鼻咽癌细胞6-10B和HNE2放疗敏感性的分析

目的通过对比鼻咽癌细胞6-10B和HNE2的放疗敏感性,为临床鼻咽癌不同分期放射治疗提供依据。方法鼻咽癌细胞6-10B和HNE2用于放疗敏感性实验检测,通过集落形成实验检测细胞对放疗的敏感程度、流式细胞术检测细胞周期、流式细胞术与Western blot检测细胞凋亡、免疫荧光结合Westen blot检测DNA损伤标志物γ-H2AX表达水平。结果集落形成实验结果初步看出HNE2(IC50约3.5 Gy)对放疗的敏感性强于6-10B(IC50约5 Gy);细胞周期结果可以发现放疗后,两株细胞均出现G2M期周期阻滞;HNE2细胞放疗引起的DNA损伤和凋亡水平均高于6-10B。结论鼻咽癌细胞HNE2对放疗的敏感性强于6-10B,为鼻咽癌的不同分期治疗提供临床参考。

干扰长链非编码RNA AFAP1-AS1抑制人鼻咽癌HNE2细胞增殖、侵袭及体内移植瘤形成的研究

目的:探讨短发卡RNA(shRNA)干扰长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(lncRNA AFAP1-AS1)对人鼻咽癌(NPC)细胞增殖、侵袭及体内移植瘤形成的影响。方法:将HNE2细胞培养制成细胞悬液后分为空白对照组(Control)、阴性对照组(shRNA-NC)与lncRNA AFAP1-AS1干扰组(sh-AFAP1-AS1),通过试剂盒转入对应目的片段,进行RT-PCR验证;结晶紫染色法检测细胞增殖,FCM检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平,免疫组织化学法检测VEGF表达TUNEL检测肿瘤组凋亡,将转染sh-AFAP1-AS1成功的HNE2细胞及其阴性对照细胞悬浮液分别于右腋下静脉注入裸鼠体内,以成瘤直径超过5 mm为抑制成功。2周后比较2组裸鼠肿瘤重量、AFAP1-AS1表达量、肿瘤组织细胞凋亡、VEGF表达变化。结果:sh-AFAP1-AS1细胞AFAP1-AS1表达水平和细胞增殖率低于Control组(P<0.05);sh-AFAP1-AS1细胞凋亡率高于Control组(P<0.05);sh-AFAP1-AS1细胞的侵袭率低于Control组(P<0.05),sh-AFAP1-AS1细胞中VEGF和MMP-9蛋白表达水平较Control组显著降低(P<0.05);sh-AFAP1-AS1组裸鼠肿瘤质量、AFAP1-AS1表达量均较Control组降低(P<0.05);sh-AFAP1-AS1组裸鼠肿瘤组织的细胞凋亡率高于Control组(P<0.05),肿瘤组织中VEGF表达量低于Control组(P<0.05)。结论:AFAP1-AS1可能通过调控癌细胞增殖、转移及侵袭相关蛋白表达参与NPC HNE2细胞的增殖、侵袭及转移过程。

丝裂霉素C对鼻咽癌细胞HNE2和HNE2/lmp1抑制作用及其机制

目的探讨丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)对鼻咽癌细胞HNE2和HNE2/lmp1生长抑制作用及其机制。方法以体外培养的鼻咽癌细胞HNE2和HNE2/lmp1为研究对象,以不同浓度的MMC(40、20、10、5、2.5、1.25μg/mL)作用于HNE2和HNE2/lmp1细胞,MTS法检测MMC对人鼻咽癌细胞HNE2和HNE2/lmp1生长的抑制作用;荧光显微镜观察MMC干预24 h前后HNE2细胞的形态变化;流式细胞仪检测MMC对鼻咽癌细胞HNE2和HNE2/lmp1凋亡及细胞周期的影响;比色法检测MMC作用于HNE2和HNE2/lmp1细胞后Caspase-3的活化度变化。结果MMC对HNE2和HNE2/lmp1细胞生长有明显的抑制作用,呈剂量依赖性。40μg/mlMMC作用于HNE2和HNE2/lmp1细胞24 h的抑制率分别为(72.97±4.93)%和(69.42±2.94)%。MMC作用于HNE2细胞后可见悬浮细胞增多,细胞胞体缩小、变圆、碎裂,胞内出现颗粒样物质。流式细胞仪检测表明,MMC对HNE2和HNE2/lmp1肿瘤细胞的抑制主要表现为诱导细胞凋亡,凋亡率分别由4.46%和0.75%增高至18.09%和10.27%,而对细胞周期的影响较小。MMC能明显上调HNE2和HNE2/lmp1细胞Caspase-3活性,MMC浓度越高作用时间越长caspas-3活化度越高,在浓度和时间水平存在差异。统计结果显示HNE2/lmp1细胞较HNE2细胞有较高的对抗丝裂霉素抑制作用的能力。两细胞组caspas-3活化度也相应存在差异。结论MMC可明显抑制鼻咽癌细胞HNE2和HNE2/lmp1的生长,促进细胞凋亡,其机制和Caspase-3有关。EBV-潜伏膜蛋白1(latent membrance protein 1,lmp1)可通过caspase-3途径抑制HNE2细胞的凋亡对抗丝裂霉素的细胞生长抑制作用。

维甲酸对鼻咽癌细胞生长、表型和瘤基因表达的作用

研究了维甲酸（ＲＡ）对鼻咽癌细胞生长、表型和癌基因表达的作用．用ＲＡ诱导鼻咽癌细胞，绘制诱导前后的细胞曲线，观察细胞形态，并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和ＤＮａｓｅⅠ超敏感区分析法检测基因表达和调控．结果表明，ＲＡ能显著抑制鼻咽癌细胞的生长，前５ｄ下降约５０％．ＲＡ处理后的细胞从典型的多边形形态变成扁平、细长，类似纤维细胞状的形态．ＲＡ诱导前ｃ－ｍｙｃ基因和ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因ＨＮＥ２细胞中高表达，而诱导后ｃ－ｍｙｃ基因表达水平急剧下降，ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因无明显改变．在实验中还发现ＲＡ诱导前后的ｃ－ｍｙｃ基因和ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因中一些重要的超敏感位点和它们的功能．由实验结果可得到如下结论：ＲＡ能促进鼻咽癌细胞分化，通过对染色体上调控位点的作用来抑制ｃ－ｍｙｃ基因的表达，ＤＮａｓｅⅠ超敏感位点与细胞的分化程度、细胞的组织特异性和基因表达状态有关，ｃ－ｍｙｃ基因可通过不同的调控方式而失活．

6-姜烯酚对鼻咽癌的作用及机制研究

目的:探究6-姜烯酚对人鼻咽癌CNE2和HNE2细胞增殖、凋亡和迁移的影响并初步探究其机制。方法:6-姜烯酚处理组采用6-姜烯酚(25μmol·L^(-1))处理鼻咽癌CNE2和HNE2细胞,对照组加入同体积DMSO,空白组不做处理;48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测凋亡、增殖、上皮-间充质转化相关蛋白表达情况。结果:与空白组和对照组比较,6-姜烯酚处理组细胞增殖明显被抑制,凋亡细胞明显增加,PCNA蛋白表达水平明显降低,Caspase-3蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);划痕实验划线48 h后,6-姜烯酚处理组的缝隙间距明显大于空白组和对照组,EMT相关蛋白表达水平显著改变,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:6-姜烯酚可抑制CNE2和HNE2细胞增殖和迁移并促进其凋亡。

LMP1通过Survivin抑制^(60)Co诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的 研究EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)介导凋亡抑制蛋白 (Survivin)表达对辐射效应的影响。方法 利用LMP1可调控表达鼻咽癌细胞系 (Tet on LMP1HNE2 )诱导LMP1表达 ,同时 60 Co照射 5Gy ,采用形态学观察、流式细胞术和半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase 3)活性检测等方法 ,分析LMP1表达对60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡的影响。用反义Survivin寡核苷酸阻断Survivin表达 ,观察Sur vivin表达阻断对60 Co辐射效应的影响。结果 LMP1表达抑制60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡 ,LMP1表达60 Co照射组形态学和流式细胞术检测凋亡率 (32 .7%± 2 .1% ,6 .3% )明显低于LMP1表达阴性组 (6 6 .0 %± 3.0 % ,2 9.6 % ) (P <0 .0 5 ) ;转染Survivin反义寡核酸后细胞凋亡率 (5 9.3%± 3.2 % ,3.0 % )明显高于对照组 (2 6 .0 %± 2 .6 % ,8.6 % ) (P <0 .0 5 ) ;同样转染Survivin反义寡核酸组Caspase 3活性 (3.78nmol/ 10 6)高于对照组 (2 .79nmol/ 10 6)。结论 提示LMP1通过介导Survivin表达而抑制60 Co照射诱导凋亡 ,Survivin反义核酸协同辐射诱导肿瘤细胞凋亡 ,Survivin作为增敏放射治疗靶 ,具有潜在的临床意义。