miR-1抑制SDF-1表达和分泌调控HMSC-bm向肝癌细胞迁移

目的明确肿瘤抑制性micro RNA-1(miR-1)能否通过抑制SDF-1的表达和分泌,调控骨髓间充质干细胞(HMSC-bm)向肿瘤组织的转移。方法 (1)分别利用miR-1表达质粒pSuper-miR-1和miR-1反义寡核苷酸,在肝癌细胞系HepG2中过表达或下调miR-1,Western blot和酶联免疫吸附实验分别检测肝癌细胞蛋白裂解物和培养上清液中SDF-1的表达和分泌水平;(2)构建融合SDF-1 3'UTR的pGL3重组萤光素酶报告基因载体,将其与pSuper-miR-1共转染HEK293细胞,利用双萤光报告基因检测系统检测重组萤光素酶的表达情况。(3)利用pSuper-miR-1或miR-1反义寡核苷酸转染接种于Transwell下层小室的HepG2细胞过表达miR-1或下调miR-1水平,检测Transwell上层小室HMSC-bm向下层小室HepG2肝癌细胞的迁移情况。结果 (1)在肝癌细胞,HepG2过表达miR-1能够显著抑制SDF-1蛋白表达和分泌,而下调miR-1水平则能够诱导SDF-1的表达和分泌。(2)miR-1能够抑制携带SDF-1 3'UTR的pGL3重组萤光素酶报告基因活性。(3)在Transwell下层小室的HepG2细胞中过表达miR-1后,上层小室中HMSC-bm向下层小室迁移细胞数量显著减少,而下调下层小室HepG2细胞中miR-1表达水平,则明显增加HMSC-bm向HepG2肝癌细胞的迁移。结论 miR-1能够直接抑制肝癌细胞SDF-1的表达和分泌,并藉此降低肝癌细胞对HMSC-bm的趋化作用。

骨髓间充质干细胞在肺腺癌微环境中的遗传稳定性及增殖能力

目的探讨人骨髓间充质干细胞(HMSC-bm)在肺腺癌微环境中遗传稳定性的变化。方法通过6孔板结合Transwell小室建立HMSC-bm和肺腺癌A549细胞的共培养体系,倒置相差显微镜下观察细胞的形态;MTT法检测细胞的增殖能力;常规染色体及G显带核型分析细胞的染色体;Western blot检测组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)的表达。以单独培养的HMSC-bm,A549作为对照组。结果共培养组细胞胞核大而深染,可见病理性核分裂象,HMSC-bm组无明显变化;细胞增殖曲线呈S型,共培养组细胞于第4天开始增殖速率快于HMSC-bm组;共培养组染色体数目为亚三倍体、三倍体,有明显的染色体异常;共培养组细胞HDAC4表达明显高于HMSC-bm组(P<0.01)。结论肺腺癌微环境可改变HMSC-bm的增殖速率和其遗传稳定性。