维甲酸对鼻咽癌细胞生长、表型和瘤基因表达的作用

研究了维甲酸（ＲＡ）对鼻咽癌细胞生长、表型和癌基因表达的作用．用ＲＡ诱导鼻咽癌细胞，绘制诱导前后的细胞曲线，观察细胞形态，并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和ＤＮａｓｅⅠ超敏感区分析法检测基因表达和调控．结果表明，ＲＡ能显著抑制鼻咽癌细胞的生长，前５ｄ下降约５０％．ＲＡ处理后的细胞从典型的多边形形态变成扁平、细长，类似纤维细胞状的形态．ＲＡ诱导前ｃ－ｍｙｃ基因和ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因ＨＮＥ２细胞中高表达，而诱导后ｃ－ｍｙｃ基因表达水平急剧下降，ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因无明显改变．在实验中还发现ＲＡ诱导前后的ｃ－ｍｙｃ基因和ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因中一些重要的超敏感位点和它们的功能．由实验结果可得到如下结论：ＲＡ能促进鼻咽癌细胞分化，通过对染色体上调控位点的作用来抑制ｃ－ｍｙｃ基因的表达，ＤＮａｓｅⅠ超敏感位点与细胞的分化程度、细胞的组织特异性和基因表达状态有关，ｃ－ｍｙｃ基因可通过不同的调控方式而失活．

维甲酸诱导基因G慢病毒表达载体的构建及对肺癌细胞A549的影响

背景与目的:维甲酸诱导基因G(retinoic acid-induced gene G,RIG-G)是从急性早幼粒细胞性白血病细胞系NB4细胞中克隆出的肿瘤抑制基因。我们通过调控基因(Tet-on)系统构建受强力霉素(doxycycline,DOX)诱导RIG-G基因表达的A549细胞系,并观察其对A549细胞增殖的作用。方法:采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)技术扩增RIG-G基因片段,利用LR重组系统构建p Lenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体,对该慢病毒载体和Tet-on慢病毒载体包装和病毒滴度测定后,感染A549细胞;采用有限稀释法筛选稳定株;使用细胞免疫荧光和蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定RIG-G基因受DOX调控表达的效果;CCK-8试验检测细胞增殖能力。结果:成功构建p Lenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体,包装后测得其活性滴度为1.0×108 TU/m L;慢病毒经Tet-on包装后物理滴度为4×109 VP/m L;RIG-G蛋白成功地在慢病毒感染后的A549稳定株中合成和表达,并且受DOX的诱导调控。RIG-G蛋白表达成功后,A549细胞的增殖与对照组相比显著降低(1.168±0.107 vs 2.099±0.162,P<0.05)。结论:本研究成功建立了RIG-G基因可调控表达的A549稳定株;RIG-G蛋白对A549的增殖有抑制作用。

hp450RAI质粒转染对视黄酸诱导的HL-60细胞凋亡的影响

目的探讨细胞内细胞色素氧化酶 p45 0 (CYP)表达、视黄酸 (RA)代谢与细胞凋亡的相互关系。方法采用脂质体介导的质粒转染和逆转录 - PCR等实验技术方法做有关分析检测。结果野生型 HL- 6 0细胞 hp45 0 RAI表达微弱 ,脂质体介导的 hp45 0 RAI质粒转染可使 HL- 6 0细胞稳定表达 hp45 0 RAI;hp45 0 RAI转染对 ATRA诱导的 HL- 6 0细胞增殖能力无明显影响 ;野生型 HL- 6 0细胞有较强 Bcl- 2表达 ,ATRA处理抑制未转染细胞 Bcl- 2表达 ,但单纯 hp45 0 RAI转染、hp45 0 RAI转染 +CYP抑制剂或加用 IFN- α均能增强 Bcl- 2表达 ,其中以加用 ketoconazole作用更为显著。结论 RA敏感 HL- 6 0细胞中影响 RA代谢的主要 CYP并非 hp45 0 RAI,hp45 0 RAI转染能增强 Bcl- 2表达 ,但对 HL - 6 0细胞增殖能力无明显影响 ,CYP抑制剂、IFN-α可能通过抑制细胞内 RA代谢 ,而增加 HL - 6 0细胞Βcl- 2表达。

HoxB1质粒转染对视黄酸诱导的HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨细胞内 Hox B1表达、视黄酸 ( RA)代谢与细胞凋亡的相互关系。方法 :采用脂质体介导的质粒转染和反转录 - PCR等实验技术方法做有关分析检测。结果 :2 .5× 10 - 7mol/ L 全反式 RA( ATRA)处理 HL-6 0细胞 3天 ,HPL C分析显示 ,Hox B1的高表达可明显抑制 HL- 6 0细胞 ATAR代谢 ;使 ATRA增殖抑制作用减弱 ;野生型 HL- 6 0细胞有较强 bc1- 2表达 ,ATRA处理抑制未转染细胞 bcl- 2表达 ,但单纯 Hox B1转染、Hox B1转染 + IFNα均能增强 bc1- 2表达。结论 :Hox B1转染 HL- 6 0细胞 ATRA代谢明显受抑 。