miR-125b-2-3p表达对鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-125b-2-3p表达对鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR检测miR-125b-2-3p在人永生化鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞中的表达。荧光定量PCR检测上调和下调miR-125b-2-3p表达转染效率。实验分为control组(未处理)、mimics NC组(Lip 2000+mimics NC)、miR-125b-2-3p mimics组(Lip 2000+miR-125b-2-3p mimics)、inhibitor NC组(Lip 2000+inhibitor NC)和miR-125b-2-3p inhibitor组(Lip 2000+miR-125b-2-3p inhibitor)。CCK-8实验、细胞集落形成实验和活细胞/死细胞双染色实验检测细胞增殖的情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;DAPI细胞核染色检测细胞核的形态变化;线粒体膜电位检测细胞早期凋亡情况。结果与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,鼻咽癌细胞中miR-125b-2-3p的表达较高(P<0.05)。与control组和mimics NC组相比,miR-125b-2-3p mimics组miR-125b-2-3p表达上调(P<0.01);与control组和inhibitor NC组相比,miR-125b-2-3p inhibitor组miR-125b-2-3p表达下调(P<0.01)。与mimics NC组相比,miR-125b-2-3p mimics组细胞增殖能力较强(P<0.01),细胞凋亡能力较弱(P<0.01),线粒体膜电位较高(P<0.01);相较于inhibitor NC组,miR-125b-2-3p inhibitor组细胞增殖能力被抑制(P<0.01),细胞凋亡能力较强(P<0.01),核固缩核碎裂较多,线粒体膜电位较低(P<0.05)。结论下调miR-125b-2-3p能抑制鼻咽癌细胞HNE1的增殖,促进细胞的凋亡。

重组质粒pLMP1-p53mt在人鼻咽癌HNE1和人宫颈癌HeLa细胞中的表达分析

目的:研究重组质粒pLMP1-p53mt中EB病毒LMP1基因和突变型p53(p53mt)基因在HNE1和HeLa细胞中的体外表达。方法:体外培养人鼻咽癌细胞株HNE1和人宫颈癌细胞株HeLa,采用脂质体lipofectAMINETM2000介导将重组质粒pLMP1-p53mtDNA转染细胞,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Sourthernblot法分析p53mt基因和LMP1基因的表达情况。结果:经重组质粒pLMP1-p53mt转染的HNE1和HeLa细胞中检测到了p53mt基因和LMP1基因的表达。结论:重组质粒pLMP1-p53mt的LMP1基因和p53mt基因能分别在EDL-2启动子和CMV启动子控制下表达。该质粒可进一步用于转基因动物的制备和基因功能研究。

细胞角蛋白13通过PTEN抑制PI3K/AKT/mTOR通路增强鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性

目的:探讨细胞角蛋白13(cytokeratin 13,CK13)对鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法:将HNE1细胞分为对照组、anti-CK13#a组及anti-CK13#b组(敲减CK13)、对照组+西罗莫司处理组(100 nmol/L的西罗莫司处理1 h)、anti-CK13#a+西罗莫司处理组(100 nmol/L的西罗莫司处理1 h),经放疗处理(200 c Gy/min剂量照射5 min)后,用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力,用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,q PCR法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关基因PTEN的表达,WB法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:经放疗处理后,与对照组相比,敲减CK13后HNE1细胞增殖能力明显增强(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01);细胞中c-caspase-3和γH2AX的表达明显降低(均P<0.01)、p-AKT和p-S6K表达明显升高(P<0.01)、PTEN蛋白表达明显降低(P<0.01)。敲减CK13+西罗莫司(PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂)处理可以回复敲减CK13导致的细胞增殖能力增强(P<0.05)和细胞凋亡率降低(P<0.01)。结论:敲减CK13通过下调PTEN蛋白水平进而增强PI3K/AKT/mTOR信号通路活性,最终降低HNE1细胞的放疗敏感性。

抑瘤基因NGX6对鼻咽癌细胞株HNE1细胞生长的影响(英文)

鼻咽癌是我国南方多发恶性肿瘤 ,它的发生发展与遗传因素密切相关 .采用定位候选克隆策略在 9p上克隆出一个候选抑瘤基因 ,命名为NGX6 .为了进一步研究它的功能 ,将NGX6基因的全长cDNA片段亚克隆至pcDNA3.1(+ )的表达载体中 ,通过脂质体转染入鼻咽癌细胞系HNE1中 ,Northern杂交方法筛选高效表达NGX6的细胞株 ,并借助细胞生长曲线、软琼脂糖集落形成实验、裸鼠体内接种实验和流式细胞仪对转染细胞的生物学行为进行了检测 .结果显示 ,转染了NGX6基因的HNE1细胞的生长速度明显减慢 ,在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降 (P〈0 0 5 ) ,裸鼠体内成瘤的时间较对照组明显延长 ,瘤体的大小和重量较对照组明显减少 ,流式细胞仪检测发现细胞的凋亡率无明显变化 .为了明确NGX6蛋白在细胞中发挥作用的部位 ,进一步将NGX6的开放阅读框架完整正确地克隆到pEGFPC1的荧光载体中 ,转染到COS7细胞中 ,用荧光显微镜观察细胞中荧光的分布 ,发现荧光主要分布在细胞浆中 ,说明NGX6蛋白可能是一种胞浆蛋白 .该研究表明 ,NGX6在NPC的发生发展中起重要作用 ,为全面阐述NGX6的功能提供重要的信息 。

LPLUNC1基因对鼻咽癌细胞HNE1生长增殖的抑制作用研究

LPLUNC1在正常的鼻咽组织及人胚鼻咽组织中高表达,而在71%的鼻咽癌中表达下调或缺失,是与鼻咽癌的发生发展密切相关的新基因.通过研究LPLUNC1基因对鼻咽癌细胞系HNE1的影响,进一步确定其与鼻咽癌发生发展的关系.将LPLUNC1基因全长cDNA克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,通过脂质体介导稳定转染入LPLUNC1低表达鼻咽癌细胞系HNE1中,通过RT-PCR及RNA印迹筛选LPLUNC1高表达的细胞株,并利用细胞生长曲线、MTT、BrdU掺入、流式细胞仪检测、软琼脂集落形成实验及裸鼠成瘤等实验,研究了LPLUNC1对鼻咽癌细胞系HNE1细胞生长、增殖的影响.结果发现,稳定转染LPLUNC1的HNE1细胞的生长速度明显减慢,在MTT与BrdU掺入实验发现LPLUNC1可明显地抑制鼻咽癌细胞的增殖,并且通过流式细胞仪检测也发现,LPLUNC1基因可明显延缓HNE1细胞的细胞周期进程,使G0/G1期细胞增多而S期细胞相对减少.进一步通过软琼脂集落形成及裸鼠成瘤实验发现,LPLUNC1稳定转染后的HNE1细胞集落形成率与集落的大小均小于空白载体细胞,同时能明显地抑制HNE1细胞的体外成瘤.结果表明,LPLUNC1基因能明显抑制鼻咽癌细胞HNE1的生长增殖,是鼻咽癌发生发展中的重要候选抑瘤基因之一.

p33^(ING1b)对鼻咽癌细胞HNE1增殖的影响

背景与目的:作为ING1的一种主要表达产物,p33ING1b蛋白结合和稳定p53后诱导肿瘤细胞周期阻断或引起细胞凋亡。本研究通过建立高表达p33ING1b的鼻咽癌细胞HNE1模型,探讨p33ING1b对鼻咽癌细胞增殖影响及分子作用机制。方法:利用脂质体介导转染HNE1细胞,RT-PCR法筛选p33ING1b高表达的阳性克隆,绘制生长曲线检测细胞增殖速度,免疫组化法检测细胞中p53的表达分布,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测p53、p21、Stat3、C-myc和Cyclin D1蛋白水平。结果:转染ING1后p33ING1b表达水平显著升高,HNE1细胞增殖能力受到抑制,出现G0/G1期的阻滞、S期比例下降。细胞中Stat3、C-myc和CyclinD1表达水平显著降低,p53与p21表达水平上升。结论:p33ING1b可能通过促进HNE1细胞中p53和阻断Stat3两种不同信号传导通路抑制鼻咽癌细胞的增殖。

放射线联合人血管内皮生长抑素对HNE1鼻咽癌移植瘤生长抑制作用

目的:研究放射线联合重组人血管内皮生长抑素(Endostatin)对HNE1鼻咽癌移植瘤生长、转移的抑制作用。方法:应用裸鼠建立HNE1移植瘤模型;待瘤体平均体积达627mm3±47mm3,40只裸鼠随机分成治疗组:单独放疗(RT)组,单用Endostatin组,单次20Gy照射后+连续使用Endostatin 14天组,连续使用Endostatin 14天后+单次20Gy照射组和空白对照组;绘制肿瘤生长曲线;取瘤体用免疫组化检测乏氧诱导因子-α(HIF-α)和微血管内皮CD34的表达,观察肿瘤乏氧及其微血管密度的变化。结果:与空白对照组比较,照射20GY后+连续Endostatin 14天组,其照射后20天抑瘤率84.79%,而先用Endostatin组+后照射组及单独照射组,单独使用En-dostatin(使用完14天以后的第7天)组的抑瘤率分别是83.91%,64.95%,19.47%;其中各放射治疗组的减瘤率分别为44.1%,54.1%和18.1%(P=0.000);使用Endostatin联合放射线及单用Endostatin组,肿瘤新生血管减少,HIF-α表达降低。结论:放射线联合Endostatin的策略,其肿瘤控制率优于单用Endostatin或单用放射线,且能明显抑制HNE1鼻咽癌移植瘤生长和转移。照射后使用Endostatin可以在较短的时间获得较好的局部控制率;而先给予Endostatin再照射具有明显的放射增敏作用,可获得较长的再生长延缓时间,但两者的长期疗效无明显统计学差异(P=0.077)。提示采用分割照射方案同时加用Endostatin可能会取得更好的临床疗效。

HNE1细胞株光动力学治疗前后形态学的动态变化

目的 探讨体外光动力学治疗 (PDT)引起鼻咽癌 (NPC)细胞死亡的作用机制。方法 对鼻咽癌细胞株HNE1体外光动力学治疗前后形态学变化进行动态观察。结果 对照组HNE1细胞培养 3h ,6h ,12h ,2 4h和 4 8h后细胞形态与正常培养组HNE1细胞形态相比较无明显改变。PDT 12h后 ,实验组HNE1细胞开始变形皱缩 ,细胞界限模糊 ,细胞透光度和立体感较差 ,治疗 2 4～ 4 8h后细胞发生凋亡。结论 体外光动力学治疗对HNE1具有明显的杀伤效应并诱导HNE1细胞凋亡。

益气解毒颗粒干预鼻咽癌细胞HNE1蛋白质表达的研究

目的 探讨中药复方益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞杀伤作用的分子机制。方法 筛选益气解毒颗粒药液对鼻咽癌杀伤的半抑制浓度(IC_(50)),用0.1倍半抑制浓度(0.1×IC_(50))的益气解毒颗粒作用鼻咽癌细胞HNE1 96h,用固相pH梯度双向凝胶电泳分离益气解毒颗粒处理和未处理的鼻咽癌细胞HNE1的总蛋白质,银染显色,PDQuest 2-de软件分析差异蛋白质点。结果 益气解毒颗粒药液杀伤鼻咽癌细胞HNE1的半抑制浓度为6.25mg/ml;双向电泳图像分析益气解毒颗粒药物处理组图像的平均蛋白质数为1120±89,未处理组的平均蛋白质数为1281±102;差异蛋白质有673个,其中有218个表达增强,有455个蛋白质表达下降。结论 益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞的杀伤作用这些差异表达蛋白质有关,这些差异蛋白质有待质谱分析鉴定,为中药作用的分子机理研究提供了新的思路。

鼻咽癌HNE1细胞株端粒酶的表达(英文)

目的 探讨鼻咽癌HNE1细胞株端粒酶的表达。方法 采用TRAPPCRELISA法检测人HNE1、白血病HL6 0、肺癌TUL1、正常骨髓细胞 2例、培养的外周血单个核细胞及人血管平滑肌细胞株中端粒酶的表达。结果 人HNE1,HL6 0及TUL1细胞株中端粒酶均为阳性表达 ;其余 3种正常对照组细胞全部为阴性。HNE1细胞株热灭活后的端粒酶活性均为阴性 ,而在 10 2 个HNE1细胞中亦能检测到端粒酶活性。结论 端粒酶在鼻咽癌HNE1细株中具有高表达。端粒酶活性测定具有较高的特异性及灵敏度。

长片段非编码RNA XIST可改变人鼻咽癌HNE1细胞对顺铂的耐药性

目的明确长片段非编码RNA(lncRNA)X失活特异性转录本(XIST)对人鼻咽癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及可能的机制。方法通过荧光定量PCR检测人鼻咽癌顺铂耐药HNE1细胞株(HNE1/DDP)中XIST的表达特征。采用MTT试验观察XIST上调和下调对HNE1/DDP细胞DDP耐药性的影响,并通过EdU试验和流式细胞技术观察其对HNE1/DDP细胞增殖和凋亡的影响。采用蛋白质印迹法检测XIST上调和下调对促凋亡因子程序性细胞死亡4(PDCD4)和Fas配体(Fas-L)蛋白表达的影响。结果 XIST在HNE1/DDP细胞的表达量显著高于HNE1细胞(0.57±0.06 vs 0.1±0.02,P<0.05)。下调XIST的表达显著降低HNE1/DDP细胞对DDP的耐药性(P<0.05),而上调XIST增加对DDP的耐药性(P<0.05)。下调XIST的表达显著降低HNE1/DDP细胞增殖(6.17±1.93 vs 16.59 4.86, P<0.05)并诱导细胞凋亡[(18.04±4.72)%vs(4.22±1.65)%, P<0.05],而上调XIST增加细胞增殖(25.40±7.21 vs 13.16±3.95, P<0.05)并抑制细胞凋亡[(2.82±0.88)%vs(6.46±1.75)%, P<0.05]。下调XIST的表达显著增加HNE1/DDP细胞中PDCD4(4.10±0.42 vs 1.0±0.12, P<0.05和Fas-L(3.07 0.29 vs 1.0±0.14, P<0.05)蛋白的表达,而上调XIST降低PDCD4(0.36±0.11 vs 1.0±0.18, P<0.05)和Fas-L(0.17±0.09 vs 1.0±0.21, P<0.05)蛋白的表达。结论 XIST在HNE1/DDP细胞中表达升高,下调和上调XIST的表达可分别降低和增加HNE1/DDP细胞对DDP的耐药性,其机制可能与PDCD4和Fas-L蛋白表达改变相关。

鼻咽癌上皮细胞株HNE1差异表达基因的分离与鉴定

为了分离鼻咽癌差异表达基因 ,应用抑制性扣除杂交技术 ,在正向抑制性扣除杂交中 ,以鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA作为检测子 ,以人胚鼻咽上皮细胞cDNA作为驱赶子 ;在反向抑制性扣除杂交中 ,以人胚鼻咽上皮细胞cDNA作为检测子 ,以鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA作为驱赶子 ,分别通过抑制性扣除杂交 ,构建了鼻咽癌上皮细胞株HNE1表达下调和表达上调的两个扣除cDNA文库 .从鼻咽癌相关的扣除cDNA文库中随机挑取 1 2 0 0个克隆 ,采用菌落PCR扩增其插入cDNA片段 ,自动点膜制备成cDNA微阵列膜 ,分别用鼻咽癌上皮细胞株HNE1、人胚鼻咽上皮mRNA经逆转录标记cDNA探针 ,分别与cDNA微阵列膜杂交 ,通过杂交信号的自动扫描分析 ,对杂交信号存在 5倍差异的克隆进行测序 ,获得了 1 0个鼻咽癌差异表达基因的cDNA片段 ,其中 3个为新基因序列 ,其GenBank登录号为 :AF5 1 0 1 88、AF5 1 0 1 89和AF5 1 0 1 90 ,7个代表已知基因序列 .采用RT PCR证实S1 0 0A8,CK1 9和RBP1基因在人胚鼻咽上皮中高表达而在鼻咽癌细胞株HNE1中低表达 .

紫杉醇对人鼻咽癌低分化鳞癌HNE1细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨紫杉醇(TAX)对人鼻咽癌低分化鳞癌HNE1细胞系增殖和凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度TAX对HNE1细胞的增殖抑制情况,TAX 0、2.5、5、10、20、40、80 nmol/L对HNE1细胞分别作用12、24、36、48、72 h,以TAX 0 nmol/L作为对照组,采用流式细胞术和原位末端标记法(TUNEL)检测不同浓度TAX对HNE1细胞凋亡的影响。结果72 h最高增殖抑制率超过70%,不同浓度TAX(2.5、5、10、20、40、80 nmol/L)对HNE1细胞的增殖抑制率与作用时间呈时效关系(P<0.05),但与药物浓度未呈量效关系(P>0.05);流式细胞术检测细胞凋亡情况显示,TAX 0、5、10、20 nmol/L作用HNE1细胞48 h的早期及中晚期凋亡率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),呈浓度依赖关系。TUNEL检测细胞凋亡情况显示,TAX 0、5、10、20 nmol/L作用HNE1细胞48 h后的凋亡指数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TAX能够抑制人鼻咽癌低分化鳞癌HNE1细胞系的增殖,诱导细胞凋亡。

唑来膦酸联合紫杉醇不同序贯用药方案对人鼻咽癌HNE1细胞的作用

目的探讨唑来膦酸（ZOL）联合紫杉醇（TAX）不同序贯方案对人鼻咽癌低分化鳞癌HNE1细胞系增殖抑制和凋亡诱导作用，寻找两药联合合适序贯给药方式及相关机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法检测ZOL联合TAX不同序贯用药方案对HNE1细胞的增殖抑制，流式细胞术和原位末端标记法（TUNEL）检测各用药方案对HNE1细胞的凋亡影响，实时定量PCR和Western印迹法测定各用药方案对HNE1细胞Bcl-2、Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）3和Caspase9mRNA和蛋白表达水平的影响。结果MTF法提示实验组均能抑制HNE1细胞增殖（P〈0．05）；其中以ZOL序贯TAX组作用最强（P〈0．05）。流式细胞术检测早期细胞凋亡，实验组的早期凋亡率则分别为13．89％±0．69％、11．73％±0．54％、23．97％±0．68％、10．45％±0．16％和8．59％±0．74％，与对照组（2．59％±0．28％）比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；TUNEL检测细胞凋亡，实验组均能不同程度增加凋亡率（P〈0．05），ZOL序贯TAX组更为明显（P〈0．05）。实时定量PCR和Western印迹法检测表明用药组均下调抑凋亡蛋白Bcl-2和上调促凋亡蛋白Bax、Caspase9和Caspase3表达；ZOL序贯TAX组更为明显。结论ZOL能够增强TAX对HNE1增殖抑制和凋亡诱导能力，尤以ZOL序贯TAX作用最强；其机制可能通过影响Bcl-2家族，活化线粒体凋亡途径有关。

唑来膦酸对人鼻咽癌HNE1细胞的抗增殖和抗侵袭作用

目的探讨唑来膦酸对人鼻咽癌细胞株HNE1增殖、侵袭能力的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法检测细胞毒性，Transwell小室试验检测细胞侵袭能力，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量，明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9的活性，反转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western印迹法测定唑来膦酸对HNE1细胞MMP2、MMP9和VEGFmRNA和蛋白表达水平的影响。结果唑来膦酸浓度为2．5、5、10、20和40μmol／L分别作用HNE1细胞48和72h，72h的最高增殖抑制率接近50％，出现在40μmol／L组；但唑来膦酸对HNE1细胞的增殖抑制作用无时间和浓度依赖性。唑来膦酸作用24h后，0、10、20、40μmol／L组的穿膜细胞数分别为75．8±2．6、54．8±5．4、44．6±6．4和38．6±8．2，对照组（0μmol／L组）与处理组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。明胶酶谱法显示40μmol／L组MMP2和MMP9的酶活性明显低，但10、20μmol／L组无明显变化。ELISA法检测0、10、20、40μmol／L唑来膦酸作用HNE1细胞24h，上清VEGF浓度分别为（5264±89）、（4626±30）、（4155±40）和（1908±171）μg/L，对照组（0μmol／L组）与处理组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。RT—PCR显示MMP2、MMP9、VEGFmRNA的表达下调，Western印迹法检测其相应蛋白表达水平下降。结论唑来膦酸对人鼻咽癌HNE1细胞的增殖和侵袭能力有抑制作用；唑来膦酸能抑制HNE1细胞VEGF的表达和分泌，抑制MMP2和MMP9酶活性和表达。

连翘苷对体内外鼻咽癌血管新生的影响

【目的】观察连翘苷抗鼻咽癌效应及机制。【方法】(1)体外实验:不同浓度(0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L)连翘苷作用于体外人脐静脉内皮细胞(HUVECs)、人鼻咽正常上皮细胞系NP69和鼻咽癌细胞系HNE1和SUNE-1后,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,小管形成实验测定HUVECs血管新生活性,Transwell小室实验测定HUVECs侵袭活性,Western Blot法测定HNE1和SUNE-1细胞、HUVECs中血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Wnt和β-catenin表达水平。(2)体内实验:以连翘苷(10 mg/kg)对鼻咽癌异种移植瘤裸鼠进行干预后,采用血管造影法检测裸鼠鼻咽癌异种移植瘤的血管密度,免疫组织化学法检测鼻咽癌异种移植瘤中CD34、VEGFA和Wnt的表达。【结果】(1)连翘苷(0.625~10μmol/L)对体外HNE1和SUNE-1细胞活力有显著抑制效果,但对体外HUVECs和NP69的细胞活力无显著抑制效果;连翘苷(0.625~10μmol/L)可明显抑制HUVECs血管新生和侵袭活性,VEGFA(20μg/L)可削弱连翘苷对体外HUVECs血管新生和侵袭活性的抑制作用;连翘苷可下调VEGFA、Wnt和β-catenin在HNE1和SUNE-1细胞中的含量;连翘苷可诱导HUVECs中VEGFR2表达下调。(2)连翘苷(10 mg/kg)对裸鼠无明显毒副作用,但可显著抑制鼻咽癌异种移植瘤生长和血管新生,抑制鼻咽癌异种移植瘤组织中的CD34、VEGFA和Wnt的阳性表达。【结论】连翘苷对体内外鼻咽癌血管新生有显著抑制作用,其主要作用机制可能与调控Wnt/β-catenin/VEGFA/VEGFR2信号通路有关。

负载紫杉醇的温敏水凝胶对鼻咽癌的抑制作用

【目的】制备负载紫杉醇(PTX)的壳聚糖/β-甘油磷酸钠(CS/β-GP)温敏水凝胶,表征其理化性质,探讨其对体内外鼻咽癌生长的影响。【方法】在CS/β-GP水凝胶中加入PTX,制备PTX/CS/β-GP水凝胶,扫描电子显微镜观察水凝胶的形态,紫外光谱检测水凝胶的低临界转变温度(LCST)和体外释药性能。体外实验:细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定CS/β-GP水凝胶与PTX/CS/β-GP水凝胶对鼻咽癌HNE1细胞活力的影响,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)法检测细胞凋亡。体内实验:采用人HNE1细胞皮下注射法建立鼻咽癌移植瘤裸鼠模型,观察PTX和PTX/CS/β-GP水凝胶对移植瘤生长的抑制效果,免疫组织化学法检测移植瘤中Ki-67的表达,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测移植瘤细胞凋亡。【结果】制备的PTX/CS/β-GP水凝胶呈现规整的三维网络结构、良好的温敏性和药物缓释性能。CS/β-GP水凝胶对HNE1活力无明显抑制作用,PTX/CS/β-GP水凝胶可显著抑制HNE1细胞生长,并促进细胞凋亡。PTX/CS/β-GP水凝胶可显著抑制鼻咽癌移植瘤生长,其抗癌效应优于相同剂量的游离PTX。PTX/CS/β-GP水凝胶可抑制移植瘤组织中Ki-67的阳性表达,并促进TUNEL阳性细胞增多。【结论】CS/β-GP温敏水凝胶具有稳定的理化性质和良好的组织相容性,与游离PTX相比,PTX/CS/β-GP温敏水凝胶具有较低的细胞毒性和更好的抗癌效果,可以作为鼻咽癌治疗的候选药物负载系统。

连翘苷经miR-545-3p/SLC7A11途径诱导鼻咽癌细胞铁死亡

目的探究诱导铁死亡在连翘苷对鼻咽癌发挥抗癌效应中的作用,并研究其可能的作用机制。方法不同浓度连翘苷作用鼻咽癌HNE1细胞后,采用CCK-8法和细胞克隆形成实验分别检测鼻咽癌HNE1细胞活力和克隆形成能力;荧光探针检测鼻咽癌HNE1细胞内活性氧(ROS)水平,丙二醛(MDA)试剂盒检测鼻咽癌HNE1细胞内脂质过氧化情况;RT-qPCR法检测细胞中miR-545-3p表达,Western Blot实验测定溶质载体家族7成员11(SLC7A11)在鼻咽癌HNE1细胞中的表达水平;通过生物信息学工具分析miR-545-3p的可能靶基因,荧光素酶报告实验测定荧光素酶活性;通过裸鼠皮下肿瘤细胞注射法建立裸鼠鼻咽癌异种移植瘤模型,观察连翘苷(10 mg·kg^(-1))对鼻咽癌异种移植瘤生长的抑制效果;免疫组化检测异种移植瘤中Ki-67和SLC7A11的表达。结果连翘苷可明显抑制体外HNE1细胞活力(P<0.001),抑制细胞克隆形成能力(P<0.001),上调ROS和MDA表达水平(P<0.001),上调miR-545-3p表达水平(P<0.001),并下调SLC7A11的表达(P<0.001);通过生物学信息预测相关的靶基因和荧光素酶报告实验验证SLC7A11是miR-545-3p的直接作用靶点;过表达SLC7A11可明显削弱连翘苷对HNE1细胞活力、克隆形成能力以及对ROS和MDA表达的影响(P<0.001,P<0.05,P<0.01);连翘苷(10 mg·kg^(-1))可明显抑制鼻咽癌异种移植瘤生长,并抑制异种移植瘤组织中Ki-67和SLC7A11的阳性表达(P<0.001)。结论连翘苷可抑制体内外鼻咽癌细胞生长,促进鼻咽癌细胞铁死亡,miR-545-3p/SLC7A11信号通路可能是其主要作用机制。

BRD7基因转染对鼻咽癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨鼻咽癌负相关基因ＢＲＤ７对鼻咽癌细胞系ＨＮＥＩ生长的影响。方法：构建ＢＲＤ７基因真核表达载体ｐｃＤＮＡ３.１（＋）／ＢＲＤ７重组体，采用脂质体介导转染技术，将ＢＲＤ７真核表达重组质粒和空载体质粒分别导入鼻咽癌细胞系ＨＮＥ１，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ分别检测外源性ＤＮＡ的整合和ＢＲＤ７基因的表达，并借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验、流式细胞计数和裸鼠接种方法对转染细胞的生物学行为进行了检测。结果：转染ＢＲＤ７基因的 ＨＮＥ１生长倍增时间为５３ ｈ，较ＨＮＥ１（２３．９ｈ）和空载体转染 ＨＮＥ１（２４.１ｈ）明显延长，流式细胞仪表明，ＢＲＤ７表达升高延缓细胞由Ｇ０－Ｇ１期进人Ｓ期，ＢＲＤ７转染ＨＮＥ１在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降（Ｐ＜０．０１），裸鼠接种试验显示ＢＲＤ７基因转染细胞ＨＮＥ１生长速度受到抑制。结论：ＢＲＤ７基因重表达有助于ＨＮＥ１的恶性表型的逆转；ＢＲＤ７是一个鼻咽癌相关的抑瘤基因良好的候选者。