亨氏马尾藻岩藻聚糖结构鉴定及其对氧化型低密度脂蛋白诱导HMVEC损伤的保护作用

【目的】探讨4种亨氏马尾藻岩藻聚糖的结构及其对氧化型低密度脂蛋白诱导HMVEC损伤的保护作用。【方法】以亨氏马尾藻岩藻聚糖(FD1)为原料,过Sepharose Cl-6B琼脂糖凝胶柱层析得到组分FS11,对FS11进行化学组成分析和单糖分析,测定F、FD1、FS1、FS11等4种岩藻聚糖的相对分子质量、糖链构象和红外光谱,进行结构鉴定;采用MTT法测定3种岩藻聚糖对HMVEC存活率的影响,研究4种岩藻聚糖对氧化型低密度脂蛋白诱导HMVEC损伤的保护作用。【结果】与F、FD1、FS1比,FS11硫酸基和多糖含量最高。FS11中岩藻糖含量高达52.744%;F、FD1、FS1、FS11的相对分子质量分布分别为474576、459032、201285、190049;I-KI紫外扫描和刚果红实验表明岩藻聚糖具有复杂树状分支和多股螺旋结构;红外光谱结果表明各组分均有O—H、C—H多糖特征官能团、S==O活性特征官能团;加药培养24 h,质量浓度为500μg/mL和1000μg/mL的4种岩藻聚糖(F、FD1、FS1、FS11)均能显著减弱受氧化型低密度脂蛋白损伤的HMVEC的增殖抑制(P<0.01)。【结论】尾藻岩藻聚糖对氧化型低密度脂蛋白诱导的HMVEC损伤具有保护作用。

柔毛水杨梅对人微血管内皮细胞增殖、迁移、成管能力的影响

【目的】研究柔毛水杨梅对人微血管内皮细胞增殖、迁移、成管能力的影响。【方法】将不同浓度（0~200 ng/m L）柔毛水杨梅作用于人微血管内皮细胞（HMVEC-Ls）,分别采用MTS法检测细胞的增殖活性,划痕法检测细胞的迁移能力,Matrigel法检测细胞的成管能力以及Western blot法验证低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、端粒酶逆转录酶（TERT）的表达水平。【结果】MTS结果显示：柔毛水杨梅与HMVEC-Ls共同培养7 d,25~200 ng/m L不同浓度组均可促进HMVEC-Ls增殖,与对照组（0 ng/m L）比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）,以100 ng/m L组促进HMVEC-Ls增殖能力最显著（P〈0.05）。划痕实验结果显示：与对照组比较,50~150 ng/m L组HMVEC-Ls迁移率显著增大,差异均有统计学意义（P〈0.05）,以150 ng/m L组HMVEC-Ls迁移率最高。成管实验结果：与对照组比较,50~150 ng/m L组HMVECLs成管长度显著增加,差异均有统计学意义（P〈0.05）,亦以150 ng/m L组HMVEC-Ls成管长度最大。Western blot检测结果：与对照组比较,150 ng/m L柔毛水杨梅浓度组HIF-1α、TERT和VEGF表达均显著升高（P〈0.05）。【结论】柔毛水杨梅可通过促进人微血管内皮细胞增殖、迁移、管样形成而发挥促血管新生效应,其机制可能与HIF-1α-TERT-VEGF途径介导的血管新生有关。

缺氧对人微血管内皮细胞HIF-VEGF-Notch信号通路的影响

目的观察缺氧对人微血管内皮细胞(HMVEC)中HIF-VEGF-Notch信号通路相关分子表达的影响。方法常规方法培养HMVEC细胞,低氧培养箱制备HMVEC缺氧模型,正常细胞作为对照组。采用Western Blot法检测HMVEC中HIF-1α及Notch-1的蛋白表达,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白表达水平。结果缺氧组和对照组细胞中Notch1蛋白表达分别为2.07±0.16和0.91±0.04,两者差异有显著意义(P<0.05);HIF-1α蛋白表达缺氧组为2.53±0.19,对照组为0.67±0.08,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组上清液中VEGF表达量为50.04±5.92 ng/L,缺氧组上清液中VEGF表达量为238.04±19.29 ng/L,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧可上调HMVEC细胞中HIF-VEGF-Notch信号通路相关分子的表达,此可能与重要脏器缺血缺氧性损伤后诱导的血管新生有关。

人源化YKL-40中和抗体(Rosazumab)体外阻断血管再生

目的:血管再生是实体肿瘤的生长和恶性转移的一个必须病理过程,阻断这一过程能够有效阻止恶性肿瘤的发生发展。YKL-40是血管再生因子,能刺激肿瘤的血管再生。本文探讨了一个原创性人源化抗YKL-40单克隆抗体(Rosazumab,命名为洛沙单抗)阻断YKL-40血管生成的体外功能。方法:Western Blot检测洛沙单抗对分泌和重组YKL-40蛋白的特异性结合;Western Blot及考马斯亮蓝染色检测该抗体的抗体特异性和纯度;Live/Dead染色试验检测抗体的细胞毒性。以人微血管内皮细胞(Human microvascular endothelial cells,HMVECs)为研究对象,引入重组YKL-40蛋白或脑胶质瘤细胞(Glioblastoma serum-differentiated cells,GSDCs)的条件培养基进行培养。Transwell试验检测该抗体对HMVECs迁移力的影响,并用Matrigel试验检测对微管形成的作用。结果:洛沙单抗可特异性结合YKL-40,考马斯亮蓝染色进一步证明其纯度及特异性。体外血管再生试验包括细胞迁移力和微管形成证明该抗体可以有效中和重组YKL-40蛋白及肿瘤细胞条件培养基中的YKL-40,抑制HMVECs的迁移和血管形成。结论:洛沙单抗是首创的人源化中和YKL-40的抗体,其特异性高,细胞毒性低,能显著抑制YKL-40血管再生功能,为下一步体内试验奠定基础。本研究可为YKL-40诱导的肿瘤血管生成及恶性肿瘤转移提供一种新的治疗手段。