长链非编码RNA在急性肺损伤中的作用及分子调控机制研究进展

急性肺损伤(ALI)是临床上常见的危重症之一。长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的非蛋白质编码RNA,在染色质形成、转录和转录后翻译等基因表达水平直接或间接参与ALI的发生发展。lncRNA核富集丰富转录物1、lncRNA HOX转录反义基因间RNA及lncRNA牛磺酸上调1等lncRNA可作为竞争性内源RNA,与miR-26a-5p、miR-17-5p及miR-34b-5p等微小RNA结合,调节Wnt1诱导的信号通路蛋白1、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1蛋白及自噬相关蛋白等下游相关蛋白的表达,参与ALI的发生发展。LncRNA可能通过调控DNA甲基化、组蛋白修饰,在表观遗传水平参与ALI的发生发展;L通过组装转录激活因子和抑制因子,调节白细胞介素6(IL-6)、IL-17、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3/9等蛋白质的转录,在转录水平参与ALI的发生发展;与多种RNA结合蛋白相互作用,在转录后水平调控ALI的发生发展。

长链非编码RNA HOX转录物反义RNA通过磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录物反义RNA(HOTAIR)通过磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用体外培养人食管鳞癌细胞株(购自中国细胞资源种子库),分别用磷酸盐缓冲液(PBS)和CRISPR/Cas9 KO HOTAIR病毒或CRISPR/Cas9 KO HOTAIR病毒+PI3K/Akt激活剂胰岛素样生长因子(IGF)-1处理,得到对照组(NC组),CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组和CRISPR/Cas9 KO HOTAIR+IGF-1组。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA HOTAIR和Akt mRNA水平;蛋白质印迹法(Western blot)法测定磷酸化Akt(p-Akt)、t-Akt和Tubulin蛋白的表达量;噻唑蓝(MTT)检测各组细胞增殖情况,最后通过Tanswell测各组细胞迁移。采用双尾t检验。结果通过RT-PCR检测IncRNA HOTAIR在正常食管组织组(1.001±0.115)和食管鳞癌组织组(4.167±0.491),两者差异有统计学意义(t=8.654,P<0.01);与NC组(1.001±0.144)比较,CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.051±0.014)的lncRNA HOTAIR表达水平显著降低(t=6.554,P<0.01),差异有统计学意义;与NC组(1.033±0.060)比较,CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.220±0.058)的p-Akt或p-Akt/t-Akt值显著降低(t=10.054,P<0.01),差异有统计学意义,而CRISPR/Cas9 KO HOTAIR+IGF-1组(0.400±0.029)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.220±0.058)比较,p-Akt或p-Akt/t-Akt值显著升高(t=1.412,P<0.05),差异有统计学意义;通过敲除HOTAIR基因对的Akt mRNA检测:NC组(1.033±0.044)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.936±0.064)比较,两者差异无统计学意义(t=0.936,P>0.05);CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.936±0.064)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR+IGF-1组(1.036±0.102)比较,两者差异无统计学意义;通过MTT检测细胞的增殖,在72 h比较细胞增殖,NC组(6.700±0.289)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(2.517±0.306)比较,两者差异有统计学意义(t=0.458,P<0.01);CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(2.517±0.306)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR+IGF-1组(4.200±0.265)比较,两者差异有统计学意义(t=0.966,P<0.05)。通过Transwell检测细胞的迁移,NC组(1.000±0.029)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.330±0.049)比较,两者差异有统计学意义(t=14.798,P<0.01);CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.330±0.049)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR+IGF-1(0.608±0.068)组比较,两者差异有统计学意义(t=0.876,P<0.05)。结论敲除HOTAIR基因(KO HOTAIR)通过降低p-Akt水平,降低p-Akt/t-Akt值而抑制PI3K/Akt信号通路,降低细胞增殖,抑制细胞迁移。而PI3K/Akt的激活剂IGF-1可以阻止HOTAIR基因敲除产生的影响。

长链非编码RNA HOTAIR与甲状腺癌生物学行为的研究进展

甲状腺癌是目前临床上发病率上升最快的恶性实体肿瘤,且在女性多发,约占全身恶性肿瘤的1%左右[1]。到2019年,甲状腺癌在女性恶性肿瘤中排名第三[2]。甲状腺癌根据其组织病理学特点可分为甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)、甲状腺滤泡状癌(follicular thyroid carcinoma,FTC)、甲状腺髓样癌(medullary thyroid carcinoma,MTC)及甲状腺未分化癌[anaplastic(undifferentiated)thy-roid carcinoma,ATC][3]。

血清lncRNA HOTAIR和miR-206表达水平与急性呼吸窘迫综合征患者病情严重程度及预后的关系

目的探讨血清长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义基因间RNA(HOTAIR)、miR-206表达水平与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者病情严重程度及预后的关系。方法选取110例ARDS患者,依据其入院时的氧合指数[PaO_(2)/吸入氧比例(FiO_(2))]分为ARDS轻度组37例、ARDS中度组41例、ARDS重度组32例,并根据入院28 d内的临床结局将其分为生存组74例和死亡组36例。比较不同病情严重程度及不同临床结局ARDS患者的一般资料及临床资料,血清HOTAIR、miR-206表达水平,采用COX回归模型分析ARDS患者入院28 d内死亡的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HOTAIR和miR-206表达水平对ARDS患者入院28 d内死亡的预测效能,采用Pearson法对血清HOTAIR与miR-206表达水平进行相关性分析。结果ARDS轻度组、ARDS中度组、ARDS重度组患者的呼气末正压通气(PEEP)、急性生理与慢性健康评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分及血清HOTAIR表达水平均依次升高,而血清miR-206表达水平依次降低(均P<0.05)。与生存组相比,死亡组患者的APACHEⅡ评分、PEEP及血清HOTAIR表达水平均更高,而PaO_(2)/FiO_(2)及血清miR-206表达水平均更低(均P<0.05)。COX回归分析结果显示,APACHEⅡ评分、PaO_(2)/FiO_(2)及血清HOTAIR表达水平、血清miR-206表达水平均是ARDS患者入院28 d内死亡的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清HOTAIR表达水平、血清miR-206表达水平及两者联合预测ARDS患者入院28 d内死亡的曲线下面积分别为0.845、0.837、0.943,特异度分别为87.80%、71.60%、89.20%,敏感度分别为75.00%、83.30%、91.70%。Pearson相关性分析结果显示,ARDS患者血清HOTAIR的表达水平与血清miR-206的表达水平呈负相关(P<0.05)。结论血清HOTAIR、miR-206的表达水平与ARDS患者的病情严重程度及预后密切相关,血清HOTAIR表达水平升高及血清miR-206表达水平降低均是ARDS患者入院28 d内死亡的危险因素,且ARDS患者血清HOTAIR表达水平与血清miR-206表达水平呈负相关,二者联合检测对ARDS患者的预后具有较好的预测价值。

MALAT1、HOTAIR、NEAT1调控结直肠癌的研究进展

结直肠癌作为一种遗传性疾病,其发病机制涉及多个基因。长链非编码RNA(lncRNA)在肿瘤发生过程中起着重要的调节作用,对肿瘤的发展有重要影响。该文概述了lncRNA在结直肠癌中作为竞争性内源性RNA如何发挥其功能以及它们的表达是如何被调节,并重点介绍了以下lncRNA:HOTAIR、MALAT1、NEAT1在结直肠癌预后与肿瘤进展、侵袭、转移、细胞凋亡、放射抵抗等方面的作用机制,并阐明其作为治疗靶点的潜在作用。

长链非编码RNA HOTAIR在结直肠癌中的研究进展

结直肠癌(CRC)是消化系统常见的恶性肿瘤,也是恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一。近年来我国CRC的发病率和病死率不断升高,迫切需要寻找更有效的治疗策略。HOX转录物反义RNA(HOTAIR)是长链非编码RNA(lncRNA)家族中的一员,在CRC细胞和组织中均高表达,并可作为原癌基因通过多种途径调控CRC细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡以及耐药等,与CRC的发生发展密切相关。因此,深入研究lncRNA HOTAIR在CRC发生发展中的作用机制,可以为CRC的治疗提供新思路。

长链非编码RNA-HOX转录反义RNA对三阴乳腺癌发生发展的影响

目的检测三阴乳腺癌(TNBC)中长链非编码RNA-HOX转录反义RNA(HOTAIR)表达,并探讨HOTAIR对TNBC发生发展的分子调控机制。方法收集64例2016年1月至2019年7月东莞市人民医院乳腺科手术治疗TNBC癌及癌旁腺体组织,以实时定量荧光聚合酶链反应(qPCR)检测HOTAIR表达,比较其在癌及癌旁中表达差异,并分析其与病理分期的相关性。在TNBC MDA-MB231细胞株中以小干扰RNA下调HOTAIR表达,以siControl为对照组检测对细胞增殖能力和凋亡的影响。进一步研究下调HOTAIR表达对于多梳蛋白复合体2(PRC2)核心亚基Zeste基因增强子同源物2(EZH2)表达的影响,应用SPSS 19.0统计软件分析,组间差异采用t检验。结果与癌旁组织比较,HOTAIR在TNBC中表达明显上调(0.71±0.10比0.50±0.06,t=20.286,P<0.01),差异有统计学意义。且HOTAIR在晚期TNBC组织中的表达明显高于早中期(0.78±0.05比0.64±0.07,t=8.625,P<0.01),差异有统计学意义。MDA-MB231细胞中以小干扰RNA(siRNA)沉默HOTAIR或EZH2的表达均引起细胞增殖能力下降、细胞凋亡增加。HOTAIR沉默表达后,EZH2表达明显下调,而下调EZH2 RNA对HOTAIR表达无影响。结论TNBC中HOTAIR表达明显上调,与不良预后相关。TNBC中HOTAIR可能通过调节PRC2复合物核心蛋白EZH2表达发挥生物效应。

HOTAIR EZH2和VEGF在鼻咽癌组织中的表达情况及其对预后的影响

目的:分析血管内皮生长因子(VEGF)、zeste基因增强子同源物2(EZH2)和长链非编码RNA Hox转录反义RNA(HOTAIR)在鼻咽癌组织中的表达情况及其对预后的影响。方法:采用回顾性研究,收集本院72例鼻咽癌(鼻咽癌组)和54例鼻咽慢性炎症(对照组)患者的临床资料,通过免疫组织化学法检测两组VEGF和EZH2蛋白表达情况,并采用实时荧光定量聚合酶链反应检测患者VEGF、EZH2和HOTAIR mRNA的表达情况。根据HOTAIR在鼻咽癌组织中的表达情况,将鼻咽癌患者分为低表达组与高表达组,比较两组临床病理特征的差异。结果:鼻咽癌组VEGF和EZH2蛋白表达水平均明显高于对照组(P<0.001)。相比对照组,鼻咽癌组VEGF、EZH2和HOTAIR mRNA相对表达量均明显升高(P<0.05)。高表达组病理分级、N分期、M分期、近期疗效与低表达组比较,均存在明显差异(P<0.05);两组年龄、性别、病理类型的比较,均无明显差异(P>0.05)。结论:VEGF、EZH2和HOTAIR高表达于鼻咽癌组织,并且HOTAIR可能通过EZH2和VEGF而起到诱导鼻咽癌远处转移的作用,且与患者预后不良存在密切关系。

lncRNA HOTAIR在卵巢癌发生发展中的作用机制及其临床应用研究进展

长链非编码RNA同源异型盒基因转录反义基因间RNA(HOTAIR)在卵巢癌组织和循环中表达上调,能够增加卵巢癌的易感性,促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡,干扰细胞周期进展,促进细胞自噬以及诱导上皮-间充质转化,从而介导卵巢癌的发生发展过程。循环HOTAIR检测可应用于卵巢癌的诊断。多项研究表明,HOTAIR高表达常预示卵巢癌患者预后不良,靶向HOTAIR可逆转卵巢癌化疗耐药性及抑制卵巢癌进展。HOTAIR有望作为卵巢癌生物诊断、预后评估的标志物以及潜在的治疗靶点。

长链非编码RNA在膀胱癌中的研究概况

随着二代测序技术的广泛应用和基因层面上肿瘤学研究的深入,曾被忽略、被低估的lncRNA被揭示与人类肿瘤的发生发展密切相关,从不同的生物学途径影响肿瘤的发生、发展。研究发现,lncRNA与膀胱癌的增殖、浸润、转移、复发、耐药等密切相关。本文将对lncRNA在膀胱癌中的研究概况进行综述。

lncRNA-HOTAIR通过靶向负调控miR-1-3p抑制脂多糖诱导的H9c2大鼠心肌细胞增殖并促进炎症反应

目的探讨长链非编码RNA-HOX转录本反义基因间RNA(lncRNA-HOTAIR)是否通过靶向微小RNA miR-1-3p调控脓毒症的炎症反应。方法利用0.5μg/mL脂多糖(LPS)诱导H9c2大鼠心肌细胞,建立脓毒症心肌细胞损伤模型,将H9c2细胞分为对照组、LPS组、LPS联合HOTAIR小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、LPS联合HOTAIR小干扰RNA(si-HOTAIR)组、LPS联合miR-1-3p阴性对照(miR-NC)组、LPS联合miR-1-3p组、LPS联合si-HOTAIR和miR-1-3p拮抗剂阴性(anti-miR-NC)组、LPS联合siHOTAIR和anti-miR-1-3p组。实时定量PCR检测HOTAIR和miR-1-3p表达,CCK-8法检测细胞增殖,Western blot法分析KI-67抗原(ki67)、P21、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)的蛋白表达,流式细胞术评估细胞凋亡,ELISA测定炎性因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。双荧光素酶报告实验分析HOTAIR和miR-1-3p的靶向关系。结果LPS组H9c2细胞中HOTAIR表达量高于对照组,miR-1-3p表达量低于对照组。与LPS联合si-NC组比较,LPS联合si-HOTAIR组LPS处理H9c2细胞增殖活性、ki67、Bcl2表达量增多,P21表达量、凋亡率、BAX表达量、IL-6和TNF-α水平降低。HOTAIR靶向调控miR-1-3p的表达。LPS联合miR-1-3p组较LPS联合miR-NC组的H9c2细胞增殖活性、ki67、Bcl2表达量升高,P21表达量、凋亡率、BAX表达量、IL-6、TNF-α水平降低。与LPS联合si-HOTAIR和anti-miR-NC组比较,LPS联合si-HOTAIR和anti-miR-1-3p组H9c2细胞增殖活性降低、ki67、Bcl2表达减少,P21、BAX表达,细胞凋亡、IL-6、TNF-α水平增加。结论HOTAIR通过靶向负调控miR-1-3p的表达,抑制LPS诱导的H9c2心肌细胞增殖,并诱导细胞凋亡和炎症反应。

LncRNA HOTAIR基因多态性与人乳头瘤病毒感染女性宫颈癌易感性的关联

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义基因间RNA(HOTAIR)基因多态性与人乳头瘤病毒(HPV)感染女性宫颈癌易感性及临床病理参数的关系。方法 选择武汉市第一医院妇科2019年12月-2020年12月收治的HPV感染宫颈癌患者120例设为研究组,选择同期医院体检宫颈癌筛查结果HPV结果阴性女性80名为对照组,通过电子病历及问卷调查的方式收集研究对象基本资料,包括年龄、初次生育年龄、体质量指数、孕次、产次、绝经状态。采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应检测LncRNA HOTAIR基因rs920778位点基因多态性,分析其与宫颈癌患者HPV感染的易感性及临床病理参数的关系。结果 两组研究对象分布情况在预期值与实际值之间比较差异无统计学意义,证明该研究群体具有群体代表性;研究组LncRNA HOTAIR基因rs920778位点TT基因型、T等位基因频率高于对照组,CC基因型、C等位基因低于对照组(P<0.05);Logistic回归分析结果显示携带TT基因型、T等位基因为高危型HPV感染宫颈癌发生的影响因素(P<0.05)。结论 LncRNA HOTAIR基因rs920778位点TT基因型增加本地区女性对HPV宫颈癌的易感性,但与其病情进展无关。

血清LncRNA OSER1-AS1及HOTAIR表达与原发性肝细胞癌病理特征及预后的相关性分析

目的探讨原发性肝细胞癌(HCC)患者血清长链非编码RNA(LncRNA)OSER1-AS1及LncRNA HOX转录物反义RNA(HOTAIR)的表达情况及其与病理特征和预后的相关性。方法选取2016年6月至2019年6月华北理工大学附属医院行R0切除术的92例原发性HCC患者作为HCC组,另选取同期体检的100例健康志愿者作为对照组。采集HCC组术前血清标本及对照组血清标本,收集HCC肿瘤组织及癌旁组织,检测LncRNA OSER1-AS1及LncRNA HOTAIR表达水平。随访HCC患者的术后总生存情况和无病生存情况。结果HCC组术前血清LncRNA OSER1-AS1及LncRNA HOTAIR表达水平高于对照组(P<0.05)。HCC组织LncRNA OSER1-AS1及LncRNA HOTAIR表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析,血清LncRNA OSER1-AS1及LncRNA HOTAIR表达水平对HCC具有诊断价值,截断值分别为1.098(灵敏度70.00%、特异度69.69%)及1.066(灵敏度67.50%、特异度69.57%)。HCC组血清LncRNA OSER1-AS1及LncRNA HOTAIR表达水平与病理分级、临床分期、脉管浸润有关(P<0.05)。LncRNA OSER1-AS1≥1.098、LncRNA HOTAIR≥1.066的HCC患者累积总生存率及累积无病生存率均低于LncRNA OSER1-AS1<1.098、LncRNA HOTAIR<1.066的HCC患者(P<0.05)。结论HCC患者血清LncRNA OSER1-AS1及LncRNA HOTAIR高表达,且与病理进展、预后不良有关。

沉默lncRNA HOTAIR上调miR-17-5p表达增加U87R细胞放射敏感性

目的探讨lncRNA HOTAIR对胶质瘤U87R细胞和移植瘤放射敏感性影响及潜在作用机制。方法将阴性对照质粒、沉默HOTAIR质粒、过表达miR-NC质粒、过表达miR-17-5p质粒分别转染到U87R细胞中,记为沉默对照组、沉默HOTAIR组、过表达miR-NC组、过表达miR-17-5p组;以上各组细胞分别用4Gy照射,记为沉默对照+4Gy组、沉默HOTAIR+4Gy组、过表达miR-NC+4Gy组、过表达miR-17-5p+4Gy组;将沉默HOTAIR质粒分别与抑制表达miR-NC质粒、抑制表达miR-17-5p质粒共转染到U87R细胞中,记为沉默HOTAIR+抑制miR-NC组、沉默HOTAIR+抑制miR-17-5p组,转染均用脂质体法。采用qRT-PCR检测miR-17-5p和HOTAIR的表达;细胞克隆形成实验检测瘤细胞放射敏感性影响;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果HOTAIR在放射抵抗的细胞中高表达;沉默HOTAIR和过表达miR-17-5p可增加U87R细胞放射敏感性且促进放射照射诱导的凋亡。HOTAIR可靶向调节miR-17-5p表达,抑制miR-17-5p逆转了沉默HOTAIR对U87R细胞放射增敏和促进放射诱导的凋亡。结论沉默lncRNA HOTAIR对胶质瘤细胞具有放射增敏和促放射诱导的凋亡作用,其机制可能与调控miR-17-5p有关。

健脾消癌方通过lncRNA HOTAIR/JAK2/STAT3信号通路抑制结肠癌细胞株HCT116转移的机制

目的:观察健脾消癌方对Hox转录本反义基因间RNA(lncRNA HOTAIR)/酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响,探讨健脾消癌方抑制结肠癌转移的可能作用机制。方法:分析不同细胞株lncRNA HOTAIR的表达情况,采用10%,15%,20%健脾消癌方含药血清作用于HCT116细胞,transwell实验检测健脾消癌方对HCT116细胞的侵袭能力影响,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测lncRNA HOTAIR,JAK2,STAT3 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JAK2,磷酸化STAT3(p-STAT3),STAT3蛋白表达情况。结果:结肠癌细胞株HCT116中lncRNA HOTAIR的表达水平最高,采用此细胞作为观察对象。与空白组比较,健脾消癌方各组的侵袭细胞数均降低(P<0.05,P<0.01);健脾消癌方中剂量组JAK2 mRNA相对表达水平降低(P<0.05);健脾消癌方中、高剂量组的lncRNA HOTAIR,健脾消癌方高剂量组的JAK2 mRNA相对表达水平显著降低(P<0.01)。与空白组比较,健脾消癌方中剂量组的p-STAT3蛋白相对表达水平均降低(P<0.05);健脾消癌方中、高剂量组的JAK2蛋白,健脾消癌方高剂量组的p-STAT3蛋白相对表达水平均明显降低(P<0.01)。结论:健脾消癌方可有效抑制结肠癌细胞转移,其机制可能与抑制lncRNA HOTAIR/JAK2/STAT3信号通路的表达相关。

血浆HOTAIR在冠状动脉粥样硬化性心脏病的表达及诊断价值

目的:检测血浆HOX转录反义RNA(HOTAIR)表达水平,并初步探讨血浆HOTAIR作为冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)标志物的诊断价值。方法:CAD患者和非CAD患者分别作为本研究的疾病组和对照组,血标本来自重庆大坪医院心内科介入室(2013年1月-9月)。运用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)分别检测疾病组和对照组各100例血浆HOTAIR水平,同时对上述血浆HOTAIR的表达值绘制受试者工作特征(ROC)曲线,并计算ROC曲线下面积(AUC)。结果:与对照组(0.25±0.10)相比,HOTAIR在CAD患者血浆(0.80±0.30)中表达显著升高(P<0.05);ROC曲线分析表明,AUC为0.776,Cut-off值为0.55时,诊断CAD的灵敏度为75%,特异度为80%。结论:冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血浆HOTAIR水平升高,血浆HOTAIR可作为诊断冠状动脉粥样硬化性心脏病的独立生物标志物。

长链非编码RNA在结肠癌中的研究进展

结肠癌是世界上排名第三的恶性肿瘤,据统计,2012年全球有140万的结肠癌新发病例,并且其中693 900人死于结肠癌[1]。大多数的结肠癌为散发,不存在遗传或家族史,因此分子信号通路的变异在结肠癌的发生、发展中具有重要的作用。