了新的核苷酸点突变,并都导致氨基酸替代。一个突变发生在SRY基因的5′端HMG盒外的核苷酸第113位腺嘌呤(A)被鸟嘌呤(G)取代,并导致谷氨酸被甘氨酸替换;另一个突变是第387位核苷酸发生T被A替换,该突变引起第129位的酪氨酸变成终止密码,她父亲的SRY序列被证明是正常的野生型。通过查询文献和人类基因突变数据库(HGMD),这两个突变都是以前未见报道过的新型SRY基因突变,并使因核苷酸替换引起SRY基因突变总数增加到45。

性别决定基因SRY的研究进展

SRY基因是哺乳动物性别决定过程中的主宰基因 ,其表达产物SRY蛋白是一种DNA结合蛋白 ,该蛋白含有一个HMG盒 ,能够以序列特异性结合到DNA双螺旋链的一侧 ,起到转录因子的作用 ,调节或协同下游基因如SOX9、AMH等基因的表达 ,使胚胎发育向雄性方向发展。

黑斑蛙Sox基因的PCR-SSCP分析

Sox基因家族是一类高度保守的基因家族,具有一个保守基序HMG-box,可以与DNA序列特异性结合,促进基因的特异转录,从而在胚胎发育及性别分化中起着重要作用。本文采用简并PCR方法,扩增并克隆了黑斑蛙的Sox基因保守区,获得长约220bp的片段;结合SSCP分析技术,在阳性克隆中筛选出六个不同的Sox基因。本研究为Sox家族成员的分类及分子进化的研究提供了资料。

SRY基因的研究进展

性别决定是最近研究的一个热门话题 ,经过科学家们的不懈努力 ,已经确定了

SOX9基因的研究进展

SOX9基因是SOX基因家族的一个重要成员,在哺乳动物性别决定和软骨生成中起着关键的调控作用。从基因的结构、表达、生化特性、蛋白之间的作用及功能等几方面阐述了SOX9基因的研究进展。