茶多酚对鼻咽癌HNE-1及HNE-1(200)细胞株增殖抑制作用研究

目的研究天然有效成分茶多酚对鼻咽癌HNE-1及HNE-1(200)细胞株增殖的抑制作用。方法本研究以鼻咽癌HNE-1细胞株和HNE-1(200)耐药细胞株为研究对象,采用MTT法测定茶多酚对两组细胞的增殖抑制率。结果茶多酚对两组实验细胞均有抑制作用,且这种作用呈浓度依赖关系;茶多酚对两种细胞株的抑制率没有显著差别。结论茶多酚对鼻咽癌耐药细胞株和非耐药细胞株均有相似而明显的增殖抑制作用,这为茶多酚的进一步研究和应用打下了基础。

KAI1基因对人鼻咽癌细胞株HNE-1增殖、侵袭及转移能力的影响

目的:研究转移抑制基因KAI1对人鼻咽癌细胞体外增殖、侵袭及转移能力等生物学效应的影响。方法:通过腺病毒载体将KAI1基因转染人鼻咽癌细胞株HNE-1,RT-PCR法检测转染效果;MTT法检测鼻咽癌细胞转染KAI1基因后体外增殖能力的变化;FCM法检测细胞生长周期分布;Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力的改变;细胞同质黏附实验检测细胞黏附力的变化。结果:当腺病毒载体rAd-KAI1效价为30 MOI时,对HNE-1细胞的转染率可达92%;转染48和72 h时,rAd-KAI1转染组细胞的增殖明显受到抑制,抑制率分别为17%和30%;G0/G1期细胞数量较对照组增多,S期细胞数量减少;转染组的穿膜细胞数为(52.5±4.2)个,明显低于对照组的(167.4±3.5)个,差异有统计学意义(P<0.05);转染组的细胞同质黏附作用高于对照组(P<0.05)。结论:腺病毒载体成功介导了抑癌基因KAI1转染进入鼻咽癌HNE-1细胞,并取得较高的转染率。KAI1基因可能通过阻滞HNE-1细胞生长周期,从而抑制细胞增殖。KAI1基因能够抑制HNE-1细胞侵袭能力,其机制可能为KAI1基因增强了鼻咽癌细胞的黏附力所致。

茶多酚和粉防己碱联合抗肿瘤药物对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)增殖的抑制作用

目的研究天然有效成分茶多酚(TP)和粉防己碱(TET)分别联合4种常见抗肿瘤药物对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)增殖的抑制作用。方法以鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)为研究对象,用MTT法测定无毒剂量的TP和TET分别联合顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)对实验细胞的增殖抑制率。结果无毒剂量的TP分别与4种抗肿瘤药物联合应用后,药物对HNE-1(200)细胞的抑制率增加约200%;无毒剂量的TET分别与4种抗肿瘤药物联合应用后,药物对HNE-1(200)细胞的抑制率增加约300%。结论无毒浓度的天然药物TP、TET分别与抗肿瘤药物联合应用能提高药物对鼻咽癌耐药细胞株的增殖抑制率,降低药物的IC50。

脂质体阿霉素对人鼻咽癌HNE-1细胞株增殖与凋亡作用的研究

目的:研究脂质体阿霉素对人鼻咽癌HNE-1细胞株增殖抑制和凋亡作用的影响。方法:本研究以人鼻咽癌HNE-1细胞株为研究对象,以游离阿霉素为对照,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定脂质体阿霉素对HNE-1的细胞毒作用;分别采用倒置显微镜和TUNEL法检测脂质体阿霉素作用于HNE-1细胞后细胞凋亡的形态学变化和细胞凋亡率。结果:脂质体阿霉素对HNE-1细胞的IC50是游离阿霉素的1/3倍;与游离阿霉素组相比较,倒置显微镜观察脂质体阿霉素组,发现该实验组细胞出现细胞凋亡形态学变化;脂质体阿霉素和游离阿霉素分别作用于HNE-1细胞的凋亡指数分别为11.27%±0.33%、43.57%±3.14%。结论:本实验研究显示,与游离阿霉素相比较,脂质体阿霉素对人鼻咽癌HNE-1细胞株具有较好的体外增殖抑制作用,能够诱导HNE-1细胞凋亡。

冬凌草甲素对鼻咽癌HNE-1细胞株生长及其PCNA、Caspase-3表达的影响

目的观察冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株HNE-1生长及其细胞核抗原(PCNA)、Caspase-3表达的影响。方法 HNE-1中加入冬凌草甲素,MTT法观察其生长情况,FCM检测细胞周期,免疫细胞化学染色法检测PCNA,Western-blot技术检测Caspase-3。结果加入冬凌草甲素后HNE-1细胞生长受抑制,细胞被阻滞于G_0/G_1期;冬凌草甲素作用48 h后,HNE-1细胞的PCNA蛋白表达下调,Caspase-3蛋白表达增加。结论冬凌草甲素在体外可显著抑制人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞生长并诱导其凋亡,其机制可能是下调PCNA蛋白表达,激活Caspase-3的活性。

唑来膦酸影响人鼻咽癌HNE-1细胞增殖和凋亡的体外实验

目的 观察唑来膦酸对鼻咽癌细胞系HNE-1的增殖抑制及凋亡诱导作用并探索其相关机制。方法MTT法检测体外细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞凋亡和细胞周期变化;原位末端标记法(TUNEL)检测DNA片段化以标记凋亡细胞;Real-time PCR和Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bad、Bax及Caspase-9 mRNA和蛋白表达。结果 MTT显示不同浓度唑来膦酸处理组(2.5、5、10、20、40μmol/L)作用24 h,对HNE-1细胞增殖无抑制作用(P】0.05);作用48和72 h均能明显抑制HNE-1细胞增殖(P【0.05);但抑制增殖能力与药物浓度和作用时间未呈时效和量效关系(P】0.05)。10~40μmol/L唑来膦酸处理后,48和72 h的早期凋亡率明显高于对照组;S期细胞比例较对照组升高(P【0.01);TUNEL法染色显示,作用72 h后凋亡细胞明显增多(P【0.05);Real-time PCR和Western blot显示,唑来膦酸下调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,同时上调Bad、Bax及Caspase-9 mRNA和蛋白表达。结论 唑来膦酸可以抑制HNE-1细胞增殖,诱导HNE-1细胞凋亡,可能与促进Bad、Bax及Caspase-9的表达并降低Bcl-2的表达有关。

氧化苦参碱与抗肿瘤药物联合作用对HNE-1、HNE-1(200)细胞增殖抑制的影响

目的了解天然有效成分氧化苦参碱联合常用抗肿瘤药物(长春新碱、平阳霉素、5-Fu、顺铂)对HNE-1、HNE-1 (200)细胞的增殖抑制作用。方法本研究以鼻咽癌HNE-1细胞株以及由放射线照射诱导的耐药细胞株HNE-1(200)为研究对象,采用氧化苦参碱与低毒剂量的常用抗肿瘤药物联合应用,用MTT法测定其对实验细胞的增殖抑制率。结果对试验细胞抑制率低于20%的低毒浓度的长春新碱、平阳霉素、5-Fu、顺铂加入低毒浓度(0.5mg/mL)的氧化苦参碱后,使4种药物对细胞的抑制率增加,浓度越低,增幅越大。结论低浓度的天然药物与抗肿瘤药物联合应用对肿瘤细胞有明显的增殖抑制作用,并且时放射线照射诱导的耐药细胞株有一定的逆转作用。

鼻咽癌细胞株HNE-1蛋白质二维电泳图谱的建立

目的建立及优化聚丙烯酰胺二维凝胶电泳技术,结合分析软件,全面展示鼻咽癌细胞株HNE-1的蛋白质表达谱,为进一步开展鼻咽癌的蛋白质组学研究奠定了基础。方法大规模培养HNE-1细胞,利用优化的蛋白质抽提技术获得HNE-1细胞的总蛋白。选用线性及非线性的不同pH梯度固相(IPG)干胶条对细胞总蛋白等电聚焦以及聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳,初步建立了HNE-1细胞株总蛋白质的二维电泳(2-DE)图谱。结果采用不同pH梯度范围的IPG胶条和优化的2-DE技术能够有效展示HNE-1细胞全蛋白质表达谱。结论重叠窄pH梯度范围的IPG胶条提高了2-DE中蛋白质的分离效果。

氧化苦参碱对放疗鼻咽癌HNE-1细胞P-糖蛋白表达影响

目的(1)氧化苦参碱对放射前后鼻咽癌HNE-1细胞有无生长抑制作用;(2)研究天然产物氧化苦参碱对鼻咽癌HNE-1细胞株放射前、后P-糖蛋白表达的影响。方法(1)MTT法检测长春新碱、维拉帕米、氧化苦参碱对放射前HNE-1细胞、放射后HNE-1(200)细胞生长抑制情况;(2)免疫化学法检测氧化苦参碱、维拉帕米对HNE-1(200)细胞P-糖蛋白表达的影响。结果(1)长春新碱、维拉帕米、氧化苦参碱对放射前、后细胞生长均有抑制作用,呈浓度依赖关系,随着浓度的增加抑制作用也增加;(2)高浓度VCR对放射治疗后细胞HNE-1(200)的抑制率比对HNE-1细胞的抑制率降低了近50%,P值小于0.01,有显著差异;氧化苦参碱、维拉帕米对两种实验细胞抑制没有显著差异。(3)免疫组化检测细胞P-糖蛋白表达,结果为HNE-1阴性,HNE-1(200)阳性,维拉帕米、氧化苦参碱分别作用于HNE-1(200)细胞后P-gp表达弱阳性。结论(1)氧化苦参碱对放射前后鼻咽癌HNE-1细胞有明显生长抑制作用;(2)放射后细胞HNE-1(200)对长春新碱产生耐药;(3)低毒性浓度氧化苦参碱具有与维拉帕米相似的作用,能使放射照射后鼻咽癌HNE-1细胞株P-糖蛋白的表达下降。

硫链丝菌肽对人鼻咽癌HNE-1细胞生长及Foxm1表达的影响

目的研究硫链丝菌肽(TST)对人鼻咽癌HNE-1细胞株增殖能力及Forkhead box protein M1(Foxm1)表达的影响。方法以MTT法分别测定不同浓度(1、2、4、8、12、16μmol/L)TST作用于人鼻咽癌HNE-1细胞48h的增殖抑制率;通过流式细胞仪(FCM)检测不同浓度(1、2μmol/L)TST分别作用于HNE-1细胞48h后对其细胞周期动力学的影响;采用免疫细胞化学法和Western blot检测HNE-1细胞中Foxm1蛋白表达以及不同浓度TST作用于HNE-1细胞48hFoxm1蛋白表达的变化。结果不同浓度(1、2、4、8、12、16μmol/L)TST作用于HNE-1细胞48h后的增殖抑制率分别为8.31%、17.46%、34.28%、58.68%、87.91%、99.05%;浓度分别为1、2μmol/L的TST作用于HNE-1细胞48h后,均使HNE-1细胞停滞于G1/G0期(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);同时将TST作用于HNE-1细胞48后,经免疫细胞化学法和Western blot均检测到Foxm1蛋白在HNE-1细胞胞质中表达显著降低(P<0.05)。结论 TST对人鼻咽癌HNE-1细胞株具有明显的增殖抑制作用,可能与降低肿瘤细胞中Foxm1蛋白表达有关。

CYTOGENETIC STUDY ON A NEW EPITHELIAL CELL LINE, HNE-1,DERIVED FROM NASOPHARYNGEAL CARCINOMA

The cytogenetics of HNE- 1 cell line derived from the biopsy of nasopharyngeal carcinoma of a 27- year- old Chinese male has been investigated by chromosomal banding technique. A karyotypic characterization of subteraploid and a modal number of 74 - 77 have been revealed in this cell line. All cells contained a series of non- random chromosomal rearrangements. 18 of them, including 5 isochromosomes. were present in all metaphases and 3 of them in a few one. These findings indicated that the severe DNA damage and increase of gene copies may be occurred in genome of HNE- 1 cells.

5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对人鼻咽癌HNE-1细胞株增殖抑制与凋亡作用的影响

目的研究5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞株增殖与凋亡作用的影响。方法本研究以人鼻咽癌HNE-1细胞株为研究对象,以5-氟尿嘧啶为对照,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对HNE-1细胞的增殖抑制率;用流式细胞仪(FCM)测定5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体作用与HNE-1细胞72h后细胞的凋亡率。结果 5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对HNE-1细胞的IC50是5-氟尿嘧啶的1/3;浓度为0.043μg/mL 5-氟尿嘧啶和5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体作用于HNE-1细胞的凋亡指数分别为(6.31±0.17)%、(19.53±1.79)%。结论本实验研究显示,与5-氟尿嘧啶相比较,5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对人鼻咽癌HNE-1细胞具有很好的生长增殖抑制作用,并且能够显著提高HNE-1细胞的凋亡率。

氧化苦参碱对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)耐药逆转机制的研究

目的:研究天然有效成分氧化苦参碱对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)耐药逆转的机制。方法:以放射线照射诱导的鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)为研究对象,采用免疫细胞化学法、免疫印迹(Western Blot)法检测细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药1基因(mdr1)的mRNA的改变。结果:氧化苦参碱作用于HNE-1(200)细胞24h后,免疫细胞化学方法和Western Blot显示:人鼻咽癌(P-gp)表达下调;RT-PCR显示:HNE-1、HNE-1(200)细胞的mdr1表达无差异。结论:氧化苦参碱能通过下调P-gp表达,在一定程度上逆转耐药,但是mRNA表达并无变化,说明鼻咽癌多药耐药引起P-gp表达上调受多种机制控制。

氧化苦参碱、儿茶素、表儿茶素对鼻咽癌HNE-1、HNE-1(200)细胞增殖抑制作用

[目的]研究氧化苦参碱、儿茶素、表儿茶素对鼻咽癌HNE-1及HNE-1(200)细胞的增殖抑制作用。[方法]以鼻咽癌HNE-1细胞株和放射照射诱导的HNE-1(200)耐药细胞株为研究对象,以维拉帕米为对照,采用MTT法测定氧化苦参碱、儿茶素、表儿茶素对两种细胞的增殖抑制率。[结果]氧化苦参碱对两种实验细胞均有抑制作用,且这种抑制作用呈浓度依赖性;氧化苦参碱的细胞抑制作用与维拉帕米相近。表儿茶素和儿茶素在本试验浓度下对两种细胞抑制作用不明显,抑制率均在20%以下。[结论]氧化苦参碱有明显的细胞抑制作用,表儿茶素和儿茶素未发现明显细胞毒作用。

抗人IgM抗体对鼻咽癌HNE-1细胞生物学特性的影响

目的研究抗人免疫球蛋白M(IgM)抗体对鼻咽癌HNE-1细胞增殖、凋亡、细胞周期和成瘤的影响。方法经抗人IgM抗体处理后,采用细胞增殖抑制实验观察HNE-1细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及周期,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡;构建裸鼠动物模型,腹腔注射抗人IgM抗体,观察移植瘤的生长,免疫组织化学SP法检测移植瘤中IgM和糖蛋白96(gp96)的蛋白表达。结果抗人IgM抗体可呈浓度和时间依赖性抑制HNE-1细胞的增殖(P<0.05);流式细胞术检测表明抗人IgM抗体可促进HNE-1细胞G1期细胞百分比明显降低,S期细胞百分比明显增加,细胞凋亡率明显增高(P<0.05);TUNEL检测提示抗人IgM抗体可促进HNE-1细胞凋亡(P<0.01);移植瘤实验显示抗人IgM抗体可明显抑制移植瘤的体积和质量(P<0.05);移植瘤免疫组织化学显示裸鼠腹腔注射抗人IgM抗体后,移植瘤内IgM和gp96蛋白的表达水平明显低于对照组(P<0.05)。结论抗人IgM抗体可有效抑制HNE-1细胞的增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期,并且能抑制裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制IgM和gp96蛋白表达有关。

茶多酚与抗肿瘤药物联合作用对人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1增殖抑制的影响

目的:检测茶多酚与4种抗肿瘤药物长春新碱、平阳霉素、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂联合应用对放射线照射后的鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)的增殖抑制作用。方法:采用MTT法筛选茶多酚及4种药物的低毒剂量,再测定低毒剂量的茶多酚与4种药物联合应用后对HNE-1(200)细胞的增殖抑制率。结果:茶多酚的低毒剂量为0.50mg.mL-1,该剂量下茶多酚与长春新碱、平阳霉素、5-Fu、顺铂联合应用后,对HNE-1(200)细胞的增殖抑制率均不同程度的增加,其增幅为单用抗肿瘤药的100%～300%。结论:茶多酚与4种抗肿瘤药物低剂量联合应用对人鼻咽癌耐药细胞具有明显的增殖抑制作用,提示茶多酚对该细胞株具有一定的耐药逆转作用。

瞬时受体电位锚蛋白亚型1受体在远端创伤预处理保护心肌缺血/再灌注损伤中的作用

目的探讨瞬时受体电位锚蛋白亚型1受体(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)在远端创伤预处理(RPCT)保护心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤中的作用及相关机制。方法将SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham)、模型组(IR)、远端创伤预处理组(RPCT)、TRPA1抑制剂+远端创伤预处理组(TCS+RPCT)和TRPA1抑制剂组(TCS)。实验采用大鼠心肌缺血/再灌注模型,全程监测血流动力学。再灌注完成后留取大鼠心脏,测量心肌梗死面积和心肌细胞凋亡水平,检测线粒体醛脱氢酶2(ALDH2)活性和蛋白表达以及4-羟基壬烯醛(4-HNE)的表达水平。结果与Sham组相比,IR组心肌梗死面积和心肌凋亡细胞增加,ALDH2活性和表达降低,4-HNE含量升高;与IR组相比,RPCT组心肌梗死面积和心肌凋亡细胞减少,ALDH2活性和表达升高,4-HNE含量降低;TCS+RPCT组相比于RPCT组,RPCT的心肌保护作用消失。结论TRPA1受体介导了远端创伤预处理减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用,其机制可能与调控ALDH2活性和蛋白表达,影响4-HNE含量有关。

醛糖还原酶基因敲除对小鼠脊髓损伤的保护作用及机制研究

目的:研究醛糖还原酶(AR)在小鼠脊髓损伤(SCI)的作用及分子机制。方法:利用野生型(WT)小鼠和AR敲除(AR KO)小鼠,制备小鼠脊髓钳夹伤模型,通过BMS评分对比观察损伤后两种小鼠在不同时间点(3、7、14和28 d)的运动功能恢复情况;采用免疫荧光染色观察小胶质细胞活化状态和损伤面积恢复程度;利用试剂盒和Western Blot检测损伤后小鼠脊髓组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、磷酸化核因子-κB(NF-κB)家族p65、4-羟基壬烯醛(4-HNE)和活性氧(ROS)的表达。通过体外培养来源于小鼠小胶质细胞系BV2,给予脂多糖(LPS)及4-HNE联合刺激,利用免疫荧光染色观察BV2细胞极化状态,Western Blot检测iNOS和p-p65蛋白表达水平。结果:与WT小鼠相比,AR基因敲除促进小鼠脊髓损伤后的运动功能恢复,损伤区面积显著减小,并且抑制小鼠脊髓损伤区小胶质细胞活化,NF-κB信号通路相关炎性分子iNOS表达水平明显下调。WT小鼠和AR KO小鼠在脊髓损伤后ROS、4-HNE的含量逐渐上升,在损伤后7 d表达较高,并且具有相似的表达变化模式。LPS联合4-HNE刺激BV2细胞系,可抑制M1型相关分子白细胞分化抗原16/32(CD16/32)、iNOS和p-p65的表达,促进M2型相关分子精氨酸酶1(Arg-1)的表达。结论:AR敲除促进小鼠脊髓损伤后4-HNE的累积,减少NF-κB信号通路的激活,抑制小胶质细胞的活化,从而促进运动功能的恢复。

氧化苦参碱和粉防己碱对鼻咽癌耐药细胞株的耐药逆转作用

目的:研究天然有效成分氧化苦参碱(Oxy)和粉防己碱(TET)对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)的耐药逆转作用.方法:以鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)为研究对象,用MTT法测定无毒剂量的Oxy和TET作用后HNE-1(200)耐药细胞对常用抗肿瘤药物顺铂(DDP),5-氟尿嘧啶(5-Fu),长春新碱(vincristine,VCR),阿霉素(Adriamycin,ADM)的增殖抑制率和IC50,并进一步计算其逆转指数.结果:无毒剂量的TET和Oxy分别与4种抗肿瘤药物联合应用后,抗肿瘤药物对耐药细胞的增殖抑制率增加.TET逆转HNE-1(200)细胞对DDP,5-Fu,VCR,ADM的耐药指数分别为2.25,2.1,3.19,2.27;Oxy逆转HNE-1(200)细胞对DDP,5-Fu,VCR,ADM的耐药指数分别为1.59,1.26,2.28,1.26.结论:低毒浓度的天然药物Oxy和TET对鼻咽耐药细胞株HNE-1(200)具有一定的耐药逆转作用.

鼻咽癌细胞系中核迁移蛋白的表达及作用

背景与目的:核迁移是真核生物生长发育和细胞功能所必需的,核迁移蛋白(nucleardistributionC,NUDC)在核迁移中起着重要作用。本研究旨在检测NUDC在鼻咽癌细胞系CNE-2、HNE-2中的表达情况,初步探讨其抗体对癌细胞活性的影响。方法:在大肠杆菌中表达GST-NUDC重组蛋白并制备其多克隆抗体,间接免疫荧光染色法明确NUDC蛋白在鼻咽癌细胞中的亚细胞定位,Westernblot确定NUDC蛋白在鼻咽癌细胞系中表达情况,MTT法检测NUDC抗体对鼻咽癌细胞生长的影响。结果:鼻咽非癌组织及鼻咽癌细胞中均有NUDC蛋白表达,且其在鼻咽癌细胞中的表达量明显高于鼻咽非癌组织。NUDC蛋白在鼻咽癌细胞中主要位于细胞质核区附近,细胞核也可见少量表达。NUDC蛋白抗体可抑制鼻咽癌细胞生长,且存在着剂量-反应关系。结论:NUDC蛋白在鼻咽癌细胞系中高度表达,且NUDC蛋白抗体在体外可抑制鼻咽癌细胞的生长。