表儿茶素抑制HMGB1信号通路修复心肌细胞缺氧/复氧损伤

【目的】观察表儿茶素对心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的影响,并探讨其机制。【方法】构建大鼠心肌细胞H9C2 H/R损伤模型,观察细胞形态学变化。将H9C2细胞分为4组,即对照组(正常细胞)、模型组(H/R损伤)、表儿茶素组(H/R损伤,且于造模前30 min,加入20μmol/L表儿茶素溶液)和高迁移率族蛋白1(HMGB1)抑制剂组(H/R损伤,且于造模前30 min,加入100μg/mL抑制剂Glycyrrhizin),应用细胞计数试剂盒8(CCK8)法测定细胞12、24、48、72 h的增殖能力,AnnexinVFITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡,实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞HMGB1、Toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)p65 m RNA的表达,蛋白免疫印迹法检测细胞HMGB1、TLR4和NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白的表达。【结果】构建H/R损伤模型后,H9C2细胞呈现出凋亡特征。与对照组相比,模型组细胞增殖能力降低,凋亡率升高,HMGB1、TLR4 m RNA和蛋白表达水平,NF-κB p65 m RNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明显升高(P<0.05)。而经表儿茶素或HMGB1抑制剂处理后,H/R模型细胞的增殖能力增强,凋亡率降低,且HMGB1、TLR4 mRNA和蛋白表达水平,NF-κB p65 mRNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均降低(P<0.05)。【结论】表儿茶素对H/R损伤心肌细胞的修复作用与HMGB1抑制剂相似,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。

冬凌草甲素调节HMGB1/TLR4信号通路对急性牙髓炎大鼠的改善作用

目的探讨冬凌草甲素调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路对急性牙髓炎大鼠的改善作用。方法将SD大鼠分为冬凌草甲素高剂量组(20 mg/kg)、冬凌草甲素低剂量组(10 mg/kg)、冬凌草甲素高剂量+rHMGB1组(20 mg/kg冬凌草甲素+8μg/kg rHMGB1)、模型组、对照组,每组10只。记录大鼠面部梳理时间以评估疼痛行为学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-8、IL-10、趋化因子(CX3CL1)、血红素加氧酶-1(HO-1)水平;检测牙髓组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠牙髓组织病理学改变;RT-qPCR检测HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA表达;Western blotting检测HMGB1、TLR4、核转录因子-κB(NF-κB)、p-NF-κB、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果与模型组相比,冬凌草甲素低、高剂量组大鼠面部梳理时间、血清IL-1β、TNF-α、IL-8、CX3CL1、HO-1水平、牙髓组织MDA含量、HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA表达、HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达降低,血清IL-10水平、牙髓组织SOD活性、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);重组蛋白rHMGB1可部分逆转冬凌草甲素对急性牙髓炎大鼠的改善作用(P<0.05)。结论冬凌草甲素可能通过抑制HMGB1/TLR4信号通路降低急性牙髓炎大鼠炎症反应、氧化应激,抑制组织细胞凋亡,减轻牙髓组织损伤,缓解牙髓炎。

连翘苷抑制HMGB1/RAGE信号通路减轻大鼠糖尿病周围神经病变坐骨神经损伤

目的 基于高迁移率族蛋白Box-1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路探讨连翘苷(PHI)对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠坐骨神经损伤的影响。方法 利用高脂高糖饮食并注射链脲佐菌素(STZ)建立DPN大鼠模型,随机分为模型组、连翘苷低剂量(PHI-L)(50 mg/kg)组、连翘苷中剂量(PHI-M)(100 mg/kg)组、连翘苷高剂量(PHI-H)(200 mg/kg)组、阳性药物(甲钴胺,250μg/kg)组;另取正常饲料喂养大鼠为对照组。每组10只。采用BL-420S生物机能实验系统测定坐骨神经传导速度;血糖仪检测空腹血糖(FBG)水平;ELISA试剂盒检测血清HbAlc、IL-6、TNF-α水平;电镜观察坐骨神经超微结构形态;试剂盒检测坐骨神经中ROS、SOD、MDA、MBP水平;RT-qPCR、Western blot法检测坐骨神经中HMGB1、RAGE mRNA和蛋白水平。结果 与模型组比较,PHI-M组、PHI-H组、阳性药物组大鼠病理损伤明显减轻,坐骨神经传导速度、MBP、SOD水平显著恢复,FBG、HbAlc、IL-6、TNF-α、ROS、MDA、HMGB1、RAGE的mRNA及蛋白水平显著下降(P均<0.05)。结论 PHI可降低炎症反应,减轻大鼠DPN,发挥治疗作用,其机制可能与抑制HMGB1/RAGE信号通路有关。

黄芪多糖调节HMGB1-RAGE信号通路对自身免疫性心肌炎大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨黄芪多糖(AP)调节高迁移率族蛋白Box-1-晚期糖基化终产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠心肌损伤的影响。方法:取50只SPF级SD大鼠,适应性喂养1周,随机分为对照组、EAM组、AP组(30 g/kg)、rHMGB1组(8μg/kgr)、AP+rHMGB1组[Ap(30 g/kg)+rHMGB1(8μg/kg)],除对照组(弗氏完全佐剂)外,其余各组通过左、右后足垫皮下注射抗原佐剂乳化液方法建立EAM大鼠模型并按照上述剂量进行干预;3周后,超声仪检测心率(HR)、左心室射血分数(LVEF)和舒张末期内径(LVEDs);酶联免疫吸附(ELISA)检测各组大鼠血清中炎症因子水平;马松(Masson′s)及苏木精-伊红(HE)染色检测心肌组织纤维化及病理学变化;免疫印迹(Western blotting)及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达。结果:与对照组比较,EAM组心肌结构紊乱及纤维化严重,病理评分、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、白细胞介素-6(IL-6)水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著增加,LVEF显著下降(P<0.05);与EAM组比较,AP组病理损伤及纤维化得到改善,病理评分、TNF-α水平、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著降低,LVEF显著增加(P<0.05),但rHMGB1组病理损伤及纤维化进一步加重,病理评分、TNF-α水平、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著增加,LVEF显著下降(P<0.05);与AP组比较,AP+rHMGB1组病理损伤及纤维化稍加重,病理评分、TNF-α水平、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著增加,LVEF显著下降(P<0.05);与rHMGB1组比较,AP+rHMGB1组病理损伤及纤维化得到改善,病理评分、TNF-α、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著降低,LVEF显著增加(P<0.05)。结论:AP可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路改善EAM大鼠心肌损伤。

甲基莲心碱调节HMGB1-RAGE信号通路对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用

目的探讨甲基莲心碱对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及HMGB1-RAGE信号通路在其中发挥的作用。方法将SD大鼠分为假手术组、模型组、甲基莲心碱低剂量组、甲基莲心碱高剂量组和甲基莲心碱高剂量+rHMGB1(重组蛋白HMGB1)组,每组10只。脊背神经结扎建立神经病理性疼痛大鼠模型。机械性刺激和热敏实验检测大鼠疼痛;酶联免疫吸附法(ELISA)检测前列腺素E2(PGE2)、P物质(SP)、5-羟色胺(5-HT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-10水平;六胺银染色观察大鼠脊髓背角形态学变化;TUNEL染色观察脊髓背角神经元凋亡;Western blot检测脊髓背角组织HMGB1、RAGE、NF-κB、p-NF-κB、Bcl-2、Bax蛋白水平。结果与对照组比较,模型组大鼠神经原纤维结构严重损伤,大鼠缩爪阈值和热敏潜伏期、IL-10水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,PGE2、SP、5-HT、TNF-α、IL-1β水平、脊髓背角神经元凋亡率、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,甲基莲心碱低、高剂量组大鼠神经原纤维结构损伤显著减轻,大鼠缩爪阈值和热敏潜伏期、IL-10水平、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,PGE2、SP、5-HT、TNF-α、IL-1β水平、脊髓背角神经元凋亡率、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。重组蛋白rHMGB1可部分逆转甲基莲心碱对神经病理性疼痛大鼠的治疗作用(P<0.05)。结论甲基莲心碱通过抑制HMGB1-RAGE信号通路可减轻神经病理性疼痛大鼠炎症因子和疼痛因子表达、降低脊髓背角神经元凋亡,进而减轻疼痛。

EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路的影响

目的:基于HMGB1/Beclin-1信号通路探究EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体的作用机制。方法:40只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常(A)组、模型(B)组、二甲双胍(C)组、EPO(D)组,每组10只,对B、C、D组采用高脂饲料及链脲佐菌素进行糖尿病肾病建模。建模成功后,对C组灌胃100 mg/kg二甲双胍,对D组腹腔内注射100 U/kg EPO,A组、B组同期灌胃等体积生理盐水;另取20只大鼠建模,建模成功后,随机分为E组、F组,E组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂,F组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂和腹腔内注射100 U/kg EPO;取HK-2细胞,分为高糖+HK-2细胞(HH)组、EPO+高糖+HK-2细胞(EH)组、甘草酸苷L+高糖+HK-2细胞(LH)组,葡萄糖培养后进行细胞实验。血糖仪检测大鼠血糖,全自动生化分析仪检测大鼠生化指标,PAS染色法检测大鼠肾组织病理形态,免疫印迹法检测HMGB1/Beclin-1蛋白表达,RT-PCR及免疫组化法检测NK细胞活化性受体表达。结果:与A组比较,B组血糖及血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),体质量明显降低(P<0.05);与B组比较,C组、D组血糖及24 h尿量、血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05),体质量明显升高(P<0.05),肾脏病理学明显改善,且D组较C组变化显著(P<0.05);与A组比较,B组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达显著升高(P<0.05),与B组相比,C、D、E、F组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),且D组HMGB1/Beclin-1蛋白表达与C组相比降低明显(P<0.05),E组与D组无明显差异,F组较E组降低明显;HMGB1/Beclin-1蛋白表达与NKp30、NKp44、NKp46mRNA均呈正相关(P<0.05);与HH组相比,EH、LH组细胞增殖率显著升高(P<0.05),凋亡率及HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),而LH组与EH组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EPO可有效降低糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体表达,抑制HMGB1/Beclin-1信号通路,提示EPO可能通过调控NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路发挥作用,而NK细胞活化性受体表达与HMGB1/Beclin-1信号通路呈正相关。

辣椒素调节SIRT1/HMGB1/NF-κB信号通路对LPS诱导的小胶质细胞炎症反应的影响

目的:探究辣椒素调节沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)/高迁移率族蛋白(HMGB1)/核因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞炎症反应的影响。方法:体外培养BV2小鼠小胶质细胞,分别用辣椒素(10μmol/L)、SIRT1抑制剂EX527(100μmol/L)、辣椒素+EX527(10μmol/L辣椒素+100μmol/L EX527)预处理3 h,然后用LPS(1μg/mL)处理24 h,对应分组为LPS组、LPS+辣椒素组、LPS+EX527组、LPS+辣椒素+EX527组,另设置正常培养的对照组(Control),显微镜下观察各组BV2细胞形态变化;CCK-8法检测各组BV2细胞活力;免疫荧光染色检测各组BV2细胞离子钙接头蛋白(Iba-1)阳性表达情况及M1(CD16/32染色阳性)/M2(CD206染色阳性)亚型极化情况;ELISA检测各组BV2细胞炎症因子水平;Western blot、免疫共沉淀检测各组SIRT1/HMGB1/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:与Control组比较,LPS组BV2细胞胞体萎缩,突起变短,细胞活力及IL-1β、TNF-α、IL-6水平升高,Iba-1阳性表达BV2细胞、M1型BV2细胞增加,SIRT1蛋白表达减少,乙酰化(ace)-HMGB1蛋白、胞浆HMGB1蛋白、核NF-κB蛋白表达增加(P<0.05);经辣椒素预处理,上述情况均改善,同时M2型BV2细胞增加;在辣椒素预处理的基础上增加EX527预处理,上述情况均加重。结论:辣椒素能够抑制LPS诱导的BV2细胞活化引发的炎症反应,其可能通过调节SIRT1/HMGB1/NF-κB信号通路实现。

槲皮素通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路减轻糖尿病引起的大鼠肾脏损伤

目的探究槲皮素对链脲佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠的肾脏炎症反应和细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法采取腹腔一次性注射STZ建立糖尿病SD大鼠模型,并设置正常对照组(NC组,n=6)、高糖高脂组(HC组,n=6)、糖尿病模型组(DM组,n=6)、槲皮素组(DMQ组,n=6),DMQ组每日给予100 mg/kg的槲皮素灌胃处理。通过HE染色观察肾组织的病理学形态变化;ELISA检测血清炎症反应;免疫组化观察NF-κB的表达情况;血糖分析仪检测FBG;磷酸甘油氧化酶法、脲酶法、肌氨酸酶氧化酶法、双缩脲法等方法测定各组大鼠血清TG、BUN、Scr含量以及24 h尿蛋白含量;Western blotting检测各组大鼠肾脏组织HMGB1、RAGE、NF-κB、Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达情况。结果与正常对照组相比,糖尿病组大鼠FBG、TG、BUN、Scr、肾脏肥大指数和24 h尿蛋白均显著升高(P<0.01);血清炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.01);肾脏结构产生典型的病理性变化;肾脏组织HMGB1、RAGE、NF-κB、Bax、Caspase-3的表达量明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达量明显降低(P<0.01)。与糖尿病组相比,经过槲皮素干预后上述情况得到相反的结果。结论槲皮素能够改善糖尿病引起的肾脏损伤,其保护作用可能与抑制HMGB1/RAGE/NF-κB炎症信号通路,进而减轻肾脏的炎症反应、细胞凋亡等。

南蛇藤素调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对急性肝功能衰竭大鼠炎性损伤的影响

目的 分析南蛇藤素调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对急性肝功能衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠炎性损伤的影响。方法 将大鼠分为正常组、模型组、南蛇藤素12.5 mg/kg组、南蛇藤素50 mg/kg组、促肝细胞生长素组(2 mg/kg)、南蛇藤素+甘草酸组(50 mg/kg+20 mg/kg),给药干预持续3 d,观察大鼠一般情况,全自动生化分析仪分析大鼠血清肝功能、炎症指标水平,HE染色观测大鼠肝组织病理,TUNEL染色观测大鼠肝细胞凋亡情况,Western blotting法观测大鼠肝组织HMGB1/TLR4/NF-κB通路蛋白表达情况。结果 与正常组相比,模型组大鼠死亡率、血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达升高(P<0.05);与模型组相比,南蛇藤素12.5 mg/kg组、南蛇藤素50 mg/kg组、促肝细胞生长素组死亡率、血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达降低(P<0.05);与南蛇藤素50 mg/kg组相比,南蛇藤素+甘草酸组大鼠血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达降低(P<0.05)。结论 南蛇藤素可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路降低ALF大鼠肝脏炎症与肝细胞凋亡,保护肝组织。

瑞马唑仑调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对LPS诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响

目的:探究瑞马唑仑(REM)调节高迁移率族蛋白(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响。方法:体外培养人肺泡上皮细胞HPAEpiC,将其分为7组,对照(Control)组(正常培养)、LPS组(10 mg/L LPS)、LPS+pcDNA3.1组(10 mg/L LPS+转染pcDNA3.1质粒)、LPS+pcDNA3.1-HMGB1组(10 mg/L LPS+转染pcDNA3.1-HMGB1质粒)、LPS+REM组(10 mg/L LPS+150μg/mL REM)、LPS+REM+pcDNA3.1组(10 mg/L LPS+150μg/mL REM+转染pcDNA3.1质粒)、LPS+REM+pcDNA3.1-HMGB1组(10 mg/L LPS+150μg/mL REM+转染pcDNA3.1-HMGB1质粒),扫描电镜下观察各组HPAEpiC细胞形态变化;CCK-8法检测各组HPAEpiC细胞存活率;检测各组HPAEpiC细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量及白细胞介素(IL)-1β、IL-18炎性因子水平;Western blotting检测各组HPAEpiC细胞核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、cleaved N-terminal gasdermin D-N(GSDMD-N)焦亡相关蛋白及TLR4、NF-κB蛋白表达水平;qRT-PCR检测各组HPAEpiC细胞HMGB1 mRNA表达水平。结果:与Control组比较,LPS组HPAEpiC细胞可见明显焦亡特征,细胞肿胀甚至破裂,在质膜上产生较大的气泡,细胞存活率减少,LDH释放量,NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达,IL-1β、IL-18水平,HMGB1 mRNA及TLR4、核NF-κB蛋白表达增加;与LPS组比较,LPS+pcDNA3.1-HMGB1组上述现象加重,LPS+REM组上述现象好转;与LPS+REM组比较,LPS+REM+pcDNA3.1-HMGB1组HPAEpiC细胞上述现象加重(P<0.05~P<0.01)。结论:REM能够减轻LPS诱导的炎症反应,抑制HPAEpiC细胞焦亡,可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。

缺氧-复氧诱导HK2细胞HMGB1/TLR-4信号通路活化调控TNF-α、IL-1β表达的意义

目的:观察缺氧-复氧诱导后HK2细胞的凋亡率、高迁移率蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)水平的改变,探讨缺氧-复氧模拟肾缺血-再灌注诱导HGMB1/TLR-4信号通路活化在调控晚期炎症反应和细胞凋亡的意义。方法:用抗霉素A处理HK2细胞(0.1μmol/L)耗竭ATP的方法建立缺氧-复氧HK2细胞模型以模拟缺血-再灌注损伤。将HK2细胞随机分成3组:normal组、I/R组和重组人HGMB1组(r HGMB1组),在复氧后12 h、24 h、48 h 3个时间点,用流式细胞术检测细胞的凋亡率,ELISA法检测细胞上清液HMGB1、TNF-α、IL-1β的水平,免疫激光共聚焦和western blot检测HK2细胞TLR-4蛋白的表达。结果:缺氧-复氧可诱导HK2细胞凋亡比率、细胞上清液重组人HMGB1、TNF-α、IL-1β水平及HK2细胞TLR-4蛋白12 h即明显增多,24 h达高峰,与normal组相同时间点相比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。经重组人HGMB1处理后,细胞的凋亡率、上清液HMGB1、TNF-α、IL-1β水平及HK2细胞TLR-4蛋白均明显降低,与I/R组相同时间点相比较差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:缺氧-复氧模拟肾缺血-再灌注可诱导HK2细胞HGMB1/TLR-4信号通路活化,参与调控TNF-α、IL-1β炎症介质的表达及HK2细胞的凋亡,通过晚期炎症和凋亡机制介导AKI的发生和发展。

化痰通络汤对MCAO大鼠脑保护作用及HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路的影响

目的基于HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路探讨化痰通络汤对脑缺血再灌注(MCAO)大鼠脑保护作用。方法将54只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、化痰通络汤组,其中模型组及化痰通络汤组行MCAO术,各组均于灌胃1 d、3 d、7 d后取材;比较各组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、脑含水量、脑组织高迁移率族蛋白l(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)含量。结果各时间点神经功能缺损评分比较显示,化痰通络汤组较模型组有明显下降,组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);脑梗死体积比较显示,化痰通络汤组在各时间点脑梗死体积均小于模型组,组间比较具有明显差异(P<0.01);化痰通络汤组1 d、3 d、7 d脑组织HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达均低于模型组,组间比较有明显差异(P<0.05或P<0.01);化痰通络汤组1 d、3 d、7 d脑组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量均低于模型组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);结论化痰通络汤对MACO大鼠的脑保护作用机制可能是通过抗炎症反应、阻断HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路实现的。

生地大黄汤对脑出血大鼠HMGB1/TLR4/MMP9信号通路的影响

目的观察生地大黄汤对脑出血(ICH)大鼠脑组织HMGB1/TLR4/MMP9信号通路的影响。方法将60只大鼠随机分为假手术组、ICH模型组、生地大黄汤组。假手术组只开颅钻孔进针,后两组采用自体血注入法制备大鼠脑出血模型。于造模后6 h,生地大黄汤组灌胃生地大黄汤,假手术组和ICH模型组灌胃等量生理盐水。分别于造模后1 d、3 d进行TUNEL阳性细胞检测及HMGB1、TLR4和MMP-9含量测定。结果造模后1 d,生地大黄汤组与模型组TUNEL阳性细胞计数比较差异无统计学意义(P>0.05);造模后3 d,生地大黄汤组TUNEL阳性细胞表达明显减少(P<0.01)。模型组HMGB1、TLR4、MMP9表达均明显升高,高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);生地大黄汤组HMGB1、TLR4、MMP9表达水平均明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)结论急性脑出血时HMGB1/TLR4/MMP-9炎症信号通路表达上调;生地大黄汤能抑制急性脑出血大鼠HMGB1/TLR4/MMP-9信号通路表达,改善脑出血大鼠脑组织炎性损伤,减少细胞凋亡数。

松萝提取物通过调节HMGB1-RAGE炎症通路治疗类风湿关节炎的机制研究

目的 探讨松萝提取物通过调节(high mobility group protein, HMGB1-RAGE)信号通路治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的机制。方法 54只CIA大鼠随机平均分为空白组,模型组,羟氯喹组,松萝提取物高、中、低剂量组,除空白组外,其余各组CIA大鼠均采用免疫诱导法建立RA模型,从造模第14 d后进行灌胃干预,连续用药14天后取血清及滑膜组织。ELISA检测(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、(interleukin-1,IL-1β)、(interleukin-6,IL-6)、(interleukin-17,IL-17)、、(interleukin-23,IL-23)浓度水平,Rt-PCR检测HMGB1、RAGE mRNA的表达,Western blot法检测HMGB1、RAGE的蛋白活性。结果 模型组检测指标明显高于空白组。经过14天的干预治疗后,羟氯喹组、松萝提取物高、中、低剂量检测指标均有不同程度降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),与羟氯喹组比较,松萝提取物高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 松萝提取物可抑制HMGB1、RAGE、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23在CIA大鼠中的表达。提示松萝提取物可能有望通过调节HMGB1-RAGE信号通路治疗类风湿关节炎。

基于HMGB1/TLR2信号通路探讨红景清肺方治疗PM2.5诱导小鼠ALI的作用机制

目的探讨红景清肺方通过HMGB1/TLR2信号通路治疗PM2.5诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的作用机制。方法将60只SPF级雄性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、红景清肺方低剂量组和高剂量组,每组15只。除空白组外,其他各组均用PM2.5混悬液滴鼻诱导小鼠ALI模型。造模完成后,中药低、高剂量组分别按0.77 g/mL、1.54 g/mL的生药量浓度灌胃;空白组和模型组小鼠灌胃等体积的生理盐水,连续灌胃7 d后处死取材。运用HE染色法观察肺组织病理损害,蛋白质印迹法(Western Blot)和免疫组织化学法(IHC)检测肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体2(TLR2)、黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)的表达情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺匀浆中白细胞介素-1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的含量变化。结果与空白组相比,模型组小鼠肺组织病理损害明显,模型组小鼠HMGB1、TLR2、AIM2蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);中药组病理损害得到不同程度的保护,HMGB1、TLR2和AIM2蛋白表达较模型组相比减少(P<0.05,P<0.01),IL-1β和iNOS释放减少(P<0.05,P<0.01),以高浓度组改变更明显。结论红景清肺方可以通过降低HMGB1/TLR2信号通路的表达水平,减少IL-1β和iNOS炎症因子的释放,从而抑制肺部炎症反应,减轻PM2.5所致的小鼠急性肺损伤。

利多卡因调节HMGB1/TLR4信号通路对慢性心力衰竭大鼠的心脏保护作用

目的探讨利多卡因调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路对慢性心力衰竭大鼠的心脏保护作用。方法将大鼠分为正常组、模型组、利多卡因低剂量组、利多卡因高剂量组和EP(HMGB1抑制剂)组,采用异丙肾上腺素皮下注射制备慢性心力衰竭大鼠模型。超声检测各组大鼠心功能;ELISA试剂盒测定血清心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;HE染色和Masson染色观察大鼠心脏组织病理学变化;RT-qPCR检测HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA表达;Western blot检测HMGB1、TLR4、NF-κB、p-NF-κB、Bcl-2、Bax相关蛋白表达。结果正常组大鼠HE染色结果显示心肌细胞形态结构正常,Masson染色结果显示心肌组织致密有序排列,组织间没有胶原蛋白沉积。与正常组相比,模型组大鼠心肌细胞褶缩,形态结构排列不规则,有较多炎性细胞浸润,组织间有大量胶原蛋白沉积,心肌纤维化程度较重,大鼠左室舒张末期内径(LVEDD)和左室收缩末期内径(LVESD)水平、心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、IL-1β和TNF-α水平、HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA水平、HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达水平显著升高,左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS)水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,利多卡因低、高剂量组和EP组大鼠心肌细胞损伤显著改善,心肌组织中胶原蛋白显著减少,心肌纤维化程度显著减轻,大鼠LVEDD、LVESD、ANP、BNP、IL-1β和TNF-α水平、HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA水平、HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达水平显著降低,LVEF和LVFS水平、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与利多卡因高剂量组相比,EP组大鼠各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论利多卡因可抑制HMGB1/TLR4信号通路,降低慢性心力衰竭大鼠的炎症损伤,改善其心功能。

HMGB1-TLR4-MyD88-NF-κB信号通路在大鼠胸部创伤后心肌损伤的调节机制研究

目的探讨HMGB1-TLR4-MyD88-NF-κB信号通路在胸部创伤多发肋骨骨折后心肌损伤的调节机制,观察心肌损伤后炎性细胞因子IL-4、IL-6、IL-10表达变化。方法(1)根据自由落体原理自制大鼠胸部创伤后多发肋骨骨折伴心肌损伤的模型;(2)实验分组:①对照组;②创伤后4h组、创伤后8h组、创伤后12h组;各组雄性大鼠10只。检测各组心肌组织TLR4、MyD88、NF-κBp65、P-NF-κBp65蛋白含量;检测血浆心肌损伤标志物肌钙蛋白I(cTnI)、HMGB1、IL-4、IL-6、IL-10水平变化。结果与对照组比较,创伤后4h心肌组织TLR4、MyD88、P-NF-κBp65即开始上升;创伤后随时间延长表达明显增高(P<0.05),NF-κBp65无明显的变化;血浆TnI、HMGB1、IL-6水平与对照组比较,创伤后4h即开始上升;且随时间延长表达明显增强(P<0.05),但IL-4、IL-10无明显的上升。结论内源性危险分子HMGB1于胸部创伤后明显表达上升,激活TLR4-MyD88-NF-κB信号通路,同时刺激前炎症细胞因子IL-6等大量释放,加重心肌损伤。

肺纤方通过调控HMGB1/TLR2信号通路抑制特发性肺纤维化的实验研究

目的探讨肺纤方通过调控高迁移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)/Toll蛋白受体2(toll protein receptor 2,TLR2)信号通路对特发性肺纤维化的抑制作用。方法选取健康雄性SD大鼠80只,分为对照组16只和造模组64只。造模组采用博来霉素气管注射法建立特发性肺纤维化模型,对照组给予等量生理盐水气管注射。造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、肺纤方低、高浓度组及泼尼松组,各16只。模型组和对照组分别给予生理盐水10 mL/kg,1次/d,灌胃给药;肺纤方低、高浓度组分别给予0.72、2.9 g/mL肺纤方药液10 mL/kg,1次/d,灌胃给药;泼尼松组给予1.0 mg/mL醋酸泼尼松溶液10 mL/kg,1次/d,灌胃给药。所有大鼠均连续给药4周。对大鼠肺纤维化程度、血清血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及肺泡灌洗液炎症因子水平、肺组织HMGB1、TLR2蛋白表达水平进行检测。结果治疗后,与模型组比较,各组大鼠肺纤维化程度评分较低,肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平较低,血清PDGF、TGF-β1水平较低,肺组织HMGB1、TLR2蛋白表达水平较低,且肺纤方低浓度组>泼尼松组>肺纤方高浓度组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺纤方能明显减轻特发性肺纤维化模型大鼠肺纤维化程度,降低血清细胞因子PDGF、TGF-β1水平,抑制肺部炎症反应,且药物浓度越高效果越明显,其作用可能与下调HMGB1/TLR2信号通路活性有关。

大黄牡丹汤调控HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路干预急性胰腺炎模型大鼠的机制

旨在研究大黄牡丹汤对急性胰腺炎模型大鼠的干预作用及可能的分子机制。将96只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、阳性药物对照组和大黄牡丹汤高、中、低3个剂量试验组(n=16)。采用胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠溶液复制急性胰腺炎模型,模型组及假手术组均采用灌胃方式给予生理盐水;对照组皮下注射奥曲肽;高、中、低3个剂量试验组分别灌胃不同剂量大黄牡丹汤水煎液,1次·d-1,连续6 d。常规麻醉后脱颈椎处死,心脏取血,开腹剖取胰腺组织。在光学显微镜下对胰腺的病理学改变进行观察,采用IHC和Western blot法检测胰腺组织HMGB1、RAGE、p-NF-κBp65、p-IκBα蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测胰腺组织HMGB1、RAGE基因表达水平,ELISA检测胰腺组织中IL-1β、TNF-α、IL-6含量。结果发现:1)与假手术组相比,模型组大鼠一般生存状况较差,镜下可见胰腺组织明显肿胀以及扩张充血,胰腺组织中HMGB1、RAGE基因和蛋白相对表达量,下游蛋白NF-κBp65、IκBα磷酸化水平,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高(P<0.05);2)与模型组相比,治疗组大鼠一般生存状况不同程度改善,镜下间质性水肿以及坏死灶明显改善,HMGB1、RAGE基因和蛋白相对表达量,下游蛋白NF-κBp65、IκBα磷酸化水平,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著下降(P<0.05),其中,尤以大黄牡丹汤高剂量组最为明显(P<0.05)。本研究表明,大黄牡丹汤能够显著缓解大鼠急性胰腺炎疾病进展,其机制与其能够抑制HMGB1/RAGE/NF-κB通路激活,进而阻断炎性级联反应有关。

吴茱萸碱调节HMGB1-RAGE信号通路对脓毒症大鼠急性肺损伤的影响

目的 探讨吴茱萸碱(EVO)调节高迁移率族蛋白1/晚期糖基化终末产物受体(HMGB1/RAGE)信号通路对脓毒症大鼠急性肺损伤(ALI)的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、EVO组(40 mg/kg EVO)、EVO+HMGB1组(40 mg/kg EVO+500μg HMGB1重组蛋白),每组均12只。除对照组外,其余组采用盲肠结扎穿刺(CLP)法建立脓毒性ALI模型;ELISA法检测血清中炎性因子;苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态;TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡情况;肺通透性指数(LPI)评估大鼠肺毛细血管渗漏;Western blot检测肺组织Occludin、ZO-1以及HMGB1-RAGE通路相关蛋白表达。结果 对照组肺组织结构正常;与对照组相比,模型组肺组织炎性细胞浸润严重,肺泡壁增厚,弥漫性水肿明显,肺泡间隙变窄,间质充血增强,病理损伤严重,Smith评分(3.10±0.38)、TNF-α、IL-1β、MCP-1含量、细胞凋亡率、LPI水平(2.98±0.12)、HMGB1、RAGE蛋白水平显著升高(P<0.05),Occludin、ZO-1蛋白水平显著下调(P<0.05);与模型组相比,EVO组肺肿胀、充血、炎性细胞浸润现象改善,Smith评分(0.42±0.04)、TNF-α、IL-1β、MCP-1含量、细胞凋亡率、LPI水平(0.97±1.05)、HMGB1、RAGE蛋白水平显著降低(P<0.05),Occludin、ZO-1蛋白水平显著升高(P<0.05);HMGB1过表达消除了EVO对脓毒症大鼠ALI的有利影响。结论 EVO可能通过下调HMGB1-RAGE信号通路对脓毒症大鼠ALI起到改善效果。