基于长链非编码RNA HOX转录反义RNA探讨次乌头原碱对人肝癌SK-Hep-1细胞自噬的影响实验研究

目的:基于长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)探讨次乌头原碱对人肝癌SK-Hep-1细胞自噬的影响。方法:取对数期人肝癌SK-Hep-1细胞,将lncRNA HOTAIR抑制质粒lncRNA HOTAIR-shRNA转染至SK-Hep-1细胞,随机分为转染组和联合组,转染组常规培养,联合组加入次乌头原碱(终浓度200μmol/L)。另取SK-Hep-1细胞随机分为空白组和次乌头原碱组,空白组常规培养,次乌头原碱组加入次乌头原碱(终浓度200μmol/L)。48 h后收集细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组lncRNA HOTAIR表达量;流式细胞仪检测各组凋亡率;绿色荧光蛋白(GFP)-微管相关蛋白1轻链3(LC3)转染检测各组自噬情况;免疫印迹法检测细胞Beclin1、P62、微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)蛋白相对表达量。结果:与空白组比较,次乌头原碱组lncRNA HOTAIR表达量升高,转染组lncRNA HOTAIR表达量降低(均P<0.05)。与次乌头原碱组比较,联合组lncRNA HOTAIR表达量降低(P<0.05)。与转染组比较,联合组lncRNA HOTAIR表达量升高(P<0.05)。与空白组比较,次乌头原碱组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白相对表达量升高,GFP-LC3斑点数增加(均P<0.05);转染组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白表达量降低,GFP-LC3斑点数减少(均P<0.05)。与次乌头原碱组比较,联合组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白相对表达量降低,GFP-LC3斑点数减少(均P<0.05)。与转染组比较,联合组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白相对表达量升高,GFP-LC3斑点数增加(均P<0.05)。结论:次乌头原碱可能通过诱导人肝癌SK-Hep-1细胞过度自噬而促进细胞凋亡,其作用机制可能与上调LncRNA HOTAIR表达有关。

长链非编码RNA HOX转录物反义RNA通过磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录物反义RNA(HOTAIR)通过磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用体外培养人食管鳞癌细胞株(购自中国细胞资源种子库),分别用磷酸盐缓冲液(PBS)和CRISPR/Cas9 KO HOTAIR病毒或CRISPR/Cas9 KO HOTAIR病毒+PI3K/Akt激活剂胰岛素样生长因子(IGF)-1处理,得到对照组(NC组),CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组和CRISPR/Cas9 KO HOTAIR+IGF-1组。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA HOTAIR和Akt mRNA水平;蛋白质印迹法(Western blot)法测定磷酸化Akt(p-Akt)、t-Akt和Tubulin蛋白的表达量;噻唑蓝(MTT)检测各组细胞增殖情况,最后通过Tanswell测各组细胞迁移。采用双尾t检验。结果通过RT-PCR检测IncRNA HOTAIR在正常食管组织组(1.001±0.115)和食管鳞癌组织组(4.167±0.491),两者差异有统计学意义(t=8.654,P<0.01);与NC组(1.001±0.144)比较,CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.051±0.014)的lncRNA HOTAIR表达水平显著降低(t=6.554,P<0.01),差异有统计学意义;与NC组(1.033±0.060)比较,CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.220±0.058)的p-Akt或p-Akt/t-Akt值显著降低(t=10.054,P<0.01),差异有统计学意义,而CRISPR/Cas9 KO HOTAIR+IGF-1组(0.400±0.029)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.220±0.058)比较,p-Akt或p-Akt/t-Akt值显著升高(t=1.412,P<0.05),差异有统计学意义;通过敲除HOTAIR基因对的Akt mRNA检测:NC组(1.033±0.044)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.936±0.064)比较,两者差异无统计学意义(t=0.936,P>0.05);CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.936±0.064)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR+IGF-1组(1.036±0.102)比较,两者差异无统计学意义;通过MTT检测细胞的增殖,在72 h比较细胞增殖,NC组(6.700±0.289)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(2.517±0.306)比较,两者差异有统计学意义(t=0.458,P<0.01);CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(2.517±0.306)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR+IGF-1组(4.200±0.265)比较,两者差异有统计学意义(t=0.966,P<0.05)。通过Transwell检测细胞的迁移,NC组(1.000±0.029)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.330±0.049)比较,两者差异有统计学意义(t=14.798,P<0.01);CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.330±0.049)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR+IGF-1(0.608±0.068)组比较,两者差异有统计学意义(t=0.876,P<0.05)。结论敲除HOTAIR基因(KO HOTAIR)通过降低p-Akt水平,降低p-Akt/t-Akt值而抑制PI3K/Akt信号通路,降低细胞增殖,抑制细胞迁移。而PI3K/Akt的激活剂IGF-1可以阻止HOTAIR基因敲除产生的影响。

长链非编码RNA HOX转录反义RNA靶向miR-206对结直肠癌细胞迁移、侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)靶向miR-206对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法常规培养人结直肠癌HT-29细胞,将合成的HOTAIR si RNA和siRNA control转染于HT-29细胞,设置为si-HOTAIR组、si-con组,未进行转染的HT-29细胞设置为空白组。实时荧光定量聚合酶链反应测定转染效果,Transwell和划痕愈合实验检测HT-29细胞侵袭和迁移情况。生物信息学软件分析HOTAIR与miR-206区域结合位点,构建突变型(HOTAIR 3’UTR mut)和野生型(HOTAIR 3’UTR wt)萤光素酶报告载体,将HOTAIR 3’UTR wt、HOTAIR 3’UTR mut与miR-206 mimic或miR-NC载体共转染至HT-29细胞中,设为HOTAIR 3’UTRwt/miR-NC组、HOTAIR3’UTRwt/miR-206组、HOTAIR3’UTRmut/miR-NC组,HOTAIR3’UTRmut/miR-206组,培养48 h后检测萤光素酶活性。将HOTAIR si RNA和miR-206 inhibitor共转染于HT-29细胞,设置si-HOTAIR+anti-NC组和si-HOTAIR+anti-miR-206组,用Transwell和划痕愈合实验分析细胞侵袭、迁移水平。结果空白组与si-con组HT-29细胞中HOTAIR m RNA的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);与si-con组比较,si-HOTAIR组HT-29细胞中HOTAIR m RNA的表达水平降低(P<0.01)。空白组与si-con组HT-29细胞侵袭数目、细胞划痕愈合率比较,差异无统计学意义(P>0.05);与si-con组比较,si-HOTAIR组HT-29细胞侵袭数目减少,细胞划痕愈合率降低(P<0.01)。与HOTAIR 3’UTR wt/miR-NC组比较,HOTAIR 3’UTR wt/miR-206组中HOTAIR wt的萤光素酶活性下降(P<0.01);而HOTAIR 3’UTR mut/miR-NC组与HOTAIR 3’UTR mut/miR-206组萤光素酶活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与si-HOTAIR+anti-NC组比较,si-HOTAIR+anti-miR-206组中miR-206的表达水平降低(P<0.01)。与si-HOTAIR+anti-NC组比较,si-HOTAIR+anti-miR-206组中HT-29细胞的侵袭和迁移率增加(P<0.01)。结论HOTAIR通过负调控miR-206促进HT-29细胞的侵袭和迁移能力。

长链非编码RNA HOX转录反义RNA对成骨分化及骨性疾病影响的研究进展

干细胞的成骨分化需要转录因子、信号通路和生物学信号的紧密协调。这种交互网络的失调会影响干细胞和成骨细胞的增殖和凋亡,从而破坏骨代谢和稳态。lncRNAs广泛参与干细胞的成骨分化过程,从而在骨关节炎、骨肿瘤等骨疾病的发生、发展和进展中发挥重要作用。长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)调节干细胞的成骨分化,并在骨形成和相关疾病的发展中起重要的中介作用。现就lncRNA HOTAIR在成骨分化及骨病中的具体作用和机制的相关研究作一综述,以期为未来骨与关节疾病的防治提供新的思路。

三氧化二砷对乳腺癌细胞长链非编码RNA HOX转录反义RNA的作用

目的:探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)在乳腺癌组织和细胞中的表达情况及三氧化二砷(As2O3)对HOTAIR基因表达的影响。方法:实时定量PCR检测在乳腺癌癌旁组织与癌组织中长链非编码RNA HOTAIR mRNA的表达,筛选高表达HOTAIR的乳腺癌细胞株,检测As2O3对HOTAIR mRNA表达的作用。先观察比较乳腺癌与癌旁组织中HOTAIR的表达,再检测乳腺癌细胞株中HOTAIR的表达,以及As2O3作用后MCF-7细胞中HOTAIR的表达变化。结果:乳腺癌组织中HOTAIR mRNA表达量为0.011±0.005,癌旁组织未见表达;乳腺癌细胞株SKBR-3和MAD-MB-231细胞均未表达HOTAIR mRNA,MCF-7细胞株高表达HOTAIR mRNA(1±0.236);在As2O3作用下,MCF-7细胞中HOTAIR mRNA表达较空白组明显下降(P<0.01)。结论:HOTAIR与乳腺癌的发展可能相关,As2O3可以抑制其表达。

非小细胞肺癌组织中HOX转录反义RNA的表达变化及意义

目的观察HOX转录反义RNA(HOTAIR)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达变化,并探讨其临床意义。方法收集125例NSCLC患者的肿瘤组织及其瘤旁正常肺组织,采用实时RT-PCR法检测HOTAIR的表达。检索高通量基因表达数据库(GEO)、Array Express数据库中NSCLC组织与HOTAIR表达相关的芯片数据。结果125例患者中,HOTAIR在NSCLC组织中的表达高于癌旁正常肺组织(P<0.05)。HOTAIR表达水平与NSCLC患者年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期有关(P均<0.05)。从数据库检索出的基因芯片显示HOTAIR表达水平与肿瘤病理类型不相关(P>0.05)。结论 HOTAIR在NSCLC组织中呈现高表达,可能参与NSCLC的发生发展。

HOX转录反义RNA与EZH2分子在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)通过影响表观遗传修饰在多种肿瘤的发生发展中起到重要作用,HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)是其中研究较为深入的一种,其在多种肿瘤中的作用已明确。很多lncRNA包括HOTAIR可与多梳蛋白抑制复合物2(polycomb repress complex2,PRC2)结合,组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶EZH2是PRC2中起催化作用的关键亚基,其介导的组蛋白H3甲基化作用与多种肿瘤的发生发展密切相关,同时HOTAIR与EZH2的相互作用关系已在多种肿瘤中被研究证实。本文对HOTAIR及EZH2在不同肿瘤中的作用及二者的相互关系进行综述,并探索二者在肿瘤中的研究应用前景。

HOX转录反义RNA表达对胸腔镜食管癌切除术后风险的预测价值研究

目的探讨HOX转录反义RNA表达对胸腔镜食管癌切除术后风险的预测价值。方法收集该院接受胸腔镜食管癌切除术患者92例,采用RT-PCR检测术后组织中HOX转录反义RNA表达情况,分析HOX转录反义RNA表达与食管癌术后复发、生存状况之间的关系。结果 RT-PCR显示,癌组织HOTAIR相对表达量为(0.673±0.076),而癌旁组织为(0.387±0.058),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HOTAIR对术后复发诊断的曲线下面积为0.727(95%CI:0.684,0.884),对术后生存诊断的曲线下面积为0.769(95%CI:0.692,0.901)。术后3年内,HOTAIR相对表达量≤0.5组复发率低于HOTAIR相对表达量>0.5组(P<0.05)。Cox模型分析显示,分化程度、临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移及HOTAIR为预后的危险因素,而术后辅助放、化疗为预后的保护因素。结论 HOTAIR为胸腔镜食管癌切除术后复发、生存状况的影响因素,通过对HOTAIR的检测可以为临床选择合理的治疗方案提供参考依据。

下调HOX转录反义RNA对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响

目的研究下调HOX转录反义RNA(HOTAIR)水平对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响。方法si-HOTAIR对MDA-MB-231细胞转染,实验分为对照组、si-阴性对照组、si-HOTAIR组,实时荧光定量法测定转染后MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平;分别用MTT法、流式细胞仪、Transwell小室实验测定转染后MDA-MB-231细胞活性、周期、侵袭能力;蛋白印迹法(WB)测定转染后MDA-MB-231细胞中c-myc、Ki-67、PCNA、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平。结果与MCF-10A细胞组相比,对照组MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平升高[(1.85±0.21)比(1.06±0.13),P<0.05]。与对照组、si-阴性对照组相比,si-HOTAIR组MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平(1.34±0.15)、细胞活性(98.04±6.28)%、侵袭能力(35.66±8.04)降低(P<0.05),细胞G0/G1期下调,阻滞在G2/M期;与对照组、si-阴性对照组相比,si-HOTAIR组MDA-MB-231细胞中c-myc、Ki-67、PCNA、MMP-9、MMP-2表达水平降低(P<0.05)。结论HOTAIR在MDA-MB-231细胞中高表达,下调HOTAIR表达水平可抑制MDA-MB-231细胞增殖、阻滞细胞周期、降低肿瘤细胞侵袭能力。

类风湿关节炎患者血清长链非编码RNA-Hox转录反义RNA表达变化及其意义

目的观察类风湿关节炎(RA)患者血清长链非编码RNA(LncRNA)-Hox转录反义RNA(HOTAIR)的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择RA患者(RA组)132例,同期健康体检者50例(对照组)。取RA组入院第二天,对照组入院当天的空腹静脉血,采用实时RT-PCR法检测血清LncRNA-HOTAIR,ELISA法检测抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,速率散射比浊法检测RF、CRP,魏氏法检测ESR。分析RA患者血清LncRNA-HOTAIR水平与患者临床参数(DAS28,炎性指标及年龄、性别、病程、疼痛关节数)的关系。ROC分析血清LncRNA-HOTAIR水平对RA的诊断价值。结果RA组血清LncRNA-HOTAIR、抗CCP抗体、RF、CRP、ESR水平高于对照组(P均<0.05)。RA组病情高度活动者血清LncRNA-HOTAIR水平高于中度及低度活动者(P均<0.05)。RA组血清LncRNA-HOTAIR水平与DAS28呈正相关(r=0.645,P=0.009)。血清LncRNA-HOTAIR诊断RA的ROC下面积为0.706,敏感度71%,特异度82%。结论RA患者血清LncRNA-HOTAIR水平升高,其水平变化与疾病活动程度有关,对RA的诊断准确度较高。

HOX转录反义RNA在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中HOX转录反义RNA(HOTAIR)和其调控基因HOXD10的表达情况及HOTAIR基因的甲基化情况。方法对45对乳腺癌组织、癌旁组织、前哨淋巴结组织、腋窝淋巴结组织进行研究,采用实时荧光定量PCR法测定HOTAIR和HOXD10的表达情况,甲基化特异性聚合酶链反应测定HOTAIR非甲基化情况。结果乳腺癌组织中HOTAIR相对表达量(10. 22±3. 65)显著高于癌旁组织(5. 43±2. 19,P<0. 05),但两组HOXD10相对表达量比较差异无统计学意义(P>0. 05)。乳腺癌组织中HOTAIR基因非甲基化率(88. 9%)显著高于癌旁组织(44. 4%,P<0. 05)。乳腺癌组织中HOTAIR基因与Ki-67和孕激素受体呈正相关(r=0. 810、0. 623,P均<0. 05)。前哨淋巴结组织中HOTAIR相对表达量(9. 27±1. 19)显著高于腋窝淋巴结组织(6. 86±1. 24,t=3. 397,P<0. 05)。前哨淋巴结组织中HOTAIR与Ki-67和淋巴结转移率呈正相关(r=0. 803、0. 687,P均<0. 05)。结论乳腺癌组织和前哨淋巴结组织中HOTAIR基因表达水平升高,乳腺癌组织中HOTAIR与Ki-67和孕激素受体呈正相关,其调控基因HOXD10表达量无明显变化,HOTAIR基因非甲基化水平升高。

HOX转录反义RNA在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是导致女性死亡的主要病因,其早期缺乏典型的临床症状以及可靠的早期筛查手段,超过70%的患者在确诊时已为晚期。HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense inter genic RNA,HOTAIR)是一种典型的反义长链非编码RNA(lncRNA),也是首个被发现的具有反式调控作用的lncRNA,HOTAIR在卵巢癌中高表达并通过调节多种信号通路参与卵巢癌的进展。此外,HOTAIR作为内源性竞争性RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA),与多个microRNA结合并抑制其表达,从而上调靶向下游mRNA的水平,导致癌症的发生、发展。该文就HOTAIR在卵巢癌中的作用及其对细胞增殖、迁移、凋亡和化疗耐药的影响作一综述。

长链非编码RNAβ分泌酶1反义转录物在七氟醚诱发老年大鼠认知功能下降中的作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)β分泌酶1反义转录物(BACE1-AS)在七氟醚诱发老年大鼠认知功能下降中的作用。方法SPF级健康雄性SD老年大鼠64只,18月龄,体重480~580 g。采用随机数字表法分为四组:对照组(C组)、七氟醚组(S组)、七氟醚+阴性对照质粒组(SN组)和七氟醚+BACE1-AS抑制剂(siRNA-BACE1-AS)组(ST组),每组16只。SN组和ST组分别侧脑室注射阴性对照质粒和siRNA-BACE1-AS,C组和S组注射等体积PBS溶液,注射后1 d C组吸入30%氧气6 h,S组、SN组和ST组吸入3.6%七氟醚与30%氧气的混合气体6 h。气体吸入后1 d,采用水迷宫实验测实验第1~5天逃避潜伏期和实验第6天穿越平台次数。水迷宫实验结束后1 h内处死大鼠,取海马组织,采用ELISA法检测海马组织TNF-α、IL-1β、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)浓度,可见分光光度计法检测海马组织caspase-3活性,Western blot法检测海马组织Bax、Bcl-2和BACE1蛋白含量,RT-qPCR法检测海马组织lncRNA BACE1-AS、miR-124和BACE1 mRNA表达量,TUNEL法测定海马组织神经细胞凋亡百分比,苏木素伊红染色法观察海马组织病理结构。结果与C组比较,S组、SN组和ST组水迷宫实验第3~5天逃避潜伏期明显延长(P<0.05),实验第6天穿越平台次数明显减少(P<0.05),海马组织TNF-α、IL-1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1-AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显升高(P<0.05),SOD浓度、Bcl-2蛋白含量、miR-124 mRNA表达量明显降低(P<0.05),caspase-3活性明显增强(P<0.05)。与S组比较,ST组水迷宫实验第3~5天逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),实验第6天穿越平台次数明显增多(P<0.05),海马组织TNF-α、IL-1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1-AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显降低(P<0.05),SOD浓度、Bcl-2蛋白含量、miR-124 mRNA表达量明显升高(P<0.05),caspase-3活性明显减弱(P<0.05)。S组和SN组上述指标差异均无统计学意义。结论长链非编码RNAβ分泌酶1反义转录物参与七氟醚诱导老年大鼠认知功能下降,其机制与神经细胞炎症、氧化应激损伤、调控miR-124和BACE1表达和促进细胞凋亡有关。

长链非编码RNA HOX转录反义RNA/miR-124参与乳腺癌细胞转移的调控研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)/miR-124参与乳腺癌细胞转移的调控机制。方法收集87例乳腺癌切除术患者肿瘤组织及癌旁组织,检测乳腺癌细胞和癌旁组织的HOTAIR及mi R-124的表达水平,并观察其在乳腺癌转移、侵袭中的调控作用。结果乳腺癌组织中HOTAIR表达高于癌旁组织(P<0.05)。HOTAIR组穿膜细胞数明显高于感染组(P<0.05)。HOTAIR组E-cadherin蛋白表达下降,而Vimentin蛋白和Slug表达升高(均P<0.05)。mi R-124在乳腺癌细胞系的表达水平明显低于人正常乳腺上皮细胞(P<0.05)。转染miR-124模拟物在MDA-MB-231和T-47D中的表达水平明显提高,且与转染miR-NC比较,转染miR-124模拟物能明显抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力(均P<0.05);转染miR-124模拟物和p MIRSP1的3’UTR的荧光强度较低,转染miR-124模拟物后SP1 mRNA和SP1蛋白质表达水平较低(均P<0.05)。结论 HOTAIR在乳腺癌组织中过表达,可诱导乳腺癌细胞发生EMT,从而促进肿瘤细胞侵袭及转移;miR-124在乳腺癌组织中过表达,可通过调控转录因子SP1抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移。

天然反义转录物及其调控基因的表达机制

天然反义转录(NATs)是一组编码蛋白质或非编码蛋白质的RNAs,与其他(有义)转录物具有互补序列,可以调节有义链的表达。这种调节可以发生在转录水平或转录后水平,调节方式有转录干扰、RNA封闭、双链依赖机制或染色质重建(修饰)等。正义链和反义链分别加工成小RNAs调节基因表达,也是NATs调节基因表达的重要方式,如piRNAs的"乒乓机制"。实验或计算机研究已经证明了NATs在生物中广泛存在,是一种重要的基因表达调节方式。文章论述了NATs的重要作用和机理,重点论述了NATs的调节机制和相关的小RNAs。

LncRNA HOTAIR调节细胞自噬对脊髓损伤模型神经元凋亡的保护作用

目的:探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)在脊髓损伤凋亡和自噬中的作用及相关机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)和模型组(SCI组)。构建缺氧缺糖诱导的SY-SH5Y细胞模型(OGD模型),将SY-SH5Y细胞分为Control组、OGD组、OGD+Vector组、OGD+pcDNA-HOTAIR组、OGD+pcDNA-HOTAIR+NC mimic组、OGD+pcDNA-HOTAIR+miR-17 mimic组。通过脊髓损伤运动功能(BBB)评分评估大鼠运动功能的恢复能力;通过双荧光素酶报告基因实验分别检测HOTAIR和miR-17、miR-17和Beclin-1之间的靶向关系;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测大鼠脊髓组织和细胞中HOTAIR、miR-17、Beclin-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠脊髓组织和细胞中Beclin-1、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、P62蛋白的表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:与Sham组比较,SCI组大鼠BBB评分下降,脊髓组织中HOTAIR水平降低,miR-17水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Control组比较,OGD组处理的SY-SH5Y细胞中HOTAIR水平降低,miR-17水平升高,神经元凋亡率升高,LC3Ⅱ蛋白表达降低,P62蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与OGD+Vector组比较,OGD+pcDNA-HOTAIR组细胞中HOTAIR水平升高(P<0.05),神经元凋亡率降低(P<0.05),LC3Ⅱ蛋白表达升高(P<0.05),P62蛋白表达降低(P<0.05),而自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)逆转了这一结果(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,Beclin-1是miR-17的靶基因,miR-17是HOTAIR的靶基因。与OGD+pcDNA-HOTAIR+NC mimic组比较,OGD+pcDNA-HOTAIR+miR-17 mimic组细胞中miR-17表达明显升高,神经元凋亡率明显升高,Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白表达降低,P62蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:LncRNA HOTAIR通过靶向miR-17/Beclin-1通路增强自噬,从而减轻神经元凋亡和改善脊髓损伤。

红景天苷调控lncRNA HOTAIR/NF-κB促进脊髓损伤后运动功能机制研究

目的:探讨红景天苷(SAL)调节长链非编码核糖核酸(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)对脊髓损伤(SCI)后运动功能的影响。方法:将27只SD大鼠随机分为假手术组、SCI组和SCI+SAL组。采用改良Allen法建立SCI大鼠模型,BBB评分检测大鼠后肢运动功能变化,苏木精—伊红染色(HE)及尼氏染色观察脊髓组织结构及神经元数量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定HOTAIR和相关炎症因子表达情况。在体外构建lncRNA HOTAIR过表达星形胶质细胞,随后将构建的细胞和原代星形胶质细胞各分为8组,即control组、不同浓度SAL组(6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL),采用细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测细胞存活率。利用脂多糖(LPS)构建继发性SCI炎症模型并给予不同浓度SAL进行干预,RT-qPCR法检测lncRNA HOTAIR、IL-6和TNF-α基因表达,蛋白质免疫印迹法(western blotting)以及酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定NF-κB通路和炎症因子蛋白表达情况。结果:SAL干预明显提高了SCI大鼠的BBB评分,减少组织结构破坏以及神经元损伤并下调SCI后HOTAIR和炎症因子(TNF-α、IL-6)的表达。在体外实验中与control组相比,SAL各剂量组星形胶质细胞的生存率均无显著变化;进一步研究发现SAL能够调控lncRNA HOTAIR降低LPS刺激的星形胶质细胞炎症因子的表达;同时SAL可以靶向lncRNA HOTAIR下调p-NF-κB p65、p-IκB-α、IKKβ蛋白和炎症因子的表达。结论:SAL能够促进SCI大鼠运动功能恢复,其机制可能与减轻炎症反应,抑制lncRNA HOTAIR的表达有关。

长链非编码RNA在急性肺损伤中的作用及分子调控机制研究进展

急性肺损伤(ALI)是临床上常见的危重症之一。长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的非蛋白质编码RNA,在染色质形成、转录和转录后翻译等基因表达水平直接或间接参与ALI的发生发展。lncRNA核富集丰富转录物1、lncRNA HOX转录反义基因间RNA及lncRNA牛磺酸上调1等lncRNA可作为竞争性内源RNA,与miR-26a-5p、miR-17-5p及miR-34b-5p等微小RNA结合,调节Wnt1诱导的信号通路蛋白1、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1蛋白及自噬相关蛋白等下游相关蛋白的表达,参与ALI的发生发展。LncRNA可能通过调控DNA甲基化、组蛋白修饰,在表观遗传水平参与ALI的发生发展;L通过组装转录激活因子和抑制因子,调节白细胞介素6(IL-6)、IL-17、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3/9等蛋白质的转录,在转录水平参与ALI的发生发展;与多种RNA结合蛋白相互作用,在转录后水平调控ALI的发生发展。

糖尿病肾病患者血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p与白蛋白尿短期进展及预后的关系

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清长链非编码RNA KCNQ1反向链/反义转录物1(LncRNA KCNQ1OT1)、微小核糖核酸-192-5p(miR-192-5p)与白蛋白尿短期进展及预后的关系。方法选取2021年4月—2022年12月康复大学青岛中心医院/青岛市中心医院内分泌风湿免疫科收治的DN患者102例为观察组,根据2次检测(间隔6个月)24 h尿白蛋白及SCr水平分为未进展亚组(n=78)和进展亚组(n=24),根据随访1年预后情况分为预后良好亚组(n=84)和预后不良亚组(n=18),选择同期医院健康体检者58例为健康对照组。采用qRT-PCR检测血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p相对表达量;Pearson法分析LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p的相关性;多因素Logistic回归分析患者白蛋白尿短期进展的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA KCNQ1OT1,miR-192-5p对患者预后的预测价值。结果与健康对照组比较,观察组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=17.619/<0.001、16.120/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.698/<0.001、9.485/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组患高血压比例降低及FPG、HbA_(1c)、BUN、SCr升高,差异均有统计学意义(χ^(2)/P=9.835/0.002,t/P=2.593/0.011、2.356/0.020、4.582/<0.001、3.139/0.002);与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.602/<0.001,9.380/<0.001);LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p呈负相关(r/P=-0.452/<0.001);高血压、血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高为患者白蛋白尿短期进展的危险因素[OR(95%CI)=1.532(1.058~2.219)、1.638(1.100~2.438)],miR-192-5p水平升高为患者白蛋白尿短期进展的保护因素[OR(95%CI)=0.671(0.517~0.871)];LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p以及二者联合预测患者预后的AUC分别为0.808、0.822、0.896,联合预测显著优于各自单独预测(Z/P=2.030/0.042、2.116/0.034)。结论DN患者血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低,两者均为DN患者发生白蛋白尿短期进展的影响因素,且对患者预后具有一定辅助预测价值。

长链非编码RNA HOTAIR与甲状腺癌生物学行为的研究进展

甲状腺癌是目前临床上发病率上升最快的恶性实体肿瘤,且在女性多发,约占全身恶性肿瘤的1%左右[1]。到2019年,甲状腺癌在女性恶性肿瘤中排名第三[2]。甲状腺癌根据其组织病理学特点可分为甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)、甲状腺滤泡状癌(follicular thyroid carcinoma,FTC)、甲状腺髓样癌(medullary thyroid carcinoma,MTC)及甲状腺未分化癌[anaplastic(undifferentiated)thy-roid carcinoma,ATC][3]。