从HNRNPC基因角度探讨胰岛素抵抗发生机制

目的以HNRNPC基因为研究对象,在细胞水平上,探讨HNRNPC基因、CaSR、PI3K/Akt信号通路与胰岛素抵抗(IR)之间的关系。方法建立人肝癌HepG2细胞IR模型,采用基因沉默/过表达技术干扰IR细胞及正常HepG2细胞中HNRNPC的表达。利用qRTPCR、Western blot技术检测HNRNPC表达水平,以检测沉默及过表达效率;通过Western blot技术检测各组细胞内CaSR蛋白表达量,同时检测IR相关信号通路PI3K/Akt的磷酸化水平;通过GOD-POD实验检测各组细胞葡萄糖消耗量。结果IR-HepG2组HNRNPC基因及蛋白表达升高,CaSR蛋白表达降低,PI3K/Akt信号通路被抑制,细胞葡萄糖消耗量降低;成功沉默及过表达HNRNPC后,IR-HNRNPC-siRNA组CaSR蛋白表达升高,PI3K/Akt信号通路抑制状态有所改善,细胞葡萄糖消耗量提高;HepG2-HNRNPC-OE组CaSR蛋白表达降低,PI3K/Akt信号通路被抑制,细胞葡萄糖消耗量降低。结论HNRNPC基因的高表达可下调CaSR表达,从而降低PI3K/Akt信号通路活性,这可能是IR的发生机制之一。

基于HnRNPC基因探究花旗泽仁改善HepG2细胞胰岛素抵抗机制研究

目的从HnRNPC基因和Pkcζ/Akt/FOXO1通路的角度,深入探讨花旗泽仁治疗胰岛素抵抗(IR)的作用机制,为将花旗泽仁开发为治疗IR的中药新药制剂奠定基础。方法应用qRT-PCR、Western blot、液质联用及GOD-POD实验分别检测细胞内HnRNPC的表达量、Cer含量、Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路磷酸化水平及葡萄糖含量。结果于IR细胞内给与花旗泽仁后与IR组进行比较,发现HnRNPC蛋白及基因表达量明显降低,Cer含量减少,Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路活性下降且葡萄糖含量减少,结果均有显著性统计学意义(P<0.001);过表达HnRNPC的HepG2细胞给予花旗泽仁后与正常HepG2细胞相比,亦发现HnRNPC蛋白及基因表达量明显降低,Cer含量减少,逆转Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路过度激活状态且葡萄糖含量减少,差异均具有统计学意义(P<0.001)。结论花旗泽仁可通过减少HnRNPC的表达降低Cer的含量,进而通过抑制Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路改善IR。