缺氧-复氧诱导HK2细胞HMGB1/TLR-4信号通路活化调控TNF-α、IL-1β表达的意义

目的:观察缺氧-复氧诱导后HK2细胞的凋亡率、高迁移率蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)水平的改变,探讨缺氧-复氧模拟肾缺血-再灌注诱导HGMB1/TLR-4信号通路活化在调控晚期炎症反应和细胞凋亡的意义。方法:用抗霉素A处理HK2细胞(0.1μmol/L)耗竭ATP的方法建立缺氧-复氧HK2细胞模型以模拟缺血-再灌注损伤。将HK2细胞随机分成3组:normal组、I/R组和重组人HGMB1组(r HGMB1组),在复氧后12 h、24 h、48 h 3个时间点,用流式细胞术检测细胞的凋亡率,ELISA法检测细胞上清液HMGB1、TNF-α、IL-1β的水平,免疫激光共聚焦和western blot检测HK2细胞TLR-4蛋白的表达。结果:缺氧-复氧可诱导HK2细胞凋亡比率、细胞上清液重组人HMGB1、TNF-α、IL-1β水平及HK2细胞TLR-4蛋白12 h即明显增多,24 h达高峰,与normal组相同时间点相比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。经重组人HGMB1处理后,细胞的凋亡率、上清液HMGB1、TNF-α、IL-1β水平及HK2细胞TLR-4蛋白均明显降低,与I/R组相同时间点相比较差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:缺氧-复氧模拟肾缺血-再灌注可诱导HK2细胞HGMB1/TLR-4信号通路活化,参与调控TNF-α、IL-1β炎症介质的表达及HK2细胞的凋亡,通过晚期炎症和凋亡机制介导AKI的发生和发展。

冬凌草甲素调节HMGB1/TLR4信号通路对急性牙髓炎大鼠的改善作用

目的探讨冬凌草甲素调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路对急性牙髓炎大鼠的改善作用。方法将SD大鼠分为冬凌草甲素高剂量组(20 mg/kg)、冬凌草甲素低剂量组(10 mg/kg)、冬凌草甲素高剂量+rHMGB1组(20 mg/kg冬凌草甲素+8μg/kg rHMGB1)、模型组、对照组,每组10只。记录大鼠面部梳理时间以评估疼痛行为学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-8、IL-10、趋化因子(CX3CL1)、血红素加氧酶-1(HO-1)水平;检测牙髓组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠牙髓组织病理学改变;RT-qPCR检测HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA表达;Western blotting检测HMGB1、TLR4、核转录因子-κB(NF-κB)、p-NF-κB、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果与模型组相比,冬凌草甲素低、高剂量组大鼠面部梳理时间、血清IL-1β、TNF-α、IL-8、CX3CL1、HO-1水平、牙髓组织MDA含量、HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA表达、HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达降低,血清IL-10水平、牙髓组织SOD活性、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);重组蛋白rHMGB1可部分逆转冬凌草甲素对急性牙髓炎大鼠的改善作用(P<0.05)。结论冬凌草甲素可能通过抑制HMGB1/TLR4信号通路降低急性牙髓炎大鼠炎症反应、氧化应激,抑制组织细胞凋亡,减轻牙髓组织损伤,缓解牙髓炎。

LEASO患者血清miR-21、miR-126水平与HMGB1/TLR4信号通路活性和术后复发的关系

目的 探讨股腘型下肢动脉硬化闭塞症(LEASO)患者血清微小核糖核酸(miR)-21、miR-126水平与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路活性和术后复发的关系。方法 选取行介入手术的股腘型LEASO患者120例,根据术后是否复发将股腘型LEASO患者分为复发组和未复发组。RF-qPCR剂检测血清miR-21、miR-126表达和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达。采用Pearson相关性分析法分析股腘型LEASO患者血清miR-21、miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达的相关性。多因素Logistic回归分析股腘型LEASO患者介入术后复发的影响因素。结果 120例股腘型LEASO患者随访2年,术后复发率为34.17%。与未复发组比较,复发组血清miR-21和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达升高,血清miR-126表达降低(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,股腘型LEASO患者血清miR-21与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈正相关(r分别为0.660、0.649,P均<0.05),miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈负相关(r分别为-0.632、-0.641,P均<0.05),外周血单个核细胞HMGB1mRNA与TLR4 mRNA表达呈正相关(r=0.742,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,高血压、糖尿病和miR-21、HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA升高为股腘型LEASO患者介入术后复发的独立危险因素,miR-126升高为独立保护因素(P均<0.05)。结论 股腘型LEASO患者血清miR-21高表达和miR-126低表达与HMGB1/TLR4信号通路激活有关,是股腘型LEASO患者术后复发的独立影响因素。

吴茱萸碱调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响

目的:探讨吴茱萸碱调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响。方法:采用大脑中动脉栓塞法构建脑梗死大鼠模型,随机分为模型组、吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组、吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组,每组15只,另选取15只健康大鼠设为假手术组,以吴茱萸碱和质粒分组处理后,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经损伤;三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠脑梗死面积;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测大鼠海马神经元凋亡率;透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清及脑组织促炎因子环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-18(IL-18)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马神经元超微结构发生损伤,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65明显升高(P<0.05);与模型组比较,吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组大鼠海马神经元超微结构损伤均减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低(P<0.05);吴茱萸碱高剂量组大鼠海马神经元超微结构损伤较吴茱萸碱低剂量组进一步减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65进一步降低(P<0.05)。与吴茱萸碱高剂量组比较,吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组大鼠海马神经元超微结构损伤加重,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05)。结论:吴茱萸碱可通过阻止HMGB1/TLR4/NF-κB信号激活而降低促炎因子表达,从而抑制神经炎症,减轻脑梗死大鼠神经功能损伤。

南蛇藤素调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对急性肝功能衰竭大鼠炎性损伤的影响

目的 分析南蛇藤素调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对急性肝功能衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠炎性损伤的影响。方法 将大鼠分为正常组、模型组、南蛇藤素12.5 mg/kg组、南蛇藤素50 mg/kg组、促肝细胞生长素组(2 mg/kg)、南蛇藤素+甘草酸组(50 mg/kg+20 mg/kg),给药干预持续3 d,观察大鼠一般情况,全自动生化分析仪分析大鼠血清肝功能、炎症指标水平,HE染色观测大鼠肝组织病理,TUNEL染色观测大鼠肝细胞凋亡情况,Western blotting法观测大鼠肝组织HMGB1/TLR4/NF-κB通路蛋白表达情况。结果 与正常组相比,模型组大鼠死亡率、血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达升高(P<0.05);与模型组相比,南蛇藤素12.5 mg/kg组、南蛇藤素50 mg/kg组、促肝细胞生长素组死亡率、血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达降低(P<0.05);与南蛇藤素50 mg/kg组相比,南蛇藤素+甘草酸组大鼠血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达降低(P<0.05)。结论 南蛇藤素可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路降低ALF大鼠肝脏炎症与肝细胞凋亡,保护肝组织。

基于HMGB1/TLR4/NF-κB通路研究鱼油延缓气道重塑治疗哮喘的作用机制

目的:探讨鱼油通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路延缓气道重塑,治疗哮喘的潜在作用机制及其疗效,为哮喘的新型治疗策略提供理论依据和实验支持。方法:采用Ovalbumin(OVA)诱导的哮喘小鼠模型,随机分为对照组、模型组、鱼油组、鱼油+E5564组,每组10只,共40只;4组小鼠,通过肺功能测试仪对比气道阻力,酶联免疫吸附试验判断运用TLR4抑制剂前后的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10炎症因子水平,苏木精—伊红染色观察肺组织病理变化,逆转录定量聚合酶链反应对比Bax、caspase-3、Bcl2的mRNA表达水平,免疫印迹分析观察Bax、caspase-3、Active-caspase3、HMGB1、TLR4、NF-κB、p-NF-κB p65的蛋白表达量,免疫组化法观察HMGB1、TLR4、NF-κB的蛋白表达水平。结果:气道阻力测试表明,鱼油组小鼠的气道阻力显著降低,肺组织病理损伤减轻,炎症细胞浸润明显减少;HE染色结果表明降低,鱼油组小鼠的气道损伤更小,炎症细胞浸润和上皮细胞排列紊乱更少;ELISA结果显示,鱼油组小鼠的血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达降低,并提高了IL-10的表达,而鱼油+E5564组的血清炎症因子水平与模型组相近;RT-qPCR结果表明,鱼油组小鼠的Bax、caspase-3的mRNA表达量较低,Bcl2的mRNA表达量较高;WB结果表明,鱼油组小鼠的Bax、caspase-3、Active-caspase3、HMGB1、TLR4、NF-κB、p-NF-κB p65蛋白表达量更低,而鱼油+E5564组小鼠HMGB1、TLR4、NF-κB及p-NF-κB p65蛋白表达量与模型组小鼠相近;IHC结果表明,鱼油组小鼠HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达量更低,与WB结果趋同。结论:鱼油通过影响HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,显著减轻哮喘小鼠模型的气道炎症和重塑,提高肺功能,显示出作为哮喘潜在治疗剂的可能性;该研究为鱼油在哮喘治疗领域的应用提供了实验依据,但需要进一步的临床研究来验证其疗效和安全性。

鸢尾黄素对哮喘幼鼠气道炎症、气道重塑及HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响

目的 探究鸢尾黄素对哮喘幼鼠气道炎症、气道重塑及高迁移率族蛋白B1 (high mobility group box1 protein,HMGB1)/Toll样受体4 (Toll-like receptor4,TLR4)/核因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB)通路的影响。方法 将60只雄性BALB/c幼鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组,以及鸢尾黄素低、中、高剂量组,每组10只。采用腹腔注射致敏剂[卵清蛋白(ovalbumin,OVA) 20μg+氢氧化铝凝胶2 mg]+4%OVA雾化吸入激发建立幼鼠哮喘模型。肺功能检测仪检测幼鼠肺容积(lung volume,LV)、每分钟静息通气量(resting ventilation per minute,VE)及气道反应性(Penh值);苏木精-伊红染色观察并分析气道重塑情况;ELISA法检测肺泡灌洗液中白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor alpha,TNF-α)含量;实时定量逆转录聚合酶链反应及Western blot法检测肺组织中HMGB1/TLR4/NF-κB通路相关mRNA及蛋白表达。结果 与模型组比较,地塞米松组及鸢尾黄素低、中、高剂量组LV、VE均显著升高(P<0.05),其中鸢尾黄素各剂量组随剂量增加LV、VE升高(P<0.05);地塞米松组及鸢尾黄素低、中、高剂量组Penh值、IL-1β、IL-6、TNF-α、气道重塑指标,以及HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA和HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达水平均降低(P<0.05),其中鸢尾黄素各剂量组随剂量增加上述指标降低(P<0.05)。与地塞米松组比较,鸢尾黄素低、中剂量组LV、VE均降低(P<0.05),Penh值、IL-1β、IL-6、TNF-α、气道重塑指标,以及HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA和HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达水平均升高(P<0.05);鸢尾黄素高剂量组上述指标与地塞米松组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 鸢尾黄素能有效减轻哮喘幼鼠气道炎症,抑制气道重塑,可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路有关。

积雪草酸通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路减轻脂多糖诱导肉鸡肾细胞焦亡

旨在研究积雪草酸(asiatic acid, AA)通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路减轻脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导肉鸡肾细胞焦亡的作用机制。将40只1日龄健康黄羽肉鸡适应性饲养至7日龄,随机分成4组:空白对照组(CON)、LPS诱导模型组(LPS)、AA低剂量组(LPS+AA 15 mg·kg^(-1))和AA高剂量组(LPS+AA 30 mg·kg^(-1))。AA处理组的肉鸡用对应剂量的AA预处理14 d。除空白对照组外,其余肉鸡在16、18和20日龄时腹腔注射0.5 mg·kg^(-1)的LPS构建急性肾损伤模型,在20日龄,腹腔注射LPS 12 h后处死肉鸡,并采集肾组织样品。采用苏木精-伊红染色(HE)观察肾组织病理变化;RT-qPCR法检测肾组织中HMGB1、TLR4、NF-κB、IκB、NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平;Western blot法检测肾组织中HMGB1、TLR4、P-NF-κB、NLRP3、GSDMD、IL-1β和Cleaved caspase-1/Caspase-1的蛋白表达水平;免疫组化技术检测P-IκB蛋白在肾组织中的表达水平;免疫荧光技术检测HMGB1、NLRP3和ASC蛋白在肾组织中的表达水平。结果显示,LPS会引发肾小管上皮细胞产生空泡变性以及肾小球发育不良,而经AA处理可以改善由LPS诱导引起的病理损伤。同时,LPS使肉鸡肾组织中HMGB1/TLR4/NF-κB通路和焦亡相关基因蛋白表达升高(P<0.05),AA可以显著下调由LPS诱导所导致的肾组织中HMGB1、TLR4、NF-κB、IκB、NLRP3、Caspase-1、TNF-α和IL-18的mRNA水平升高(P<0.05);TLR4、P-NF-κB、NLRP3、IL-1β和Cleaved caspase-1/Caspase-1的蛋白水平显著下降(P<0.05);免疫组化和免疫荧光结果表明,AA可以显著降低LPS所诱导的肾组织中P-IκB、HMGB1、NLRP3和ASC蛋白的表达与分布。综上所述,AA能够通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路减轻LPS诱导肉鸡肾细胞焦亡。

基于TGF-β1/Smads信号通路探讨2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮抗肝纤维化的作用机制

目的探讨2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2,5-diene-1,4-dione,DMDD)对CCl_(4)致大鼠肝纤维化的影响及潜在作用机制。方法采用50%CCl_(4)复制肝纤维化模型,检测血液中门冬氨酸转移酶(aspartate transferase,AST)、丙氨酸转移酶(alanine transferase,ALT)、白蛋白/球蛋白(albumin/globulin,A/G)、总蛋白(total protein,TP)、总胆红素(total bilirubin,T-BIL)、大鼠透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,ColⅢ)和Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,ColⅣ)。HE和Masson染色观察肝脏组织病变和纤维形成情况。免疫组织化学法检测肝脏组织中α平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColI)、转化生长因子β1(transformed growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2、Smad7蛋白表达水平。RT-PCR法检测肝脏组织中α-SMA、ColI、TGF-β1、Smad7mRNA水平。Western blot法检测肝脏组织中TGF-β1、Smad4、Smad7蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组血清AST、ALT、TP、T-BIL、HA、LN、ColⅢ、ColⅣ水平明显升高,A/G水平明显降低,肝脏HE和Masson染色显示有大量纤维形成,说明造模成功。与模型组相比,DMDD给药组大鼠AST、ALT、TP、T-BIL、HA、LN、ColⅢ、ColⅣ含量和α-SMA、ColI、TGF-β1、Smad2、Smad4mRNA及蛋白水平显著下调,A/G、Smad7水平上调。肝脏HE和Masson染色结果显示纤维增生明显减少。结论DMDD对CCl_(4)诱导的肝纤维化具有保护作用,其机制可能与TGF-β1/Smads信号通路有关。

基于TLR-4/NF-κB信号通路及水通道蛋白1表达探讨大陷胸汤干预重症急性胰腺炎早期肺损伤的效应机制

目的:探讨大陷胸汤对重症急性胰腺炎(SAP)早期肺损伤的影响及作用机制。方法:将60只大鼠随机分为实验组、模型组和对照组,每组20只。实验组予大陷胸汤灌胃,对照组及模型组予蒸馏水灌胃,在连续灌胃7 d后,模型组与实验组以胰胆管注射牛磺胆酸钠的方式制备SAP模型,于造模后12、24、48、72 h各时间点分别处死5只大鼠取材,观察大鼠一般情况、胸腹水量、肺湿干重比、胰腺组织及肺组织病理学改变、肺组织白细胞介素(IL)-1及Toll样受体4(TLR-4)水平、肺组织核因子(NF)-κB及水通道蛋白1(AQP1)表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠一般情况较差,胰腺炎症反应以及肺损伤程度较重,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平升高(P<0.05),肺组织AQP1表达水平下降。与模型组相比,实验组大鼠一般情况较好,肺损伤程度较轻,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平下降(P<0.05),肺组织AQP1表达水平升高,造模后72 h后,胰腺组织坏死程度与同期模型组相比明显好转。结论:大陷胸汤可在一定程度上减轻SAP大鼠早期肺损伤,其机制可能与抑制TLR-4/NF-κB炎症信号通路,增强AQP1表达有关。

甘草酸对慢性肾脏病大鼠心肌HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α信号通路的影响

目的 探讨应用甘草酸(Gly)治疗时对慢性肾脏病(CKD)大鼠心室肌高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子κB/缺氧诱导因子1α(HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α)信号通路的影响。方法 将38只Wistar大鼠按随机数字表法分为4组:假手术(Sham)组、Sham+Gly组、CKD组、CKD+Gly组,5/6肾切除制备CKD模型,Gly腹腔注射给药(80 mg/kg)。4周后行血流动力学及心脏彩超观察各组大鼠心脏功能;心室取血检测生化指标;心肌组织取材检测HMGB1、TLR4、NF-κB、HIF-1α蛋白表达的变化。结果 与Sham组相比,CKD组肌酐、尿酸、尿素氮和血清镁水平增高(P<0.05),血压升高,舒张期室间隔厚度、收缩期左心室内径增加,左心室射血分数降低,E/A比值降低,肺动脉血流加速时间延长(P<0.05);HE染色可见心肌细胞肥大,Masson染色见心肌纤维化程度增加(P<0.05),心肌组织HMGB1、NF-κB、HIF-1α蛋白表达水平上调(P<0.05)。与CKD组相比,CKD+Gly组收缩期室间隔厚度增加,左心室射血分数升高,E/A比值升高(P<0.05),HE染色心肌细胞肥大情况有所好转,心肌纤维化程度降低(P<0.05),心肌组织HMGB1、NF-κB、HIF-1α蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论 CKD会影响大鼠心功能,加重大鼠心肌纤维化,Gly可减轻CKD大鼠心肌纤维化程度,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α信号通路下传有关。

血清kallistatin、Netrin-4与早发型子痫前期患者外周血HMGB1-RAGE信号通路的关系及对妊娠结局的影响

目的探讨血清人激肽释放酶抑制剂(kallistatin)、轴突导向因子4(Netrin-4)水平与早发型子痫前期(EOPE)患者外周血高迁移率族蛋白1(HMGB1)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路的关系及对妊娠结局的影响。方法选取2019年9月至2021年8月该院产科收治的EOPE患者(EOPE组,182例)及健康孕妇(对照组,91例)。比较两组血清kallistatin、Netrin-4、HMGB1、RAGE、核因子-κB p65(NF-κB p65)水平并进行相关性分析。根据EOPE患者的妊娠结局分为不良组(52例)和良好组(130例),并对不良妊娠结局的危险因素进行Logistic回归分析法。结果EOPE组患者血清kallistatin、Netrin-4水平低于对照组,HMGB1、RAGE、NF-κB p65水平高于对照组(P<0.05);血清HMGB1、RAGE、NF-κB p65水平与kallistatin、Netrin-4水平呈负相关(P<0.05)。EOPE组不良妊娠结局发生率为28.57%,单因素及多因素Logistic回归分析法结果显示,孕前高体质量指数(BMI)、24 h尿蛋白定量高水平、血肌酐高水平、D-二聚体高水平、血清kallistatin低水平、Netrin-4低水平均是EOPE患者发生不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.05)。结论EOPE患者血清kallistatin、Netrin-4与HMGB1-RAGE信号通路蛋白表达呈负相关,孕前高BMI、24 h尿蛋白定量高水平、血肌酐高水平、D-二聚体高水平、血清kallistatin低水平、Netrin-4低水平是导致EOPE患者发生不良妊娠结局的独立危险因素。

甲基莲心碱调节SDF-1/CXCR4信号通路对糖尿病肾病的影响

目的·探讨甲基莲心碱(neferine,Nef)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织的作用及其相关机制。方法·采用高脂饲料喂食联合腹腔注射链脲佐菌素的方法构建DN模型大鼠,并将造模成功的大鼠随机分为DN组、Nef(低、中、高)剂量组、Nef高剂量+通路拮抗剂(AMD3100)组,每组10只。同时,选10只普通大鼠作为正常组。检测6组大鼠的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、24 h尿蛋白、血清糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平及肾指数。分别采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,H-E)染色、马松(Masson)染色观察6组大鼠的肾组织的病理变化。采用硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法检测肾组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,分别采用水溶性四氮唑(water soluble tetrazolium,WST-1)法、钼酸铵法检测肾组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性。分别采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测肾组织中基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)、CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)的mRNA以及蛋白表达。采用高糖(30 mmol/L葡萄糖)诱导大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以建立DN细胞模型。将该细胞分为对照组、高糖(HG)组、HG+Nef(低、中、高)剂量组(即HG+Nef-L、M、H组)、HG+Nef-H+AMD3100组。分别采用WST-1法、钼酸铵法检测模型细胞中SOD、CAT活性,采用TBA法检测MDA含量,分别采用qPCR、Western blotting检测SDF-1、CXCR4的mRNA及蛋白表达,采用CCK-8法、流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。结果·与DN组比较,Nef(低、中、高)剂量组和Nef高剂量+AMD3100组大鼠的FBG、24 h尿蛋白、HbA1c、Scr、BUN水平以及肾指数、MDA水平均较低,SDF-1、CXCR4的mRNA和蛋白表达以及SOD、CAT活性均较高(均P<0.05),肾组织病理损伤、纤维化程度有所减轻,且均呈剂量依赖性;AMD3100能减弱高剂量Nef对DN大鼠的肾保护作用。与HG组比较,HG+Nef-L、M、H组NRK-52E细胞的活力,SOD、CAT活性,SDF-1、CXCR4的mRNA和蛋白表达均较高,MDA含量及凋亡率均较低(均P<0.05);AMD3100可逆转Nef-H对NRK-52E细胞损伤的保护作用。结论·Nef可能通过激活SDF-1/CXCR4信号通路来控制DN大鼠的血糖水平并提高其抗氧化能力,从而发挥肾保护作用。

lncRNA FER1L4调控Wnt/β-catenin信号通路对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨lncRNA FER1L4调控Wnt/β-catenin信号通路对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:检测人甲状腺滤泡上皮正常细胞和甲状腺癌细胞中FER1L4的表达水平。将SW579细胞分为control组、si-NC组、si-FER1L4组、LiCl+si-FER1L4组;检测各转染组细胞FER1L4的表达水平,细胞增殖,细胞凋亡率,细胞迁移和侵袭;检测细胞Cleaved caspase3、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达水平。结果:SW579细胞中FER1L4表达水平最显著;干扰FER1L4后,其细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率和Cleaved caspase3表达显著升高(P<0.05);与si-FER1L4组相比,LiCl+si-FER1L4组细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达显著升高,细胞凋亡率和Cleaved caspase3表达显著降低(P<0.05)。结论:干扰FER1L4的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来抑制甲状腺癌恶性发展。

吴茱萸碱抑制HMGB1/TLR-4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎大鼠的改善作用

目的 探讨吴茱萸碱(Evo)对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜增生和炎性反应的改善作用机制。方法 建立胶原诱导的RA模型大鼠,分为模型组、吴茱萸碱低、中、高剂量组(Evo-L、M、H组)、阳性对照组(美洛昔康组),另设健康大鼠为对照组。评估6组大鼠足跖肿胀度及关节炎指数;HE染色检测滑膜组织病理学变化;TUNEL染色观察滑膜细胞凋亡;微量法检测滑膜组织氧化应激指标(MDA、SOD、GSH Px)水平;ELISA法检测血清炎性因子水平;Western blot法检测滑膜组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR-4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路蛋白表达。结果 与模型组比较,Evo-L、M、H组和美洛昔康组大鼠滑膜组织病理学变化不同程度好转,足跖肿胀度及关节炎指数、MDA、IL-6、CRP、TNF-α水平、HMGB1、TLR-4蛋白水平及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著下降(P<0.05),滑膜细胞凋亡率、SOD、GSH Px水平显著上升(P<0.05)。结论 吴茱萸碱可能通过抑制HMGB1/TLR-4/NF-κB信号通路,改善RA大鼠的滑膜增生和炎性反应。

淫羊藿苷调节SDF-1/CXCR4信号通路对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的探讨淫羊藿苷调节基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC型趋化因子受体4(CXCR4)信号轴对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法将从PCOS模型组大鼠卵巢组织中成功分离的颗粒细胞分为PCOS组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷中剂量组、淫羊藿苷高剂量组、重组大鼠SDF-1蛋白(Rr-SDF-1)组、淫羊藿苷高剂量+Rr-SDF-1组,另取从正常对照组大鼠卵巢组织中成功分离的颗粒细胞作为对照组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测卵巢颗粒细胞上清液中卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平;CCK-8法、EdU染色检测颗粒细胞增殖;流式细胞术检测颗粒细胞凋亡;Western blot检测颗粒细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果与对照组比较,PCOS组FSH水平、光密度(OD)_(450)值、EdU阳性细胞率降低,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平升高(P<0.05)。与PCOS组比较,淫羊藿苷低、中、高剂量组FSH水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率均依次升高,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平均依次降低;Rr-SDF-1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05)。与淫羊藿苷高剂量组比较,淫羊藿苷高剂量+Rr-SDF-1组FSH水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率降低,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论淫羊藿苷可能通过抑制SDF-1/CXCR4信号通路抑制PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡。

基于生物信息学方法和动物实验方法获取多房棘球蚴病组蛋白H3K4ME1的生物学功能和信号通路信息

目的基于生物信息学方法和动物实验方法获取多房棘球蚴病组蛋白H3K4ME1的生物学功能和信号通路信息。方法1.提取冻存组织细胞核。2.构建cut&tag文库。3.分析生物信息:1)评估多房棘球蚴病组蛋白H3K4ME1的测序数据;2)确定reads在基因组上的分布;3)分析单个样本富集区间信息;4)分析peak转录因子;5)分析与Peak关联基因的GO功能富集、KEGG通路富集情况;6)分析差异关联基因基本情况;7)分析差异关联基因的GO功能富集情况;8)分析差异关联基因的KEGG通路富集情况。结果1.提取冻存组织细胞核:在显微镜下观察到细胞核计数>100000,表示细胞核提取成功。2.测序文库构建后,用qubit软件检查测序文库,结果显示合格。3.生物信息分析结果:1)实验组与参考基因库之间的数据相似程度>98%(测序数据良好),可进行下一步检测;2)多房棘球蚴病组和健康小鼠组的reads在TSS明显起峰;3)通过单个样本的富集,筛选出显著性Peak;4)与peak关联的转录因子主要集中在zf-C2H2、Homeobox和BHLH等;5)与Peak关联基因的GO功能主要富集在细胞蛋白大分子定位、细胞发育调节、解剖结构形态调控等生物学过程,与peak关联基因的KEGG通路主要富集在MAPK、cGMP-PKG、Hippo等信号通路;6)多房棘球蚴病组与健康小鼠组的组蛋白H3K4ME1存在5547个差异关联基因,其中上调基因2556个、下调基因2929个;7)组蛋白H3K4ME1差异关联基因GO功能富集分析的生物过程主要有细胞投射组织的正向调节、GTPase的活性调节等,细胞组分主要有细胞投影膜、突触等,分子功能主要有肌动蛋白结合、细胞黏附分子结合等;8)组蛋白H3K4ME1差异关联基因KEGG通路富集分析主要分布在MAPK、Wnt、Rap1等信号通路上。结论获得了多房棘球蚴病组蛋白H3K4ME1的生物学功能和信号通路信息。

双路通脑方调节SIRT1/Nrf2/GPx4信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡的影响

目的探讨双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡的作用以及对沉默信息调节因子2同源物1(SIRT1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)信号通路的调节机制。方法采用随机数字表法选取20只大鼠作为假手术组,剩余70只大鼠均利用大脑中动脉闭塞法制备缺血性脑卒中大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、双路通脑方组、双路通脑方+SIRT1抑制剂组(双路通脑方+EX527组),每组20只。14 d后,对大鼠进行神经功能损伤评分;TTC染色检测大鼠脑梗死面积;HE染色检测大鼠脑组织病理变化;尼氏染色检测大鼠脑组织神经元数量;试剂盒检测大鼠脑组织中铁离子(Fe^(2+))、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平;免疫组化检测大鼠脑组织中酰基-辅酶a合成酶长链家族成员4(ACSL4)、转铁蛋白受体(TFR)、铁蛋白重链多肽1(FTH1)蛋白的阳性表达;Western blotting法检测大鼠脑组织中SIRT1、Nrf2、GPx4及胱氨酸/谷氨酸转运蛋白(SLC7A11)蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠的神经功能缺损评分、脑梗死面积、Fe^(2+)和MDA含量、ACSL4、TFR蛋白表达升高(P<0.05),神经元数量、SOD和GSH含量、FTH1、SIRT1、Nrf2、GPx4及SLC7A11蛋白表达均降低(P<0.05);与模型对照组比较,双路通脑方组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、Fe^(2+)和MDA含量、ACSL4、TFR蛋白表达降低(P<0.05),神经元数量、SOD和GSH含量、FTH1、SIRT1、Nrf2、GPx4及SLC7A11蛋白表达均升高(P<0.05);采用SIRT1抑制剂进行回补实验,结果显示SIRT1抑制剂逆转了双路通脑方对神经元铁死亡的抑制作用,同时也抑制了Nrf2和GPx4的表达(P<0.05)。结论双路通脑方可能通过激活SIRT1/Nrf2/GPx4信号通路来抑制缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡。

钙结合蛋白S100A4通过TLR4/NF-κB信号通路调控胶质瘤细胞增殖、存活及迁移功能

目的:探索外源性钙结合蛋白S100A4对胶质瘤细胞增殖、存活及迁移功能的影响及机制。方法:利用UCSC数据库下载泛癌数据集,进行S100A4在泛癌中的表达及预后分析;从CGGA数据库中下载胶质瘤患者的转录组数据和临床数据,利用R软件进行分析S100A4表达在胶质瘤患者中的预后与进展;利用在线分析工具GEPIA与STRING进行胶质瘤患者的S100A4蛋白质网络互作分析。体外培养人胶质瘤细胞系(U87与U251),实验分为3组:PBS组、S100A4组、S100A4+TAK242组[瑞沙托维(TAK242)为Toll-样受体4(TLR4)特异性抑制剂]。流式细胞术检测胶质瘤细胞的增殖与凋亡;细胞划痕实验、Transwell实验及克隆形成实验检测U87与U251细胞的迁移及增殖能力;Western blot检测TLR4蛋白、NF-κB相关信号分子蛋白水平。结果:生物信息学结果显示,S100A4在多种肿瘤中显著上调(P<0.05),包括:胶质母细胞瘤(GBM)、低级胶质瘤(LGG)、胃癌(STAD)、肝细胞肝癌(LIHC)等,其中在GBM和LGG中预后较差。与低表达S1004的胶质瘤患者相比,高表达S100A4的胶质瘤患者生存期更短,WHO分级程度更高。此外,胶质瘤患者S100A4蛋白可能与膜联蛋白A2(ANXA2)、TLR4和晚期糖基化终末产物特异性受体(AGER)蛋白存在相互作用。细胞实验中,与PBS组相比,外源性S100A4处理后,胶质瘤U87和U251细胞增殖、迁移能力增强,TLR4、p-ERK1/2、p-p38、p-p65蛋白水平显著上调(P<0.05)。与S100A4组相比,S100A4+TAK242组胶质瘤细胞增殖、迁移能力减弱,TLR4、p-ERK1/2、p-p38、p-p65蛋白水平显著下调(P<0.05)。结论:S100A4可能通过TLR-4/NF-κB信号通路调控胶质瘤细胞增殖、迁移及存活功能。

EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路的影响

目的:基于HMGB1/Beclin-1信号通路探究EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体的作用机制。方法:40只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常(A)组、模型(B)组、二甲双胍(C)组、EPO(D)组,每组10只,对B、C、D组采用高脂饲料及链脲佐菌素进行糖尿病肾病建模。建模成功后,对C组灌胃100 mg/kg二甲双胍,对D组腹腔内注射100 U/kg EPO,A组、B组同期灌胃等体积生理盐水;另取20只大鼠建模,建模成功后,随机分为E组、F组,E组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂,F组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂和腹腔内注射100 U/kg EPO;取HK-2细胞,分为高糖+HK-2细胞(HH)组、EPO+高糖+HK-2细胞(EH)组、甘草酸苷L+高糖+HK-2细胞(LH)组,葡萄糖培养后进行细胞实验。血糖仪检测大鼠血糖,全自动生化分析仪检测大鼠生化指标,PAS染色法检测大鼠肾组织病理形态,免疫印迹法检测HMGB1/Beclin-1蛋白表达,RT-PCR及免疫组化法检测NK细胞活化性受体表达。结果:与A组比较,B组血糖及血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),体质量明显降低(P<0.05);与B组比较,C组、D组血糖及24 h尿量、血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05),体质量明显升高(P<0.05),肾脏病理学明显改善,且D组较C组变化显著(P<0.05);与A组比较,B组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达显著升高(P<0.05),与B组相比,C、D、E、F组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),且D组HMGB1/Beclin-1蛋白表达与C组相比降低明显(P<0.05),E组与D组无明显差异,F组较E组降低明显;HMGB1/Beclin-1蛋白表达与NKp30、NKp44、NKp46mRNA均呈正相关(P<0.05);与HH组相比,EH、LH组细胞增殖率显著升高(P<0.05),凋亡率及HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),而LH组与EH组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EPO可有效降低糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体表达,抑制HMGB1/Beclin-1信号通路,提示EPO可能通过调控NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路发挥作用,而NK细胞活化性受体表达与HMGB1/Beclin-1信号通路呈正相关。