麻黄细辛附子汤对尘螨变应原Der p1诱导的鼻黏膜上皮细胞屏障损伤的影响

目的基于RhoA/ROCK信号通路探讨麻黄细辛附子汤及麻黄对尘螨变应原Der p1诱导的人鼻黏膜上皮细胞(HNEpC)屏障损伤的影响及作用机制。方法体外培养HNEpC,将细胞分为对照组、模型组、麻黄组、抑制剂组及麻黄细辛附子汤低、中、高剂量组。电阻仪检测细胞跨膜电阻,酶标仪检测FITCDextran通透性,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot检测紧密连接蛋白咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白1(Claudin-1)及通路蛋白RhoA、ROCK1表达,免疫荧光染色检测肌动蛋白(F-actin)表达。结果与对照组比较,模型组细胞间隙增大,出现环形损伤,标准化跨膜电阻显著降低(P<0.01),FITC-Dextran通透性显著增加(P<0.01),Occludin、Claudin-1蛋白表达显著降低(P<0.01),RhoA、ROCK1、F-actin蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,麻黄组、抑制剂组和麻黄细辛附子汤低、中、高剂量组细胞排列紧密,环形损伤被修复,标准化跨膜电阻显著升高(P<0.01),FITC-Dextran通透性显著降低(P<0.01),Occludin、Claudin-1蛋白表达显著升高(P<0.01),RhoA、ROCK1蛋白表达显著降低(P<0.01),麻黄细辛附子汤低、中、高剂量组和抑制剂组细胞F-actin蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论麻黄细辛附子汤及麻黄可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善鼻黏膜通透性,修复Der p1诱导的HNEpC屏障损伤。

基于网络药理学和实验验证的麻黄细辛附子汤治疗变应性鼻炎的作用机制探讨

目的基于网络药理学和分子对接技术探讨麻黄细辛附子汤治疗变应性鼻炎(AR)的作用机制,并结合体外细胞实验进行验证。方法运用TCMSP平台获取麻黄细辛附子汤的活性成分及作用靶点,通过GeneCards、OMIM、PharmGKB、TTD和DrugBank数据库检索AR疾病靶点。利用STRING平台构建蛋白质相互作用(PPI)网络。通过R语言进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。利用AutoDock对关键化合物与核心靶基因进行对接验证。体外培养人鼻黏膜上皮细胞(HNEpC),使用酶联免疫吸附(ELISA)、流式细胞术、实时荧光定量PCR(qRTPCR)的方法验证麻黄细辛附子汤对炎症因子、细胞凋亡、部分关键靶点表达的影响。结果经筛选得到麻黄细辛附子汤活性成分62个,治疗AR靶点99个。PPI核心靶点包括前列腺素G/H合成酶2(PTGS2)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等。KEGG富集分析涉及与免疫炎症相关信号通路,与细胞增殖、凋亡相关信号通路,GO富集分析涉及对脂多糖反应等生物过程,细胞因子受体结合、细胞因子活性等分子功能。分子对接结果表明,活性成分与靶基因紧密结合。细胞实验结果显示,与模型组比较,麻黄细辛附子汤可以减少炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌(P<0.05、0.01),抑制细胞凋亡(P<0.01),降低PTGS2、MAPK3 mRNA表达、升高MMP-9 mRNA表达(P<0.05、0.01)。结论麻黄细辛附子汤可以通过多种活性成分作用于多靶点、多通路,调控炎症反应、免疫功能、细胞凋亡等途径发挥治疗AR的作用。