转FasL基因卵巢癌HO-8910细胞系的建立

目的建立表达转FasL基因卵巢癌细胞系,为以FasL为靶点治疗卵巢癌提供理想细胞模型。方法应用分子克隆技术,将人FasLcDNA片段正向插入逆转录病毒载体pLXSN构建重组质粒pL(hFasL)SN,转染包装细胞PA317收获假病毒上清,磷酸钙法转染卵巢癌HO-8910细胞筛选建系,酶切PCR鉴定、流式细胞仪(FCM)法检测。结果酶切鉴定证实重组质粒pL(hFasL)SN中存在FasL,PCR方法从转染细胞HO-8910-FasL基因组中扩增出0.86kb片段,FCM检测显示FasL表达增加40.32%,HL60细胞与HO-8910-FasL细胞共培养HL60细胞凋亡增加25.65%。结论应用逆转录病毒法建立了稳定高表达FasL并具功能的HO-8910-FasL细胞系。

人卵巢癌HO-8910细胞系胞内多胺水平的动态变化

采用丹酰氯薄膜层析法测定体外培养人卵巢癌HO－8910细胞系8天时胞内多胺水平，结果提示：其细胞多胺水平与细胞分裂增殖呈显著平行关系。

参一胶囊联合顺铂对高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM的抑制作用

目的观察参一胶囊(Rg3)对高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM的抑制作用。方法细胞分成6组:阴性对照组(A组):只加新鲜的全培养液;低浓度组(B组):含10μg.mL-1Rg3培养液;中浓度组(C组):含20μg·mL-1Rg3培养液;高浓度组(D组):含40μg·mL-1Rg3培养液;顺铂阳性对照组(E组):含10μg·mL-1顺铂的培养液;顺铂+Rg3联合用药组(F组):含10μg·mL-1顺铂+20μg·mL-1Rg3培养液。分别从台盼蓝活细胞计数法、细胞的增殖抑制(CCK-8法)进行观察。结果Rg3对人卵巢癌HO-8910PM细胞有明显的抑制作用,显示了较好的细胞毒活性作用(P<0.05)。Rg3与顺铂联合用药时,细胞毒作用与高浓度Rg3和顺铂组相似,但在微观结构上能造成更大的细胞形态结构损伤。结论Rg3对高转移人卵巢癌细胞有一定的抑制作用,Rg3与顺铂联合用药在细胞结构破坏上可能有相加或协同作用,这将为临床卵巢癌患者进行抗肿瘤治疗提供依据。

米非司酮对人卵巢癌细胞系HO-8910的生长及细胞周期的影响

目的 :探讨米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞的杀伤活性及对细胞增殖和细胞周期分布的影响。方法 :采用MTT测定 ,观察不同浓度米非司酮 (2 0、10、5、2 5 μmol/L)对HO - 8910细胞的杀伤活性 ;通过ABC免疫组化染色及流式细胞仪分析 ,检测用药后HO - 8910细胞Ki- 6 7抗原表达、细胞周期分布及细胞增殖指数的变化。结果 :4个浓度的米非司酮对HO - 8910细胞均有杀伤作用 ,并呈剂量依赖性 ,以 2 0 μmol/L浓度杀伤作用最明显 ,杀伤率达 5 2 0 1% ;5 μmol/L米非司酮可使HO - 8910细胞Ki- 6 7抗原表达显著减少 ,细胞增殖受到明显抑制 ,使细胞阻滞于G0 /G1期 ,不能进入S及G2 /M期 ,细胞增殖指数明显下降。结论 :米非司酮体外对人卵巢上皮性癌细胞具有杀伤活性 ,并对细胞增殖及细胞周期有明显抑制作用 ,主要通过抑制DNA合成 ,将细胞阻滞于G0 /G1期。

逆转录酶抑制剂(AZT)对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞超微结构和增殖的影响

目的研究逆转录酶抑制剂(AZT)对卵巢癌细胞系HO-8910细胞超微结构及增殖的影响。方法应用透射电镜观察AZT作用前后肿瘤细胞超微结构的变化,用MTT分析法对不同浓度AZT作用的卵巢癌HO-8910细胞进行药物敏感实验,并用流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果 AZT作用后的HO-8910细胞生长明显受抑制,并有时间依赖关系和剂量依赖关系。形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块。细胞周期中G1期细胞增多,S期细胞减少,并且可测到凋亡峰含量为14.2％。结论 AZT能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,因而可为卵巢癌和其它肿瘤的治疗尝试一条新的有效的方法。

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞周期的影响

目的:观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将1×10-7mol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)和1×10-6mol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486分别单用或合用处理HO-8910细胞,采用流式细胞术测定细胞周期,核素掺入半定量RT-PCR检测细胞周期蛋白激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果:Dex诱导HO-8910细胞发生G0/G1期停滞,并使p21/WAF1 mRNA表达上调;RU486可逆转Dex引起的p21/WAF1表达的变化。结论:p21/WAF1的表达上调可能参与糖皮质激素引起的HO-8910细胞G0/G1期停滞作用。

藏红花水提取物通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达影响人卵巢癌细胞HO-8910增殖

目的:探讨藏红花水提取物调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达对人卵巢癌细胞HO-8910增殖、凋亡、侵袭的影响。方法:以人卵巢癌细胞HO-8910为研究对象,给予不同浓度(0、0.4、0.8、1.0 mg/L)藏红花水提取物进行培养,MTT法检测细胞HO-8910的增殖活力;流式细胞术观察细胞HO-8910的凋亡率;划痕法检测细胞HO-8910的迁移情况;Transwell法检测细胞HO-8910的侵袭情况;Western blot法检测细胞HO-8910的ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力受藏红花水提取物的影响,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力减弱;而人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率则相反,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率逐渐增加;受藏红花水提取物影响,人卵巢癌细胞HO-8910中ERK、Bcl-2蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达增加,且藏红花水提取物剂量越高,ERK、Bcl-2蛋白表达越低,Bax蛋白表达越高。结论:藏红花水提取物能够降低卵巢癌细胞的增殖活力、迁移能力及侵袭能力,并诱导卵巢癌细胞凋亡,这可能是通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达来实现的。

基因芯片研究卵巢癌细胞系HO-8910差异基因表达

目的 用基因芯片技术研究人卵巢癌细胞系HO -8910和正常卵巢上皮的基因表达谱 ,分析其基因表达变化 ,探讨卵巢癌发生、发展过程中与肿瘤相关的基因群及其功能 ,有助于从分子水平全面了解细胞癌变机理 ,为卵巢癌的临床诊断和治疗提供分子标记和靶基因。 方法 用一步法抽提人卵巢癌细胞和对照正常卵巢组织的总RNA并纯化mRNA ;将等量的人卵巢癌细胞及对照组织的mRNA逆转录合成以Cy5和Cy3标记的cDNA链做探针 ,混合后在含有4096条双点人类全长基因的芯片上进行杂交。经洗片后用ScanArray3000扫描仪扫描芯片荧光信号图像 ,用ImaGene3.0软件对扫描图像进行数字化处理 ,分析高低转移人卵巢癌细胞系之间及与正常卵巢上皮基因表达谱差异。结果 人卵巢癌细胞系HO -8910细胞与正常卵巢上皮比较 ,差异3倍以上共有355个基因 ,其中表达上调>3倍有88个 ,表达下调<0.33有267个。差异6倍以上共有75个基因 ,其中表达上调>6倍有13个 ,表达下调<0.17有62个。结论 通过基因谱平行比较表明 :人卵巢癌细胞系与正常卵巢上皮细胞基因表达谱存在差异 :人卵巢癌细胞系HO -8910细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有355个基因。提示这些基因与卵巢癌的发生和发展有关。

加热对卵巢癌细胞系HO-8910细胞周期的影响

目的探讨加热对人卵巢癌细胞系HO 8910细胞周期的影响。方法将卵巢癌细胞HO 8910在 4 2℃条件下 ,分别加热 30、6 0、12 0min ,与未加热的正常状态细胞相比较 ,利用流式细胞仪技术 ,分析各种处理后的细胞其细胞周期的变化。结果与正常状态下的细胞相比较 ,当细胞被加热到 4 2℃时 ,G2 期细胞所占比例明显减少 ,随加热时间的延长略有增高 ;S期和G2 期细胞的变化不明显。当加热时间为 30min时 ,与正常状态下的细胞相比较 ,细胞周期可发生明显的特异性改变并出现细胞凋亡峰。结论人卵巢细胞系HO 8910在 4 2℃条件下 ,加热不同时间 。

RNA干扰技术抑制上皮性钙黏附分子表达对HO-8910细胞的影响

目的探讨通过RNA干扰(RNAi)技术下调上皮性钙黏附分子(E-cad)表达后,对人卵巢浆液性囊腺癌HO-8910细胞的侵袭、迁移能力的影响。方法将针对E-cad的双链小干扰RNA(siRNA)转染入HO-8910细胞中,抑制E-cad基因表达;采用免疫荧光法及Western blotting检测RNAi效果;用Transwell小室法检测RNAi后细胞侵袭、迁移能力的改变。结果RNAi后HO-8910细胞E-cad表达显著下降,由63.7%降低为11.9%(P<0.01),RNAi有效;细胞对细胞外基质的侵袭能力明显提高,穿过滤膜的细胞数由13.4±3.93增至42.0±4.15(P<0.01);细胞迁移能力也明显提高,穿过滤膜的细胞数由23.24±3.71增至82.0±5.51(P<0.01)。结论人卵巢浆液性囊腺癌的侵袭、转移等恶性行为可能与E-cad基因表达下降有关。

染料木黄酮诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡的实验研究

目的 研究染料木黄酮对人HO-8910卵巢癌细胞的抑制效应和诱导凋亡作用，探讨其机制。方法 将不同浓度的染料木黄酮作用于人HO-8910卵巢癌细胞，利用MTT法检测其有效作用浓度，分别采用瑞氏染色、TUNEL、流式细胞仪观察和检测HO-8910细胞凋亡情况。结果 MTT法测得其1C50值为28．63mg／L，浓度为8-128mg／L的染料木黄酮具有诱导人HO-8910卵巢癌细胞凋亡的作用，且随药物作用时间延长凋亡率逐渐增加。结论 染料木黄酮具有抗卵巢癌作用，其重要作用机制之一是诱导人HO-8910卵巢癌细胞凋亡。

番茄红素异构体对人卵巢癌HO-8910细胞增殖和凋亡的影响效果初探

目的研究番茄红素异构体对体外培养的人卵巢癌HO-8910细胞增殖和凋亡的影响。方法观察含不同比例的顺、反式异构体番茄红素对人卵巢癌HO-8910细胞的增殖抑制作用;采用PI流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果番茄红素异构体对人卵巢癌HO-8910细胞有一定程度的抑制增殖和诱导凋亡的作用,且呈浓度依赖性。结论对人卵巢癌HO-8910细胞,含较高比例顺式番茄红素的Ⅱ号药组抑制增殖与诱导凋亡的作用比全反式番茄红素的Ⅰ号药组具更强的生物活性。

斑蝥素抑制人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的体外实验研究

背景与目的:斑蝥素在治疗癌症方面显示出其独特的疗效,已有较多文献证实核因子鄄κB(nuclearfactor鄄kappaB,NF鄄资B)与肿瘤侵袭转移关系密切。本研究旨在观察斑蝥素对人高转移卵巢癌细胞HO鄄8910PM转移相关能力的影响,并探讨其作用机理。方法:MTT法及细胞粘附人工重组基底膜实验检测斑蝥素对HO鄄8910PM细胞的细胞毒作用及粘附能力的影响;用Transwell小室法检测斑蝥素对HO鄄8910PM细胞侵袭能力和趋化运动能力的影响;Westernblot法分析斑蝥素对HO鄄8910PM细胞中NF鄄κB和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的影响。结果:20μmol/L的斑蝥素作用6h对HO鄄8910PM细胞抑制率及体外侵袭、趋化运动和粘附的抑制率分别为(8.4±2.2)%及(38.8±1.7)%、(40.3±5.6)%和(55.1±6.7)%。20μmol/L斑蝥素能明显下调HO鄄8910PM细胞中NF鄄κB和VEGF的表达。结论:斑蝥素能抑制HO鄄8910PM细胞的侵袭、运动和粘附能力。斑蝥素抗肿瘤侵袭转移的作用机制与NF鄄κB和VEGF蛋白的表达下调有关。

人参皂苷Rg3联合顺铂对高转移人卵巢癌细胞系H0-8910PM增殖的抑制作用

背景与目的:人参皂苷(Rg3)有抑制肿瘤细胞生长的作用,顺铂为诱导肿瘤凋亡的化疗药物,中西医结合治疗肿瘤日益受到重视。本研究探讨Rg3联合顺铂对高转移人卵巢癌细胞系H0-8910PM增殖的抑制作用。方法:采用我院自建的高转移人卵巢癌细胞系H0-8910PM进行实验研究。实验分成6组:①空白对照组:只加新鲜的全培养液;②Rg3低浓度组:10μg/mlRg3培养液;③Rg3中浓度组:20μg/mlRg3培养液;④Rg3高浓度组:40μg/mlRg3培养液;⑤顺铂单药对照组:含10μg/ml顺铂的培养液;⑥顺铂+Rg3(中浓度)联合用药组:含10μg/ml顺铂+20μg/mlRg3培养液。分别观察各组对细胞核分裂指数、细胞集落形成率的影响。结果:随着Rg3浓度增高及Rg3和DDP的联合应用细胞核分裂指数下降,以联合用药组下降最明显(F=5.498,P=0.011)。空白对照组和Rg3高浓度组,顺铂单药组及顺铂+Rg3(中浓度)联合用药组相比,差异有非常显著性(P=0.011,0.007和0.001);Rg3低、中浓度组分别与顺铂+Rg3(中浓度)联合用药组相比,差异有显著性(P=0.010和0.015)。细胞集落形成率随着Rg3浓度增高而下降(F=100.69,P=0.000),高浓度的Rg3、DDP和联合用药组三者结果相近(P=0.887)。Rg3高浓度组、顺铂单药组合顺铂+Rg3(中浓度)组与空白对照组、Rg3低浓度组和Rg3中浓度组相比,及Rg3高浓度组与其他各组相比,差异均有显著性(P<0.05)。结论:Rg3对高转移人卵巢癌细胞有一定的杀伤作用,能有效抑制细胞核分裂、细胞集落形成,但未发现Rg3和顺铂联合用药会相加或协同作用。

枸杞多糖联合紫杉醇对人上皮性卵巢癌HO-8910PM细胞增殖及凋亡的影响

目的研究枸杞多糖对紫杉醇诱导的人上皮性卵巢癌HO8910PM细胞株的增殖及细胞周期、细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将处于对数生长期人上皮性卵巢癌HO-8910PM细胞分4组:A:阴性对照组;B:阳性对照组紫杉醇(PTX)单药作用组(0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1μg·mL^(-1));C:枸杞多糖(LBP)作用组(50、100、150、200、250、300、350、400μg·mL^(-1));D:LBP及PTX协同作用组(LBP+PTX:50+0.01、100+0.01、50+0.05、100+0.05μg·mL^(-1))。药物干预48h后,采用CCK8检测药物干预后细胞增殖的抑制率;Hochest染色观察HO-8910PM细胞的凋亡形态变化;流式细胞术分析药物作用后对细胞周期、凋亡的影响。结果与阴性对照组比较,LBP、PTX单药作用可见人上皮性卵巢癌HO-8910PM细胞增殖抑制,抑制作用随时间、剂量的增强而增加,LBP作用48h的IC50为280μg·mL^(-1),最低起效浓度为120μg·mL^(-1),在400μg·mL^(-1)时可达到85%细胞抑制,PTX作用48h的IC50为0.005μg·mL^(-1),在0.5μg·mL^(-1)时达到100%细胞抑制。LBP协同PTX作用细胞可见增殖抑制大于单药作用之和,增益作用显著(P<0.05);流式细胞分析结果显示LBP协同PTX作用可致G0/GI期、G2/M期细胞比例增加,细胞凋亡率升高,效果均大于单药作用之和,协同作用对细胞周期抑制、诱导凋亡作用的增益作用显著(P均<0.05)。结论枸杞多糖具有抑制人上皮性卵巢癌HO-8910PM细胞增殖并促进其凋亡的作用,且枸杞多糖明显增益紫杉醇对HO-8910PM增殖抑制及诱导凋亡作用。

半边旗提取物5F影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的探讨半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞周期的影响及其作用机制。方法以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO8910PM细胞周期的影响;Westernblot法分析NFκB(P65)、FAK的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平。结果不同浓度的5F分别处理细胞24h后,对HO8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;流式细胞术分析表明5F使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;同时,5F可使NFκB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并降低FAK酪氨酸磷酸化水平。结论5F对HO8910PM细胞周期的影响与NFκB(P65)表达下调及FAK的表达上调有关。

逆转录酶抑制剂对卵巢癌细胞株HO-8910细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

目的 研究逆转录酶抑制剂 (AZT)对卵巢肿瘤细胞端粒酶活性的影响 .方法 采用 TRAP- EL ISA方法检测卵巢癌 HO- 8910细胞在 AZT作用前后端粒酶活性的变化 ,以流式细胞仪分析细胞周期的改变 .结果 AZT作用后的 HO-8910细胞端粒酶活性明显受抑制 ,且细胞的 G2 /M期 DNA含量明显增高 .结论 AZT能明显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 .

五没食子酰基葡萄糖对卵巢癌HO-8910细胞凋亡调控基因表达与胱天蛋白酶凋亡途径的影响

目的探讨五没食子酰基葡萄糖(PGG)诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡的作用及诱导胱天蛋白酶凋亡途径的机制。方法 PGG 10,20,40和80μmol·L-1处理HO-8910细胞48,72和96 h后,MTT法检测细胞存活率;Hoechst 33258染色观察HO-8910细胞核形态改变,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western印迹法检测细胞内胱天蛋白酶酶原及活性形式;RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2、Bcl-XL、凋亡抑制因子1(CIAP-1)、CIAP-2、存活蛋白、神经元凋亡抑制蛋白(NIAP)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和细胞周期蛋白D1 mRNA表达。结果 PGG 10～80μmol·L-1分别作用48,72和96 h,随浓度的增加,细胞存活率明显降低,r分别为0.93,0.95和0.86(P<0.05)。PGG 40μmol·L-1使HO-8910细胞的细胞核染色质固缩,出现凋亡形态学改变,早期凋亡率从正常对照组的(0.6±0.1)%分别增加到(3.4±1.1)%,(9.8±3.7)%和(19±4.5)%,对晚期凋亡率影响不明显。PGG 20～80μmol·L-1使HO-8910细胞内胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶7和胱天蛋白酶9及其底物多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切水平增加,PGG20～80μmol·L-1均抑制死亡受体FAS的蛋白表达水平并使胱天蛋白酶8总剪切水平降低。PGG 20～80μmol·L-1抑制HO-8910细胞中细胞周期蛋白D1,Bcl-2,Bcl-XL和NIAP mRNA的表达,上调CIAP-1 mRNA的表达,对基因Bax,CIAP-2和XIAP mRNA表达影响不明显;PGG 20μmol·L-1抑制存活蛋白基因mRNA的表达,但是增加处理浓度却上调存活蛋白基因mRNA的表达。结论 PGG可能通过抑制凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL的表达从而诱导HO-8910细胞内胱天蛋白酶9依赖的内源性凋亡途径,并诱导细胞凋亡。

福安泰-03对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭能力的影响

应用噻唑蓝法检测从赤魟中分离到的福安泰-03(Fuantai-03,FAT-03)对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM生长的影响;人工重组基底膜检测FAT-03对细胞侵袭能力的影响;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测FAT-03对HO-8910PM细胞分泌MMP-9能力的影响。结果显示,FAT-03(20.0、40.0、60.0μg/ml)作用HO-8910PM细胞24h,对细胞生长的抑制率小于10%,对细胞与纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和Matrigel粘附的抑制率分别为15.1%、28.0%(P<0.05)、54.1%(P<0.01)和14.7%、34.3%(P<0.05)、40.5%(P<0.01),对细胞迁移的抑制率分别为16.4%、33.8%(P<0.05)和42.6%(P<0.01)。此外,FAT-03显著减少HO8910-PM细胞分泌MMP-9的量,并降低其活性。这些实验事实提示FAT-03能明显抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力。

ILK-ASODN对卵巢癌HO-8910细胞增殖及凋亡影响的研究

目的:探讨脂质体介导的整合素连接激酶(ILK)反义寡核苷酸(ASODN)对卵巢癌细胞的增殖及诱导其凋亡的作用。方法:选用ILK的反义寡核苷酸(ILKASODN)、正义寡核苷酸(ILK-SODN)分别转染卵巢癌HO-8910细胞株。实验分为6组:空白对照组(A组)、脂质体对照组(B组)、ILK-SODN 100nmol/L组(C组)和ILK-ASODN60nmol/L、80nmol/L、100nmol/L组(分别为D、E、F组)。应用四唑单钠盐(WST-1)法检测转染后第24h、48h、72h、96h和120h的体外增殖抑制率;转染120h后,采用Annexin VFITC和碘化丙啶(PI)联合标记法测定细胞凋亡情况。结果:(1)与对照组比较,转染ILK-ASODN后,卵巢癌细胞生长受到明显抑制(P<0.05),ILK-ASODN各浓度组分别于96h、72h、48h开始出现明显抑制作用,且抑制率随转染浓度的增高而增高;转染ILKSODN组的细胞生长也受到抑制(P<0.05),但抑制效果低于ILK-ASODN各组。(2)转染ILK-ASODN后,细胞凋亡率增高(P<0.05),其凋亡率随转染浓度的增高而增高;转染ILK-SODN后细胞凋亡率也有所增高,但低于转染ILK-ASODN组(P<0.05)。结论:ILKASODN可能通过诱导细胞凋亡来实现抑制卵巢癌细胞的生长效应,从而最终达到抑制肿瘤发展、转移和恶化的目的。