人单核细胞系THP-1中HMGN2的分离纯化及其抗菌活性

目的从人单核细胞系THP-1中分离与纯化HMGN2抗菌肽,应用微量琼脂糖弥散法检测抗菌活性,以探讨HMGN2分子的抗菌作用。方法采用HPLC分离纯化,琼脂糖弥散法筛选纯化有抗菌活性的组分,用Tricine-SDS-PAGE电泳初步测定其分子质量,以质谱法进行分子质量的精确分析。结果从人THP-1细胞中分离纯化出HMGN2抗菌肽,琼脂糖弥散法检测显示其对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抑菌活性,对大肠杆菌标准株ATCC25922和临床分离株54080亦有较强的抗菌活性,而对金黄色葡萄球菌ATCC25923未检测出抗菌活性。结论 HMGN2是一种抗菌分子,可能参与了体内的天然免疫防御作用。

HMGN2的重组表达质粒的构建及其抗菌功能研究

目的:构建HMGN2重组表达载体,探讨HMGN2分子抗菌作用。方法:用基因克隆的方法构建pET-32 a-c(+)-HMGN2重组表达质粒,经IPTG诱导表达后,用亲和层析的方法纯化H is-HMGN2融合蛋白,Tric ine-SDS-PAGE电泳鉴定其分子量,行琼脂糖弥散法检测其抗菌功能。结果:成功构建了pET-32 a-c(+)-HMG17重组表达质粒,其表达的融合蛋白对致病性大肠杆菌54080,54299以及金黄色葡萄球菌ATCC25923均有抗菌活性。结论:HMGN2是一种抗菌分子,可能参与了体内的天然免疫防御作用。

HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统的作用

目的研究HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统作用。方法用5%高氯酸萃取兔胸腺组织,通过反相高效液相色谱进一步分离纯化蛋白,用Tricine-SDS-PAGE、AU-PAGE和Dot-blot进行鉴定。采用凝胶迁移阻滞试验(EMSA)检测HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统的结合作用;平板菌落记数法检测TA系统激活或非激活条件下,菌体过表达重组HMGN2和对照组对细菌存活百分率的影响。结果HMGN2可阻滞mazEF基因的泳动速率,且随HMGN2浓度增加,阻滞作用增强。利福平激活TA系统,菌体过表达重组HMGN2后,与对照组比较细菌存活量减少约30%,有统计学差异。而头孢哌酮不能激活TA系统,过表达重组HMGN2组和空质粒组CFU%分别为70.2%、68.9%,两者无明显差异。结论HMGN2可加强mazEF系统介导的细菌程序性死亡;HMGN2对TA系统的作用也可能是其抗大肠埃希氏菌作用的机制之一。

人LAK细胞免疫效应分子HMGN2的鉴定

为分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)小分子抗菌多肽,应用制备尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化人LAK细胞酸溶性提取物,纯化出一个具抗菌活性的多肽HLP-3p21.蛋白质N端氨基酸测序、质谱精确分子质量测定、蛋白质印迹分析证明HLP-3p21为HMGN2.最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)试验证明HMGN2有抗大肠杆菌ML-35p氨苄青霉素耐药株、铜绿假单胞菌ATCC27853、白色念珠菌ATCC10231活性,无抗金黄色葡萄球菌ATCC25923活性.制备HMGN2多克隆抗体,应用免疫荧光化学、酶联免疫吸附测定和蛋白质印迹方法对HMGN2进行定位分析,证明单个核细胞经IL-2刺激成为LAK细胞时部分HMGN2由胞核转移至胞浆,进而分泌到胞外.提示HMGN2是LAK细胞一个新的免疫效应分子.

人单核细胞株THP-1中HMGN2的分离纯化

目的:从人单核细胞株THP-1中分离与纯化HMGN2抗菌肽,探讨HMGN2分子抗菌作用。方法:采用HPLC分离纯化,琼脂糖弥散法筛选纯化组分的抗菌活性,对活性组分进行Tricine-SDS-PAGE电泳初步测定分子量。结果:从人THP-1细胞中分离纯化出的HMGN2抗菌肽,对致病性大肠杆菌54080有抗菌活性。结论:HMGN2是一种抗菌分子,可能参与了体内的天然免疫防御作用。

人宫颈黏液HMGN2鉴定及在宫颈组织的表达

为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱分子质量测定证明,HCP-21为HMGN2,HCP-26为SLPI片段.提取原代培养宫颈上皮细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增出一条与HMGN2 cDNA大小相同(270bp)目的基因片段,表明在生理状况下,宫颈上皮细胞即可表达其mRNA.制备HMGN2多克隆抗体,对生理状态下宫颈组织切片和宫颈黏液涂片进行HMGN2分子免疫组化分析表明,该分子主要分布于子宫颈黏膜层,并存在于子宫颈黏液.HMGN2分子在宫颈黏膜上皮组织和黏液中固有表达,可能在子宫颈天然免疫防御中起重要作用.

LRRK2特异性调控溶菌酶的运输分泌促进肠道稳态

肠道共生菌在人体健康中发挥重要作用,近年来,有关肠道菌群的研究日益成为科学家们感兴趣的焦点.宿主和肠道菌群共同作用调节肠道内环境稳态,有关这其中复杂机制的探索,是揭示在长期的共进化过程中,肠道菌与宿主如何实现＂共生-互益＂的关键所在,对研究肠道菌异常引起的疾病的发病机制具有重要意义.中国科学院生物物理研究所刘志华课题组发现了共生菌通过Nod2-LRRK2-Rab2a途径介导潘氏细胞中溶菌酶的分拣来促进共生关系,