miR-802靶向Hnf1B抑制胰岛素分泌的作用研究

探究miR-802对于胰岛β细胞分泌胰岛素的影响及其作用机制。利用miR-802类似物及miR-802抑制剂分别在胰岛原代细胞及Min6细胞过表达或敲降miR-802;采用ELISA法检测miR-802对胰岛素分泌的影响;通过miRNA靶基因数据库预测、荧光素酶报告法和Western blot法确证miR-802的靶基因;最后开展功能回复实验阐明miR-802调控胰岛β细胞分泌胰岛素的作用机制。结果表明:在胰岛原代细胞和Min6细胞中过表达miR-802能抑制胰岛β细胞分泌胰岛素;qPCR和Western blot实验证明miR-802通过抑制靶基因肝细胞核因子1B(hepatocyte nuclear factor 1β,Hnf1B)的转录和翻译,从而抑制胰岛素的分泌。

HNF1A和HNF1B基因遗传变异与乳腺癌遗传易感性的关联研究

目的:研究肝细胞核因子(hepatocyte nuclear factor 1,HNF)1A和HNF1B基因遗传变异与乳腺癌遗传易感性之间的相关性。方法:采用病例对照研究,选取1032例经病理组织学确诊的乳腺癌患者以及与之相匹配的1063例健康女性对照,应用Illumina基因分型平台对HNF1A和HNF1B基因多态位点进行基因分型检测;在调整年龄、初潮年龄、绝经状态的基础上,通过Logistic回归计算OR值及95%CI,比较不同基因型与乳腺癌发病风险之间的相关性。结果:位于HNF1A基因上的3个位点与中国人群乳腺癌发病风险显著相关,其中包括HNF1A基因外显子区的rs2464196(OR=0.80,95%CI:0.71~0.91,P=7.45×10^(-4)),HNF1A基因内含子区的rs1183910(OR=0.87,95%CI:0.77~0.99,P=0.039)和rs7310409(OR=0.86,95%CI:0.76~0.98,P=0.023)。进一步FDR校正后,rs2464196位点与乳腺癌易感性仍然存在着显著的相关性(P=4.47×10^(-3))。结论:肝细胞核因子HNF1A基因上的rs2464196多态位点可能是中国人群乳腺癌的易感标志物。

HNF1B基因新发变异致胎儿肾囊肿的遗传学分析

目的探讨1例先天性肾囊肿胎儿的临床特征及基因变异特点。方法收集胎儿的临床资料,应用染色体核型分析、低深度全基因组拷贝数变异测序(CNV-seq)检测和家系全外显子组测序(trio-WES)技术对胎儿及其父母进行遗传学分析,对候选变异进行Sanger测序家系验证,应用生物信息学工具评估变异氨基酸保守性,分析蛋白质结构改变,预测变异蛋白致病性。结果胎儿系统超声检查提示双侧多发肾囊肿。核型分析未检出染色体数目或结构异常。CNV-seq检测未发现非整倍体或与胎儿表型相关的致病性拷贝数变异。trio-WES发现胎儿携带HNF1B基因NM_000458.2:c.1120dupA(p.Met374Asnfs^(*)26)移码变异,Sanger测序验证该变异为新发变异,变异氨基酸在多个物种中高度保守,变异HNF1B蛋白结构受损,缺失了尾部的关键结构域。结合胎儿临床表型及遗传学检测结果,考虑诊断为HNF1B基因新发变异导致的常染色体显性遗传性HNF1-β肾病。结论HNF1B基因c.1120dupA新发移码变异是胎儿多发肾囊肿的遗传学病因,对生后表型具有重要预测作用。本研究丰富了HNF1B基因的致病变异谱。

HNF1B基因相关疾病临床表型分析

目的 了解HNF1B基因相关疾病临床表型.方法 选择2013至2017年在北京大学第一医院儿科和妇产科住院、门诊就诊的不明原因肾功能减退的4例患者（例1、2、4为男性患儿,例3为成年女性患者）,胎儿期肾脏超声异常的胎儿3例,经目标区域捕获二代测序、实时定量PCR或Sanger测序验证检测到HNF1B基因突变.以其为研究对象,回顾性分析其肾脏影像、血生化、尿液常规和其他必要检查结果.结果 4例患者中,例1和例4自胎儿期起病,例2和例3分别于13岁和28岁起病;除例3外,其余3例患者均有不同程度的肾功能减退;例4尚表现有肾病综合征和糖尿,例2尚表现有早发的甲状旁腺功能亢进和肾性骨病,例3尚有糖尿病;仅例3有肾脏病家族史,其余3例患者均无肾脏病家族史;4例患者均有肾脏结构异常,包括双肾多发囊肿、肾脏小和肾脏高回声.3例胎儿均经产前超声检查发现肾脏高回声,伴或不伴肾脏囊肿;仅1例胎儿羊水过多;2例胎儿有肾脏病家族史.结论 HNF1B基因相关疾病临床表型存在异质性,肾脏受累最为常见,多表现为肾脏囊肿,儿童期会出现肾功能减退;胎儿期肾脏超声显示肾脏高回声或肾脏囊肿者应想到HNF1B基因相关疾病的可能.

一例婴儿型多囊肾病胎儿的HNF1B基因新发变异分析

目的对一例婴儿型多囊肾病胎儿的HNF1B基因变异进行分析, 明确其致病原因。方法收集引产胎儿的新鲜组织及其父母外周静脉血样, 提取基因组DNA, 进行全外显子测序分析, 筛查出与临床表型相关的变异位点, 并通过Sanger测序进行位点验证。结果胎儿组织样本中检测到HNF1B基因的一个c.1370C>T(p.P457L) 杂合变异, 其父母为正常。该变异经检索相关数据库及文献均未见报道为新变异。结论 HNF1B基因的c.1370C>T新发杂合变异可能为婴儿型多囊肾的致病原因。本研究结果为该病的遗传咨询和临床产前诊断提供了依据。

HNF1B基因变异所致早发性糖尿病合并肾发育不良1例并文献复习

肾囊肿和糖尿病综合征(RCAD),又称青年人中的成年发病型糖尿病5型(MODY5),是一种由肝细胞核因子1β基因(HNF1B)异常引起的常染色体显性遗传病,主要表现为由肾脏发育异常引起的非糖尿病性肾脏疾病和糖尿病。该类患者肾脏疾病表现差异较大,除肾囊肿还包括先天性肾脏畸形、单侧肾缺如等,并多伴早发糖尿病。该类病例较易误诊,现总结石家庄市第二医院收治的1例符合MODY5临床表现的早发性糖尿病合并肾发育不良家系,并进行文献复习。

HNF1B基因多态性与前列腺癌发病风险相关性的Meta分析

目的系统评价HNF1B基因多态性与前列腺癌发病风险的相关性。方法计算机检索Pub Med、EMbase、The Cochrane Library、CNKI、CBM和Wan Fang Data数据库,搜集有关HNF1B基因多态性与前列腺癌发病风险相关性的病例-对照研究,检索时限均从建库至2017年12月。由2名研究者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后,采用Stata 14.0软件进行Meta分析。结果共纳入15个病例-对照研究,包括病例组30 532例、对照组38 832例。Meta分析结果显示,HNF1B基因rs4430796多态性[G vs.A:OR=0.802,95%CI(0.784,0.821),P<0.001;GG vs.AA:OR=0.659,95%CI(0.606,0.717),P<0.001;AG vs.AA:OR=0.762,95%CI(0.714,0.814),P<0.001)],rs11649743多态性[A vs.G:OR=0.875,95%CI(0.820,0.941),P<0.001;AA vs.GG:OR=0.669,95%CI(0.564,0.792),P<0.001;AG vs.GG:OR=0.855,95%CI(0.798,0.916),P<0.001)];rs7501939多态性[A vs.G:OR=0.833,95%CI(0.807,0.859),P<0.001],rs3760511多态性[A vs.C:OR=0.834,95%CI(0.803,0.868),P<0.001]均与前列腺癌发病风险存在显著相关性。结论当前证据表明,HNF1B基因多态性与前列腺癌发病风险存在显著相关性。受纳入研究数量和质量的限制,上述结论尚待更多高质量研究予以验证。

Sortilin-induced lipid accumulation and atherogenesis are suppressed by HNF1b SUMOylation promoted by flavone of Polygonatum odoratum

This study aims to investigate the impact of hepatocyte nuclear factor 1β(HNF1b)on macrophage sortilin-mediated lipid metabolism and aortic atherosclerosis and explore the role of the flavone of Polygonatum odoratum(PAOA-flavone)-promoted small ubiquitin-related modifier(SUMO)modification in the atheroprotective efficacy of HNF1b.HNF1b was predicted to be a transcriptional regulator of sortilin expression via bioinformatics,dual-luciferase reporter gene assay,and chromatin immunoprecipitation.HNF1b overexpression decreased sortilin expression and cellular lipid contents in THP-1 macrophages,leading to a depression in atherosclerotic plaque formation in low-density lipoprotein(LDL)receptor-deficient(LDLR−/−)mice.Multiple SUMO1-modified sites were identified on the HNF1b protein and co-immunoprecipitation confirmed its SUMO1 modification.The SUMOylation of HNF1b protein enhanced the HNF1b-inhibited effect on sortilin expression and reduced lipid contents in macrophages.PAOA-flavone treatment promoted SUMO-activating enzyme subunit 1(SAE1)expression and SAE1-catalyzed SUMOylation of the HNF1b protein,which prevented sortilin-mediated lipid accumulation in macrophages and the formation of atherosclerotic plaques in apolipoprotein E-deficient(ApoE−/−)mice.Interference with SAE1 abrogated the improvement in lipid metabolism in macrophage cells and atheroprotective efficacy in vivo upon PAOA-flavone administration.In summary,HNF1b transcriptionally suppressed sortilin expression and macrophage lipid accumulation to inhibit aortic lipid deposition and the development of atherosclerosis.This anti-atherosclerotic effect was enhanced by PAOA-flavone-facilitated,SAE1-catalyzed SUMOylation of the HNF1b protein.

重编程诱导犬脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化

本研究旨在利用转基因技术诱导脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,AMSCs)分化为胰岛素分泌细胞(insulin producing cells,IPCs),通过干细胞疗法达到临床治疗糖尿病的目的。本试验首先验证了Hnf1b基因在体外诱导犬AMSCs向IPCs分化中的作用,在此基础上联合胰岛细胞发育过程中起关键作用的级联调控因子Pdx1、Ngn3、Pax4、Nkx6.1,组成三种不同的多基因共表达腺病毒感染犬AMSCs,重编程其向IPCs分化,通过检测筛选出最佳诱导组合。结果表明,Hnf1b基因对体外诱导犬AMSCs向IPCs分化具有促进作用。pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3(A)、pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3-Pax4(B)、pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3-Nkx6.1(C)三种组合的多基因共表达腺病毒载体,在感染犬AMSCs 25 d后,A、B、C三组均形成胰岛样细胞团,且B组数量最多,双硫腙染色着色最深;高糖刺激下B组的胰岛素分泌量极显著高于A组和C组。A、B、C三组的胰岛细胞发育相关基因表达量显著升高;B组Pdx1基因的表达量显著高于A组和C组,Pcsk1基因表达量极显著高于C组;Ins基因的表达量显著高于A组。综上所述,Hnf1b基因对体外诱导犬AMSCs向IPCs分化具有促进作用,Hnf1b、Pdx1、Ngn3和Pax4基因联合诱导效率最佳。该研究结果为探究干细胞向IPCs分化的更高效方法提供新参考,也为糖尿病的临床治疗提供新思路。

全外显子测序检测6个囊性肾病胎儿及其核心家系的致病突变

目的全外显子测序技术检测6个囊性肾病胎儿及其核心家系,寻找致病变异,为遗传咨询、产前诊断或植入前诊断提供遗传学数据支持。方法应用Illumina Hiseq2500测序平台,对超声检查提示为囊性肾病、染色体微阵列检测(CMA)未见异常的胎儿标本进行家系全外显子检测,参考数据库Human Genome 19(hg19/GRCh37),根据美国医学遗传学与基因组学学会指南(ACMG,2015)及指南应用建议评估变异致病性,对评级可疑致病位点应用Sanger测序验证。结果家系WES检出3个家系存在异常突变,其中1个家系的突变为遗传性,2个家系胎儿的突变为新发突变;余3个家系未检出明确致病突变。胎儿1 PKHD1基因c.5869G>A(父源)和c.9455delA复合杂合突变(母源),均为可能致病的变异。胎儿5 HNF1B基因c.826C>T杂合突变,为致病性新发突变。胎儿6 HNF1B基因c.1318G>T杂合突变,为可能致病性新发突变。Sanger测序验证结果与全外显子检测结果一致。结论对囊性肾病可运用家系核心成员全外显子检测,筛选出候选变异后进行Sanger测序验证,并对家系进行遗传分析,有助于遗传咨询、再次妊娠的产前诊断或辅助生殖的植入前诊断。本研究检出3个未见文献报道的可能致病突变位点,1个致病性突变位点已在个别文献报道但是未在国际公认数据库明确为致病突变位点,本研究拓宽了囊性肾病的致病基因位点谱。

多脏器功能受累的青少年起病的成人型糖尿病5型一例

患者,男,27岁,因“发现血糖升高3年余”于2020年3月24日收入我科。患者3年前体检空腹血糖>7 mmol/L,餐后2 h血糖12 mmol/L,无“三多一少”症状,仅饮食、运动控制治疗。1年前测空腹血糖9~10 mmol/L,开始服用西格列汀0.05 g每日1次、二甲双胍0.5 g每日2次降糖治疗,监测空腹血糖6~8 mmol/L,餐后2 h血糖8~14 mmol/L,为寻求进一步诊治遂来我院就诊。

肝功能异常的少见原因:肾囊肿和糖尿病综合征1例

报道1例以肝功能异常及血红蛋白升高起病,最终诊断肾囊肿和糖尿病综合征的病例。患者诊治过程曲折,期间经历了多家医院就诊、3次肝穿刺组织学检查,但病因一直未能明确。最终,通过基因检测等检查确诊。