斑蝥素抑制人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的体外实验研究

背景与目的:斑蝥素在治疗癌症方面显示出其独特的疗效,已有较多文献证实核因子鄄κB(nuclearfactor鄄kappaB,NF鄄资B)与肿瘤侵袭转移关系密切。本研究旨在观察斑蝥素对人高转移卵巢癌细胞HO鄄8910PM转移相关能力的影响,并探讨其作用机理。方法:MTT法及细胞粘附人工重组基底膜实验检测斑蝥素对HO鄄8910PM细胞的细胞毒作用及粘附能力的影响;用Transwell小室法检测斑蝥素对HO鄄8910PM细胞侵袭能力和趋化运动能力的影响;Westernblot法分析斑蝥素对HO鄄8910PM细胞中NF鄄κB和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的影响。结果:20μmol/L的斑蝥素作用6h对HO鄄8910PM细胞抑制率及体外侵袭、趋化运动和粘附的抑制率分别为(8.4±2.2)%及(38.8±1.7)%、(40.3±5.6)%和(55.1±6.7)%。20μmol/L斑蝥素能明显下调HO鄄8910PM细胞中NF鄄κB和VEGF的表达。结论:斑蝥素能抑制HO鄄8910PM细胞的侵袭、运动和粘附能力。斑蝥素抗肿瘤侵袭转移的作用机制与NF鄄κB和VEGF蛋白的表达下调有关。

半边旗提取物5F影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的探讨半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞周期的影响及其作用机制。方法以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO8910PM细胞周期的影响;Westernblot法分析NFκB(P65)、FAK的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平。结果不同浓度的5F分别处理细胞24h后,对HO8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;流式细胞术分析表明5F使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;同时,5F可使NFκB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并降低FAK酪氨酸磷酸化水平。结论5F对HO8910PM细胞周期的影响与NFκB(P65)表达下调及FAK的表达上调有关。

枸杞多糖联合紫杉醇对人上皮性卵巢癌HO-8910PM细胞增殖及凋亡的影响

目的研究枸杞多糖对紫杉醇诱导的人上皮性卵巢癌HO8910PM细胞株的增殖及细胞周期、细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将处于对数生长期人上皮性卵巢癌HO-8910PM细胞分4组:A:阴性对照组;B:阳性对照组紫杉醇(PTX)单药作用组(0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1μg·mL^(-1));C:枸杞多糖(LBP)作用组(50、100、150、200、250、300、350、400μg·mL^(-1));D:LBP及PTX协同作用组(LBP+PTX:50+0.01、100+0.01、50+0.05、100+0.05μg·mL^(-1))。药物干预48h后,采用CCK8检测药物干预后细胞增殖的抑制率;Hochest染色观察HO-8910PM细胞的凋亡形态变化;流式细胞术分析药物作用后对细胞周期、凋亡的影响。结果与阴性对照组比较,LBP、PTX单药作用可见人上皮性卵巢癌HO-8910PM细胞增殖抑制,抑制作用随时间、剂量的增强而增加,LBP作用48h的IC50为280μg·mL^(-1),最低起效浓度为120μg·mL^(-1),在400μg·mL^(-1)时可达到85%细胞抑制,PTX作用48h的IC50为0.005μg·mL^(-1),在0.5μg·mL^(-1)时达到100%细胞抑制。LBP协同PTX作用细胞可见增殖抑制大于单药作用之和,增益作用显著(P<0.05);流式细胞分析结果显示LBP协同PTX作用可致G0/GI期、G2/M期细胞比例增加,细胞凋亡率升高,效果均大于单药作用之和,协同作用对细胞周期抑制、诱导凋亡作用的增益作用显著(P均<0.05)。结论枸杞多糖具有抑制人上皮性卵巢癌HO-8910PM细胞增殖并促进其凋亡的作用,且枸杞多糖明显增益紫杉醇对HO-8910PM增殖抑制及诱导凋亡作用。

逆转录酶抑制剂对卵巢癌细胞株HO-8910细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

目的 研究逆转录酶抑制剂 (AZT)对卵巢肿瘤细胞端粒酶活性的影响 .方法 采用 TRAP- EL ISA方法检测卵巢癌 HO- 8910细胞在 AZT作用前后端粒酶活性的变化 ,以流式细胞仪分析细胞周期的改变 .结果 AZT作用后的 HO-8910细胞端粒酶活性明显受抑制 ,且细胞的 G2 /M期 DNA含量明显增高 .结论 AZT能明显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 .

福安泰-03对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭能力的影响

应用噻唑蓝法检测从赤魟中分离到的福安泰-03(Fuantai-03,FAT-03)对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM生长的影响;人工重组基底膜检测FAT-03对细胞侵袭能力的影响;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测FAT-03对HO-8910PM细胞分泌MMP-9能力的影响。结果显示,FAT-03(20.0、40.0、60.0μg/ml)作用HO-8910PM细胞24h,对细胞生长的抑制率小于10%,对细胞与纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和Matrigel粘附的抑制率分别为15.1%、28.0%(P<0.05)、54.1%(P<0.01)和14.7%、34.3%(P<0.05)、40.5%(P<0.01),对细胞迁移的抑制率分别为16.4%、33.8%(P<0.05)和42.6%(P<0.01)。此外,FAT-03显著减少HO8910-PM细胞分泌MMP-9的量,并降低其活性。这些实验事实提示FAT-03能明显抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力。

参一胶囊联合顺铂对高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM的抑制作用

目的观察参一胶囊(Rg3)对高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM的抑制作用。方法细胞分成6组:阴性对照组(A组):只加新鲜的全培养液;低浓度组(B组):含10μg.mL-1Rg3培养液;中浓度组(C组):含20μg·mL-1Rg3培养液;高浓度组(D组):含40μg·mL-1Rg3培养液;顺铂阳性对照组(E组):含10μg·mL-1顺铂的培养液;顺铂+Rg3联合用药组(F组):含10μg·mL-1顺铂+20μg·mL-1Rg3培养液。分别从台盼蓝活细胞计数法、细胞的增殖抑制(CCK-8法)进行观察。结果Rg3对人卵巢癌HO-8910PM细胞有明显的抑制作用,显示了较好的细胞毒活性作用(P<0.05)。Rg3与顺铂联合用药时,细胞毒作用与高浓度Rg3和顺铂组相似,但在微观结构上能造成更大的细胞形态结构损伤。结论Rg3对高转移人卵巢癌细胞有一定的抑制作用,Rg3与顺铂联合用药在细胞结构破坏上可能有相加或协同作用,这将为临床卵巢癌患者进行抗肿瘤治疗提供依据。

半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PMETS-1mRNA和VEGF蛋白表达的影响

目的:研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对HO-8910PM细胞内VEGF蛋白及ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制.方法:RT-PCR分析ETS-1mRNA的表达;Western blot分析VEGF蛋白的表达.结果:25～100 μmol/L 5F作用HO-8910PM细胞24 h后,明显下调ETS-1mRNA的表达;5F明显下调VEGF蛋白表达水平.结论:5F抗肿瘤侵袭转移能力与ETS-1mRNA和VEGF蛋白的表达有关.

洛伐他汀对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期和增殖的影响

目的探讨洛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期和增殖的影响。方法以MTT法检测洛伐他汀对HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析洛伐他汀对HO-8910PM细胞周期的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变。结果洛伐他汀对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用,并使G0/G1期细胞增多,G2/M、S期细胞减少,32μmol/L用药48h有指示细胞凋亡的亚G1期"凋亡峰"出现。结论洛伐他汀阻滞HO-8910PM细胞于G0/G1期,并能有效抑制癌细胞的体外增殖,以上作用均有剂量和时间依赖性。

核桃楸提取物抑制人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的实验研究

目的研究中药核桃楸提取物对人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖能力的影响。方法采用层流分离法提取出核桃楸6种有效成分,分别以10^-8 mg/mL、10^-7 mg/mL、10^-6 mg/mL、10^-5 mg/mL浓度作用于卵巢癌细胞HO-8910PM,并设立空白对照组,以噻唑蓝比色法和形态学观察法检测核桃楸提取物对癌细胞生长的抑制作用。结果核桃楸提取物的6种有效成分结构鉴定分别为a-羟基-四氢萘醌(Y1)、胡桃醌(Y2)、4,8-二羟基萘酚-1-0-β-D-[6′-0-(3″,5″-二甲氧基-4″-羟基苯甲酰基)]葡萄糖苷(Y3)、4,8-二羟基萘酚-β-D-(6′-乙酰氧基葡萄糖苷)(Y4)、4,8-二羟基萘酚-β-D-葡萄糖苷(Y5)、4,5,8-二羟基-ɑ-四氢萘醌-5-0-β-D-[6′-0-(4″-羟基-3″,5″-二甲氧基苯甲酰基)]葡萄糖苷(Y6)。Y1、Y3、Y6这3种药物随着药物浓度的增高和作用时间的延长,对HO-8910PM细胞增殖的抑制率也相应增高,并且Y1、Y3的浓度依赖性明显,Y6的时间依赖性明显且在短时间低浓度组(10^-8 mg/mL)表现出了明显的肿瘤抑制作用;其他药物无规律变化。电镜下观察各药物组HO-8910 PM细胞随着药物浓度的增高和作用时间的延长,细胞出现程序性死亡。结论核桃楸提取物的6种有效成分中,有3种能够抑制人卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖,且抑制作用存在剂量、时间依赖性。

高浓度孕激素对卵巢癌细胞株HO-8910体外生长的影响

目的探讨高浓度孕激素对卵巢癌细胞株HO-8910体外生长的作用。方法用细胞凋亡检测试剂盒判定细胞凋亡,用光镜、电镜观察细胞变化。结果孕激素浓度为200、500ng/mL时,对细胞的生长影响与对照组比较无显著差异;孕激素浓度为1000、2000、3000、4000、5000ng/mL时,与对照组比较有显著差异。结论高浓度孕素对卵巢癌细胞株HO-8910的生长有抑制作用,呈剂量依赖效应。

辛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的抑制作用

目的研究辛伐他汀(SIM)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖的抑制作用。方法MTT法检测SIM对HO-8910PM细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析SIM对细胞周期的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变。结果SIM抑制HO-8910PM细胞的增殖,细胞被阻滞在G0/G1期;荧光染色法显示经SIM作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体。结论SIM在体外能有效地抑制癌细胞的增殖,其作用可能是通过诱导其凋亡产生的。

逆转录酶抑制剂联合化疗药物对卵巢癌细胞株HO-8910细胞增殖的作用

目的:探讨逆转录酶抑制剂(AZT)与卡铂、阿霉素联合用药对卵巢癌细胞株HO-8910生长的影响。方法:用MTT分析法检测各种药物对肿瘤细胞的杀伤率,流式细胞仪分析细胞周期中DNA的含量。结果:AZT与卡铂、阿霉素联合用药对细胞抑制作用明显增强,与AZT、卡铂、阿霉素单独用药组相比差异有显著性(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,联合用药后S期细胞明显减少,DNA合成明显降低。结论:AZT可抑制肿瘤细胞增殖,联合化疗药物后抑制作用更明显,有协同作用,可作为卵巢癌化疗的增效剂。

RNA干扰survivin对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响

目的探讨RNA干扰survivin基因对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响。方法实验分3个组:siRNA组,采用脂质体法将靶向survivin siRNA荧光真核表达质粒载体pGPU6-GFP-survivin-shRNA转染卵巢癌HO-8910PM细胞;空白对照组,单纯细胞培养;阴性对照组,用表达与survivin序列无同源性的siRNA片段质粒pGPU6-GFP-NC转染细胞。于转染后48 h和72 h,用PI单染法流式细胞术检测各组HO-8910PM细胞周期的变化以及Western blot检测survivin蛋白的表达情况。结果 PI单染流式细胞仪检测细胞周期结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比较,2个时间点siRNA组转染后的G0/G1期细胞比例明显增加,而G2/M期细胞比例均下降(P<0.05);Western blot结果证实,siRNA组的HO-8910PM细胞survivin蛋白的表达量明显下调。结论导入survivin基因特异性的siRNA可导致卵巢癌HO-8910PM细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞增殖受阻,且细胞survivin蛋白表达量下降。

骨桥蛋白反义寡核苷酸对卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖的实验研究

卵巢癌是死亡率较高的妇科恶性肿瘤之一,因易转移而广泛播散,70%的患者就诊时已属晚期,因此卵巢癌的早期诊断和治疗尤其重要。许多研究提示骨桥蛋白（osteopontin,OPN）很有希望作为卵巢癌新的肿瘤标志物,进而用于卵巢癌的早期诊断和病情预测。骨桥蛋白（OPN）是一种磷酸化糖蛋白,首先由骨骼组织中分离而来,

辛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移及Ras表达的影响

目的：研究辛伐他汀（SIM）通过抑制法尼基化途径对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移相关能力及Ras信号转导作用的影响。方法：以MTT法、流式细胞技术分析检测SIM对HO-8910PM细胞生长增殖和细胞周期的影响；用Transwell小室法及细胞粘附人工重组基底膜实验检测SIM对HO-8910PM细胞侵袭粘附能力的影响；RT-PCR、Western blot法检测SIM对HO-8910PM细胞Ras、ERK2表达水平的影响；采用7-32P掺人法检测MAPK活性。结果：（1）4～64μmol／L的SIM处理24～72h后，HO-8910PM细胞的生长增殖受到一定的抑制；各给药组内G1期细胞明显增多，G2、S期细胞减少，用药浓度高时有指示细胞凋亡的亚G1期“凋亡峰”出现。以上作用均有浓度一效应和时间依赖关系。（2）SIM能够明显地抑制HO-8910PM细胞的体外趋化运动、侵袭和粘附能力（P〈O．05）。（3）随用药浓度的增高，K-RasmRNA的表达没有明显的变化，细胞膜上Ras蛋白水平逐渐降低，胞浆中Ras蛋白水平逐渐增加，总Ras蛋白的表达变化不大；SIM能明显下调HO-8910PM细胞的ERK2蛋白表达。（4）激酶活性检测结果显示，SIM能明显抑制MAPK活性（P〈O．01）。结论：SIM能抑制人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭、运动和粘附能力。SIM抗肿瘤转移的作用机制与它们抑制某些蛋白（如Ras蛋白）的法尼基化反应有关。SIM能抑制Ras蛋白的法尼基化即抑制它锚定于细胞膜上，抑制了其生物活性，从而影响Ras-MAPK信号转导作用和其下游靶蛋白。

陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖影响的研究

目的体外培养法研究陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的影响。方法将体外培养的HO-8910PM细胞分为挥发油组、阳性对照组、阴性对照组及Control组,分别以挥发油、环磷酰胺、DMSO及完全培养基处理后,以MTT法评价不同浓度及不同作用时间下陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对HO-8910PM细胞的生长抑制作用;以Hoechst33258荧光染色法染色细胞核,倒置显微镜观察细胞核形态变化;测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)、Caspase-3酶活性,评价4种挥发油对细胞膜结构及细胞凋亡的影响。结果陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对HO-8910PM细胞增殖具有抑制作用,并且呈时间剂量依赖性。Hoechst33258荧光染色法观察细胞核有明显的凋亡形态变化。各实验浓度挥发油处理后,细胞培养液中LDH活性、细胞中Caspase-3酶活性均明显增加,较Control组及阳性药环磷酰胺组差异有统计学意义(P<0.01)。结论陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对HO-8910PM细胞具有增殖抑制及促凋亡作用,其机制可能为破坏肿瘤细胞的细胞膜,激活细胞凋亡途径中的关键酶Caspase-3。

IL-18真核表达载体的构建及其在HO-8910细胞株的表达

目的:通过构建人白细胞介素18(IL-18)真核表达载体,观察其在HO-8910细胞株的表达情况。方法:应用分子克隆技术将IL-18基因插入pCI真核表达载体,应用脂质体介导法转染人卵巢癌HO-8910细胞株。转染分3组,空白组:人卵巢癌HO-8910细胞株+脂质体;对照组:卵巢癌HO-8910细胞株+pCI;实验组:卵巢癌HO-8910细胞株+pCI-hIL-18。以RT-PCR方法分别检测3组的IL-18表达情况。结果:成功构建pCI-hIL-18真核表达载体并转染HO-8910细胞株,RT-PCR、ELISA显示转染pCI-hIL-18重组质粒组在转染的细胞内获得表达。结论:IL-18基因能够转染到HO-8910细胞株中并获得表达。

苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖影响

目的探讨苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞增殖的影响。方法不同浓度苏拉明作用于人卵巢癌细胞株HO-8910PM,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HO-8910PM增殖情况。结果MTT结果显示50、100、200、300、400、500、600μg/mL浓度的苏拉明作用于HO-8910PM细胞96 h的生长抑制率(G I)分别是13.1%、22.6%、35.1%、43.7%、54.3%、64.8%、70.9%,不同时间及不同浓度组吸光光度值A差异有统计学意义(P<0.01)。结论苏拉明以时间及剂量效应方式抑制体外培养的HO-8910PM增殖;提示苏拉明作为HPA抑制剂有望成为转移性卵巢癌联合化疗用药。

辛伐他汀对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞Ras/MAPK/NF-κB通路的影响

目的:研究辛伐他汀(SIM)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞Ras信号通路的影响。方法:不同浓度SIM分别作用HO-8910PM细胞48 h后,采用RT-PCR分别检测Ras、HIF-1α、NF-κB(P65)、Rho A和VEGF m RNA的表达,Western blot分别检测Ras、ERK2、-κBα、NF-κB(p65)、HIF-1α和VEGF的蛋白水平,γ-^(32)P掺入法检测MAPK活性。结果 :SIM能使NF-κB(p65)、VEGF和RHo A m RNA表达降低,影响Ras蛋白在胞浆和胞膜间的分布,下调ERK2、HIF-1α、VEGF蛋白表达,并抑制活化的NF-κB往核内易位。结论:SIM抗卵巢癌机制与抑制Ras/MAPK信号传导及其与NF-κB通路间的交叉通讯密切相关。

8-氨基异紫堇碱对HO-8910PM增殖和迁移的抑制作用

目的分析8-氨基异紫堇碱(8-NH2-ICD)对人高转移卵巢癌细胞(HO-8910PM)增殖和迁移的抑制作用。方法取对数生长期人上皮性卵巢癌(OC)HO-8910PM细胞15株,分为阴性对照组、药物组,各组培养24、48、72 h后,采用CCK-8检测药物干预后细胞增殖抑制率,Hoechst染色观察HO-8910PM细胞的凋亡形态变化,流式细胞技术、Transwell小室分别测定药物作用后细胞周期及迁移能力。结果随时间、药物浓度增加,HO-8910PM细胞增殖抑制率增加(P<0.05),在5~20μg/ml范围内有明显量效、时效关系,至20μg/ml时对细胞增殖抑制作用基本已达最大值;Hoechst 33258染色表明,阴性对照组细胞呈弥散均匀的淡蓝色荧光,添加8-NH2-ICD的细胞株出现细胞核固缩、荧光致密发亮、大小不同颗粒状强蓝色荧光等凋亡形态变化;8-NH2-ICD作用72 h后,与阴性对照组比较,浓度在5~20μg/ml时对细胞周期作用不明显,浓度为40μg/ml时S期细胞减少,G0/G1期细胞比例增加,8-NH2-ICD对HO-8910PM细胞周期阻滞在G0/G1期;处理24、48、72 h时药物组侵袭至滤镜下表面的细胞数明显减少,且低于阴性对照组,尤其是48、72 h时差异有统计学意义(P<0.05)。结论 8-NH2-ICD可明显抑制人OC细胞株HO-8910PM的增殖与迁移,促进细胞凋亡,且其对HO-8910PM细胞周期阻滞在G0/G1期。