D816V突变型KIT特异性诱导COS-1非洲绿猴肾细胞核不均一核糖核蛋白 L(HNRNPL)和HNRNPK磷酸化

目的探究Ⅲ类酪氨酸激酶受体KIT D816V突变对核不均一核糖核蛋白L(HNRNPL)和HNRNPK的调控作用。方法在COS-1非洲绿猴肾细胞表达野生型KIT或KIT D816V,或与HNRNPL或HNRNPK共表达,用免疫沉淀法和Western blot法检测KIT活化及HNRNPL、HNRNPK的磷酸化,通过激光共聚焦显微镜检测KIT、HNRNPL、HNRNPK在COS-1细胞中的定位。结果野生型KIT需要其配基干细胞因子(SCF)的刺激发生活化,而KIT D816V无需SCF刺激即可发生自活化。此外,KIT D816V可诱导HNRNPL和HNRNPK发生磷酸化,而野生型KIT无此功能。HNRNPL和HNRNPK在细胞核表达,野生型KIT在细胞膜和细胞质表达,而KIT D816V主要表达于细胞质。结论野生型KIT活化需要其配体SCF参与,而KIT D816V无需SCF刺激即可发生自活化,并能特异性诱导HNRNPL和HNRNPK磷酸化。

罗哌卡因抑制THRIL对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期和迁移的影响

目的:探讨罗哌卡因对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期和迁移的影响及分子机制。方法:将RL-95-2细胞分为对照组、低、中、高药物剂量组、高剂量药物+pc DNA组、高剂量药物+pc DNA-THRIL组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期;Transwell检测细胞迁移;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测THRIL表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测Ki67、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达。结果:不同浓度罗哌卡因处理子宫内膜癌细胞RL-95-2后,中、高剂量药物组细胞存活率降低,G0-G1期细胞所占比例升高,S期细胞所占比例降低,迁移细胞数降低,THRIL表达水平降低,Ki67、N-cadherin表达水平降低,E-cadherin表达水平升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);而低剂量药物组各指标无明显变化(P>0.05)。过表达THRIL逆转了罗哌卡因对RL-95-2细胞增殖和迁移的作用。结论:罗哌卡因可能通过下调THRIL抑制子宫内膜癌细胞增殖和迁移,阻滞细胞周期。