人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质双向凝胶电泳分析

目的 :研究人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质表达特征。方法 :抽提鼻咽癌细胞系HONE1总蛋白 ,双向凝胶电泳 (2 DE)分离、银染显色 ,用凝胶成像仪和PDQUEST软件获取HONE1总蛋白的 2 DE图像 ;根据获得的 2 DE凝胶图像 ,从胶上切取分辨良好、染色较浓的蛋白质点 ,用胰蛋白酶原位水解 ,所获酶解肽段经基质辅助激光解吸飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定Mr;以测得的肽段Mr为肽质量指纹 (PMF) ,通过PepIdent软件搜索SWISS PROT和TrEMBL数据库而识别该点对应的蛋白质。结果 :建立了双向凝胶电泳分离总蛋白、质谱鉴定银染蛋白质点的方法 ,并鉴定出人鼻咽癌细胞系HONE1中表达较强的 10个点相应的蛋白质。结论 :本研究为建立人鼻咽癌细胞HONE1的 2 DE参考图和蛋白质数据库提供了有用的基础性研究资料 ,为进一步识别鼻咽癌特异性的蛋白质奠定了实验基础。

miR-516b-5p靶向ATM调控鼻咽癌细胞HONE1 DNA修复的机制研究

目的探讨鼻咽癌细胞HONE1中抑制DNA修复的潜在机制。方法使用ETP处理鼻咽癌细胞HONE1造成DNA损伤后,通过高通量测序检测鼻咽癌细胞HONE1中miRNA的表达谱。过表达差异miRNA后,通过基于I-PpoI的可诱导DSB系统检测DNA双链断裂处(DNA double-strand breaks,DSB)的DNA-PKcs含量。通过miRDB在线分析miRNA的潜在靶标。通过荧光素酶报告系统检测miRNA靶向mRNA。结果ETP处理后hsa-miR-9983-3p、hsa-miR-4731-5p、hsa-miR-3675-5p、hsa-miR-516b-5p、hsa-miR-4437、hsa-miR-7114-5p、hsa-miR-637、hsa-miR-5008-5p的表达水平上升至少8倍。miR-516b-5p mimics导致DSB的DNA-PKcs含量减少(P<0.05),而miR-516b-5p inhibitor导致DSB的DNA-PKcs含量增加(P<0.05)。在鼻咽癌细胞HONE1中过表达miR-516b-5p后,ATM mRNA的表达水平和蛋白表达水平下降,DNA-PKcs的磷酸化水平下降;而抑制miR-516b-5p表达后,ATM mRNA的表达水平和蛋白表达水平上升,DNA-PKcs的磷酸化水平上升。同时,miR-516b-5p靶向ATM的3端非编码区。过表达ATM后,DSB的DNA-PKcs含量上升(P<0.05),而敲低ATM后,DSB的DNA-PKcs含量下降(P<0.05)。结论miR-516b-5p通过靶向ATM mRNA的3端非编码区,降解了ATM mRNA,抑制了ATM的翻译,随后DNA-PKcs的磷酸化水平下降,DNA-PKcs与DSB的结合减少,最终抑制了鼻咽癌细胞HONE1的DNA修复。

海带多糖和茶多酚对鼻咽癌细胞HONE1和CNE2增殖的影响

目的:观察海带多糖(LJP)和茶多酚(TP)单独及联合应用对鼻咽癌(NPC)细胞HONE1和CNE2增殖的影响,了解LJP对体内移植瘤的抑制作用,探讨其抗癌机制。方法:以NPC细胞HONE1和CNE2为研究对象,绘制两者生长曲线,计算倍增时间确定对数生长期细胞,采用MTT检测LJP和TP单独及联合应用对两组细胞的增殖抑制率,运用Annexin V加PI双染法检测LJP对HONE1细胞凋亡的影响;以人NPC细胞株HONE1建立裸鼠皮下移植瘤模型及行体内抑瘤实验。结果:LJP和TP均对两组细胞有增殖抑制作用,LJP和TP联合应用对两组实验细胞抑制作用均高于两者单独应用的效果,且这种作用呈浓度依赖关系。流式细胞仪检测结果显示,LJP具有诱导HONE1细胞凋亡的作用,凋亡率随着LJP浓度的增加而增高,320mg/L的凋亡率为(49.51±1.89)%(P<0.01)。体内实验中,25.0mg/kg LJP组、50.0mg/kg LJP组的抑瘤率分别为33.7%(P<0.05)和47.0%(P<0.01),具有明显抑制移植瘤的作用,而12.5mg/kg LJP组的抑瘤率仅为16.4%(P>0.05)。结论:LJP和TP对鼻咽癌细胞HONE1和CNE2增殖均有抑制作用,两者联合应用更具有显著效果,LJP作用机制可能是通过诱导癌细胞凋亡而实现的。

冬凌草甲素影响细胞外排功能增加HONE1细胞对米托蒽醌的敏感性

目的观察非毒性剂量冬凌草甲素是否增加鼻咽癌细胞株HONE1对米托蒽醌的敏感性。方法采用MTT法使用不同浓度的冬凌草甲素处理HONE1细胞株,确定冬凌草甲素的非毒剂量区间;然后用非毒性剂量冬凌草处理细胞后用流式细胞术进行侧群表型检测,探索能显著降低侧群表型的冬凌草甲素浓度;参考冬凌草甲素非毒性剂量和能降低侧群表型的剂量得到冬凌草甲素用于联用米托蒽醌的浓度。结果 5μmol/L冬凌草甲素并未对HONE1细胞产生明显毒性,该浓度处理细胞24 h后,细胞侧群比例由3.32%降低至0.55%;米托蒽醌联用5μmol/L冬凌草甲素组HONE1细胞存活率较单用米托蒽醌组低(P<0.05);流式细胞术分析显示膜外排蛋白ABCG2含量降低。结论冬凌草甲素可以通过影响细胞ABCG2外排功能增加鼻咽癌细胞株HONE1对米托蒽醌的敏感性。

紫杉醇调控Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌细胞株HONE1增殖

目的 研究紫杉醇对鼻咽癌细胞株HONE1的增殖抑制作用及对Wnt/β-catenin信号通路的调控。方法 低、中、高剂量实验组鼻咽癌HONE1细胞以10,20,30 mol·L^-1紫杉醇处理,对照组细胞以等量生理盐水处理,各组分别干预12,24,48 h。以噻唑蓝(MTT)法及平板克隆形成实验检测鼻咽癌HONE1细胞增殖,以Hoechst 33258染色观察鼻咽癌HONE1细胞细胞核形态及凋亡情况,HONE1细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达以蛋白质印迹法检测。结果 对照组及低、中、高剂量实验组鼻咽癌HONE1细胞克隆形成率分别为(66. 12±3. 08)%,(41. 93±3. 36)%,(30. 84±2. 97)%,(21. 03±3. 01)%,细胞凋亡率分别(3. 28±0. 83)%,(13. 56±2. 14)%,(27. 01±2. 64)%,(34. 79±2. 52)%,Wnt4蛋白相对表达量分别为0. 76±0. 09,0. 67±0. 10,0. 18±0. 04,0. 11±0. 03,β-catenin蛋白相对表达量分别为0. 94±0. 17,0. 78±0. 14,0. 35±0. 03,0. 21±0. 02,低、中、高剂量实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。各实验组间HONE1细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论 紫杉醇可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有效抑制鼻咽癌HONE1细胞生长,诱导其凋亡。