化痰通络汤对MCAO大鼠脑保护作用及HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路的影响

目的基于HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路探讨化痰通络汤对脑缺血再灌注(MCAO)大鼠脑保护作用。方法将54只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、化痰通络汤组,其中模型组及化痰通络汤组行MCAO术,各组均于灌胃1 d、3 d、7 d后取材;比较各组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、脑含水量、脑组织高迁移率族蛋白l(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)含量。结果各时间点神经功能缺损评分比较显示,化痰通络汤组较模型组有明显下降,组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);脑梗死体积比较显示,化痰通络汤组在各时间点脑梗死体积均小于模型组,组间比较具有明显差异(P<0.01);化痰通络汤组1 d、3 d、7 d脑组织HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达均低于模型组,组间比较有明显差异(P<0.05或P<0.01);化痰通络汤组1 d、3 d、7 d脑组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量均低于模型组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);结论化痰通络汤对MACO大鼠的脑保护作用机制可能是通过抗炎症反应、阻断HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路实现的。

南蛇藤素调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对急性肝功能衰竭大鼠炎性损伤的影响

目的 分析南蛇藤素调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对急性肝功能衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠炎性损伤的影响。方法 将大鼠分为正常组、模型组、南蛇藤素12.5 mg/kg组、南蛇藤素50 mg/kg组、促肝细胞生长素组(2 mg/kg)、南蛇藤素+甘草酸组(50 mg/kg+20 mg/kg),给药干预持续3 d,观察大鼠一般情况,全自动生化分析仪分析大鼠血清肝功能、炎症指标水平,HE染色观测大鼠肝组织病理,TUNEL染色观测大鼠肝细胞凋亡情况,Western blotting法观测大鼠肝组织HMGB1/TLR4/NF-κB通路蛋白表达情况。结果 与正常组相比,模型组大鼠死亡率、血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达升高(P<0.05);与模型组相比,南蛇藤素12.5 mg/kg组、南蛇藤素50 mg/kg组、促肝细胞生长素组死亡率、血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达降低(P<0.05);与南蛇藤素50 mg/kg组相比,南蛇藤素+甘草酸组大鼠血清ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达降低(P<0.05)。结论 南蛇藤素可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路降低ALF大鼠肝脏炎症与肝细胞凋亡,保护肝组织。

基于HMGB1/TLR4/NF-κB通路研究鱼油延缓气道重塑治疗哮喘的作用机制

目的:探讨鱼油通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路延缓气道重塑,治疗哮喘的潜在作用机制及其疗效,为哮喘的新型治疗策略提供理论依据和实验支持。方法:采用Ovalbumin(OVA)诱导的哮喘小鼠模型,随机分为对照组、模型组、鱼油组、鱼油+E5564组,每组10只,共40只;4组小鼠,通过肺功能测试仪对比气道阻力,酶联免疫吸附试验判断运用TLR4抑制剂前后的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10炎症因子水平,苏木精—伊红染色观察肺组织病理变化,逆转录定量聚合酶链反应对比Bax、caspase-3、Bcl2的mRNA表达水平,免疫印迹分析观察Bax、caspase-3、Active-caspase3、HMGB1、TLR4、NF-κB、p-NF-κB p65的蛋白表达量,免疫组化法观察HMGB1、TLR4、NF-κB的蛋白表达水平。结果:气道阻力测试表明,鱼油组小鼠的气道阻力显著降低,肺组织病理损伤减轻,炎症细胞浸润明显减少;HE染色结果表明降低,鱼油组小鼠的气道损伤更小,炎症细胞浸润和上皮细胞排列紊乱更少;ELISA结果显示,鱼油组小鼠的血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达降低,并提高了IL-10的表达,而鱼油+E5564组的血清炎症因子水平与模型组相近;RT-qPCR结果表明,鱼油组小鼠的Bax、caspase-3的mRNA表达量较低,Bcl2的mRNA表达量较高;WB结果表明,鱼油组小鼠的Bax、caspase-3、Active-caspase3、HMGB1、TLR4、NF-κB、p-NF-κB p65蛋白表达量更低,而鱼油+E5564组小鼠HMGB1、TLR4、NF-κB及p-NF-κB p65蛋白表达量与模型组小鼠相近;IHC结果表明,鱼油组小鼠HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达量更低,与WB结果趋同。结论:鱼油通过影响HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,显著减轻哮喘小鼠模型的气道炎症和重塑,提高肺功能,显示出作为哮喘潜在治疗剂的可能性;该研究为鱼油在哮喘治疗领域的应用提供了实验依据,但需要进一步的临床研究来验证其疗效和安全性。

甘草酸对慢性肾脏病大鼠心肌HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α信号通路的影响

目的 探讨应用甘草酸(Gly)治疗时对慢性肾脏病(CKD)大鼠心室肌高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子κB/缺氧诱导因子1α(HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α)信号通路的影响。方法 将38只Wistar大鼠按随机数字表法分为4组:假手术(Sham)组、Sham+Gly组、CKD组、CKD+Gly组,5/6肾切除制备CKD模型,Gly腹腔注射给药(80 mg/kg)。4周后行血流动力学及心脏彩超观察各组大鼠心脏功能;心室取血检测生化指标;心肌组织取材检测HMGB1、TLR4、NF-κB、HIF-1α蛋白表达的变化。结果 与Sham组相比,CKD组肌酐、尿酸、尿素氮和血清镁水平增高(P<0.05),血压升高,舒张期室间隔厚度、收缩期左心室内径增加,左心室射血分数降低,E/A比值降低,肺动脉血流加速时间延长(P<0.05);HE染色可见心肌细胞肥大,Masson染色见心肌纤维化程度增加(P<0.05),心肌组织HMGB1、NF-κB、HIF-1α蛋白表达水平上调(P<0.05)。与CKD组相比,CKD+Gly组收缩期室间隔厚度增加,左心室射血分数升高,E/A比值升高(P<0.05),HE染色心肌细胞肥大情况有所好转,心肌纤维化程度降低(P<0.05),心肌组织HMGB1、NF-κB、HIF-1α蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论 CKD会影响大鼠心功能,加重大鼠心肌纤维化,Gly可减轻CKD大鼠心肌纤维化程度,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α信号通路下传有关。

HMGB1介导TLR4/NF-κB信号通路干预骨关节炎研究进展

骨关节炎(osteoarthritis,OA)作为临床常见老年退行性疾病,目前尚无有效治疗手段。研究发现OA是一种慢性低度炎性疾病。损伤相关分子模式HMGB1(high mobility group box-1)在OA病理过程中发挥中心分子作用。HMGB1与固有免疫模式识别受体TLR4(toll-like receptor 4,TLR4)结合后激活NF-κB信号通路导致OA软骨退变和滑膜炎等免疫炎症反应。通过综述HMGB1介导TLR4/NF-κB信号通路在OA发病机制中的作用,为靶向阻断HMGB1治疗OA提供理论依据和参考。

HMGB1-TLR4-MyD88-NF-κB信号通路在大鼠胸部创伤后心肌损伤的调节机制研究

目的探讨HMGB1-TLR4-MyD88-NF-κB信号通路在胸部创伤多发肋骨骨折后心肌损伤的调节机制,观察心肌损伤后炎性细胞因子IL-4、IL-6、IL-10表达变化。方法(1)根据自由落体原理自制大鼠胸部创伤后多发肋骨骨折伴心肌损伤的模型;(2)实验分组:①对照组;②创伤后4h组、创伤后8h组、创伤后12h组;各组雄性大鼠10只。检测各组心肌组织TLR4、MyD88、NF-κBp65、P-NF-κBp65蛋白含量;检测血浆心肌损伤标志物肌钙蛋白I(cTnI)、HMGB1、IL-4、IL-6、IL-10水平变化。结果与对照组比较,创伤后4h心肌组织TLR4、MyD88、P-NF-κBp65即开始上升;创伤后随时间延长表达明显增高(P<0.05),NF-κBp65无明显的变化;血浆TnI、HMGB1、IL-6水平与对照组比较,创伤后4h即开始上升;且随时间延长表达明显增强(P<0.05),但IL-4、IL-10无明显的上升。结论内源性危险分子HMGB1于胸部创伤后明显表达上升,激活TLR4-MyD88-NF-κB信号通路,同时刺激前炎症细胞因子IL-6等大量释放,加重心肌损伤。

生地大黄汤对脑出血大鼠HMGB1/TLR4/MMP9信号通路的影响

目的观察生地大黄汤对脑出血(ICH)大鼠脑组织HMGB1/TLR4/MMP9信号通路的影响。方法将60只大鼠随机分为假手术组、ICH模型组、生地大黄汤组。假手术组只开颅钻孔进针,后两组采用自体血注入法制备大鼠脑出血模型。于造模后6 h,生地大黄汤组灌胃生地大黄汤,假手术组和ICH模型组灌胃等量生理盐水。分别于造模后1 d、3 d进行TUNEL阳性细胞检测及HMGB1、TLR4和MMP-9含量测定。结果造模后1 d,生地大黄汤组与模型组TUNEL阳性细胞计数比较差异无统计学意义(P>0.05);造模后3 d,生地大黄汤组TUNEL阳性细胞表达明显减少(P<0.01)。模型组HMGB1、TLR4、MMP9表达均明显升高,高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);生地大黄汤组HMGB1、TLR4、MMP9表达水平均明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)结论急性脑出血时HMGB1/TLR4/MMP-9炎症信号通路表达上调;生地大黄汤能抑制急性脑出血大鼠HMGB1/TLR4/MMP-9信号通路表达,改善脑出血大鼠脑组织炎性损伤,减少细胞凋亡数。

基于HMGB1/TLR4/NF-κB通路探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫功能的影响

目的基于HMGB1/TLR4/NF-κB通路探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及相关免疫指标的影响。方法50只SPF级雄性KM小鼠,采用随机数字表法取10只小鼠作为空白组,其40只小鼠复制H22肝癌荷瘤小鼠模型,模型复制成功后将模型小鼠随机分为模型组、顺铂组(2.5×10^(-3)g·kg^(-1))、参芪抑瘤方中药组(27.03 g·kg^(-1))、参芪抑瘤方(27.03 g·kg^(-1))联合顺铂组(2.5×10^(-3)g·kg^(-1)),每组10只,治疗13天,测定抑瘤率、脾指数和胸腺指数;苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE)观察肿瘤病理学变化;流式细胞术检测脾组织中CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞水平;实时荧光定量PCR(Realtime PCR,RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中高迁移率族蛋白B1(High mobility group protein,HMGB1)/TOLL样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路相关的基因与蛋白表达。结果①与空白组相比,模型组小鼠平均体质量及小鼠脾指数、胸腺指数、CD4^(+)T细胞水平以及CD4^(+)T/CD8^(+)T值均显著降低、CD8^(+)T细胞水平升高(P<0.05);②与模型组相比,各治疗组小鼠平均瘤质量降低(P<0.05),瘤体积减小(P<0.05),体质量升高(P<0.05),中药组和联合组小鼠脾指数、胸腺指数、CD4^(+)T细胞水平以及CD4^(+)T/CD8^(+)T比值均升高,CD8^(+)T细胞水平降低,且中药组治疗效果显著(P<0.05),小鼠肿瘤组织中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA与蛋白表达均降低,且联合组效果显著(P<0.05);③与顺铂组相比,联合组小鼠肿瘤组织中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05);④与中药组相比,联合组小鼠肿瘤组织中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05)。结论参芪抑瘤方联合顺铂能有效抑制H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长,提高相关免疫指标,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路活化有关。

葶苈子水提液通过调控HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对LPS吸入性肺损伤新生大鼠的影响

[目的]探究葶苈子水提液对脂多糖(LPS)吸入性肺炎新生大鼠的影响。[方法]腹腔注射LPS制备吸入性肺损伤大鼠模型,将大鼠随机分为6组:对照组、模型组、葶苈子水提液5 g/kg组、葶苈子水提液10 g/kg组、葶苈子水提液20 g/kg组和地塞米松0.002 g/kg组。干湿法检测肺组织干湿质量比值;苏木精-伊红(HE)染色检测肺组织病理损伤;酶联免疫吸附(ELISA)法检测氧化应激标记物:超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量和炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测高迁移率族蛋白1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)和磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)p65蛋白表达水平。[结果]与对照组比较,模型组大鼠肺干湿质量比值升高,SOD、GSH含量降低,MDA含量升高,IL-6、IL-1β和TNF-α水平升高,HMGB1、TLR4蛋白表达水平及p-NF-κB p65与核转录因子-κB(NF-κB)p65比值升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,葶苈子水提液10、20 g/kg组和地塞米松0.002 g/kg组肺干湿质量比值降低,肺组织病理损伤程度明显改善,SOD、GSH含量升高,MDA含量降低,IL-6、IL-1β和TNF-α水平降低,HMGB1、TLR4蛋白表达水平及p-NF-κB p65与NF-κB p65比值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]葶苈子水提液能改善LPS诱导的吸入性肺损伤大鼠模型病理损伤,抑制炎症因子的释放,改善氧化应激,抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的活化。

虎杖苷通过调控HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对脓毒症急性肺损伤的保护作用

[目的]观察虎杖苷(polydatin,PD)对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用,并探究其作用机制。[方法]将50只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级SD大鼠随机分为假手术组、模型组和PD高、中、低剂量组,每组10只。模型组和PD高、中、低剂量组大鼠采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症急性肺损伤模型,假手术组打开腹腔翻动盲肠后缝合。PD高、中、低剂量组大鼠分别予100、50、25mg·kg-1 PD灌胃,假手术组和模型组大鼠予等量0.5%羧甲基纤维素钠(carboxymethyl cellulose sodium,CMC-Na)灌胃,1次/d,连续7d。实验结束检测各组大鼠肺组织湿干重比(wet-to-dry weight ratio,W/D)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肺组织病理变化;酶联免疫吸附检测(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;实时定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Realtime qPCR)法和Western blot法检测肺组织高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65 mRNA和蛋白表达水平。[结果]与假手术组比较,模型组TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平升高,SOD活力降低,W/D值显著升高(P<0.05);与模型组比较,PD高、中剂量组TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平降低,SOD活力升高,W/D值显著降低(P<0.05),而PD低剂量组TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平,SOD活力及W/D值差异无统计学意义(P>0.05);PD中剂量组TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平和W/D值高于PD高剂量组,低于PD低剂量组,SOD活力低于PD高剂量组,高于PD低剂量组(P<0.05)。HE染色显示,模型组大鼠肺泡壁增厚水肿,有大量炎性细胞浸润;与模型组比较,PD高、中剂量可显著改善大鼠肺损伤,减轻肺泡壁增厚、水肿及炎性细胞浸润。Real-time qPCR和Western blot检测显示,与假手术组比较,模型组HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05);与模型组比较,PD高、中剂量组HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),PD低剂量组HMGB1、TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与PD高剂量组比较,PD中、低剂量组HMGB1、TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达增高,其中PD中剂量组HMGB1、TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达低于PD低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]PD对大鼠脓毒症相关急性肺损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的活化有关。

朝医麻黄定喘汤对OVA诱导的过敏性哮喘豚鼠模型HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨朝医麻黄定喘汤对过敏性哮喘豚鼠气道炎症的影响,并探讨其作用机制是否与HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。方法:选取50只雄性豚鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量(5 g/kg)麻黄定喘汤组、高剂量(20 g/kg)麻黄定喘汤组和地塞米松(0.5 mg/kg)组,每组各10只。除正常对照组外,其余4组均采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏和OVA气溶胶雾化激发制备哮喘豚鼠模型。最后一次雾化后观察豚鼠行为学改变;末次激发24 h后处死豚鼠,采集支气管肺泡灌洗液(BALF),通过Diff-Quik染色进行炎症细胞计数;取肺组织标本,HE、PAS和Masson染色观察肺组织病理学变化;ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5和IL-13含量;流式细胞术测定小鼠肺组织中IL-4和IFN-γ水平;Western blot检测肺组织中HMGB1、TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达;免疫组织化学及免疫荧光检测豚鼠肺组织中HMGB1表达。结果:麻黄定喘汤能有效减轻OVA诱导的哮喘豚鼠气道炎症,抑制杯状细胞增生和胶原纤维沉积,减少BALF中IL-4、IL-5和IL-13含量,并在降低肺组织中IL-4水平的同时升高肺组织中IFN-γ水平;下调肺组织HMGB1、TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达,减弱肺组织HMGB1荧光强度。结论:麻黄定喘汤能够有效减轻哮喘豚鼠气道炎症,可能与调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。

右美托咪定抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤研究

目的:观察右美托咪定(Dex)对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌功能、炎症反应及HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:取75只成年SPF级10周龄雄性SD大鼠。运用可复性结扎LAD法建立心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型。随机均分为假手术组(Sham组)、Dex预处理+MIRI组(Dex组)、Dex+育亨宾+MIRI组(Dex/Yoh组)、育亨宾预处理+MIRI组(Yoh组)与MIRI组(I/R组),每组15只。比较各组心肌梗死面积(IS/AAR)。运用ELISA检测并比较各组心肌组织与血清TNF-α、IL-6水平。采用Western blot检测并比较心肌组织HMGB1、TLR-4、MyD88、NF-κB蛋白表达情况。结果:Dex组、Dex/Yoh组、Yoh组及I/R组心肌组织与血清TNF-α、IL-6水平均高于Sham组,其中Dex组<Dex/Yoh组<Yoh组<I/R组(P<0.05)。Dex组、Dex/Yoh组、Yoh组及I/R组IS/ARR均高于Sham组,其中Dex组<Dex/Yoh组<Yoh组<I/R组(P<0.05)。Dex组、Dex/Yoh组、Yoh组及I/R组心肌组织HMGB1、TLR-4、MyD88、NF-κB蛋白表达量均高于Sham组,其中Dex组<Dex/Yoh组<Yoh组<I/R组(P<0.05)。结论:右美托咪定能够减轻心肌缺血再灌注损伤大鼠炎症反应,减少心肌梗死面积,途径为抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路。

表儿茶素抑制HMGB1信号通路修复心肌细胞缺氧/复氧损伤

【目的】观察表儿茶素对心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的影响,并探讨其机制。【方法】构建大鼠心肌细胞H9C2 H/R损伤模型,观察细胞形态学变化。将H9C2细胞分为4组,即对照组(正常细胞)、模型组(H/R损伤)、表儿茶素组(H/R损伤,且于造模前30 min,加入20μmol/L表儿茶素溶液)和高迁移率族蛋白1(HMGB1)抑制剂组(H/R损伤,且于造模前30 min,加入100μg/mL抑制剂Glycyrrhizin),应用细胞计数试剂盒8(CCK8)法测定细胞12、24、48、72 h的增殖能力,AnnexinVFITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡,实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞HMGB1、Toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)p65 m RNA的表达,蛋白免疫印迹法检测细胞HMGB1、TLR4和NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白的表达。【结果】构建H/R损伤模型后,H9C2细胞呈现出凋亡特征。与对照组相比,模型组细胞增殖能力降低,凋亡率升高,HMGB1、TLR4 m RNA和蛋白表达水平,NF-κB p65 m RNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明显升高(P<0.05)。而经表儿茶素或HMGB1抑制剂处理后,H/R模型细胞的增殖能力增强,凋亡率降低,且HMGB1、TLR4 mRNA和蛋白表达水平,NF-κB p65 mRNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均降低(P<0.05)。【结论】表儿茶素对H/R损伤心肌细胞的修复作用与HMGB1抑制剂相似,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。

基于HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路研究藁本内酯衍生物抑制IL-1β诱导的大鼠软骨细胞凋亡和炎症反应的作用机制

软骨细胞是关节软骨中的独特驻留细胞类型,当其发生一系列病理改变时能够导致骨关节炎(osteoarthritis,OA)的发生。藁本内酯衍生物(ligusticum cycloprolactam,LIGc)是中药当归药效标志物藁本内酯(Z-ligustilide,LIG)的衍生物,具有抗炎、抑制细胞凋亡等多种生物学功能。然而,其对OA软骨细胞的保护作用以及潜在的作用机制尚不清楚。该研究拟进行体外实验探索LIGc抗OA保护软骨细胞作用的分子机制。采用白细胞介素-1β(IL-1β)诱导建立大鼠OA软骨细胞炎症模型,并单独使用LIGc和联合高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子-κB(HMGB1/TLR4/NF-κB)信号通路阻断剂甘草酸(glycyrrhizic acid,GA)进行干预,以系统评估其治疗效果。通过cell counting kit-8(CCK-8)试剂盒检测不同浓度下LIGc对软骨细胞活力的影响,并筛选出最佳作用浓度;Annexin V-FITC/PI凋亡染色检测各组软骨细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组软骨细胞上清中环氧合酶-2(COX-2)、前列腺素-2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组软骨细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、HMGB1、TLR4、NF-κB p65的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组软骨细胞HMGB1、TLR4、NF-κB p65、髓样分化因子88(MyD88)的基因表达变化。通过CCK-8确定了LIGc对软骨细胞的大致安全浓度范围,并进一步明确了LIGc作用的最佳浓度。在IL-1β的干预下,成功构建大鼠OA软骨细胞模型,且在该细胞模型中,软骨细胞凋亡率明显增加。与此同时,ELISA检测该组软骨细胞上清中COX-2、PGE2、TNF-α的表达均显著上升;Western blot检测发现模型组软骨细胞Bax、caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB p65的蛋白表达显著上调,Bcl-2的蛋白表达受到明显抑制;RT-qPCR测定显示软骨细胞内HMGB1、TLR4、NF-κB p65、MyD88的基因表达经IL-1β干预后均有所提高。然而,随着LIGc的加入逆转了IL-1β诱导下上述一系列因子的表达变化。此外,LIGc联合GA共同作用下较单独添加LIGc对实验结果的逆转趋势更为明显。这些研究结果表明,从中药当归中提取并衍生的LIGc能够起到抑制软骨细胞炎症反应及减少软骨细胞凋亡的作用,且该作用的发挥可能与HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路具有较强的相关性。LIGc保护软骨细胞的药理作用,对于延缓OA病情及改善患者临床症状具有潜在价值,值得进一步深入研究。

基于HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路探讨忍冬苷对脓毒症肝损伤大鼠的影响

目的:基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路探讨忍冬苷对脓毒症肝损伤大鼠的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机分为模型组、对照组、阳性对照组(地塞米松10 mg/kg)、忍冬苷低剂量(7.5 mg/kg)、忍冬苷中剂量(15 mg/kg)、忍冬苷高剂量(30 mg/kg)组,每组10只。采用盲肠结扎穿刺法建立大鼠脓毒症模型。实验结束后麻醉大鼠取血制备血清,检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)含量;分离肝组织称重,计算肝脏指数,一部分用于HE染色观察肝组织病理变化,一部分用于制备组织匀浆检测组织中肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性及HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠血清中MDA、TNF-α、IL-6含量、肝脏指数以及肝组织中AST、ALT活性、HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著增加(P<0.05),SOD活性与IL-10含量显著下降(P<0.05);且肝组织出现明显病灶,肝细胞水肿变性,大量炎性细胞浸润。与模型组比较,阳性对照组与忍冬苷各剂量组大鼠血清中MDA、TNF-α、IL-6含量、肝脏指数以及肝组织中AST、ALT活性、HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著降低(P<0.05),SOD活性与IL-10含量显著升高(P<0.05);忍冬苷低、中剂量组仍可见病灶和水肿,但病变减轻;地塞米松组与忍冬苷高剂量组肝细胞结构趋于正常,未发现病灶。与阳性对照组比较,忍冬苷低、中剂量组大鼠血清中MDA、TNF-α、IL-6含量、肝脏指数以及肝组织中AST、ALT活性、HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著升高(P<0.05),SOD活性与IL-10含量显著降低(P<0.05);忍冬苷高剂量组上述指标无显著差异(P>0.05)。结论:忍冬苷通过下调HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的表达,抑制氧化应激,减轻炎症反应,改善肝功能,发挥对脓毒症肝损伤的保护作用。

基于HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路探讨参附注射液对慢性心力衰竭大鼠的保护作用

基于高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)/Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路探讨参附注射液调节慢性心力衰竭炎症损伤机制及作用靶点。采用异丙肾上腺素诱导法建立慢性心力衰竭大鼠模型,将成模大鼠采用随机数字表法分为3组:模型组、参附组及甘草酸组,另设正常组,连续给药15 d。在末次给药后次日取材,检测各组大鼠心脏质量指数及左心室质量指数;超声心电图检测各组大鼠心功能指标;ELISA法检测大鼠血清炎症指标;HE及Masson染色法观察大鼠心脏组织病理形态以及纤维化状态;免疫荧光染色法检测大鼠心脏组织中HMGB1含量;Western blot法及RT-qPCR(quantitative real-time PCR)法检测大鼠心脏组织中HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白及mRNA相对表达量。研究结果表明,慢性心力衰竭大鼠模型制备成功。模型组大鼠心功能降低,HMGB1及炎症因子水平升高(P<0.05),出现纤维结缔组织增生和炎性细胞浸润,纤维化程度严重,心肌组织中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB P65蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05)。参附注射液可改善心功能,降低HMGB1及炎症因子水平(P<0.05),改善间质纤维结缔组织增生和炎性细胞浸润,减轻纤维化程度,降低心肌组织中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB P65蛋白及mRNA表达(P<0.05)。参附注射液可通过调控HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,减轻慢性心力衰竭炎症损伤,改善心功能。

脑梗死合并肺部感染患者TNF-α、HMGBl、TLR4-NF-κB信号通路改变研究

目的探究脑梗死合并肺部感染患者的肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和高迁移率族蛋白Bl(High mobility group protein Bl,HMGBl)水平及其临床价值研究。方法2018年1月-2019年2月儋州市人民医院收治的急性脑梗死患者作为研究对象,其中急性脑梗死合并肺部感染患者30例作为感染组,急性脑梗死无肺部感染患者80例作为非感染组,选择同期于此医院体检的健康者30名作为对照组。采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测血清HMGB1和细胞因子IL-6、TNF-α水平,采用Western Blot法检测血清Toll样家族受体-4(Toll like receptor-4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、髓样分化因子(myeloiddifferentiationfactor88,MyD88)表达水平。结果感染组的血清HMGB1、TLR4、NF-κB、MyD88表达及细胞因子IL-6、TNF-α水平均高于非感染组和对照组(P<0.05);感染组患者大梗死灶、中等梗死灶、小梗死灶各指标总体水平差异具有统计学意义(P<0.05)。大梗死灶、中等梗死灶两亚组患者的血清HMGB1、TLR4、NF-κB、MyD88表达及细胞因子IL-6、TNF-α水平均高于小梗死灶亚组(P<0.05);急性脑梗死合并肺部感染患者的血清HMGB1和TNF-α水平呈正相关(r=0.523,P<0.001)。结论脑梗死合并肺部感染患者伴随TNF-α、HMGBl、TLR4-NF-κB信号通路的明显改变,且与梗死灶大小具有相关性,其机制有待进一步研究。

姜黄素抑制HMGB1-NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导新生大鼠急性肺损伤实验研究

目的分析姜黄素抑制高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-核转录因子κB(NF-κB)信号通路减轻脂多糖(LPS)诱导新生大鼠急性肺损伤(ALI)的作用。方法将60只新生SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松(阳性药,2 mg·kg^(-1))组和姜黄素低、中、高剂量(1.5、3.0、6.0 mg·kg^(-1))组,每组10只。除对照组外,所有大鼠采用腹膜内注射LPS(3 mg·kg^(-1))建立ALI模型。注射LPS约6 h后开始ip给药,每天1次,连续7 d,模型组和对照组大鼠ip等体积的0.1%DMSO。通过血氧分压(PaO)和肺干湿质量比(W/D)评估新生大鼠肺水肿情况;HE染色检测各组大鼠肺组织损伤;ELISA法检测新生大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平,BALF中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和HMGB1水平;Western blotting法检测大鼠肺组织胞核NF-κB、胞浆NF-κB和磷酸化核因子κB抑制因子α(p-IκBα)蛋白表达。结果与对照组相比,模型组新生大鼠肺泡腔有渗出、肺组织结构紊乱、细胞核固缩深染、伴随大量的炎性细胞浸润,病理评分显著升高(P<0.01);PaO、BALF中SOD和GSH水平显著降低(P<0.01);肺W/D,BALF中MPO和MDA水平,BALF中IL-6、TNF-α和HMGB1水平,NF-κB胞核/胞浆比例和胞浆p-IκBα蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组相比,姜黄素高、中剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理损伤减轻,肺泡腔渗出、炎性细胞浸润明显减少,病理评分显著降低(P<0.05、0.01);PaO、BALF中SOD和GSH水平显著升高(P<0.05、0.01);肺W/D,BALF中MPO、MDA水平,BALF中IL-6、TNF-α和HMGB1水平,NF-κB胞核/胞浆比例和胞浆p-IκBα蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01)。结论姜黄素可以通过抑制HMGB1-NF-κB信号通路减轻LPS诱导的新生大鼠ALI。

牛蒡子苷元对慢性心力衰竭大鼠心室重构和炎性反应的影响与机制研究

目的 探究牛蒡子苷元(ATG)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心室重构和炎性反应的影响,并分析其潜在机制。方法 79只SD大鼠随机选取12只为假手术组,其余大鼠采用腹主动脉缩窄术建立CHF大鼠模型,成功造模60只大鼠随机分为CHF组、ATG低剂量组(ATG-L组,10 mg/kg)、ATG高剂量组(ATG-H组,20 mg/kg)、ATG+阴性对照(ATG+NC)组[20 mg/kg ATG+100μl高迁移率族蛋白B1(HMGB1)阴性对照质粒]、ATG+HMGB1组(20 mg/kg ATG+100μl HMGB1过表达质粒),每组12只。各组给予相应干预4周后,检测大鼠心功能、B型钠尿肽、N末端B型钠尿肽前体和炎性因子白细胞介素6、TNF-α水平、心脏质量指数和左心室质量指数、心肌组织病理变化、心肌细胞横截面积和心肌胶原体积分数、左心室心肌组织HMGB1/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,CHF组大鼠心肌组织HMGB1(0.42±0.05 vs 0.15±0.02)、TLR4(0.70±0.09 vs 0.21±0.04)蛋白水平和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)/NF-κB p65(0.73±0.09 vs 0.26±0.05)蛋白比值显著升高,LVEF、左心室短轴缩短率(LVFS)显著降低(P<0.05);与CHF组比较,ATG-L组和ATG-H组大鼠心肌组织HMGB1(0.33±0.04、0.24±0.04 vs 0.42±0.05)、TLR4(0.56±0.06、0.41±0.05 vs 0.70±0.09)蛋白水平和p-NF-κB p65/NF-κB p65(0.61±0.08、0.49±0.06 vs 0.73±0.09)蛋白比值依次降低,LVEF、LVFS依次升高(P<0.05);HMGB1过表达能明显减弱ATG对HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路和CHF大鼠心室重构、炎性反应的抑制作用(P<0.05)。结论 ATG可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号炎性通路,抑制了CHF大鼠的心室重构。

右美托咪定减轻大鼠肾缺血再灌注的机制及致肝损伤中的作用研究

目的探讨右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)减轻大鼠肾缺血再灌注的机制及致肝损伤中的作用研究。方法将60只雄性SD大鼠依据随机数字法分为3组:假手术组(Sham组)、肾缺血再灌注损伤(renal ischemia-reperfusion injury,RIRI)组和使用Dex预处理组,按照Dex剂量高低又分为低剂量组(12.5μg/kg),中剂量组(25μg/kg)和高剂量组(50μg/kg),每组12只。Sham组大鼠与RIRI组大鼠进行相同的手术,但不进行肾蒂封闭处理。RIRI组大鼠使用非创伤性血管钳封闭双肾蒂,导致其缺血,封闭45 min后开放肾蒂。Dex预处理各剂量组大鼠在手术前30 min分别腹腔注射12.5、25、50μg/kg的Dex。手术后取血离心,随后处死大鼠,并取出肝脏和肾脏,使用全自动生化仪检测各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,Elisa法检测血清和肝组织中白细胞介素(IL)-6和8、和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western Blot法检测肾组织中HMGB1、TLR4和NF-κB蛋白表达水平。所有实验数据中,组间计量资料比较采用配对t检验或方差分析,计数资料比较采用χ^(2)检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)与Sham组相比,RIRI组和Dex预处理各剂量组大鼠血清BUN、SCr及UA水平显著增高(P<0.01);(2)TNF-α、IL6、IL8在肝组织的表达水平,相较于Sham组,在RIRI组和Dex预处理剂量组中显著增高(P<0.01)。与RIRI组大鼠相比,Dex预处理组随着Dex剂量的增高IL-6、IL-8和TNF-α逐渐下降,其中低剂量组IL-6和TNF-α下降不明显,差异无统计学意义(P>0.01),而低剂量组的IL-8及中、高剂量组的明显下降,差异有统计学意义,IL-6、IL-8和TNF-α明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01);与Sham组相比,RIRI组和Dex预处理各剂量组大鼠血清IL-6、IL-8和TNF-α水平显著调高(P<0.01),差异有统计学意义。与RIRI组大鼠相比,Dex预处理组随着Dex剂量的增高IL-6、IL-8和TNF-α逐渐下降,差异均具有统计学意义(P<0.01);(3)TLR-4,HMGB1,NF-κB在大鼠肾组织的表达水平,相较于Sham组,在RIRI组和Dex预处理组中明显升高(P<0.01),差异有统计学意义。与RIRI组相比,在Dex预处理组,TLR-4、HMGB1、NF-κB的表达水平随着Dex剂量的升高而逐渐降低,降低水平变化都有统计学意义(P<0.01)。结论右美托咪定可减轻大鼠肾缺血再灌注所致的肝损伤,其机制可能与HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。