平喘方调控HMGB1/TLR4通路对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的观察平喘方调控高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4(HMGB1/TLR4)通路对哮喘小鼠气道炎症的影响,探索其缓解哮喘气道炎症的潜在机制。方法将32只BALB/c小鼠随机分为4组:空白组、模型组、地米组、平喘方组,每组8只,采用卵清白蛋白(OVA)联合氢氧化铝腹腔注射和5%OVA雾化吸入激发的方法建立哮喘模型,平喘方组按20 mL/(kg·d)灌胃平喘方汤剂,地米组以等量的地塞米松溶液灌胃,空白组和模型组以等量的蒸馏水灌胃,每日1次,给药干预7 d。各组于最后一次给药后处死小鼠,收集血清、肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。HE染色观察肺组织病理学改变;免疫组化染色及定量观察HMGB1、TLR4表达;ELISA法检测BALF及血清中HMGB1、TLR4、IL-4及IFN-γ表达;RT-PCR检测肺组织中HMGB1、TLR4 mRNA表达。结果(1)与空白组比较,模型组小鼠气道炎性细胞浸润明显,气道壁增厚,管腔狭窄;BALF及血清中HMGB1、TLR4、IL-4含量明显升高(P<0.01),IFN-γ含量明显降低(P<0.01)。(2)与模型组比较,地米组、平喘方组小鼠气道炎症减轻、管腔狭窄减小;BALF及血清中HMGB1、TLR4、IL-4含量明显降低(P<0.05,P<0.01),IFN-γ水平升高(P<0.01)。(3)与地米组比较,平喘方组小鼠气道炎症变化不明显;HMGB1表达增强(P<0.01);BALF中TLR4、IL-4、IFN-γ含量均明显升高(P<0.05,P<0.01),HMGB1含量减少(P<0.01);血清中HMGB1、TLR4含量明显降低(P<0.01),IL-4、IFN-γ含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论平喘方可降低哮喘小鼠HMGB1、TLR4、IL-4含量,升高IFN-γ含量,改善哮喘小鼠肺组织炎症,其作用机制可能与平喘方抑制HMGB1/TLR4通路的表达相关。

HMGB1/TLR4通路在白蛋白结合型紫杉醇致神经病理性疼痛大鼠脊髓的表达

目的探究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)通路相关蛋白及下游炎性因子在白蛋白结合型紫杉醇所致的神经病理性疼痛大鼠脊髓组织中的表达及其在神经病理性疼痛中的作用。方法36只雄性SD大鼠随机分为紫杉醇组和对照组,每组18只,紫杉醇组实验第1,3,5,7天腹腔注射白蛋白结合型紫杉醇(2.47 mg/kg)建立神经病理性疼痛模型,对照组腹腔注射等剂量生理盐水。实验第8天处死大鼠取L_(4-6)脊髓。以机械刺激缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL)作为痛阈观察指标;HE染色观察大鼠L_(4-6)脊髓的病理学改变,免疫组化染色检测脊髓组织中HMGB1、TLR4、星形胶质细胞活化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及小胶质细胞活化标志物离子钙接头蛋白抗体(Iba-1)的表达变化,Western blot检测大鼠L_(4-6)脊髓TLR4通路相关蛋白MyD88、TRIF、IRF3的表达变化,ELISA检测TNF-α、IL-1β和IL-6水平。结果与对照组相比,紫杉醇组大鼠MWT、TWL均降低(P<0.05),提示神经病理性疼痛模型构建成功。HE染色结果显示,对照组大鼠L_(4-6)脊髓组织中,神经元结构完整,核膜结构清晰,核仁明显;而紫杉醇组神经细胞层次排列絮乱,神经元固缩、扭曲,细胞体变形。与对照组相比,紫杉醇组大鼠L_(4-6)脊髓组织中HMGB1、TLR4、GFAP、Iba-1、MyD88、TRIF、IRF3、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平均升高(P<0.05)。结论白蛋白结合型紫杉醇诱导的神经病理性疼痛大鼠脊髓中HMGB1/TLR4通路相关蛋白及下游炎性因子的表达增加,星形胶质细胞及小胶质细胞活化增强,该变化可能参与了白蛋白结合型紫杉醇所致神经病理性疼痛的发病机制。

HMGB1/TLR4通路参与Fibulin-5对肺癌细胞增殖和转移的抑制作用

背景与目的:Fibulin-5在肺癌组织中低表达,具有抑癌作用。高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)在肺癌中高表达,能够促进肿瘤的侵袭转移。该研究旨在探讨Fibulin-5抑制肺癌细胞增殖和转移的分子机制。方法:该研究首先检测了肺上皮细胞和肺癌细胞中Fibulin-5和HMGB1的表达,然后利用转染试剂将Fibulin-5过表达质粒和HMGB1的si RNA转染人A549细胞。实现Fibulin-5过表达和HMGB1低表达后,采用MTT实验检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力。本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测A549细胞中HMGB1 m RNA表达变化,采用酶联免疫吸附剂测定实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELisa)检测HMGB1蛋白的分泌;采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测HMGB1、cyclin D1、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)和TLR4/NF-κB通路相关蛋白的表达变化。结果:在肺癌细胞A549中,Fibulin-5低表达,HMGB1高表达。过表达Fibulin-5和低表达HMGB1后,HMGB1、cyclin D1、MMP2、MMP7和MMP9的表达均明显降低,A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显减弱(P<0.05);此外,过表达Fibulin-5下调了TLR4、MyD88、p-p65的表达,上调了IκBα的表达(P<0.05)。结论:Fibulin-5可能是通过抑制HMGB1的表达以及其下游的TLR4/NF-κB通路,抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移的过程。

基于HMGB1/TLR4/NF-κB通路研究鱼油延缓气道重塑治疗哮喘的作用机制

目的:探讨鱼油通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路延缓气道重塑,治疗哮喘的潜在作用机制及其疗效,为哮喘的新型治疗策略提供理论依据和实验支持。方法:采用Ovalbumin(OVA)诱导的哮喘小鼠模型,随机分为对照组、模型组、鱼油组、鱼油+E5564组,每组10只,共40只;4组小鼠,通过肺功能测试仪对比气道阻力,酶联免疫吸附试验判断运用TLR4抑制剂前后的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10炎症因子水平,苏木精—伊红染色观察肺组织病理变化,逆转录定量聚合酶链反应对比Bax、caspase-3、Bcl2的mRNA表达水平,免疫印迹分析观察Bax、caspase-3、Active-caspase3、HMGB1、TLR4、NF-κB、p-NF-κB p65的蛋白表达量,免疫组化法观察HMGB1、TLR4、NF-κB的蛋白表达水平。结果:气道阻力测试表明,鱼油组小鼠的气道阻力显著降低,肺组织病理损伤减轻,炎症细胞浸润明显减少;HE染色结果表明降低,鱼油组小鼠的气道损伤更小,炎症细胞浸润和上皮细胞排列紊乱更少;ELISA结果显示,鱼油组小鼠的血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达降低,并提高了IL-10的表达,而鱼油+E5564组的血清炎症因子水平与模型组相近;RT-qPCR结果表明,鱼油组小鼠的Bax、caspase-3的mRNA表达量较低,Bcl2的mRNA表达量较高;WB结果表明,鱼油组小鼠的Bax、caspase-3、Active-caspase3、HMGB1、TLR4、NF-κB、p-NF-κB p65蛋白表达量更低,而鱼油+E5564组小鼠HMGB1、TLR4、NF-κB及p-NF-κB p65蛋白表达量与模型组小鼠相近;IHC结果表明,鱼油组小鼠HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达量更低,与WB结果趋同。结论:鱼油通过影响HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,显著减轻哮喘小鼠模型的气道炎症和重塑,提高肺功能,显示出作为哮喘潜在治疗剂的可能性;该研究为鱼油在哮喘治疗领域的应用提供了实验依据,但需要进一步的临床研究来验证其疗效和安全性。

大黄素调节HMGB1/TLR4信号通路对脂多糖诱导的人牙髓成纤维细胞焦亡的影响

目的:探讨大黄素调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的人牙髓成纤维细胞(HDPFs)焦亡的影响。方法:分离培养HDPFs,筛选大黄素最佳浓度,随机将HDPFs分成control组(正常培养)、LPS组、大黄素低、中、高剂量组、pcDNA组(转染pcDNA3.1)和pcDNA-HMGB1组(转染pcDNA3.1-HMGB1),qRT-PCR检测细胞中HMGB1 mRNA表达水平,MTT法、平板克隆实验、流式细胞仪分别检测细胞增殖和焦亡;ELISA检测细胞上清中IL-18、IL-1β、TNF-α水平;Western blot检测细胞中焦亡蛋白Nod样受体蛋白3(NLRP3)、剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-1(cleaved Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)及HMGB1、TLR4蛋白表达。结果:与control组比较,LPS组细胞HMGB1 mRNA水平、焦亡率、IL-18、IL-1β、TNF-α水平、NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD、HMGB1、TLR4蛋白水平显著升高,A 490值、集落形成数显著降低(P<0.05);与LPS组比较,大黄素低、中、高剂量组细胞中以上各项指标水平显著降低,A 490值、集落形成数显著升高,其中大黄素高剂量组变化更显著(P<0.05);过表达HMGB1减弱了大黄素对LPS诱导的HDPFs细胞焦亡和炎症的抑制作用,及对细胞增殖的促进作用(P<0.05)。结论:大黄素通过抑制HMGB1/TLR4通路,抑制NLRP3炎症体活化,从而减轻LPS诱导的HDPFs细胞焦亡。

冬凌草甲素调节HMGB1/TLR4信号通路对急性牙髓炎大鼠的改善作用

目的探讨冬凌草甲素调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路对急性牙髓炎大鼠的改善作用。方法将SD大鼠分为冬凌草甲素高剂量组(20 mg/kg)、冬凌草甲素低剂量组(10 mg/kg)、冬凌草甲素高剂量+rHMGB1组(20 mg/kg冬凌草甲素+8μg/kg rHMGB1)、模型组、对照组,每组10只。记录大鼠面部梳理时间以评估疼痛行为学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-8、IL-10、趋化因子(CX3CL1)、血红素加氧酶-1(HO-1)水平;检测牙髓组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠牙髓组织病理学改变;RT-qPCR检测HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA表达;Western blotting检测HMGB1、TLR4、核转录因子-κB(NF-κB)、p-NF-κB、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果与模型组相比,冬凌草甲素低、高剂量组大鼠面部梳理时间、血清IL-1β、TNF-α、IL-8、CX3CL1、HO-1水平、牙髓组织MDA含量、HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA表达、HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达降低,血清IL-10水平、牙髓组织SOD活性、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);重组蛋白rHMGB1可部分逆转冬凌草甲素对急性牙髓炎大鼠的改善作用(P<0.05)。结论冬凌草甲素可能通过抑制HMGB1/TLR4信号通路降低急性牙髓炎大鼠炎症反应、氧化应激,抑制组织细胞凋亡,减轻牙髓组织损伤,缓解牙髓炎。

鸢尾黄素对哮喘幼鼠气道炎症、气道重塑及HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响

目的 探究鸢尾黄素对哮喘幼鼠气道炎症、气道重塑及高迁移率族蛋白B1 (high mobility group box1 protein,HMGB1)/Toll样受体4 (Toll-like receptor4,TLR4)/核因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB)通路的影响。方法 将60只雄性BALB/c幼鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组,以及鸢尾黄素低、中、高剂量组,每组10只。采用腹腔注射致敏剂[卵清蛋白(ovalbumin,OVA) 20μg+氢氧化铝凝胶2 mg]+4%OVA雾化吸入激发建立幼鼠哮喘模型。肺功能检测仪检测幼鼠肺容积(lung volume,LV)、每分钟静息通气量(resting ventilation per minute,VE)及气道反应性(Penh值);苏木精-伊红染色观察并分析气道重塑情况;ELISA法检测肺泡灌洗液中白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor alpha,TNF-α)含量;实时定量逆转录聚合酶链反应及Western blot法检测肺组织中HMGB1/TLR4/NF-κB通路相关mRNA及蛋白表达。结果 与模型组比较,地塞米松组及鸢尾黄素低、中、高剂量组LV、VE均显著升高(P<0.05),其中鸢尾黄素各剂量组随剂量增加LV、VE升高(P<0.05);地塞米松组及鸢尾黄素低、中、高剂量组Penh值、IL-1β、IL-6、TNF-α、气道重塑指标,以及HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA和HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达水平均降低(P<0.05),其中鸢尾黄素各剂量组随剂量增加上述指标降低(P<0.05)。与地塞米松组比较,鸢尾黄素低、中剂量组LV、VE均降低(P<0.05),Penh值、IL-1β、IL-6、TNF-α、气道重塑指标,以及HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA和HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达水平均升高(P<0.05);鸢尾黄素高剂量组上述指标与地塞米松组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 鸢尾黄素能有效减轻哮喘幼鼠气道炎症,抑制气道重塑,可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路有关。

积雪草酸通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路减轻脂多糖诱导肉鸡肾细胞焦亡

旨在研究积雪草酸(asiatic acid, AA)通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路减轻脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导肉鸡肾细胞焦亡的作用机制。将40只1日龄健康黄羽肉鸡适应性饲养至7日龄,随机分成4组:空白对照组(CON)、LPS诱导模型组(LPS)、AA低剂量组(LPS+AA 15 mg·kg^(-1))和AA高剂量组(LPS+AA 30 mg·kg^(-1))。AA处理组的肉鸡用对应剂量的AA预处理14 d。除空白对照组外,其余肉鸡在16、18和20日龄时腹腔注射0.5 mg·kg^(-1)的LPS构建急性肾损伤模型,在20日龄,腹腔注射LPS 12 h后处死肉鸡,并采集肾组织样品。采用苏木精-伊红染色(HE)观察肾组织病理变化;RT-qPCR法检测肾组织中HMGB1、TLR4、NF-κB、IκB、NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平;Western blot法检测肾组织中HMGB1、TLR4、P-NF-κB、NLRP3、GSDMD、IL-1β和Cleaved caspase-1/Caspase-1的蛋白表达水平;免疫组化技术检测P-IκB蛋白在肾组织中的表达水平;免疫荧光技术检测HMGB1、NLRP3和ASC蛋白在肾组织中的表达水平。结果显示,LPS会引发肾小管上皮细胞产生空泡变性以及肾小球发育不良,而经AA处理可以改善由LPS诱导引起的病理损伤。同时,LPS使肉鸡肾组织中HMGB1/TLR4/NF-κB通路和焦亡相关基因蛋白表达升高(P<0.05),AA可以显著下调由LPS诱导所导致的肾组织中HMGB1、TLR4、NF-κB、IκB、NLRP3、Caspase-1、TNF-α和IL-18的mRNA水平升高(P<0.05);TLR4、P-NF-κB、NLRP3、IL-1β和Cleaved caspase-1/Caspase-1的蛋白水平显著下降(P<0.05);免疫组化和免疫荧光结果表明,AA可以显著降低LPS所诱导的肾组织中P-IκB、HMGB1、NLRP3和ASC蛋白的表达与分布。综上所述,AA能够通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路减轻LPS诱导肉鸡肾细胞焦亡。

HMGB1-TLR4介导的NF-κB信号通路在腺苷预处理保护脑缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路在脑缺血再灌注损伤中的作用及腺苷预处理对此信号通路的影响。方法:从新乡医学院动物中心选取体质量220~270 g的成年雄性SD大鼠80只,随机分为F组(假手术组)、I/R组(缺血再灌注组)、AP组(腺苷预处理组)。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。采用动物行为学评分法对造模成功的大鼠进行神经功能量化分析,HE染色观察各组大鼠的脑细胞形态结构,TTC染色观察脑梗死并计算梗死部位的体积;IHC染色检测大鼠脑组织的HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达。应用SPSS26.0软件对实验所得数据进行单因素方差分析。结果:I/R组、AP组缺血再灌注后不同时间段大鼠神经功能均呈现不同程度的损伤,且其评分均明显高于F组,差异有统计学意义(P<0.05),且AP组神经功能损伤较I/R组明显减轻,差异有统计学意义(P<0.05);TTC染色显示AP组、I/R组大鼠的脑梗死体积明显大于F组[(93.670±4.509) mm^(3)、(123.670±7.234) mm^(3) vs (0.000±0.000) mm^(3)],且AP组大鼠脑梗死体积较I/R组明显缩小,差异均有统计学意义(P<0.05)。F组大鼠的HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白均有少量表达,但AP组、I/R组较F组表达显著,且AP组各亚组大鼠的HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达量明显低于I/R组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:腺苷预处理可以通过减少HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白的表达,进而对脑缺血再灌注损伤的大鼠起保护作用。

瑞马唑仑调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对LPS诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响

目的:探究瑞马唑仑(REM)调节高迁移率族蛋白(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响。方法:体外培养人肺泡上皮细胞HPAEpiC,将其分为7组,对照(Control)组(正常培养)、LPS组(10 mg/L LPS)、LPS+pcDNA3.1组(10 mg/L LPS+转染pcDNA3.1质粒)、LPS+pcDNA3.1-HMGB1组(10 mg/L LPS+转染pcDNA3.1-HMGB1质粒)、LPS+REM组(10 mg/L LPS+150μg/mL REM)、LPS+REM+pcDNA3.1组(10 mg/L LPS+150μg/mL REM+转染pcDNA3.1质粒)、LPS+REM+pcDNA3.1-HMGB1组(10 mg/L LPS+150μg/mL REM+转染pcDNA3.1-HMGB1质粒),扫描电镜下观察各组HPAEpiC细胞形态变化;CCK-8法检测各组HPAEpiC细胞存活率;检测各组HPAEpiC细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量及白细胞介素(IL)-1β、IL-18炎性因子水平;Western blotting检测各组HPAEpiC细胞核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、cleaved N-terminal gasdermin D-N(GSDMD-N)焦亡相关蛋白及TLR4、NF-κB蛋白表达水平;qRT-PCR检测各组HPAEpiC细胞HMGB1 mRNA表达水平。结果:与Control组比较,LPS组HPAEpiC细胞可见明显焦亡特征,细胞肿胀甚至破裂,在质膜上产生较大的气泡,细胞存活率减少,LDH释放量,NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达,IL-1β、IL-18水平,HMGB1 mRNA及TLR4、核NF-κB蛋白表达增加;与LPS组比较,LPS+pcDNA3.1-HMGB1组上述现象加重,LPS+REM组上述现象好转;与LPS+REM组比较,LPS+REM+pcDNA3.1-HMGB1组HPAEpiC细胞上述现象加重(P<0.05~P<0.01)。结论:REM能够减轻LPS诱导的炎症反应,抑制HPAEpiC细胞焦亡,可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。

南蛇藤素调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对急性肝功能衰竭大鼠炎性损伤的影响

目的 分析南蛇藤素调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对急性肝功能衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠炎性损伤的影响。方法 将大鼠分为正常组、模型组、南蛇藤素12.5 mg/kg组、南蛇藤素50 mg/kg组、促肝细胞生长素组(2 mg/kg)、南蛇藤素+甘草酸组(50 mg/kg+20 mg/kg),给药干预持续3 d,观察大鼠一般情况,全自动生化分析仪分析大鼠血清肝功能、炎症指标水平,HE染色观测大鼠肝组织病理,TUNEL染色观测大鼠肝细胞凋亡情况,Western blotting法观测大鼠肝组织HMGB1/TLR4/NF-κB通路蛋白表达情况。结果 与正常组相比,模型组大鼠死亡率、血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达升高(P<0.05);与模型组相比,南蛇藤素12.5 mg/kg组、南蛇藤素50 mg/kg组、促肝细胞生长素组死亡率、血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达降低(P<0.05);与南蛇藤素50 mg/kg组相比,南蛇藤素+甘草酸组大鼠血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达降低(P<0.05)。结论 南蛇藤素可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路降低ALF大鼠肝脏炎症与肝细胞凋亡,保护肝组织。

HMGB1通过TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路介导内皮细胞焦亡在系统性血管炎中的作用机制

目的探究高迁移率族蛋白1(High Mobility Group Box Protein1, HMGB1)通过(Toll-like Receptor4,TLR4)/核因子κB(Nuclear Factor Kappa-B, NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like Receptor Thermal Protein Domain Associated Protein 3, NLRP3)信号通路介导内皮细胞焦亡在系统性血管炎中的作用机制。方法 研究于2021年10月—2023年9月在齐齐哈尔医学院附属第三医院开展。取人脐静脉血管内皮细胞进行培养,随机分为对照组和实验组,实验组加入人重组HMGB1,对比对照组与实验组、实验组NLRP3及TLR4表达抑制前后,内皮细胞焦亡相关蛋白的表达水平。结果 系统性血管炎组与健康对照组比较,人脐静脉血管内皮细胞中HMGB1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-18(interleukin-18, IL-18)水平升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。细胞实验中实验组与对照组比较,caspase-1、IL-1β、IL-18水平升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。过表达HMGB1并抑制NLRP3可使NLRP3(2.71±0.59 vs 1.24±0.58)、caspase-1(0.69±0.12 vs 0.40±0.03)、IL-1β[(1.75±0.31)pg/mL vs (1.16±0.12)pg/mL]、IL-18[(0.15±0.04)pg/mL vs (0.09±0.01)pg/mL]水平降低,差异有统计学意义(P均<0.05);过表达HMGB1并抑制TLR4可使TLR4(4.93±1.04 vs 1.96±0.84)、NF-κB(5.62±1.39 vs 2.15±1.04)、NLRP3(2.71±0.59 vs 1.24±0.58)、caspase-1(0.69±0.12 vs 0.40±0.03)、IL-1β[(1.75±0.31)pg/mL vs (1.16±0.12)pg/mL]、IL-18[(0.15±0.04)pg/mL vs (0.09±0.01)pg/mL]水平明显降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 HMGB1通过调节TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路介导内皮细胞焦亡,进而改善系统性血管炎。

HMGB1-TLR4-IL-23-IL-17A轴在寻常型银屑病患者血清中的表达水平及临床意义

目的:探讨HMGB1-TLR4-IL-23-IL-17A轴在寻常型银屑病患者血清中的表达水平及临床意义。方法:采用ELISA检测60例中重度寻常型银屑病患者和30例健康志愿者血清中HMGB1、TLR4、IL-23、IL-17A的表达水平,比较各细胞因子表达差异及其与疾病严重程度评分(PASI)的相关性。检测并比较IL-17A抑制剂诱导期治疗后皮损改善率达PASI75及以上的22例中重度寻常型银屑病患者血清HMGB1-TLR4-IL-23-IL-17A轴表达水平的变化。结果:寻常型银屑病患者血清HMGB1、TLR4、IL-23、IL-17A表达水平显著高于健康对照组,重度患者表达水平高于中度患者,并与PASI评分呈正相关。IL-17A抑制剂诱导期后,银屑病患者血清中HMGB1-TLR4-IL-23-IL-17A轴表达水平显著降低。结论:寻常型银屑病患者血清中HMGB1-TLR4-IL-23-IL-17A轴高表达,且与疾病严重程度相关,该信号轴参与了寻常型银屑病的疾病过程,为银屑病免疫治疗提供了新的思路。

甘草酸对慢性肾脏病大鼠心肌HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α信号通路的影响

目的 探讨应用甘草酸(Gly)治疗时对慢性肾脏病(CKD)大鼠心室肌高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子κB/缺氧诱导因子1α(HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α)信号通路的影响。方法 将38只Wistar大鼠按随机数字表法分为4组:假手术(Sham)组、Sham+Gly组、CKD组、CKD+Gly组,5/6肾切除制备CKD模型,Gly腹腔注射给药(80 mg/kg)。4周后行血流动力学及心脏彩超观察各组大鼠心脏功能;心室取血检测生化指标;心肌组织取材检测HMGB1、TLR4、NF-κB、HIF-1α蛋白表达的变化。结果 与Sham组相比,CKD组肌酐、尿酸、尿素氮和血清镁水平增高(P<0.05),血压升高,舒张期室间隔厚度、收缩期左心室内径增加,左心室射血分数降低,E/A比值降低,肺动脉血流加速时间延长(P<0.05);HE染色可见心肌细胞肥大,Masson染色见心肌纤维化程度增加(P<0.05),心肌组织HMGB1、NF-κB、HIF-1α蛋白表达水平上调(P<0.05)。与CKD组相比,CKD+Gly组收缩期室间隔厚度增加,左心室射血分数升高,E/A比值升高(P<0.05),HE染色心肌细胞肥大情况有所好转,心肌纤维化程度降低(P<0.05),心肌组织HMGB1、NF-κB、HIF-1α蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论 CKD会影响大鼠心功能,加重大鼠心肌纤维化,Gly可减轻CKD大鼠心肌纤维化程度,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α信号通路下传有关。

利多卡因调节HMGB1/TLR4信号通路对慢性心力衰竭大鼠的心脏保护作用

目的探讨利多卡因调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路对慢性心力衰竭大鼠的心脏保护作用。方法将大鼠分为正常组、模型组、利多卡因低剂量组、利多卡因高剂量组和EP(HMGB1抑制剂)组,采用异丙肾上腺素皮下注射制备慢性心力衰竭大鼠模型。超声检测各组大鼠心功能;ELISA试剂盒测定血清心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;HE染色和Masson染色观察大鼠心脏组织病理学变化;RT-qPCR检测HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA表达;Western blot检测HMGB1、TLR4、NF-κB、p-NF-κB、Bcl-2、Bax相关蛋白表达。结果正常组大鼠HE染色结果显示心肌细胞形态结构正常,Masson染色结果显示心肌组织致密有序排列,组织间没有胶原蛋白沉积。与正常组相比,模型组大鼠心肌细胞褶缩,形态结构排列不规则,有较多炎性细胞浸润,组织间有大量胶原蛋白沉积,心肌纤维化程度较重,大鼠左室舒张末期内径(LVEDD)和左室收缩末期内径(LVESD)水平、心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、IL-1β和TNF-α水平、HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA水平、HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达水平显著升高,左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS)水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,利多卡因低、高剂量组和EP组大鼠心肌细胞损伤显著改善,心肌组织中胶原蛋白显著减少,心肌纤维化程度显著减轻,大鼠LVEDD、LVESD、ANP、BNP、IL-1β和TNF-α水平、HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA水平、HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达水平显著降低,LVEF和LVFS水平、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与利多卡因高剂量组相比,EP组大鼠各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论利多卡因可抑制HMGB1/TLR4信号通路,降低慢性心力衰竭大鼠的炎症损伤,改善其心功能。

不同病情严重程度癫痫患者血清IL-2、IL-6、TNF-α、HMGB1及TLR4水平的比较

目的比较不同病情严重程度癫痫患者血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)及Toll样受体4(TLR4)的水平。方法选择70例癫痫患者为癫痫组,按照不同发作情况、不同脑电图异常程度分为不同组;另选择70例健康志愿者为对照组。比较各组IL-2、IL-6、TNF-α、HMGB1及TLR4的水平。结果癫痫组IL-6、TNF-α、HMGB1及TLR4水平高于对照组(P<0.05)。重度异常、中度异常、轻度异常癫痫患者比较IL-6、TNF-α、HMGB1及TLR4水平均依次降低(P<0.05)。全身性发作癫痫患者与部分性发作患者比较IL-2、IL-6、TNF-α、HMGB1及TLR4水平均差异无显著性(P>0.05)。结论癫痫患者血清IL-6、TNF-α、HMGB1及TLR4水平明显上调,且与脑电图异常程度有关系,可为癫痫诊断和预后评估提供一定的临床参考价值。

HMGB1小干扰RNA对鼻黏膜上皮细胞HMGB1/TLR4信号通路的影响

目的研究采用小干扰RNA(si-RNA)沉默高迁移率族蛋白1(HMGB1)对人鼻黏膜上皮细胞(HNECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号通路的影响。方法体外培养人鼻黏膜上皮细胞,分为空白对照组、si-HMGB1组、脂多糖(LPS)组和LPS+si-HMGB1组。RT-PCR检测HNECs中HMGB1 mRNA的表达。Western blot检测4组细胞HMGB1、TLR4表达以及通路下游核因子-κB(NF-κB)和白介素1β(IL-1β)的表达水平。观察siRNA干扰HMGB1蛋白表达后鼻黏膜上皮细胞的相应变化。结果RT-PCR结果显示,LPS组细胞中HMGB1的转录水平显著高于空白对照组(P<0.05)。LPS+si-HMGB1组HMGB1的mRNA转录水平显著低于LPS组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,LPS+si-HMGB1组的TLR4,HMGB1蛋白表达水平明显低于LPS组,结果具有统计学意义(P<0.05)。LPS+si-HMGB1组细胞的NF-κB以及IL-1β水平明显低于LPS组(P<0.05)。结论鼻黏膜上皮细胞表达HMGB1蛋白,通过siRNA沉默手段可以下调HMGB1的表达。LPS可以激活炎症性的HMGB1,TLR4,通路下游信号NF-κB及IL-1β。siRNA可以下调HMGB1蛋白表达水平,进而抑制TLR4-NF-κB以及IL-1β信号传导通路。

柴朴汤对哮喘小鼠支气管上皮细胞炎症因子及HMGB1/TLR4/NF-κB的影响

目的探讨柴朴汤对哮喘小鼠支气管上皮细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)及下游炎症介质单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)的影响。方法将小鼠支气管上皮细胞分为对照组(Con组,空白血清培养)、Model组(哮喘小鼠血清培养)和Chaipu组(柴朴汤药血清培养)。采用qRT-PCR和Western blotting检测小鼠支气管上皮细胞中HMGB1、TLR4、NF-κB、MCP-1、IL-6的mRNA及蛋白表达情况,ELISA法测定细胞培养液中MCP-1和IL-6的水平。结果与Con组相比,Model组小鼠支气管上皮细胞HMGB1、TLR4、NF-κB、MCP-1、IL-6表达均明显升高(P<0.05);Model组细胞培养液中MCP-1、IL-6也显著升高(P<0.05)。与Model组相比,Chaipu组小鼠支气管上皮细胞HMGB1、TLR4、MCP-1、IL-6 mRNA和蛋白表达降低,NF-κB m RNA表达亦降低(P<0.05);Chaipu组细胞培养液中MCP-1、IL-6也显著降低(P<0.05)。结论柴朴汤可下调哮喘血清诱导的炎症因子的表达,可能与其抑制HMGB1/TLR4/NF-κB炎症通路有关。

白芍总苷胶囊联合来氟米特对类风湿关节炎Th1/Th2细胞平衡和外周血单核细胞TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨白芍总苷胶囊联合来氟米特对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者辅助性T细胞(helper T cell,Th)1/Th2细胞平衡和外周血单核细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的影响。方法按照信封抽签法将锦州医科大学附属第一医院2021年4月至2023年12月期间接收的129例RA患者分为对照组(n=64,来氟米特片治疗)和观察组(n=65,白芍总苷胶囊联合来氟米特片治疗)。对比两组疗效、临床症状、病情评分、疾病相关指标、Th1/Th2细胞平衡和TLR4/NF-κB信号通路相关指标,同时观察两组不良反应发生情况。结果观察组的临床总有效率高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,观察组治疗2个月后晨僵时间缩短,关节肿胀数和关节压痛数减少,疼痛视觉模拟量表(visual analog scale of pain,VAS)评分和RA患者病情评价(disease activity score 28,DAS28)评分下降,C反应蛋白、红细胞沉降率、类风湿因子下降,Th2细胞升高,Th1细胞、Th1/Th2下降,TLR4信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)、NF-κB mRNA下降(P<0.05)。两组不良反应发生率对比无差异(P>0.05)。结论白芍总苷胶囊联合来氟米特治疗RA患者,可促进患者症状改善,提高临床治疗效果,可能与调节Th1/Th2细胞平衡和抑制外周血单核细胞TLR4/NF-κB信号通路激活有关。

EGCG调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对特应性皮炎大鼠Th1/Th2平衡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对特应性皮炎(AD)大鼠的保护作用及潜在机制。方法 将SPF级SD大鼠分为对照(Control)组、AD模型(AD)组、AD+EGCG治疗(EGCG)组、AD+地塞米松阳性对照(DXM)组、AD+EGCG+TLR4激动剂(TLR4)组,每组18只。根据临床损伤严重程度计算皮肤损伤评分;ELISA检测炎症因子的表达;HE染色观察组织学变化;流式细胞仪分析Th1和Th2阳性细胞比例;Western blot检测TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白水平。结果 与Control组比较,AD组大鼠背部皮肤损伤程度较重,病理学损伤评分增加(P<0.05),白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)水平及Th1细胞百分比降低,白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)水平及Th2细胞百分比升高(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平升高(均P<0.05)。与AD组比较,EGCG组和DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分降低,Th_1细胞百分比、IL-2、IFN-γ水平升高,IL-4、IL-13水平、Th_(2)阳性百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平下降(均P<0.05)。与EGCG组比较,DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分、Th_1、Th_(2)细胞百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平差异无统计学意义(均P>0.05),TLR4组大鼠皮损评分及皮肤损伤病理学评分升高,皮损组织中Th_1细胞百分比降低,Th_(2)阳性百分比及TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平上调(均P<0.05)。结论 EGCG可以通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,维持Th1/Th2平衡来抑制炎症反应,进而降低AD的严重程度。