益肝胶囊对药物性肝损伤大鼠HMGB1、RAGE和NF⁃κB蛋白表达的影响

目的:研究益肝胶囊对抗结核药物性肝损伤(ATB‐DILI)中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、核因子‐κB(NF‐κB)和晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白表达的影响,探讨其对ATB‐DILI的保护作用和机制,为益肝胶囊的临床应用提供实验依据。方法:将24只大鼠分为两组,除空白组(n=6)灌胃0.9%氯化钠溶液外,其余18只给予异烟肼(INH)+利福平(RFP)(各50 mg⋅kg^(‐1)⋅d^(‐1))连续灌胃4周。然后将18只按每组6只随机分为3组(模型组、益肝胶囊低剂量组、益肝胶囊高剂量组),空白组与模型组继续灌胃0.9%氯化钠溶液,益肝胶囊低剂量组0.468 g/kg,益肝胶囊高剂量组1.872 g/kg[1]进行灌胃给药。4周后,HE染色观察肝的病理变化;检测ALT、AST、ALP、γ‐GT、TBIL的含量;IHC检测HMGB1、NF‐κBp65、RAGE蛋白的表达;WB检测HMGB1、NF‐κBp65、RAGE、TNF‐α和IL‐1β的表达水平。结果:HE染色显示,模型组肝的结构排列较紊乱、肝细胞出现肿胀融合、炎性细胞数量增多并伴有点状坏死,而益肝胶囊各治疗组的上述病理变化有明显的改善;模型组ALT、AST、ALP、γ‐GT、TBIL含量较空白组上升(P<0.05);益肝胶囊各治疗组ALT、AST、ALP、γ‐GT、TBIL含量较模型组显著降低(P<0.05);与空白组比较模型组TNF‐α和IL‐1β的表达水平升高(P<0.05),HMGB1、NF‐κBp65、RAGE的表达增加(P<0.05);与模型组比较益肝胶囊各治疗组TNF‐α和IL‐1β的表达水平降低(P<0.05),HMGB1、NF‐κBp65、RAGE的表达下降(P<0.05)。结论:益肝胶囊可能通过HMGB1/RAGE/NF‐κBp65信号通路,抑制炎性因子的分泌,从而对ATB‐DILI起到保护作用。

胡黄连苷Ⅱ调节HMGB1/RAGE信号通路对冠心病大鼠内皮细胞损伤的影响

目的:初步探讨胡黄连苷Ⅱ(P-Ⅱ)调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路对冠心病(CHD)大鼠内皮细胞损伤的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为control组、CHD组、P-Ⅱ低、中、高剂量组、P-Ⅱ高剂量+DEX组(P-Ⅱ高剂量+HMGB1/RAGE信号通路激活剂DEX),除control组外,采用高脂饮食联合腹腔注射垂体后叶素法建立CHD大鼠模型,灌胃或腹腔注射相应药物,1次/d,连续4周。生化分析仪分析大鼠血脂水平;ELISA检测血清血管内皮损伤标志物一氧化氮(NO)、内皮素(ET)-1、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及血清和冠状动脉组织TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子水平;试剂盒检测大鼠冠状动脉组织活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;HE染色观察大鼠冠状动脉组织病理损伤;TUNEL染色观察血管内皮细胞凋亡;Western blot检测冠状动脉组织中血管内皮生长因子(VEGF)、HMGB1、RAGE蛋白表达。结果:相较于control组,CHD组大鼠TC、TG、LDL-C、ET-1、AngⅡ、TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、内皮细胞凋亡率及HMGB1、RAGE表达显著升高,HDL-C、NO、GSH-Px及VEGF表达显著降低(P<0.05);相较于CHD组,P-Ⅱ低、中、高剂量组TC、TG、LDL-C、ET-1、AngⅡ、TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、内皮细胞凋亡率及HMGB1、RAGE表达显著降低,HDL-C、NO、GSH-Px及VEGF表达显著升高(P<0.05);HMGB1/RAGE信号通路激活剂DEX可减弱P-Ⅱ对CHD大鼠内皮细胞损伤的保护作用。结论:P-Ⅱ能有效减轻CHD大鼠内皮细胞损伤,其作用机制可能与抑制HMGB1/RAGE通路激活有关。

槲皮素通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路减轻糖尿病引起的大鼠肾脏损伤

目的探究槲皮素对链脲佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠的肾脏炎症反应和细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法采取腹腔一次性注射STZ建立糖尿病SD大鼠模型,并设置正常对照组(NC组,n=6)、高糖高脂组(HC组,n=6)、糖尿病模型组(DM组,n=6)、槲皮素组(DMQ组,n=6),DMQ组每日给予100 mg/kg的槲皮素灌胃处理。通过HE染色观察肾组织的病理学形态变化;ELISA检测血清炎症反应;免疫组化观察NF-κB的表达情况;血糖分析仪检测FBG;磷酸甘油氧化酶法、脲酶法、肌氨酸酶氧化酶法、双缩脲法等方法测定各组大鼠血清TG、BUN、Scr含量以及24 h尿蛋白含量;Western blotting检测各组大鼠肾脏组织HMGB1、RAGE、NF-κB、Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达情况。结果与正常对照组相比,糖尿病组大鼠FBG、TG、BUN、Scr、肾脏肥大指数和24 h尿蛋白均显著升高(P<0.01);血清炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.01);肾脏结构产生典型的病理性变化;肾脏组织HMGB1、RAGE、NF-κB、Bax、Caspase-3的表达量明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达量明显降低(P<0.01)。与糖尿病组相比,经过槲皮素干预后上述情况得到相反的结果。结论槲皮素能够改善糖尿病引起的肾脏损伤,其保护作用可能与抑制HMGB1/RAGE/NF-κB炎症信号通路,进而减轻肾脏的炎症反应、细胞凋亡等。

连翘苷抑制HMGB1/RAGE信号通路减轻大鼠糖尿病周围神经病变坐骨神经损伤

目的 基于高迁移率族蛋白Box-1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路探讨连翘苷(PHI)对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠坐骨神经损伤的影响。方法 利用高脂高糖饮食并注射链脲佐菌素(STZ)建立DPN大鼠模型,随机分为模型组、连翘苷低剂量(PHI-L)(50 mg/kg)组、连翘苷中剂量(PHI-M)(100 mg/kg)组、连翘苷高剂量(PHI-H)(200 mg/kg)组、阳性药物(甲钴胺,250μg/kg)组;另取正常饲料喂养大鼠为对照组。每组10只。采用BL-420S生物机能实验系统测定坐骨神经传导速度;血糖仪检测空腹血糖(FBG)水平;ELISA试剂盒检测血清HbAlc、IL-6、TNF-α水平;电镜观察坐骨神经超微结构形态;试剂盒检测坐骨神经中ROS、SOD、MDA、MBP水平;RT-qPCR、Western blot法检测坐骨神经中HMGB1、RAGE mRNA和蛋白水平。结果 与模型组比较,PHI-M组、PHI-H组、阳性药物组大鼠病理损伤明显减轻,坐骨神经传导速度、MBP、SOD水平显著恢复,FBG、HbAlc、IL-6、TNF-α、ROS、MDA、HMGB1、RAGE的mRNA及蛋白水平显著下降(P均<0.05)。结论 PHI可降低炎症反应,减轻大鼠DPN,发挥治疗作用,其机制可能与抑制HMGB1/RAGE信号通路有关。

Effects of Yigan Capsule on the expression of HMGB1,RAGE and NF-κB protein in rats with drug-induced liver injury

Objective:To study the effect of Yigan capsule on the expression of high mobility group protein B1(HMGB1),nuclear factor-B(NF-κB)and receptor for advanced glycation end products(RAGE)in anti-tuberculosis drug-induced liver injury(ATB-DILI),and to explore its protective effect and mechanism on ATB-DILI,so as to provide experimental basis for the clinical application of Yigan capsule.Methods:Twenty-four rats were divided into two groups.Except for the blank group(n=6),the other 18 rats were given isoniazid(INH)+rifampicin(RFP)(50 mg/kg.d)for 4 weeks.Then 18 rats were randomly divided into three groups(model group,low dose group of Yigan capsule and high dose group of Yigan capsule)according to 6 rats in each group.The blank group and the model group were given 0.9%sodium chloride solution by intragastric administration.The low dose group of Yigan capsule was 0.468 g/kg,and the high dose group of Yigan capsule was 1.872 g/kg[1].After 4 weeks,the pathological changes of liver were observed by HE staining.The contents of ALT,AST,ALP,γ-GT and TBIL were detected.The expression of HMGB1,NF-κBp65 and RAGE protein was detected by IHC.The expression levels of HMGB1,NF-κBp65,RAGE,TNF-αand IL-1βwere detected by WB.Result:HE staining showed that the structure of the liver in the model group was disordered,the liver cells showed swelling and fusion,the number of inflammatory cells increased and accompanied by punctate necrosis,while the above pathological changes in each treatment group of Yigan capsule were significantly improved.The contents of ALT,AST,ALP,γ-GT and TBIL in the model group were higher than those in the blank group(P<0.05).The contents of ALT,AST,ALP,γ-GT and TBIL in each treatment group were significantly lower than those in the model group(P<0.05).Compared with the blank group,the expression levels of TNF-αand IL-1βin the model group were increased(P<0.05),and the expression levels of HMGB1,NF-κBp65 and RAGE were increased(P<0.05).Compared with the model group,the expression levels of TNF-αand IL-1βin each treatment group of Yigan capsule decreased(P<0.05),and the expression of HMGB1,NF-κBp65 and RAGE decreased(P<0.05).Conclusion:Yigan capsule may inhibit the secretion of inflammatory factors through HMGB1/RAGE/NF-κBp65 signaling pathway,thus protecting ATB-DILI.

基于miR⁃34a/HMGB1轴探讨七氟醚对胃癌细胞恶性生物学活性的机制

目的基于miR⁃34a/HMGB1轴探究七氟醚对胃癌细胞恶性生物学活性的影响。方法将胃癌细胞分为NC组,SEV⁃1.7%组、SEV⁃3.4%组、SEV⁃5.1%组。miR⁃34a组、SEV⁃5.1%+anti⁃miR⁃34a组、SEV⁃5.1%+pcDNA⁃HMGB1组和SEV⁃5.1%+pcDNA⁃HMGB1+miR⁃34a组。CCK⁃8、Transwell小室法分别检测细胞增殖和侵袭移能力;qRT⁃PCR检测miR⁃34a表达;蛋白质印迹检测细胞中HMGB1蛋白表达;双荧光素酶报告系统实验检测miR⁃34a和HMGB1的靶向关系。结果和GES⁃1细胞系相比,胃癌SGC⁃7901细胞(0.23±0.03)中miR⁃34a表达降低,HMGB1蛋白(0.85±0.10)表达升高(P<0.05)。和NC组相比,SEV⁃1.7%组、SEV⁃3.4%组、SEV⁃5.1%组细胞中miR⁃34a表达均升高,细胞存活率、细胞侵袭数目和HMGB1蛋白表达均降低(P<0.05)。和SEV⁃5.1%组相比,SEV⁃5.1%+anti⁃miR⁃34a组细胞存活率[24 h、48 h分别为(92.46±8.27)%、(96.71±7.52)%]、细胞侵袭数目(126.42±10.84)和细胞中HMGB1蛋白(0.80±0.09)表达均明显增加(P<0.05)。向细胞中转染HMGB1⁃WT时,miR⁃34a组(0.34±0.05)荧光素酶活性明显低于miR⁃NC组(P<0.05)。和SEV⁃5.1%组相比,SEV⁃5.1%+pcDNA⁃HMGB1组细胞存活率[24 h、48 h分别为(90.18±8.06)%、(82.47±7.21)%]、细胞侵袭数目(122.18±10.62)和细胞中HMGB1蛋白(0.81±0.10)表达均明显升高(P<0.05);和SEV⁃5.1%+pcDNA⁃HMGB1组相比,SEV⁃5.1%+pcDNA⁃HMGB1+miR⁃34a组细胞存活率[24 h、48 h分别为(65.33±6.02)%、(28.41±3.26)%]、细胞侵袭数目(68.33±6.09)和细胞中HMGB1蛋白(0.34±0.04)表达均明显降低(P<0.05)。结论七氟醚可通过调节miR⁃34a/HMGB1轴抑制胃癌细胞增殖和侵袭。

基于HMGB1/NF-κB/NLRP3轴探讨褪黑素对氧诱导视网膜病变的保护作用

目的观察褪黑素(melatonin,Mel)对新生小鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)的保护作用,并探讨HMGB1/NF-κB/NLRP3轴在其中的作用。方法7日龄C57BL/6J新生小鼠随机分为对照组、模型组(OIR组)及Mel处理组(OIR+Mel组),各组n=9。采用高氧诱导法制备OIR模型。苏木精-伊红染色和视网膜铺片法检测视网膜结构和新生血管;免疫荧光染色法检测HMGB1/NF-κB/NLRP3轴相关蛋白和炎性因子及淋巴细胞抗原6G表达;比色法检测髓过氧化物酶活性。结果OIR组视网膜结构被破坏,出现大片无灌注区和新生血管,OIR+Mel组可见破坏的视网膜结构改善,新生血管和无灌注区减少。与对照组相比,OIR组HMGB1/NF-κB/NLRP3轴相关蛋白和炎性因子表达升高(均P<0.05),淋巴细胞抗原6G表达和髓过氧化物酶活性升高(均P<0.05);Mel处理后,上述各指标降低(均P<0.05)。与对照组相比,OIR组视网膜中褪黑素受体表达降低;Mel处理后,褪黑素受体表达较OIR组升高(均P<0.05)。结论Mel可能通过抑制HMGB1/NF-κB/NLRP3轴减轻OIR新生小鼠视网膜损伤,且可能通过褪黑素受体途径发挥作用。

艾司氯胺酮通过调控HMGB1/MAPK轴改善小鼠POCD的机制研究

目的通过观察不同剂量艾司氯胺酮对高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1,HMGB1)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)轴的调控,探究艾司氯胺酮改善小鼠POCD的作用机制。方法选取健康的18个月雄性小鼠随机进行分组,对照组(C组)、脓毒症组(LPS组)、LPS+低剂量艾司氯胺酮组5 mg/kg(LPS+S1)、LPS组+中等剂量艾司氯胺酮组10 mg/kg(LPS+S2)、LPS组+高剂量艾司氯胺酮组15 mg/kg(LPS+S3),LPS+HMGB1抑制剂(LPS+甘草酸组)、LPS+中等剂量艾司氯胺酮干预组+HMGB1抑制剂(LPS+S2+甘草酸组)、LPS+中等剂量艾司氯胺酮干预组+MAPK信号通路抑制剂组(LPS+S2+PD98095组)、LPS+中等剂量艾司氯胺酮干预组+HMGB1抑制剂+MAPK信号通路激活剂(LPS+S2+甘草酸+ANS组)。(艾司氯胺酮干预组是在模型建立后给予第一部分所研究的最佳艾司氯胺酮剂量进行处理)。LPS组是通过腹腔注射LPS 5 mg/kg,HMGB1抑制剂组给予腹腔注射甘草酸剂量为40 mg/kg,对照组注射同等剂量生理盐水。不同药物处理后进行旷场试验和水迷宫实验,之后立即处死小鼠并取其海马组织,采用ELISA测定海马组织白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)。Western Blot检测海马组织HMGB1和MAPK信号通路相关蛋白(p38 MAPK、ERK1/ERK2、JNK)表达水平。结果与对照组小鼠对比,LPS组脓毒症模型小鼠HMGB1、p38 MAPK、ERK1/ERK2、JNK表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型小鼠对比,抑制HMGB1表达后,LPS+S2+甘草酸组脓毒症模型小鼠炎症因子表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型小鼠对比,抑制HMGB1表达后,LPS+S2+甘草酸组脓毒症模型小鼠各组小鼠各时点逃避潜伏期时间减少、穿越平台次数增加、总行驶距离增加、中央区域停留时间增加、目标象限时间增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型小鼠对比,抑制MAPK信号通路后,LPS+S2+PD98095组模型小鼠炎症因子表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型小鼠对比,逃避潜伏期时间等上述指标优于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);与模型小鼠对比,抑制HMGB1表达同时激活MAPK信号通路后,LPS+S2+甘草酸+ANS组模型小鼠炎症因子表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型小鼠对比,逃避潜伏期时间等上述指标优于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论艾司氯胺酮能够一定程度改善脓毒症小鼠炎症因子表达,其机制主要是艾司氯胺酮能够直接抑制HMGB1与MAPK通路的表达或是激活,更深层次的机制可能艾司氯胺酮能够通过抑制HMGB1进而抑制MAPK信号通路的激活,进而改善脓毒症小鼠模型的症状。

HMGB1/RAGE通路在COPD和肺癌发病中共性机制的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是肺癌发病的独立危险因素,肺气肿是COPD和肺癌的共性临床特征,COPD合并肺癌者预后更差。气道上皮细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)可通过激活晚期糖基化终末产物受体(RAGE)诱导炎症反应及增强氧化应激反应,从而参与COPD肺气肿的形成及发展。HMGB1/RAGE通路激活也可通过增强炎症反应和氧化应激反应促进肺癌的增殖、转移,并与肺癌的进展及化疗药物耐药密切相关。深入研究HMGB1/RAGE信号通路在COPD和肺癌中的机制,可为COPD和肺癌的治疗提供新思路。

松萝提取物对胶原诱导性关节炎大鼠HMGB1-RAGE自噬通路及关节炎性损伤的影响

目的:探讨松萝提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)自噬通路及关节炎性损伤的影响。方法:将54只大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,松萝提取物低、中、高剂量组和羟氯喹组,每组9只。除空白对照组外,其余组采用Ⅱ型胶原乳剂建立CIA模型。松萝提取物低、中、高剂量组分别给予2mg·kg^(-1)·d^(-1)、6mg·kg^(-1)·d^(-1)、54 mg·kg^(-1)·d^(-1)松萝提取物灌胃,羟氯喹组给予36 mg·kg^(-1)·d^(-1)羟氯喹灌胃,空白对照组及模型对照组则予以等量的生理盐水灌胃。观察各组大鼠关节炎评分、肿胀程度和滑膜病理的变化,采用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶(MMPs)、血管内皮生长因子(VEGF)、HMGB1的含量,PCR、WB检测蛋白HMGB1、RAGE、Beclin1、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的蛋白浓度及表达情况。结果:模型大鼠出现关节肿胀、变形,活动量减少,关节炎评分提示造模成功。经松萝提取物治疗后,大鼠的关节肿胀减轻,活动量增加,炎症反应减轻。与空白对照组比较,模型对照组血清TNF-α、MMPs、VEGF、HMGB1含量均增高,且HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK蛋白表达量均上升,Beclin1蛋白表达量下降(P<0.05)。与模型对照组比较,松萝提取物中、高剂量组及羟氯喹组HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK、TNF-α、MMPs、VEGF含量均降低,Beclin1蛋白表达量上升(P<0.05);与羟氯喹组比较,松萝提取物中、高剂量组抑制HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK表达,激活Beclin1的效果相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:松萝提取物能减轻CIA大鼠关节肿胀程度,降低血清TNF-α、MMPs、VEGF、HMGB1含量,抑制HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK蛋白的表达,提升Beclin1表达,增强细胞自噬,减少滑膜炎症反应。

HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度的相关性

目的:分析高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、糖基化终末产物受体(RAGE)水平与子痫前期病情程度的相关性。方法:回顾性分析2020年2月至2021年2月该院收治的63例子痫前期患者的临床资料,根据子痫前期病情程度分为轻度组31例和重度组32例,另选取32名正常妊娠孕妇为对照组。检测三组HMGB1、RAGE蛋白表达水平,分析HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度的相关性。结果:重度组、轻度组胎盘组织和血清中HMGB1、RAGE蛋白表达水平均高于对照组,且重度组高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05);子痫前期患者HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度呈正相关(r>0,P<0.05)。结论:HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度呈正相关。

HMGB1及其受体RAGE分子信号通路参与调节肝细胞肝癌增殖和侵袭迁移机制的研究

目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及其受体晚期糖基化终产物(RAGE)在人体肝细胞癌(HCC)组织中的表达情况,了解HMGB1及其受体RAGE对HCC细胞增殖和侵袭转移的影响,研究HMGB1及其受体分子信号通路参与调节HCC细胞增殖和侵袭转移的相关机制。方法选取10例人体HCC组织标本和HCC细胞培养标本,以正常的肝脏组织细胞作为对照。通过免疫荧光染色、Western blot、RT-PCR检查方法分析HMGB1对HCC细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、蛋白激酶B(AKT)、NT-κB等信号通路的调节,检测HCC细胞中HMGB1及其受体分子RAGE蛋白的表达量,对HMGB1及其受体RAGE的表达量与其临床症状作相关性分析。结果 1在HMGB1抑制剂甘草皂甙、重组HMGB1(r HMGB1)、r HMGB1+sRAGE的作用下,能够有效干扰HMGB1在HCC细胞中的表达。干扰HMGB1可以抑制HCC细胞的增殖、促使细胞凋亡、引起细胞周期阻滞,同时降低其体外迀移和侵袭能力。这些结果提示HMGB1在HCC中具有促增殖、促迁移、抗凋亡和侵袭的作用。2HMGB1能增强MAPKs和NF-κB信号通路活性。稳定干扰HMGB1的HCCLM3细胞内MAPKs的磷酸化水平降低,包括p38和JNK,同时它们的上游激酶(MEK1/2、SEK1)和下游底物(c-Jun、-Myc)的磷酸化也被抑制;NF-κB的表达量及Ser536位点的磷酸化水平也下调。结论 1HMGB1与RAGE结合通过激活MAPK信号通路最终导致核转录因子NF-κB激活并促进RAGE基因转录,增加RAGE的mRNA含量,使RAGE表达上调,正反馈的扩大HMGB1引起的反应;2HMGB1通过作用于RAGE激活下游RAC1分子,并最终引起VEGF表达上调,进而促进HCC的增殖和侵袭转移。

胞外HMGB1调控SDF-1/CXCR-4轴介导脐血CD34^+细胞的迁移作用研究

本研究探究高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)和/或基质细胞衍化因子(SDF-1)对脐血CD34+细胞的迁移作用,并进一步探讨HMGB1是否通过调控SDF-1/CXCR-4轴介导脐血CD34+细胞的迁移。分离脐血单个核细胞,应用免疫磁珠分选CD34+细胞,流式细胞仪检测脐血CD34+细胞的纯度。利用趋化迁移实验(Transwell)测定HMGB1和/或SDF-1对脐血CD34+细胞的迁移作用。1.0×105细胞/孔脐血CD34+细胞加入上孔中,应用不同浓度梯度的HMGB1和/或SDF-1(0、10、25、50、100、200 ng/ml)检测HMGB1和/或SDF-1促进脐血CD34+细胞迁移的最适作用浓度。新鲜分离的脐血CD34+细胞表达SDF-1受体CXCR-4和HMGB1受体TLR2,TLR4和RAGE。为进一步探讨何种受体在HMGB1和SDF-1介导的细胞迁移中起作用,应用抗SDF-1抗体,抗CXCR-4抗体,抗RAGE抗体,抗TLR2抗体和抗TLR4抗体阻断研究HMGB1和/或SDF-1对脐血CD34+细胞的迁移作用。结果表明,磁珠分选脐血CD34+细胞纯度为97.40±1.26%。25 ng/ml的SDF-1不能介导脐血CD34+细胞的迁移,最佳作用浓度为100 ng/ml。HMGB1的最低作用浓度为100 ng/ml。通过剂量研究实验发现,细胞迁移最佳联合作用浓度为HMGB1 100 ng/ml+SDF-1 50 ng/ml。抗体阻断实验结果表明,抗SDF-1(4μg/ml)和抗CXCR-4(5μg/ml)抗体均可以阻断HMGB1单独或联合SDF-1介导的细胞迁移运动,而抗RAGE抗体,抗TLR2抗体及抗TLR4抗体并不能阻断HMGB1和/或SDF-1对脐血CD34+细胞的迁移作用。结论:HMGB1和SDF-1均可以促进脐血CD34+细胞的迁移,HMGB1可能通过CXCR-4而非RAGE和TLR受体加强SDF-1诱导的细胞迁移作用。具体的作用机制还需进一步探讨。

RAGE和HMGB1在乳腺癌中表达及其临床意义

目的探讨乳腺癌组织中RAGE和HMGB1基因表达及其临床意义。方法各对50例早期、晚期乳腺癌组织及正常乳腺组织蜡块标本,运用real-time PCR技术检测RAGE和HMGB1基因的表达情况。并分析各基因表达与乳腺癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期之间的关系。结果 RAGE和HMGB1基因表达荧光实时定量PCR法上调分别为73%、79%。乳腺癌TNM分期、淋巴结转移与基因高表达有密切关系,RAGE基因表达与HMGB1表达呈正相关(P<0.05)。结论 RAGE和HMGB1基因表达对于乳腺癌早期诊断和预后分析有重要指导意义,根据其表达开展有选择性地基因治疗应有良好的应用前景。

HMGB1通过RAGE促进肝内胆管癌细胞增殖、侵袭的机制研究

目的 :检测高迁徙率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)及其受体晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end-products,RAGE)在肝内胆管癌组织中的表达;探讨HMGB1/RAGE对肝内胆管癌细胞增殖及上皮-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用。方法:免疫组化分析未转移和已转移胆管癌患者标本中HMGB1及RAGE的表达;ELISA法检测胆管癌及胆管结石患者胆汁中HMGB1的含量;CCK8、Transwell检测HMGB1及RAGE抑制剂(FFP-ZM1)对胆管癌细胞增殖、侵袭作用的影响;Western blot检测胆管癌及癌旁组织中p-ERK的表达。结果:HMGB1和RAGE在已转移的胆管癌患者组织标本中高表达,HMGB1可促进胆管癌细胞的EMT过程及胆管癌细胞的生长和侵袭。结论 :HMGB1可参与胆管癌细胞的增殖与EMT过程。

加味补阳还五颗粒对脑梗死大鼠HMGB1/RAGE信号通路的影响

目的观察加味补阳还五颗粒对脑梗死大鼠HMGB1/RAGE信号通路的影响。方法将健康雄性SD大鼠90只,按体质量用数字表法随机分为正常组、假手术组、模型组、加味补阳还五颗粒低剂量组、加味补阳还五颗粒中剂量组、加味补阳还五颗粒高剂量组、HMGB1抑制剂组、RAGE阻断剂组、阳性药物组各10只。分别取大鼠梗死区脑组织和血清。ELASA法检测血清中HMGB1和RAGE水平;Western blotting法分析脑组织中HMGB1表达水平。结果中等剂量的加味补阳还五颗粒可降低梗死区脑组织中HMGB1表达水平,可降低脑梗死大鼠血清中HMGB1和RAGE的含量。结论加味补阳还五颗粒可能通过影响脑梗死大鼠HMGB1/RAGE信号通路而发挥脑保护作用。中等剂量的加味补阳还五颗粒,折合人体剂量后每味药剂量如下:黄芪30 g,当归10 g,川芎6 g,赤芍10 g,丹参10 g,地龙10 g,茯苓10 g,陈皮6 g,杜仲10 g,天麻10 g。成人每日1剂,分两次服用。

泻火化瘀通窍法对感音性耳聋大鼠HMGB1/RAGE信号通路的影响

目的探讨泻火化瘀通窍法对高迁移率族蛋白B1(highy mobility group proteinboxl,HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(advanced glycation end product receptor,RAGE)介导的耳蜗缺血再灌注损伤(cochlea ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠的作用效果及机制。方法36只健康SPF级SD大鼠,雌雄各半,平均体质量(220±20)g。采用随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、泻火化瘀通窍低剂量组(12.5g/kg)、泻火化瘀通窍中剂量组(25.0g/kg)、泻火化瘀通窍高剂量组(37.5g/kg)和地塞米松组(20mg/kg),每组各6只。以血管阻断法建立CIRI大鼠模型,并给予相应药物干预。测定大鼠脑干听觉诱发电位(brainstem auditory evoked potential,BAEP)阈值,苏木精-伊红染色观察大鼠耳蜗组织病变并定量评分,酶联免疫吸附法测定耳蜗组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量及活性,蛋白质印迹法检测大鼠耳蜗组织HMGB1、RAGE、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、磷酸化核因子-κB p65(phosphorylation nuclear factor-κB p65,p-NF-κB p65)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)及活化caspase-3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达情况。结果与假手术组相比,模型组大鼠耳蜗毛细胞变形、缺损严重,苏木精-伊红半定量评分均显著增加(P<0.01),SOD、CAT活性含量均显著降低(P<0.01),而BAEP阈值、MDA含量均显著升高(P<0.01),HMGB1、RAGE、TNF-α、IL-1β、p-NF-κB p65、cleaved-caspase-3/caspase-3蛋白表达均显著增加(P<0.01);与模型组相比,泻火化瘀通窍各剂量组和地塞米松组大鼠的CAT活性含量均显著上升(P<0.01),泻火化瘀通窍中、高剂量组和地塞米松组大鼠的苏木精-伊红半定量评分、BAEP阈值、MDA含量、HMGB1和cleaved-caspase-3/caspase-3蛋白表达均显著降低(P<0.05),泻火化瘀通窍高剂量组和地塞米松组大鼠的RAGE、p-NF-κB p65、TNF-α、IL-1β蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论泻火化瘀通窍法对CIRI大鼠具有改善作用,其作用与抑制HMGB1/RAGE信号通路有关。

大黄牡丹汤调控HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路干预急性胰腺炎模型大鼠的机制

旨在研究大黄牡丹汤对急性胰腺炎模型大鼠的干预作用及可能的分子机制。将96只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、阳性药物对照组和大黄牡丹汤高、中、低3个剂量试验组(n=16)。采用胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠溶液复制急性胰腺炎模型,模型组及假手术组均采用灌胃方式给予生理盐水;对照组皮下注射奥曲肽;高、中、低3个剂量试验组分别灌胃不同剂量大黄牡丹汤水煎液,1次·d-1,连续6 d。常规麻醉后脱颈椎处死,心脏取血,开腹剖取胰腺组织。在光学显微镜下对胰腺的病理学改变进行观察,采用IHC和Western blot法检测胰腺组织HMGB1、RAGE、p-NF-κBp65、p-IκBα蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测胰腺组织HMGB1、RAGE基因表达水平,ELISA检测胰腺组织中IL-1β、TNF-α、IL-6含量。结果发现:1)与假手术组相比,模型组大鼠一般生存状况较差,镜下可见胰腺组织明显肿胀以及扩张充血,胰腺组织中HMGB1、RAGE基因和蛋白相对表达量,下游蛋白NF-κBp65、IκBα磷酸化水平,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高(P<0.05);2)与模型组相比,治疗组大鼠一般生存状况不同程度改善,镜下间质性水肿以及坏死灶明显改善,HMGB1、RAGE基因和蛋白相对表达量,下游蛋白NF-κBp65、IκBα磷酸化水平,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著下降(P<0.05),其中,尤以大黄牡丹汤高剂量组最为明显(P<0.05)。本研究表明,大黄牡丹汤能够显著缓解大鼠急性胰腺炎疾病进展,其机制与其能够抑制HMGB1/RAGE/NF-κB通路激活,进而阻断炎性级联反应有关。

HMGB1/RAGE蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨HMGB1/RAGE蛋白在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌预后判定的作用。方法以食管鳞癌旁正常组织40例为对照,免疫组化检测80例食管鳞癌组织HMGB1、RAGE蛋白的表达,分析HMGB1、RAGE表达与临床病理因素的关系及其对食管鳞癌预后的影响。结果HMGB1、RAGE蛋白在食管鳞癌组织和正常鳞状上皮的阳性表达率分别为47.5%vs17.5%和72.5%vs42.5%,差异均具有统计学意义;HMGB1、RAGE蛋白的阳性表达与食管鳞癌浸润深度、淋巴结转移及TNM分期正相关(P<0.05),与癌细胞分化程度负相关(r分别为-0.51、-0.242,P<0.05);HMGB1和RAGE之间的表达呈正相关(r=0.35,P=0.001);HMGB1、RAGE蛋白阳性表达食管鳞癌患者预后较差,COX分析显示HMGB1蛋白为影响食管鳞癌预后的独立因素(HR=4.853,P=0.000)。结论HMGB1和RAGE蛋白的表达与食管鳞癌的临床病理学特征密切相关,HMGB1与其受体RAGE的结合可能参与了食管鳞癌的侵袭和转移,HMGB1可作为预测食管鳞癌预后的重要指标。

早期宫颈癌(Ⅰa1~Ⅱa2)术后TLR4、HMGB1和RAGE水平对24个月肿瘤复发的预测价值

目的评估早期宫颈癌术后血清、肿瘤组织tou样受体4(TLR4)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和晚期糖基化终末产物特异性受体(RAGE)水平对24个月肿瘤复发的定性、定量预测价值。方法根据术后随访期复发情况,将175例早期宫颈癌患者分成复发组(n=37)与非复发组(n=134,删除失联4例),比较组间术后血清组织TLR4、HMGB1和RAGE水平差异,并运用ROC曲线分析评估样本术后血清中上述3种功能性蛋白水平对24个月追踪时限复发情况的量化预测诊断效能。结合复发时间分布因素,以肿瘤组织3种功能性蛋白表达水平为评估指标,运用Kaplan-Meier生存分析,单因素逐一对样本24个月复发情况的时间分布进行拟合。运用Cox风险比例回归模型分析评估肿瘤组织3种功能性蛋白表达水平等9项协变量指标对早期宫颈癌术后复发的影响。结果复发组术后血清TLR4、HMGB1和RAGE水平高于非复发组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析结果显示术后血清TLR4、HMGB1和RAGE水平对早期宫颈癌术后24个月复发情况具有一定的量化诊断价值,AUC分别为0.813、0.802和0.865,预测诊断临界值分别为0.73 ng/ml、193.25 pg/ml和26.36 pg/ml。Kaplan-Meier生存分析结果显示,肿瘤组织TLR4、HMGB1和RAGE高表达患者术后复发时限更短(P<0.05);Cox风险比例回归模型分析结果显示,TLR4、术后FIGO病理分期、切缘状态、淋巴转移以及间质浸润情况,对早期宫颈癌术后复发具有一定的影响。结论TLR4、HMGB1和RAGE作为重要的炎性通路反应调控蛋白水平,其存在于早期宫颈癌患者术后血清或肿瘤组织中,均对术后复发具有一定的定性与定量诊断意义,可结合敏感性指标,相关影响因素,采取措施重点检测与干预。