hNIS基因转导黑色素瘤细胞介导^(125)I摄取的实验研究

目的 探讨克隆的人钠 碘同向转运体 (hNIS)基因cDNA的生物学性能及其用于黑色素瘤放射治疗的可能性。方法 用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)从人甲状腺组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA序列 ,将其克隆至pUCm T载体并亚克隆至真核载体pcDNA3中 ,电击法将重组质粒导入黑色素瘤细胞 (B16 )建立新细胞系 (B16 A) ,在体外培养条件下研究其对放射性碘的摄取及外流情况。结果 成功克隆了hNIS基因 ,建立了能稳定表达hNIS基因的新型细胞系B16 A和单转空质粒pcDNA3的细胞系B16 B。B16 A细胞的摄碘能力较B16细胞高 17倍 ,较单转空质粒pcDNA3细胞系B16 B高 19倍。碘的外流过程十分迅速 ,有效半衰期 (T1 2 )仅 10min。结论 体外培养条件下 ,hNIS基因转导黑色素瘤细胞其本身足以介导碘的摄取 ,但有效半衰期较短 ,有待进一步研究如何增加放射性碘的摄取量及延长其细胞内滞留时间 ,从而提高放射生物学效应。

hTERT核心启动子调控的hNIS重组腺病毒的构建与鉴定

目的:构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子调控的人钠碘转运体(hNIS)基因重组腺病毒,并初步鉴定。方法:将hTERT核心启动子从hTERT/pcDNA3.1(+)质粒中切出,亚克隆至含全长hNIS cDNA序列的质粒载体FL*-hNIS/pcDNA3,应用限制性内切酶将hTERT-hNIS片段切出后连入穿梭质粒载体pAdTrack,应用AdEasy系统构建出重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS。同时,构建CMV启动子调控的hNIS重组腺病毒Ad-CMV-hNIS作为阳性对照。应用RT-PCR方法验证hTERT在转染肿瘤细胞中的转录活性。结果:成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS、Ad-CMV-hNIS并经PCR验证正确。RT-PCR证实hNIScDNA能从Ad-hTERT-hNIS转染的细胞中扩增出来。结论:成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS;hTERT核心启动子在转染的肺癌A549细胞中具有转录活性。为下一步的碘治疗实验提供了实验依据。

hNIS基因转导黑色素瘤细胞介导放射性碘摄取的实验研究

目的 获取人钠 /碘同向转运体 (hNIS)基因cDNA ,研究其转导黑色素瘤细胞在体外和体内能否介导放射性碘摄取 ,从而探索该策略用于黑色素瘤放射性碘治疗的可能性。方法 运用逆转录聚合酶链反应从人甲状腺组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA ,将其克隆至真核载体pc DNA3 中 ,电转化法分别将重组质粒pc DNA3 hNIS及空质粒pc DNA3 转导黑色素瘤细胞 (B16 ) ,分别建立了细胞系B16 A和B16 B。在体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取及外流情况 ,继而将三种细胞系接种C5 7小鼠行13 1I显像和肿瘤摄取12 5I动态定量测定。结果 成功克隆到hNIS基因 ,并建立了能稳定表达hNIS的新型细胞系B16 A。B16 A细胞的摄碘能力较B16细胞高 17倍 ,较B16 B细胞高 19倍。碘的外流过程迅速 ,T1/ 2eff仅 10min。体内实验发现B16 A细胞所形成肿瘤能摄取放射性碘 ,腹腔注射12 5I后 1、2、4、12、2 4h肿瘤组织的 %ID/ g平均为 12 .2 2、10 .91、8.73、1.2 4、0 .19,12 5I在肿瘤组织内的生物半衰期约为 6h。B16 A细胞系所成肿瘤摄碘量与对照组相比较 ,P <0 .0 1,差别具有高度统计意义。结论 hNIS基因转导黑色素瘤细胞足以介导放射性碘摄取 ,但有效半衰期较短 ,难以产生足够的治疗剂量 ,有必要进一步研究如何增加放射性碘的摄取?

hNIS基因转导黑色素瘤细胞介导放射性碘(^(125)I,^(131)I)摄取的体内实验

采用电转化法分别将含hNIS基因的重组质粒pc-DNA3-hNIS及空质粒pc-DNA3转导黑色素瘤细胞(B16),分别建立了细胞系B16-A和B16-B。将三种细胞系(B16-A、B16-B和B16)分别接种于C57小鼠右侧腹部皮下,当肿瘤生长至直径约10mm时进行131I全身显像;于注射125I后不同时相解剖肿瘤并测量其对125I的摄取量。结果显示:B16-A细胞系所成肿瘤见明显的放射性碘摄取,腹腔注射125I后1、2、4、12、24h每克肿瘤组织摄取125I放射性摄取百分数分别为12.22±0.71、10.91±0.72、8.73±0.99、1.24±0.29和0.19±0.03%ID/g。125I在B16-A肿瘤组织内的生物半衰期约为6h。对照组B16和B16-B细胞系所成肿瘤未见放射性碘摄取,两者相比,无统计学差异(P>0.05),将二组合并成一组作为对照,B16-A细胞系所成肿瘤摄碘量与之相比有显著差异,P<0.01。说明hNIS基因转导黑色素瘤细胞在体内足以介导放射性碘的摄取,但由于碘在肿瘤内的滞留时间较短,难以产生足够的治疗剂量。

hNIS和hTPO-1基因的同时克隆及测序

目的同时克隆人钠/碘同转运体(hNIS)和甲状腺过氧化物酶(hTPO-1)基因,为下一步共同转染肿瘤细胞介导放射性碘的摄取与有机化,延长放射性碘的停留时间,为治疗未分化甲状腺癌和非甲状腺癌提供更为有效的方法。方法运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR),从人甲状腺组织总RNA中,同时全长扩增出hNIS和hTPO-1基因cDNA序列,并将它们分别克隆到pUCm-T载体上。结果与结论hNIS和hTPO-1基因cDNA,可同时成功克隆和测序。

hNIS基因突变与碘转运障碍及先天性甲状腺功能减退

人钠/碘同向转运体(hNIS)基因位于第19号染色体上,已发现9种hNIS基因突变类型,以错义突变最多。这些突变经体外实验证实均可使hNIS失去活性,导致碘转运障碍和(或)先天性甲状腺功能减退。其确切机制尚未阐明,可能与突变后hNIS蛋白不能被表达;不能准确表达于甲状腺滤泡细胞膜;或蛋白构型改变使其不具备完整的功能等有关。

挤压态HNi55-7-4-2镍黄铜合金的热变形行为和加工图

首先,以挤压态HNi55-7-4-2镍黄铜合金为对象,应用热模拟机Gleeble-3500对其进行等温热压缩实验,研究该合金在600~800℃和0.01~10 s^(-1)条件下的热变形行为。其次,基于动态材料模型和极性交互模型,分别建立HNi55-7-4-2镍黄铜合金的Prasad、Murty和PRM加工图,并结合不同变形条件下的微观组织演变,对比3种加工图的预测效果。结果表明:Murty加工图预测效果最差,而Prasad加工图和PRM加工图预测效果较好。HNi55-7-4-2镍黄铜合金的最优热变形加工参数范围为:变形温度为600~725℃,应变速率为0.01~0.07 s^(-1)和变形温度为740~800℃,应变速率为0.05~1 s^(-1)。失稳区的变形机制为局部塑性流动和混晶组织,安全区的变形机制为动态再结晶。

人甲状腺钠/碘转运体基因全长的克隆及其重组表达质粒的构建

目的:利用基因工程的方法制备甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)cDNA,为今后的转基因治疗奠定物质基础。方法:采用TRIzol一步法,从甲状腺组织中提取总RNA,再应用RT-PCR扩增出hNIS基因全长,然后采用TOPO克隆技术构建重组表达质粒pcDNA3.1D/FLhNIS,并进行酶切和测序鉴定。结果:成功制备了hNIScDNA并构建了其重组表达质粒。结论:为最终实现131I治疗不摄碘的肿瘤提供了分子生物学基础。

HNi55-7-4-2合金高温本构模型构建及应用

HNi55-7-4-2合金是一种新型复杂耐磨黄铜合金,为建立该材料基于有限元FORGE平台的本构模型,用Gleeble-3500热模拟试验机对其在变形温度为600~800℃、应变速率为0.01~10 s^-1的范围内进行等温热压缩试验。基于Hansel-Spittel模型建立该合金的本构模型,引入统计学方法及数值模拟对模型精度量化评估。结果表明:所建立模型的平均相对误差绝对值和均方根误差分别为5.6791%和2.6456 MPa,相关系数为0.9912,数值模拟得到的力-位移曲线与试验数据吻合,本构模型预测精度较高。将该模型应用于某齿环热精锻成形数值模拟,模拟结果与实际生产结果吻合。

同步器齿环用HNi55-7-4-2合金高温本构模型构建及应用

采用Gleeble-3500热模拟试验机在873~1023 K的变形温度、0.01~10 s^-1的应变速率下对HNi55-7-4-2镍黄铜合金进行等温热压缩实验,获得了该合金的真实应力-应变曲线,分析热压缩过程中摩擦和温升效应对其流变应力的影响,修正了流变应力曲线。基于修正的应力-应变数据,分别采用考虑应变补偿的修正Arrhenius(M-Arrhenius)模型和修正Zerilli-Armstrong(M-ZA)模型构建了合金的本构模型,对比分析了两种模型的拟合精度。结果表明:M-ZA模型的相关系数和平均绝对误差分别为0.997和4.21%,其预测精度优于M-Arrhenius本构模型(0.991,6.68%)。将该模型应用于某齿环热精锻成形进行数值模拟,模拟结果与实际生产结果吻合,为HNi55-7-4-2镍黄铜合金高温塑性成形数值模拟提供了准确的材料模型。

SNOW系统高速网络接口板HNI的设计与实现

HNI是为并行机群系统 SNOW研制的高性能网络接口板 ,它可以高效地支持 SNOW系统网络 Homer互联协议和 DSM协议 .HNI采用协议处理器和专门设计的协议硬件加速部件 ,实现了多用户访问模式 ,具有很强的协议处理能力 .首先给出了 HNI的结构方案 ;介绍了它的逻辑实现 ;然后对 HNI进行了测试并对测试结果进行了分析 .

医院网络管理信息系统的设计与实现

我国县及县以上医院共有14713所,运用局部网络建设较为完整的一体化医院管理信息系统已是人们非常热门的话题,我们经过四年多时间的研制开发,现已建成《医院网络管理信息系统》,本文全面系统的介绍了该系统的设计、实现方法及其技术特点和我们的体会。

基于修正Arrhenius模型和SVR-PSO模型的HNi55-7-4-2合金高温本构模型的对比

采用Gleeble-3500热模拟试验机对HNi55-7-4-2合金进行热压缩实验,研究其高温流变应力行为。通过等温热压缩实验和摩擦修正获得了HNi55-7-4-2合金在温度为600~800℃、应变速率为0.01~10 s^-1时的应力-应变曲线。结果表明:HNi55-7-4-2合金的流变应力值与温度、应变速率和变形量之间成非线性关系,流变应力值随着应变率增大而升高,随着变形温度的升高而降低。基于实验数据,分别建立修正Arrhenius本构模型和粒子群算法优化的支持向量机回归模型(SVR-PSO),引入统计学方法对模型的精度进行量化评估:修正Arrhenius模型的平均相对误差和均方根误差分别为6.30%和2.43 MPa,SVR-PSO模型的平均相对误差和均方根误差分别为0.61%和0.28 MPa,SVR-PSO模型预测精度和泛化能力均优于Arrhenius模型。

基于修正JC模型和BP-ANN算法预测HNi55-7-4-2合金高温流变行为的对比

采用Gleeble-3500型热模拟试验机,分别在变形温度为873,923,973,1023,1073 K,应变速率为0.01,0.1,1,10 s^(-1)条件下对HNi55-7-4-2合金进行等温热压缩试验,研究了该合金的高温流变行为;基于试验数据,分别采用修正Johnson-Cook(M-JC)模型和反向传播人工神经网络(BP-ANN)算法构建本构模型,对比分析这2个模型的预测精度。结果表明:HNi55-7-4-2合金的流变应力随着应变速率的增加而增大,随着变形温度的升高而降低。基于M-JC模型和BP-ANN算法建立的本构模型预测得到真应力与试验结果间的平均相对误差绝对值分别为14.63%%,0.35%%,相关系数分别为0.9787,0.9999;基于BP-ANN算法的本构模型的预测精度更高,可以较好地描述H Ni55-7-4-2合金的高温流变行为。

hTERT和GFAP双启动子条件复制腺病毒介导放射性碘治疗脑胶质瘤的实验研究

目的利用条件复制腺病毒Ad—Tp—E1a—Gp—NIS感染脑胶质瘤细胞，探讨其介导靶向性放射性碘治疗脑胶质瘤的可行性。方法克隆人端粒反转录酶（hTERT）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）启动子，荧光素酶分析法检测启动子启动效率。构建并纯化条件复制腺病毒Ad—Tp—E1a—Gp—NIS，进行肿瘤选择性病毒复制实验。U87和U251细胞感染Ad—Tp—E1a—Gp—NIS后，进行Westernblot分析蛋白质表达，131I内流及外流和131I克隆形成实验。结果荧光素分析实验证明，hTERT和GFAP启动子分别可以引导荧光素蛋白在U251和U87细胞中表达，表达效率为37．31％～49．00％（F=5．87，P〈0．05）和59．75％～62．10％（F=11．89，P〈0．01）。Ad—Tp—E1a—Gp—NIS能够在hTERT阳性和GFAP阳性实现肿瘤选择性复制，且在GFAP启动子引导下能成功表达hNIS基因。Westernblot分析表明，hTERT蛋白和GFAP蛋白在U87和U251细胞中显示出相对分子质量为120×103和49×103的条带。感染Ad-Tp—E1a—Gp—NIS后，U87细胞摄碘能力提高78．80倍（F=2914．58，P〈0．01），U251细胞摄碘能力提高92．48倍（F=2275．91，P〈0．01）。体外细胞克隆分析证明，感染病毒并在131I中孵育12h后，超过90％的肿瘤细胞被杀死，而对照组细胞仅有65％（t=11．73～78．33，P〈0．01）。结论Ad·Tp·E1a-Gp-NIS能实现条件性复制并具有明确的肿瘤靶向性。在细胞水平实验中，能引导放射性131I杀死胶质瘤细胞。

人钠/碘转运体基因G395R与先天性甲状腺功能减退症相关

先天性甲状腺功能减退症 5 2例和 10 6例健康婴幼儿 ,采用PCR RFLP技术对钠 /碘同向转运体 (hNIS)基因 3 95位点进行基因突变筛查。研究表明hNIS基因G3 95R突变可能不是青岛地区先天性甲状腺功能减退症发病的主要原因。

基于修正Johnson-Cook模型的HNi56-3镍黄铜合金高温流变行为研究

以HNi56-3镍黄铜合金为研究对象,分别在变形温度范围为600~800℃、应变速率范围为0.01~10 s^-1的变形条件下,在Gleeble-3500热模拟实验机上进行等温热压缩实验,研究HNi56-3镍黄铜合金的高温流变行为。实验结果表明:HNi56-3镍黄铜合金的流变应力与变形温度、应变速率和应变呈非线性关系,流变应力随着应变速率和应变的增大而升高、随着变形温度的升高而降低。为了描述HNi56-3镍黄铜合金的流变行为,使用Lin Y C修正的Johnson-Cook模型(Lin-JC)和本文修正的JC模型(MLin-JC)分别建立本构模型。对比两种模型,结果显示:基于Lin-JC模型的预测数据的平均相对误差绝对值AARE为11.8644%,相关系数R为0.9803,均方根误差RMSE为4.6177 MPa;本文构建的MLin-JC模型的预测数据的AARE为4.0325%,R为0.9936,RMSE为1.9017 MPa,因此,本文建立的本构模型与实验结果更吻合,能更准确地描述HNi56-3镍黄铜合金的高温流变行为。

人甲状腺组织中钠碘转运体基因表达的研究

钠碘转运体（The sodium-iodide symporter-NIS）定位于甲状腺滤泡细胞的基底外侧膜，将2个钠离子和1个碘离子同时转运人甲状腺细胞，从而形成甲状腺细胞内碘的浓聚。我们采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Real time Quantitative PCR）方法测定人甲状腺乳头状癌及转移淋巴结组织中NIS mRNA的表达，探讨hNIS mRN-A和甲状腺乳头状癌及转移淋巴结的关系。