PCR-SBT技术在人类粒细胞特异性抗原HNA-4、5基因分型中的应用

目的建立PCR-SBT技术对人类粒细胞特异性抗原HNA-4、5的基因分型方法。方法采用PCR-SBT方法对200名广州地区汉族健康献血者进行HNA-4、5基因分型,计算HNA-4、5的基因频率,进行Hardy-Weinberg平衡检验。结果广州地区汉族人群HNA-4a(+)与HNA-4a(-)基因频率分别为100.0%与0,HNA-5a(+)与HNA-5a(-)基因频率分别为85.5%与14.5%。结论应用PCR-SBT方法能够对HNA-4、5基因准确分型。

基于流式细胞特性的LNA和HNA细菌相关性研究

采用流式细胞技术分析了7种不同陆地环境介质中LNA和HNA细菌的浓度变化及流式细胞特性特征.结果显示,在水体和土壤等环境中都存在LNA和HNA细菌的分类,其中,土壤环境中LNA细菌浓度（107~108cells/g数量级）高于水环境中浓度（105~106cells/m L数量级）,但其相对比重（29.80%~33.94%）低于水环境（除地下水外,21.60%）中LNA细菌（42.25%~65.92%）,主成分分析（PCA）显示水体和土壤环境介质中LNA和HNA流式细胞参数具有明显差异;相关分析表明,LNA与HNA细菌的流式细胞参数（绿色荧光信号FL1和侧向散色信号SSC）之间具有显著相关性（FL1：R2=0.711,P〈0.01,SSC：R2=0.762,P〈0.01）,在不同生态系统中SSC变异大于FL1变异.结果表明,LNA和HNA细菌之间既不是各自对应的某一特殊生理阶段细菌,也不是两个完全相互独立的细菌群体,而是具有特殊共变关系的细菌.

人类粒细胞特异性抗原HNA-3系统PCR-SBT分型技术的建立及应用

目的建立PCR-SBT技术对人类粒细胞特异性抗原HNA-3进行基因分型。方法采用PCR-SBT方法对360名广州地区汉族健康献血者进行HNA-3测序基因分型。结果试验发现HNA-3(IVS7+76T/C)新的单核苷酸多态性(IVS+76T/C)。结论应用的PCR-SBT方法检测HNA-3基因敏感性高,重复性好;而且可具有准确、高通量、直接发现新的等位基因等特点。而且我们发现的单核苷酸多态性可以作为HNA-3基因分型的辅助依据。

广州地区无偿献血者HLA抗体及HNA-3a抗体检测分析

目的分析广州地区无偿献血者中与免疫性TRALI相关的HLA抗体及HNA-3a抗体,进而评估白细胞抗体阳性献血者捐献的血液成分对TRALI诱发的风险。方法运用HLA抗体筛选试剂盒,对随机抽取的845份无偿献血者标本进行HLA抗体筛查,并通过LSA1&LSA2试剂盒进行HLA抗体特异性鉴定,比较不同献血人群的HLA抗体发生率;利用HNA-3a转染细胞对HNA-3bb基因型标本进行HNA-3a抗体检测。结果广州地区845名献血者中HLA抗体阳性标本102份(12.07%),其中男性献血者为28/454(6.17%),已婚已育女性献血者为66/248(26.61%),未婚未育女性献血者为8/143(5.59%);已婚已育女性献血者的HLA-Ⅰ类抗体、HLA-Ⅱ类抗体、HLA-Ⅰ+HLA-Ⅱ类抗体及HLA抗体总体发生率均明显高于男性和未婚未育女性献血者(P<0.01),且多次生育女性的HLA抗体发生率明显高于单次生育女性献血者(P<0.01);对获得的28份HNA-3bb基因型献血者进行HNA-3a抗体检测,未见阳性标本。结论已婚已育女性献血者(尤其是多次生育女性)HLA抗体发生率较高,其所捐献的血液成分有诱导免疫性TRALI发生的高风险。因此,对已婚已育女性献血者开展HLA抗体及HNA-3a抗体筛查可避免用血紧张,提高输血安全。

广州地区血小板多次输注患者HNA抗体分析

目的分析广州地区多次输注血小板患者血清中的HNA抗体,进而评估白细胞抗体阳性受血者对TRALI诱发的风险。方法运用HNA抗体的Luminex筛选试剂盒及HNA-SSP试剂盒,对2016年1—12月期间在广州血液中心多次申请血小板的84名患者的血清进行HNA抗体检测,并对抗体阳性的标本进行抗原分型,分析其抗体存在情况。结果经与HNA抗原的基因分型结果进行综合分析后,在该84名多次申请血小板输注的患者中共发现HNA抗体阳性患者7人,占8.3%（7/84）。其中有2例抗-HNA1a阳性（2.3%）,1例抗-HNA1b阳性（1.2%）,1例抗-HNA3a阳性（1.2%）、3例抗-HNA3b阳性（3.6%）、1例抗-HNA5b阳性（1.2%）。结论对于多次输注血小板的患者而言,患者其血清中存在的HNA抗体同样可以诱导免疫性TRALI的发生,因此对多次输注血小板的患者进行HNA抗体的检查是十分必要的。

汉族、壮族人群人类粒细胞抗原HNA-1~5的基因多态性分布

目的通过人群的HNA基因多态性的调查,了解人群各HNA抗原的分布情况,推测该人群中可能参与免疫性粒细胞减少症的主要HNA抗原。方法本研究采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）方法对无血缘关系的647名健康汉族人和328名健康壮族人进行HNA-1~5的基因分型和多态性研究,调查了解汉族和壮族人群中HNA-1~5的基因频率多态性分布。结果在HNA-1系统,HNA-1a是汉族（0.6893）和壮族（0.7454）人群的高频率等位基因,与欧洲、南美洲、非洲等以HNA-1b为高频率等位基因的地区人群有着明显的差异,汉族和壮族人群中均未发现HNA-1c等位基因个体存在;在HNA-2 SNP 42C/G中,42C是汉族（0.697 1）和壮族（0.724 1）人群中频率较高的等位基因;在HNA-3,HNA-3a和3b基因频率在汉族和壮族人群中分别为0.687 0/0.313 0和0.739 3/0.260 7,汉、壮族人群的HNA-3等位基因频率分布与德国及土耳其等人群无差异;在HNA-4中,HNA-4b是汉族（0.007 0）和壮族（0.019 8）人群的罕见基因,在这2个人群中均未发现HNA-4bb纯合子基因型个体;在HNA-5中,HNA-5a和5b等位基因频率在汉族和壮族人群分别为0.819 9/0.180 1和0.783 5/0.216 5。汉族与壮族人群HNA各等位基因频率分布比较,除HNA-2,-5的等位基因频率分布无差别外,HNA-1,-3,-4的各等位基因频率分布均不同。结论与其它地区人群比较,汉族、壮族人群HNA基因频率分布均有着各自的独特特征,本研究数据将有助于我们了解汉族和壮族人群中HNA的免疫学特征。

初步探讨中国广东人群的中性粒细胞CD177基因型和HNA-2a的表达

目的:探讨中国广东人群的中性粒细胞CD177基因型和HNA-2a的表达及分布情况。方法:采用PCR-SBT方法和流式细胞技术分别对83例广东籍无偿献血者的CD177基因型和HNA-2a的表型进行检测,并结合SNPs、年龄及性别这几个影响因素进行统计学分析,经T-检验和单因素方差分析,若P值<0.05,认为有统计学意义。结果:83例样本的CD177基因型以42C/C和42C/G为主,分别为40例(占48.19%)和37例(占44.58%);42G/G基因型较少,仅6例(占7.23%)。83例样本HNA-2a的表达量均大于5%(mean±SD为61.37%±17.87%)。经T-检验,HNA-2a的表达量在女性与男性之间无明显差异(P>0.05),且女性随着年龄的增加HNA-2a的表达量无明显变化(P>0.05)。对于CD177基因的G42C多态性对HNA-2a表达的影响,经单因素方差分析:42C/C与42G/G基因型之间,中性粒细胞HNA-2a表达的MFI存在明显差异(5.16±1.56vs.3.93±0.84,P<0.05)。结论:中国广东人群的CD177基因型有其自身特点,并且中性粒细胞HNA-2a的表达受多种因素的影响,表现为明显的个体差异,其中SNPs(G42C)是影响HNA-2a表达量的因素之一。

广州地区汉族人群HNA-1基因频率分布的研究

目的了解广州地区汉族人群HNA-1基因的多态性及频率分布情况。方法采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)对150名广州地区汉族健康献血者作HNA-1基因分型,计算HNA-1等位基因频率并进行Hardy-Weinberg平衡检验;将结果与国内外部分数据比较。结果广州地区汉族人群HNA-1a、1b等位基因频率分别为0.713、0.287,未发现HNA-1c等位基因;人群基因型以HNA-1aa(50%)纯合子和HNA-1ab(43%)杂合子为主要表达形式;广州地区汉族人群HNA-1基因频率与浙江汉族、西藏藏族、大连汉族、西北回族、日本、韩国、德国、西班牙人群比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论得出了广州地区汉族人群HNA-1的基因频率的分布情况,为临床上相关疾病的诊治和预测提供一定的实验数据基础。

人HNA-3a基因的克隆及其在HEK-293细胞的表达

目的:构建人HNA-3a基因全长的真核表达载体,探索一种检测抗人HNA-3a抗体的实验方法,观察HNA-3a蛋白表达情况。方法:参照GeneBank中人HNA-3a基因序列,设计并合成引物,采用RT-PCR方法反转录HNA-3a基因外显子片段全长,定向克隆到pEGFP-N3载体中,然后采用Lipofectamine^(TM) 2000试剂将含目的基因的pEGFP-N3表达载体转染至HEK-293细胞中进行稳定表达,并以免疫荧光和蛋白质免疫印迹法(WB)鉴定目的基因的表达情况。结果:免疫荧光和免疫印迹结果显示,目的基因在HEK-293细胞中获高效表达。结论:成功构建了高效表达HNA-3a蛋白的真核表达载体,为检测人血浆中抗HNA-3a抗体奠定了基础。

1株广谱拮抗植物病原真菌的芽孢杆菌HNA3的鉴定及其活性成分分析

采用形态观察、16S rDNA序列和部分特异基因排列分析鉴定从植物根际土壤中分离的1株根际细菌HNA3;采用平板对峙试验和抑菌率计算方法测定其对供试植物病原真菌的拮抗谱和拮抗能力;通过摇瓶发酵和酸沉淀方法研究相关抗菌活性物质的产生条件及其分离方法;采用表面活性检测和有关功能编码基因的序列分析初步鉴定抗菌活性物质成分的性质。结果表明:HNA3菌株为1种解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefa-ciens;BPY(牛肉膏蛋白胨酵母粉)培养基是适合HNA3生长和产生相关抗菌活性物质的适宜培养基;活性物质存在于发酵除菌液中,可通过酸沉淀方法分离获得。活性物质具有较高的稳定性和抗逆性,属于脂肽类物质。本研究结果表明HNA3具有较广谱的拮抗植物病原真菌的能力,具备研发成为一种表面喷施型微生物杀菌剂的特性和应用前景。

潍坊地区无偿献血者HLA抗体和HNA抗体检测情况分析

目的:通过随机抽样检测潍坊地区无偿献血者血清HLA抗体及HNA抗体阳性率,评估在潍坊献血人群中开展HLA及HNA抗体筛查的必要性。方法:随机选取有输血、妊娠、移植等免疫史的无偿献血者208例作为实验组,选取无上述免疫史的无偿献血者168例作为对照组,运用流式荧光微珠法对两组标本进行HLA抗体和HNA抗体检测,运用统计分析方法比较两组献血者HLA抗体和HNA抗体的阳性率。结果:实验组208例献血者中HLA抗体阳性47例(22.60%),HNA抗体阳性4例(1.92%)。对照组168例献血者中HLA抗体阳性1例(0.60%),HNA抗体阳性2例(1.19%)。两组比较HLA抗体阳性率实验组明显高于对照组(P<0.05);HNA抗体阳性率无显著性差异(P>0.05)。结论:有输血、妊娠、移植等免疫史的献血者HLA抗体阳性率高于无相关免疫史的献血者,其所捐献的血液成分有诱导免疫性TRALI发生的高风险。对此类献血者开展HLA抗体筛查,对筛查阳性的相关血液产品进行必要的处理,有利于提高临床输血安全。应增加检测例数进一步了解潍坊地区无偿献血人群HNA抗体携带情况。

GPLE 失活动力学模型在 HNaβ 沸石上的应用

研究了环氧丙烷与乙醇在ＨＮａβ沸石上的反应动力学以及失活动力学，证明反应动力学为一级；在８小时后反应活性出现稳定现象。可以用一级ＧＰＬＥ模型较好地拟合实验结果。

中药复方提取物HNA-1对SIV慢性感染恒河猴胸腺输出及胸腺细胞发育的影响

目的探讨中药复方提取物湘A-1号方（HNA-1,湖南省艾滋病防治小组推荐免费使用的两个中药复方之一的提取物）治疗HIV-1感染及艾滋病（Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS）的疗效机制。方法用8只已感染猴免疫缺陷病毒SIVmac239 16-21个月的中国恒河猴,治疗组采用2个月的HNA-1治疗;对照组给予等体积生理盐水灌胃。在预设时间点采集外周血提取DNA,采用定量PCR检测T细胞受体重排删除环（T cell receptor excision circles,TRECs）来评价胸腺输出功能;并用酶消化法分离胸腺细胞,利用流式细胞术检测胸腺内CD34＋前体细胞、CD4^＋T细胞发育各阶段的比例改变。结果与模型对照组比较,HNA-1治疗组胸腺细胞输出明显增加（P〈0.05）;且胸腺内CD34^＋Lin-细胞比例明显增加（P〈0.05）,胸腺双阳性T细胞（Double positive,DP）Ⅱ阶段比例减少,而DPⅢ和DPⅣ阶段比例均增加。结论 HNA-1对艾滋病的疗效可能与其能显著增加胸腺输出有关;其作用机制可能涉及增加胸腺内前体细胞数量、以及促进胸腺细胞细胞从DPⅡ阶段发育至DPⅢ等。

基于HNA溶液腐蚀的微半球谐振陀螺研究进展

基于微电子机械系统(MEMS)加工技术的微半球谐振陀螺在吸收了传统半球陀螺全角测量优势的同时具有体积小,质量轻,成本低以及适合批量化生产的特点。在使用牺牲层法来制备微半球壳层结构的过程中,如何在单晶硅上制作一个表面光滑的、结构整体对称性高的半球型模具对于半球谐振子的性能有决定性的影响。在HNA(氢氟酸、硝酸、醋酸)各向同性腐蚀液制作微半球谐振子模具的原理基础上,介绍基于HNA溶液各向同性腐蚀的微半球谐振陀螺研究进展,指出了各向同性腐蚀工艺目前所面临的主要技术问题,并对此提出了一些可能的解决途径。

生防放线菌HNA30的固体发酵条件

为生防放线菌HNA30的生产应用提供依据,通过单因素试验和正交试验对其固体发酵条件进行优化。结果表明:固体发酵的最佳基质为麦麸,最佳碳源为淀粉,最佳氮源为酵母提取物;菌株HNA30固体发酵的最佳条件为淀粉50mg/g、酵母提取物30mg/g、初始含水量400mg/g、接种量0.35mL/g、培养时间168h;该条件下,HNA30的固体发酵产孢量达1.07×10^(10) cfu/g。

云南壮族、苗族、纳西族人群HNA-3基因多态性分布

目的了解云南地区献血者中少数民族人群的人类中性粒细胞抗原-3（HNA-3）的分布频率。方法从2012年1月—2014年1月在昆明血液中心献血的云南本地无血缘关系的健康献血者外周血标本中,筛选出壮族196（人）份、苗族209（人）份和纳西族187（人）份,采用血液基因组DNA提取试剂盒提取其DNA,以PCR-SBT方法对其HNA-3作基因分型,利用SPSS 20.0统计学软件分析3个民族的HNA-3等位基因分布频率。结果本组云南壮族、苗族和纳西族献血人群的HNA-3a/a基因型频率分别为0.59（115/196）、0.48（101/209）和0.45（85/187）,HNA-3a/b分别为0.35（69/196）、0.43（90/209）和0.46（86/187）,HNA-3b/b分别为0.06（12/196）、0.09（18/209）和0.09（16/187）,HNA-3a分别为0.76（298/392）、0.66（276/418）和0.68（254/374）,HNA-3b分别为0.24（94/392）、0.34（142/418）和0.32（120/374）;云南壮族HNA-3b/b基因型频率明显低于云南苗族和纳西族人群（P〈0.05）。结论本组云南3个目标民族人群中HNA-3等位基因频率的分布存在多态性;云南本地苗族和纳西族人产生抗-HNA-3a的风险可能要高于壮族人。

HNA-3在中国3个民族中的分布

目的研究四川汉族,西藏藏族和凉山彝族中HNA-3的分布频率,并比较产生抗-HNA-3a的理论风险。方法收集600例无偿献血员外周血标本,包括四川汉族献血者232例,西藏藏族献血者224例,凉山彝族献血者144例,采用PCR-SBT测序法对HNA-3进行分型。直接计数法计算基因型和等位基因频率。结果 HNA-3a和HNA-3b等位基因的频率分别在四川汉族人群为0.65和0.35,西藏藏族人群为0.66和0.34,凉山州彝族人群为0.60/0.40,3组之间没有统计学差异。基因型HNA-3a携带者(HNA-3a/a及HNA-3a/b)和HNA-3b/b分别在四川汉族人群为0.89和0.11,西藏藏族人群为0.88和0.12,凉山州彝族人群为0.81和0.19,汉族HNA-3b/b携带者显著低于彝族(P<0.05)。结论彝族产生抗-HNA-3a的可能性比汉族和藏族大,汉族和藏族产生抗-HNA-3a的可能性相当,该数据为不同地区产生抗-HNA-3a的可能性提供一定数据支持。

中药复方提取物HNA-1治疗猴免疫缺陷病毒感染的实验研究

目的:研究中药复方提取物HNA-1治疗猴免疫缺陷病毒(SIV)感染的作用。方法:采用SIVmac239毒株静脉感染15只中国恒河猴,待感染10周病毒载量进入平台期后,将动物随机分为高剂量组、低剂量组和模型对照组,分别灌胃给予1.8g.kg-1.d-1和0.6g.kg-1.d-1HNA-1药物以及等容量温开水;给药治疗8周,之后停药观察8周。观察、检测动物的一般情况、血浆病毒载量、CD4+和CD+8T细胞、血细胞学和活检淋巴结病理改变等。结果:模型对照组在观察期间有2例动物死亡,而治疗组动物均存活;且治疗组动物在体质量、CD4+T细胞数上均显著优于模型对照组(P<0.05);活检淋巴结病理检查显示,治疗组动物淋巴组织保存较好,部分原本淋巴组织结构已发生退变甚至耗竭的动物,经治疗后出现了恢复。结论:中药复方提取物HNA-1虽然不能直接起到抗SIV的作用,但可以提高动物体质量、减少动物死亡、提高CD4+T细胞数、改善淋巴结组织结构的病理退变,对SIV感染导致的免疫系统破坏具有一定的保护作用。

不同人群HLA、HNA抗体检出情况分析

目的:探讨多次输血者,TRALI疑似患者,正常献血者等三类人群机体内与免疫性TRALI相关的HLA抗体和HNA抗体种类及其水平的概况。方法:利用HLA和HNA检测试剂盒对100例三组人群进行HLA抗体和HNA抗体检测以及特异性的鉴定。结果:多次输血者中检出HLAⅠ类抗体24例(72.73%),检出HLAⅡ类抗体21例(63.64%);TRALI疑似患者检出HLAⅠ类抗体7例(15.56%),检出HLAⅡ类抗体12例(26.67%);正常献血者检出HLAⅠ类抗体4例(18.18%),检出HLAⅡ类抗体2例(9.09%)。三类人群共检出有HNA抗体的标本20例,其中多次输血者11例(33.33%),TRALI疑似患者检出HNA抗体7例(15.55%),正常献血者检出HNA抗体2例(9.10%)。结论:在多次输血者中HLA抗体和HNA抗体发生率最高,其次是TRALI疑似患者,正常献血者最低。因而在临床实践中,需重视对多次输血者和TRALI(疑似)患者HLA抗体和HNA抗体的筛查工作,从而保障用血安全。

LNA和HNA细菌在反硝化过程中的迁移特征分析

低核酸(low nucleic acid,LNA)和高核酸(high nucleic acid,HNA)细菌在不同环境条件下表现出不同特性,当前尚不清楚反硝化过程对细菌的影响。为此,通过对不同反硝化条件下游离态的LNA和HNA细菌沿程变化情况及相关细菌群基因测序分析,发现游离菌在反硝化过程中会快速增多,且反硝化速率越大,增速越高。结果显示:反硝化时LNA细菌比HNA细菌更快脱离污泥絮体,只有在反硝化达到一定程度,使絮体结构疏松甚至破碎时HNA细菌才会表现出快速增多,由此推测低核酸(LNA)细菌位于污泥表面或者填充于絮体之间,而高核酸(HNA)细菌是污泥絮体的骨架部分。淀粉在反硝化时会因其网捕作用使游离菌减少,但乙酸钠的反硝化作用比淀粉的网捕作用对游离菌的影响更为显著。同时HNA细菌具有较高的丰度和多样性,是主要功能菌,而LNA细菌对反硝化反应能做出更快的响应,可作为反硝化启动的指示参数。