慢病毒介导HMGN5基因沉默对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的观察慢病毒介导的高迁移率族核小体结合域5(HMGN5)基因沉默对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并对其机制进行初步探讨。方法RT qPCR法检测人卵巢上皮细胞株IOSE及4株不同卵巢癌细胞中HMGN5的表达情况,将HMGN5 shRNA慢病毒载体转染至人卵巢癌细胞SKOV3中,RT qPCR和Western blot检测SKOV3细胞中HMGN5 mRNA和蛋白表达情况,MTT法检测沉默HMGN5基因对细胞增殖能力的影响,划痕实验检测沉默HMGN5基因对细胞迁移能力的影响,Tran swell实验检测沉默HMGN5基因对细胞侵袭能力;Western blot检测SKOV3细胞中PCNA、MMP 9、Wnt1和β 连环蛋白(β catenin)蛋白表达水平。结果与卵巢上皮细胞株IOSE相比,HMGN5在卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、HO 8910、Caov3中的表达明显升高(P<0.05)。与Blank组和NC组相比,sh HMGN5组SKOV3细胞中HMGN5 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显下降(P<0.05),细胞中PCNA、MMP 9、Wnt1和β catenin蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。结论沉默HMGN5可能通过阻碍Wnt/β catenin信号通路的激活抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力。

卵巢癌组织HMGN5基因表达与临床病理特征关系分析

目的:探讨卵巢癌组织中HMGN5基因的表达变化及与临床病理特征关系。方法:通过定量PCR和免疫组化方法检测卵巢癌组织和癌旁组织中HMGN5基因的mRNA和蛋白水平表达,分析其与卵巢癌患者临床病例特征关系。结果:卵巢癌癌旁组织(21例)HMGN5的mRNA表达低于卵巢癌组织(35例)(P<0.001)。在35例卵巢癌旁标本中有5例HMGN5蛋白表达阳性(14.3%),120例卵巢癌样本中有88例蛋白表达阳性(73.3%),两组间存在差异(P<0.001);HMGN5蛋白阳性表达与卵巢肿瘤大小、临床分期和生存状态有关(P<0.05),与卵巢癌患者年龄、组织学类型、肿瘤位置和病理分级等未见有关(P>0.05)。结论:HMGN5基因在卵巢癌组织中的表达可能为治疗提供一种临床检验指标。

HMGN5基因敲除对人膀胱上皮癌细胞顺铂化疗敏感性的影响

目的探讨HMGN5基因敲除对人膀胱上皮癌细胞顺铂化疗敏感性的影响。方法采用不同浓度CDDP(0、1、2、4,8、16μg/ml)处理人UBC细胞系,采用Western blot、菌落形成、细胞侵袭、细胞凋亡及Hoechst 33342染色法评价HMGN55蛋白敲除对UBC细胞CDDP敏感性的影响,同时分析HMGN5基因参与到UBC细胞CDDP治疗环节可能分子机制。结果 UBC细胞株5637、t24及UM-UC-3中HMGN5蛋白表达,其中5637细胞系HMGN5蛋白水平最高,而UM-UC-3细胞中最低(P<0.05);5637细胞系对CDDP敏感性显著低于其他两种(P<0.05),且UM-UC-3细胞系敏感性最高;UBC细胞系HMGN5敲除后P-Akt表达显著下降(P<0.05);CDDP处理后P-Akt活性亦随之降低(P<0.05);CDDP处理还可下调VEGF-C和SLUG表达,上调E-Cad表达(P<0.05);5637细胞HMGN5基因敲除后早期凋亡率显著提高,而加入IGF-1可逆转这一过程(P<0.05);与阴性对照组和IGF-1治疗组相比,HMGN5敲除组凋亡核百分比显著升高(P<0.05);与对照组相比,HMGN5基因敲除显著下调P-AKT和VEGF-C表达,上调E-Cad、细胞色素C、裂解半胱天冬酶-3、裂解PARP表达(P<0.05);而添加IGF-1可逆转以上蛋白质表达变化(P<0.05)。结论 HMGN5可能是顺铂治疗潜在靶点,抑制HMGN5基因有助于增加UBC细胞化疗敏感性,这一作用主要通过干扰PI3K/Akt信号通路实现。

肺癌组织HMGN5基因表达水平及与临床病理特征的相关性分析

目的:探讨肺癌组织中HMGN5基因的表达水平及与临床病理特征的相关性,为肺癌的诊断和治疗提供依据。方法:采用RT-PCR法检测HMGN5基因在观察组45例肺癌组织及对照组35例癌旁正常组织中的表达,分析HMGN5基因的表达水平与肺癌组织临床病理特征相关性。结果:观察组肺癌患者HMGN5基因转录m RNA水平明显高于对照组的癌旁正常组织,比较差异有统计学意义(P<0.05)。肺癌组织中HMGN5基因与性别、年龄以及肺癌的病理类型无显著相关性(P>0.05);与患者的病理分级和分期以及是否有淋巴结转移有着显著的相关性(P<0.05)。结论:肺癌组织中HMGN5基因的表达水平与临床病理特征显著相关,并与病理分级、淋巴结转移以及临床分期呈显著有关,这可能提示HMGN5基因的表达水平与肺癌的发生、发展有着密切的关系。

双氢睾酮与比鲁卡胺对前列腺癌LNCaP细胞系HMGN5基因和AR基因转录和表达的影响

目的探讨双氢睾酮(DHT)对前列腺癌LNCaP细胞系HMGN5基因和AR基因转录和表达的影响。方法用添加10%碳吸附胎牛血清的RPMI-1640(无酚红)培养基培养LNCaP细胞系24h后,加入不同浓度DHT(0、0.1、1、10、50、100nmol/L)和比卡鲁胺(Casodex)(20μmol/L)。定量反转录qRT-PCR检测LNCaP细胞中HMGN5和AR mRNA水平,免疫印迹法检测HMGN5和AR蛋白表达情况。结果用不同浓度DHT和Casodex培养激素依赖性前列腺LNCaP细胞系24h后,随着DHT浓度升高,LNCaP细胞中HMGN5和AR mRNA水平表达增高,组间差异有统计学意义。AR蛋白表达增高,HMGN5蛋白表达无明显差异。结论 DHT增强了雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞系中HMGN5 mRNA的表达,这种作用可以被比卡鲁胺减弱。

肺癌及癌旁组织HMGN5表达差异及临床病例特征相关性分析

目的研究肺癌组织中HMGN5基因的表达水平与患者临床病例特征的相关性。方法选择我院行肺癌手术切除患者共60例的肺癌及30例癌旁组织标本,采用Real-time PCR法进行HMGN5基因m RNA表达水平检测,分析肺癌组织中HMGN5基因的表达水平与患者临床病例特征的相关性。结果肺癌组织的HMGN5 m RNA阳性表达率与肿瘤组织学分化、肿瘤直径及TNM分期具有相关性(P<0.05),而与吸烟、年龄和肿瘤的浸润深度等无相关性(P>0.05);癌旁组织的HMGN5m RNA表达水平显著低于肺癌组织(P<0.01)。结论 HMGN5基因在一定程度上参与到肺癌发生发展过程,可作为一种新型的抗肿瘤治疗靶点,为药物研发及临床治疗提供参考。