hnRNPU基因敲减小鼠preB A70细胞株的构建及鉴定

目的构建shRNA-不均一核糖核蛋白U(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein U,hnRNPU)慢病毒表达载体以及hnRNPU基因稳定敲减的小鼠preB A70细胞株。方法将靶向小鼠hnRNPU基因的shRNA干扰序列连接入pLKO.1-EBFP-PURO质粒中,测序检测。将构建成功的pLKO.1-hnRNPU shRNA-EBFP-PURO和慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清。将病毒上清感染A70细胞,利用倒置荧光显微镜观察病毒感染情况,利用Western blot检测hnRNPU蛋白的表达。通过有限稀释方法,构建单细胞克隆,并利用Western blot筛选hnRNPU基因稳定敲减的A70细胞株。结果成功构建了shRNA-hnRNPU慢病毒表达载体。表达shRNA-hnRNPU的慢病毒在HEK293T细胞中完成包装。包装好的病毒感染A70细胞72 h后,细胞内可以观察到蓝色荧光。感染后的细胞经过嘌呤霉素筛选后,细胞内的hnRNPU蛋白大约减少一半。通过有限稀释方法,构建了hnRNPU基因稳定敲减的细胞株。结论本研究成功构建了hnRNPU稳定敲减的A70细胞株,为后续研究hnRNPU在早期B细胞发育中的作用奠定了实验基础。

HNRNPU基因变异致神经发育障碍患儿1例并文献回顾

目的探讨1例HNRNPU基因变异导致神经发育障碍(NDDs)患儿的临床表现及基因变异特征,并检索文献进行回顾性分析。方法回顾性分析2020年12月至武汉科技大学附属孝感医院就诊的1例因"间断抽搐1年余"NDDs患儿的临床资料,收集患儿及其父母的外周血样,进行全外显子组测序并进行Sanger测序验证。以"HNRNPU基因""癫痫""癫痫性脑病""遗传性癫痫""神经发育障碍""神经发育综合征"与"epilepsy""epileptic encephalopathy""hereditary epilepsy""neurodevelopmental disorders""neurodevelopmental syndrome""HNRNPU""NDDs"为中英文关键词,检索时间设定为1994年1月1日至2022年2月10日,检索中国知网、万方数据库及PubMed数据库中相关文献并作总结复习。结果患儿为2岁男性,5月龄起病,临床表型主要为外貌异常、反复癫痫发作、Gesell量表评估各能区发育商偏低。给予患儿丙戊酸钠抗癫痫发作治疗及康复训练,随访半年内无癫痫发作,但智能及运动发育无明显改善。基因检测患儿HNRNPU基因存在c.1720_1722delCTT(p.Lys574del)杂合变异,父母未见该变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会变异相关指南,c.1720_1722delCTT评级为可能致病性变异(PS2+PM2_Supporting+PM4)。文献检索到13篇文献,HNRNPU基因变异类型有剪接点变异、无义变异、错义变异、框内缺失、基因重复、移码变异、多个外显子缺失。主要临床表现有发育迟缓、癫痫、智力低下、语言发育落后、颅面畸形、精神行为异常等。结论HNRNPU:c.1720_1722delCTT考虑为该NDDs患儿的致病原因。基因检测有助于儿童NDDs的诊断,变异发现丰富了HNRNPU基因变异致神经发育障碍基因变异谱。

HNRNPU基因杂合突变致发育性和癫痫性脑病54型1例报道

目的探讨HNRNPU基因突变所致发育性和癫痫性脑病54型(DEE54)患儿的临床特征和遗传学特点。方法回顾性分析潍坊医学院附属医院2023年6月收治的一例HNRNPU基因突变患儿的临床资料,并进行相关文献复习。结果本例患儿,男,1岁3个月,于7月龄发热后癫痫发作起病,主要临床特征为智力障碍、癫痫发作、全面发育迟缓、颅面畸形、肌张力低下,癫痫发作类型为全面性强直发作。基因检测提示携带HNRNPU基因c.1305_1308del位点杂合变异,根据ACMG指南,建议将该变异评为致病。患儿确诊为DEE54。结论报道了1例HNRNPU基因c.1305_1308del位点变异导致的DEE54患儿,考虑癫痫伴全面发育迟缓、智力障碍的患儿应及早完善基因检测精准诊断。