miR-125b-2-3p表达对鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-125b-2-3p表达对鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR检测miR-125b-2-3p在人永生化鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞中的表达。荧光定量PCR检测上调和下调miR-125b-2-3p表达转染效率。实验分为control组(未处理)、mimics NC组(Lip 2000+mimics NC)、miR-125b-2-3p mimics组(Lip 2000+miR-125b-2-3p mimics)、inhibitor NC组(Lip 2000+inhibitor NC)和miR-125b-2-3p inhibitor组(Lip 2000+miR-125b-2-3p inhibitor)。CCK-8实验、细胞集落形成实验和活细胞/死细胞双染色实验检测细胞增殖的情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;DAPI细胞核染色检测细胞核的形态变化;线粒体膜电位检测细胞早期凋亡情况。结果与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,鼻咽癌细胞中miR-125b-2-3p的表达较高(P<0.05)。与control组和mimics NC组相比,miR-125b-2-3p mimics组miR-125b-2-3p表达上调(P<0.01);与control组和inhibitor NC组相比,miR-125b-2-3p inhibitor组miR-125b-2-3p表达下调(P<0.01)。与mimics NC组相比,miR-125b-2-3p mimics组细胞增殖能力较强(P<0.01),细胞凋亡能力较弱(P<0.01),线粒体膜电位较高(P<0.01);相较于inhibitor NC组,miR-125b-2-3p inhibitor组细胞增殖能力被抑制(P<0.01),细胞凋亡能力较强(P<0.01),核固缩核碎裂较多,线粒体膜电位较低(P<0.05)。结论下调miR-125b-2-3p能抑制鼻咽癌细胞HNE1的增殖,促进细胞的凋亡。

重组质粒pLMP1-p53mt在人鼻咽癌HNE1和人宫颈癌HeLa细胞中的表达分析

目的:研究重组质粒pLMP1-p53mt中EB病毒LMP1基因和突变型p53(p53mt)基因在HNE1和HeLa细胞中的体外表达。方法:体外培养人鼻咽癌细胞株HNE1和人宫颈癌细胞株HeLa,采用脂质体lipofectAMINETM2000介导将重组质粒pLMP1-p53mtDNA转染细胞,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Sourthernblot法分析p53mt基因和LMP1基因的表达情况。结果:经重组质粒pLMP1-p53mt转染的HNE1和HeLa细胞中检测到了p53mt基因和LMP1基因的表达。结论:重组质粒pLMP1-p53mt的LMP1基因和p53mt基因能分别在EDL-2启动子和CMV启动子控制下表达。该质粒可进一步用于转基因动物的制备和基因功能研究。

细胞角蛋白13通过PTEN抑制PI3K/AKT/mTOR通路增强鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性

目的:探讨细胞角蛋白13(cytokeratin 13,CK13)对鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法:将HNE1细胞分为对照组、anti-CK13#a组及anti-CK13#b组(敲减CK13)、对照组+西罗莫司处理组(100 nmol/L的西罗莫司处理1 h)、anti-CK13#a+西罗莫司处理组(100 nmol/L的西罗莫司处理1 h),经放疗处理(200 c Gy/min剂量照射5 min)后,用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力,用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,q PCR法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关基因PTEN的表达,WB法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:经放疗处理后,与对照组相比,敲减CK13后HNE1细胞增殖能力明显增强(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01);细胞中c-caspase-3和γH2AX的表达明显降低(均P<0.01)、p-AKT和p-S6K表达明显升高(P<0.01)、PTEN蛋白表达明显降低(P<0.01)。敲减CK13+西罗莫司(PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂)处理可以回复敲减CK13导致的细胞增殖能力增强(P<0.05)和细胞凋亡率降低(P<0.01)。结论:敲减CK13通过下调PTEN蛋白水平进而增强PI3K/AKT/mTOR信号通路活性,最终降低HNE1细胞的放疗敏感性。

抑瘤基因NGX6对鼻咽癌细胞株HNE1细胞生长的影响(英文)

鼻咽癌是我国南方多发恶性肿瘤 ,它的发生发展与遗传因素密切相关 .采用定位候选克隆策略在 9p上克隆出一个候选抑瘤基因 ,命名为NGX6 .为了进一步研究它的功能 ,将NGX6基因的全长cDNA片段亚克隆至pcDNA3.1(+ )的表达载体中 ,通过脂质体转染入鼻咽癌细胞系HNE1中 ,Northern杂交方法筛选高效表达NGX6的细胞株 ,并借助细胞生长曲线、软琼脂糖集落形成实验、裸鼠体内接种实验和流式细胞仪对转染细胞的生物学行为进行了检测 .结果显示 ,转染了NGX6基因的HNE1细胞的生长速度明显减慢 ,在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降 (P〈0 0 5 ) ,裸鼠体内成瘤的时间较对照组明显延长 ,瘤体的大小和重量较对照组明显减少 ,流式细胞仪检测发现细胞的凋亡率无明显变化 .为了明确NGX6蛋白在细胞中发挥作用的部位 ,进一步将NGX6的开放阅读框架完整正确地克隆到pEGFPC1的荧光载体中 ,转染到COS7细胞中 ,用荧光显微镜观察细胞中荧光的分布 ,发现荧光主要分布在细胞浆中 ,说明NGX6蛋白可能是一种胞浆蛋白 .该研究表明 ,NGX6在NPC的发生发展中起重要作用 ,为全面阐述NGX6的功能提供重要的信息 。

LPLUNC1基因对鼻咽癌细胞HNE1生长增殖的抑制作用研究

LPLUNC1在正常的鼻咽组织及人胚鼻咽组织中高表达,而在71%的鼻咽癌中表达下调或缺失,是与鼻咽癌的发生发展密切相关的新基因.通过研究LPLUNC1基因对鼻咽癌细胞系HNE1的影响,进一步确定其与鼻咽癌发生发展的关系.将LPLUNC1基因全长cDNA克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,通过脂质体介导稳定转染入LPLUNC1低表达鼻咽癌细胞系HNE1中,通过RT-PCR及RNA印迹筛选LPLUNC1高表达的细胞株,并利用细胞生长曲线、MTT、BrdU掺入、流式细胞仪检测、软琼脂集落形成实验及裸鼠成瘤等实验,研究了LPLUNC1对鼻咽癌细胞系HNE1细胞生长、增殖的影响.结果发现,稳定转染LPLUNC1的HNE1细胞的生长速度明显减慢,在MTT与BrdU掺入实验发现LPLUNC1可明显地抑制鼻咽癌细胞的增殖,并且通过流式细胞仪检测也发现,LPLUNC1基因可明显延缓HNE1细胞的细胞周期进程,使G0/G1期细胞增多而S期细胞相对减少.进一步通过软琼脂集落形成及裸鼠成瘤实验发现,LPLUNC1稳定转染后的HNE1细胞集落形成率与集落的大小均小于空白载体细胞,同时能明显地抑制HNE1细胞的体外成瘤.结果表明,LPLUNC1基因能明显抑制鼻咽癌细胞HNE1的生长增殖,是鼻咽癌发生发展中的重要候选抑瘤基因之一.

放射线联合人血管内皮生长抑素对HNE1鼻咽癌移植瘤生长抑制作用

目的:研究放射线联合重组人血管内皮生长抑素(Endostatin)对HNE1鼻咽癌移植瘤生长、转移的抑制作用。方法:应用裸鼠建立HNE1移植瘤模型;待瘤体平均体积达627mm3±47mm3,40只裸鼠随机分成治疗组:单独放疗(RT)组,单用Endostatin组,单次20Gy照射后+连续使用Endostatin 14天组,连续使用Endostatin 14天后+单次20Gy照射组和空白对照组;绘制肿瘤生长曲线;取瘤体用免疫组化检测乏氧诱导因子-α(HIF-α)和微血管内皮CD34的表达,观察肿瘤乏氧及其微血管密度的变化。结果:与空白对照组比较,照射20GY后+连续Endostatin 14天组,其照射后20天抑瘤率84.79%,而先用Endostatin组+后照射组及单独照射组,单独使用En-dostatin(使用完14天以后的第7天)组的抑瘤率分别是83.91%,64.95%,19.47%;其中各放射治疗组的减瘤率分别为44.1%,54.1%和18.1%(P=0.000);使用Endostatin联合放射线及单用Endostatin组,肿瘤新生血管减少,HIF-α表达降低。结论:放射线联合Endostatin的策略,其肿瘤控制率优于单用Endostatin或单用放射线,且能明显抑制HNE1鼻咽癌移植瘤生长和转移。照射后使用Endostatin可以在较短的时间获得较好的局部控制率;而先给予Endostatin再照射具有明显的放射增敏作用,可获得较长的再生长延缓时间,但两者的长期疗效无明显统计学差异(P=0.077)。提示采用分割照射方案同时加用Endostatin可能会取得更好的临床疗效。

茶多酚对鼻咽癌HNE-1及HNE-1(200)细胞株增殖抑制作用研究

目的研究天然有效成分茶多酚对鼻咽癌HNE-1及HNE-1(200)细胞株增殖的抑制作用。方法本研究以鼻咽癌HNE-1细胞株和HNE-1(200)耐药细胞株为研究对象,采用MTT法测定茶多酚对两组细胞的增殖抑制率。结果茶多酚对两组实验细胞均有抑制作用,且这种作用呈浓度依赖关系;茶多酚对两种细胞株的抑制率没有显著差别。结论茶多酚对鼻咽癌耐药细胞株和非耐药细胞株均有相似而明显的增殖抑制作用,这为茶多酚的进一步研究和应用打下了基础。

KAI1基因对人鼻咽癌细胞株HNE-1增殖、侵袭及转移能力的影响

目的:研究转移抑制基因KAI1对人鼻咽癌细胞体外增殖、侵袭及转移能力等生物学效应的影响。方法:通过腺病毒载体将KAI1基因转染人鼻咽癌细胞株HNE-1,RT-PCR法检测转染效果;MTT法检测鼻咽癌细胞转染KAI1基因后体外增殖能力的变化;FCM法检测细胞生长周期分布;Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力的改变;细胞同质黏附实验检测细胞黏附力的变化。结果:当腺病毒载体rAd-KAI1效价为30 MOI时,对HNE-1细胞的转染率可达92%;转染48和72 h时,rAd-KAI1转染组细胞的增殖明显受到抑制,抑制率分别为17%和30%;G0/G1期细胞数量较对照组增多,S期细胞数量减少;转染组的穿膜细胞数为(52.5±4.2)个,明显低于对照组的(167.4±3.5)个,差异有统计学意义(P<0.05);转染组的细胞同质黏附作用高于对照组(P<0.05)。结论:腺病毒载体成功介导了抑癌基因KAI1转染进入鼻咽癌HNE-1细胞,并取得较高的转染率。KAI1基因可能通过阻滞HNE-1细胞生长周期,从而抑制细胞增殖。KAI1基因能够抑制HNE-1细胞侵袭能力,其机制可能为KAI1基因增强了鼻咽癌细胞的黏附力所致。

HNE1细胞株光动力学治疗前后形态学的动态变化

目的 探讨体外光动力学治疗 (PDT)引起鼻咽癌 (NPC)细胞死亡的作用机制。方法 对鼻咽癌细胞株HNE1体外光动力学治疗前后形态学变化进行动态观察。结果 对照组HNE1细胞培养 3h ,6h ,12h ,2 4h和 4 8h后细胞形态与正常培养组HNE1细胞形态相比较无明显改变。PDT 12h后 ,实验组HNE1细胞开始变形皱缩 ,细胞界限模糊 ,细胞透光度和立体感较差 ,治疗 2 4～ 4 8h后细胞发生凋亡。结论 体外光动力学治疗对HNE1具有明显的杀伤效应并诱导HNE1细胞凋亡。

脂质体阿霉素对人鼻咽癌HNE-1细胞株增殖与凋亡作用的研究

目的:研究脂质体阿霉素对人鼻咽癌HNE-1细胞株增殖抑制和凋亡作用的影响。方法:本研究以人鼻咽癌HNE-1细胞株为研究对象,以游离阿霉素为对照,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定脂质体阿霉素对HNE-1的细胞毒作用;分别采用倒置显微镜和TUNEL法检测脂质体阿霉素作用于HNE-1细胞后细胞凋亡的形态学变化和细胞凋亡率。结果:脂质体阿霉素对HNE-1细胞的IC50是游离阿霉素的1/3倍;与游离阿霉素组相比较,倒置显微镜观察脂质体阿霉素组,发现该实验组细胞出现细胞凋亡形态学变化;脂质体阿霉素和游离阿霉素分别作用于HNE-1细胞的凋亡指数分别为11.27%±0.33%、43.57%±3.14%。结论:本实验研究显示,与游离阿霉素相比较,脂质体阿霉素对人鼻咽癌HNE-1细胞株具有较好的体外增殖抑制作用,能够诱导HNE-1细胞凋亡。

益气解毒颗粒干预鼻咽癌细胞HNE1蛋白质表达的研究

目的 探讨中药复方益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞杀伤作用的分子机制。方法 筛选益气解毒颗粒药液对鼻咽癌杀伤的半抑制浓度(IC_(50)),用0.1倍半抑制浓度(0.1×IC_(50))的益气解毒颗粒作用鼻咽癌细胞HNE1 96h,用固相pH梯度双向凝胶电泳分离益气解毒颗粒处理和未处理的鼻咽癌细胞HNE1的总蛋白质,银染显色,PDQuest 2-de软件分析差异蛋白质点。结果 益气解毒颗粒药液杀伤鼻咽癌细胞HNE1的半抑制浓度为6.25mg/ml;双向电泳图像分析益气解毒颗粒药物处理组图像的平均蛋白质数为1120±89,未处理组的平均蛋白质数为1281±102;差异蛋白质有673个,其中有218个表达增强,有455个蛋白质表达下降。结论 益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞的杀伤作用这些差异表达蛋白质有关,这些差异蛋白质有待质谱分析鉴定,为中药作用的分子机理研究提供了新的思路。

茶多酚和粉防己碱联合抗肿瘤药物对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)增殖的抑制作用

目的研究天然有效成分茶多酚(TP)和粉防己碱(TET)分别联合4种常见抗肿瘤药物对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)增殖的抑制作用。方法以鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)为研究对象,用MTT法测定无毒剂量的TP和TET分别联合顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)对实验细胞的增殖抑制率。结果无毒剂量的TP分别与4种抗肿瘤药物联合应用后,药物对HNE-1(200)细胞的抑制率增加约200%;无毒剂量的TET分别与4种抗肿瘤药物联合应用后,药物对HNE-1(200)细胞的抑制率增加约300%。结论无毒浓度的天然药物TP、TET分别与抗肿瘤药物联合应用能提高药物对鼻咽癌耐药细胞株的增殖抑制率,降低药物的IC50。

p33^(ING1b)对鼻咽癌细胞HNE1增殖的影响

背景与目的:作为ING1的一种主要表达产物,p33ING1b蛋白结合和稳定p53后诱导肿瘤细胞周期阻断或引起细胞凋亡。本研究通过建立高表达p33ING1b的鼻咽癌细胞HNE1模型,探讨p33ING1b对鼻咽癌细胞增殖影响及分子作用机制。方法:利用脂质体介导转染HNE1细胞,RT-PCR法筛选p33ING1b高表达的阳性克隆,绘制生长曲线检测细胞增殖速度,免疫组化法检测细胞中p53的表达分布,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测p53、p21、Stat3、C-myc和Cyclin D1蛋白水平。结果:转染ING1后p33ING1b表达水平显著升高,HNE1细胞增殖能力受到抑制,出现G0/G1期的阻滞、S期比例下降。细胞中Stat3、C-myc和CyclinD1表达水平显著降低,p53与p21表达水平上升。结论:p33ING1b可能通过促进HNE1细胞中p53和阻断Stat3两种不同信号传导通路抑制鼻咽癌细胞的增殖。

冬凌草甲素对鼻咽癌HNE-1细胞株生长及其PCNA、Caspase-3表达的影响

目的观察冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株HNE-1生长及其细胞核抗原(PCNA)、Caspase-3表达的影响。方法 HNE-1中加入冬凌草甲素,MTT法观察其生长情况,FCM检测细胞周期,免疫细胞化学染色法检测PCNA,Western-blot技术检测Caspase-3。结果加入冬凌草甲素后HNE-1细胞生长受抑制,细胞被阻滞于G_0/G_1期;冬凌草甲素作用48 h后,HNE-1细胞的PCNA蛋白表达下调,Caspase-3蛋白表达增加。结论冬凌草甲素在体外可显著抑制人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞生长并诱导其凋亡,其机制可能是下调PCNA蛋白表达,激活Caspase-3的活性。

鼻咽癌HNE1细胞株端粒酶的表达(英文)

目的 探讨鼻咽癌HNE1细胞株端粒酶的表达。方法 采用TRAPPCRELISA法检测人HNE1、白血病HL6 0、肺癌TUL1、正常骨髓细胞 2例、培养的外周血单个核细胞及人血管平滑肌细胞株中端粒酶的表达。结果 人HNE1,HL6 0及TUL1细胞株中端粒酶均为阳性表达 ;其余 3种正常对照组细胞全部为阴性。HNE1细胞株热灭活后的端粒酶活性均为阴性 ,而在 10 2 个HNE1细胞中亦能检测到端粒酶活性。结论 端粒酶在鼻咽癌HNE1细株中具有高表达。端粒酶活性测定具有较高的特异性及灵敏度。

黄连对HNE_3细胞增殖活力的抑制作用

本文以低分化鼻咽癌上皮细胞株HNE3为靶细胞，观察了川黄连对鼻咽癌细胞增殖活力的抑制作用。实验结果表明，黄连煎液可明显地降低HNE3克隆形成率，减慢细胞增值速度。这种作用不仅表现在长期培养的连续效应上，而且还表现在短期作用后的后续效应上。对于不同种类的细胞，黄连的抑瘤效应似乎尚有一定程度的选择性。

唑来膦酸影响人鼻咽癌HNE-1细胞增殖和凋亡的体外实验

目的 观察唑来膦酸对鼻咽癌细胞系HNE-1的增殖抑制及凋亡诱导作用并探索其相关机制。方法MTT法检测体外细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞凋亡和细胞周期变化;原位末端标记法(TUNEL)检测DNA片段化以标记凋亡细胞;Real-time PCR和Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bad、Bax及Caspase-9 mRNA和蛋白表达。结果 MTT显示不同浓度唑来膦酸处理组(2.5、5、10、20、40μmol/L)作用24 h,对HNE-1细胞增殖无抑制作用(P】0.05);作用48和72 h均能明显抑制HNE-1细胞增殖(P【0.05);但抑制增殖能力与药物浓度和作用时间未呈时效和量效关系(P】0.05)。10~40μmol/L唑来膦酸处理后,48和72 h的早期凋亡率明显高于对照组;S期细胞比例较对照组升高(P【0.01);TUNEL法染色显示,作用72 h后凋亡细胞明显增多(P【0.05);Real-time PCR和Western blot显示,唑来膦酸下调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,同时上调Bad、Bax及Caspase-9 mRNA和蛋白表达。结论 唑来膦酸可以抑制HNE-1细胞增殖,诱导HNE-1细胞凋亡,可能与促进Bad、Bax及Caspase-9的表达并降低Bcl-2的表达有关。

氧化苦参碱与抗肿瘤药物联合作用对HNE-1、HNE-1(200)细胞增殖抑制的影响

目的了解天然有效成分氧化苦参碱联合常用抗肿瘤药物(长春新碱、平阳霉素、5-Fu、顺铂)对HNE-1、HNE-1 (200)细胞的增殖抑制作用。方法本研究以鼻咽癌HNE-1细胞株以及由放射线照射诱导的耐药细胞株HNE-1(200)为研究对象,采用氧化苦参碱与低毒剂量的常用抗肿瘤药物联合应用,用MTT法测定其对实验细胞的增殖抑制率。结果对试验细胞抑制率低于20%的低毒浓度的长春新碱、平阳霉素、5-Fu、顺铂加入低毒浓度(0.5mg/mL)的氧化苦参碱后,使4种药物对细胞的抑制率增加,浓度越低,增幅越大。结论低浓度的天然药物与抗肿瘤药物联合应用对肿瘤细胞有明显的增殖抑制作用,并且时放射线照射诱导的耐药细胞株有一定的逆转作用。

HNE和Fenton合剂对晶状体上皮细胞骨骼的作用

目的研究HNE和Fenton合剂对人晶状体上皮细胞株(HLEC)和大鼠晶状体的细胞骨骼的早期改变,以了解这些改变在白内障发生中的作用.方法HLEC及大鼠晶状体经HNE、Fenton合剂处理,使用试剂盒测定细胞凋亡,观察和记录白内障的变化;加抗肌动蛋白、vimentin和微管蛋白抗体进行免疫组织化学及Western Blot分析.结果HNE诱导HLEC细胞凋亡发生在接触后1 h,2～4 h最为明显;Fenton合剂迟至4 h发生,48 h达高峰.HNE和Fenton合剂均能引起大鼠晶状体混浊,并随时间延长而加剧.接触HNE和Fenton合剂后,HLEC细胞变圆和皱缩,细胞骨骼丢失明显;肌动蛋白、vimentin和微管蛋白随时间延长而减少;大鼠晶状体皮质和核的这三种细胞骨骼几乎均有明显下降甚至消失.结论HNE和Fenton合剂可致晶状体上皮细胞凋亡及白内障形成,该结果与细胞骨骼的损伤和丢失密切相关,脂质过氧化引起的细胞骨骼的损伤可能在白内障形成过程中起一定的作用.

益气解毒颗粒对HNE3细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用

目的观察益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞HNE3及其裸鼠移植瘤的抑制作用。方法益气解毒颗粒作用于HNE3细胞、宫颈癌细胞及其裸鼠移植瘤,分别进行体外抑瘤试验(包括IC50测定)和体内抑瘤试验。先行体外实验测定益气解毒颗粒对癌细胞半抑制浓度及其杀伤效力,再行体内实验,观察益气解毒颗粒对荷瘤裸鼠HNE3移植瘤的抑瘤效应,并以人宫颈癌细胞HeLa移植瘤和荷瘤模型动物作对照。结果益气解毒颗粒对HNE3细胞的半抑制浓度为0.037mg/mL,并显示了明显的体外杀伤效应和细胞凋亡诱导效应。在体内抑瘤实验中,益气解毒颗粒对HNE3移植瘤的抑瘤率为74.7%,伴有细胞增殖速度、成瘤能力的明显抑制,同时提高细胞分化能力,降低肿瘤的侵袭力。结论益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞HNE3具有明显抑制作用。