SEPTIN9与HOXA9基因甲基化在鉴别阑尾和卵巢来源腹膜假黏液瘤中的诊断价值

目的:腹膜假黏液瘤(pseudomyxoma peritonei,PMP)是一种罕见的腹膜恶性肿瘤综合征,其来源鉴别较困难。本研究旨在探讨SEPTIN9与HOXA9基因在阑尾黏液性肿瘤来源的PMP(appendiceal mucinous neoplasms-PMP,AMNs-PMP)与卵巢黏液性肿瘤来源的PMP(ovarian mucinous tumors-PMP,OMTs-PMP)中的甲基化水平及其对PMP鉴别的意义。方法:采用甲基化特异度聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MS-PCR)检测SEPTIN9与HOXA9基因在正常阑尾(appendix control,APD control)组(n=10)、正常卵巢(ovary control,OV control)组(n=17)、AMNs-PMP组(n=40)及OMTs-PMP组(n=19)中的甲基化水平,同时对AMNs-PMP组及OMTs-PMP组的组织样本进行细胞角蛋白(cytokeratin,CK)7、CK20免疫组织化学检测。通过t检验分析SEPTIN9及HOXA9基因甲基化在AMNs-PMP组及OMTs-PMP组中表达差异并分析其与免疫组织化学联合检测的作用及价值。结果:AMNs-PMP组中SEPTIN9基因甲基化的阳性率明显高于OMTs-PMP组(92.5%vs 63.2%,P<0.01);OMTs-PMP组中HOXA9基因甲基化的阳性率显著高于AMNs-PMP组(94.7%vs 12.5%,P<0.001)。OMTs-PMP组中HOXA9基因甲基化的ΔCt值显著低于AMNs-PMP组(3.20±0.47 vs 8.63±0.61,P<0.001)。OMTs-PMP组中CK7的阳性率显著高于AMNs-PMP组(94.7%vs17.5%,P<0.001),AMNs-PMP组中CK20的阳性率显著高于OMTs-PMP组(97.5%vs 63.2%,P<0.001)。CK7(-)CK20(+)与SEPTIN9(+)HOXA9(-)基因甲基化在AMNs-PMP中诊断均有较高的敏感度(82.5%vs 87.5%)和特异度(均为94.7%);CK7(+)CK20(-)与SEPTIN9(-)HOXA9(+)基因甲基化在OMTs-PMP诊断中均有较低的敏感度(均为36.8%)、较高的特异度(97.5%vs 92.5%),而CK7(+)HOXA9(+)在与前2种组合特异度相似的情况下,其敏感度为89.5%,显著高于前二者。结论:SEPTIN9(+)HOXA9(-)可用于AMNs-PMP诊断,CK7(+)HOXA9(+)可用于OMTs-PMP诊断。SEPTIN9与HOXA9基因甲基化可成为AMNs-PMP及OMTs-PMP的潜在生物学标志物。

利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除HOXA5基因对急性髓系白血病细胞增殖的影响

目的:通过CRISPR-Cas9基因编辑技术构建稳定敲除HOXA5基因的急性髓系白血病(AML)细胞株,明确HOXA5基因敲除对AML细胞增殖的影响,初步探索HOXA5基因在AML发病中的作用。方法:通过荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot技术分别检测血液系统非肿瘤患者与初诊AML患者骨髓单个核细胞(BMMC)中HOXA5的表达;应用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建稳定敲除HOXA5基因的AML细胞株KO-HOXA5-THP-1,通过qRT-PCR和Western blot检测KO-HOXA5-THP-1细胞中HOXA5的表达,并采用CCK-8实验检测细胞增殖情况。结果:与血液系统非肿瘤患者相比,初诊AML患者骨髓单个核细胞中HOXA5基因及蛋白水平均显著升高(P<0.05)。应用CRISPR-Cas9基因编辑技术能够获得稳定敲除HOXA5基因的细胞株,而且敲除HOXA5基因后的THP-1细胞株的增殖能力显著下降(P<0.05)。结论:HOXA5在AML细胞中高表达,敲除HOXA5能够显著影响AML细胞的增殖能力,这为急性髓系白血病的精准治疗提供了一个新的潜在治疗靶点。

lncR-HOXA-AS3靶向miR-29a对前列腺癌细胞凋亡和自噬的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncR)HOXA-AS3和微小RNA-29a(miR-29a)对前列腺癌(PCa)细胞凋亡、自噬的影响。方法 体外培养人PCa细胞(DU-145、LNCaP、C4-2B)和人正常前列腺细胞RWPE-1,采用RT-qPCR法检测细胞中lncR-HOXA-AS3和miR-29a表达。应用双荧光素酶报告基因实验验证lncR-HOXA-AS3和miR-29a之间的靶向调控关系。取对数生长期LNCaP细胞,分为si-NC组、si-HOXA-AS3组、si-HOXA-AS3+anti-miR-NC组和si-HOXA-AS3+anti-miR-29a组,利用脂质体转染法分别将si-NC、si-HOXA-AS3、si-HOXA-AS3+anti-miR-NC、si-HOXA-AS3+anti-miR-29a转染至各组LNCaP细胞,应用RT-qPCR法检测各组细胞中lncR-HOXA-AS3和miR-29a表达,应用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,应用Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3及自噬相关蛋白LC3II、LC3I、Beclin 1表达。结果 与正常前列腺细胞相比,人PCa细胞中lncR-HOXA-AS3表达均明显升高(P均<0.05),而miR-29a表达均降低(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因显示lncR-HOXA-AS3能靶向miR-29a抑制荧光素酶活性(P<0.05)。与si-NC组比较,si-HOXA-AS3组LNCaP细胞lncR-HOXA-AS3表达降低(P<0.05),miR-29a表达升高(P<0.05),细胞凋亡率升高(P均<0.05),Caspase-3、LC3Ⅱ/LC3I及Beclin 1蛋白表达升高(P均<0.05)。与si-HOXA-AS3+anti-miR-NC组比较,si-HOXA-AS3+anti-miR-29a组LNCaP细胞miR-29a表达下降(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Caspase-3、LC3Ⅱ/LC3I及Beclin1蛋白表达下降(P均<0.05)。结论 抑制lncR-HOXA-AS3表达能靶向调控miR-29a基因促进PCa细胞凋亡和自噬。

胃癌中lncRNA HOXA-AS2的表达及其对胃癌细胞生物学行为的影响

目的分析lncRNA HOXA-AS2在胃癌组织中的表达水平及其对胃癌恶性生物学的影响。方法采用qPCR方法检测胃癌组织和胃癌细胞系中lncRNA HOXA-AS2的表达水平;通过生物信息分析在线网站Kaplan-Meier Plotter分析ln-cRNA HOXA-AS2对胃癌患者预后的影响;分析lncRNA HOXA-AS2表达水平与胃癌患者临床病理特征之间的关系;构建干扰lncRNA HOXA-AS2表达的细胞株,利用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验、分析下调lncRNA HOXA-AS2对胃癌细胞增殖能力,迁移能力,侵袭能力的影响。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中lncRNA HOXA-AS2的表达水平显著上调;与人正常胃黏膜细胞GES比较,胃癌细胞系中lncRNA HOXA-AS2的表达水平显著升高(P<0.05);生存分析表明,lncRNA HOXA-AS2的高表达与胃癌患者的不良预后相关;lncRNA HOXA-AS2的表达水平与胃癌分期,淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05);转染siRNA的胃癌细胞中lncRNA HOXA-AS2的表达水平显著下降(P<0.05),其细胞增殖、迁移和侵袭能力也显著下降(P<0.05)。结论lncRNA HOXA-AS2在胃癌中发挥癌基因的作用且与预后相关,下调lncRNA HOXA-AS2的表达可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。

子宫内膜癌组织中lncRNA HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE的表达与患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨子宫内膜癌组织中长链非编码RNA HOXA-AS2(lncRNA HOXA-AS2)、长链非编码RNA FOXD2-AS1(lncRNA FOXD2-AS1)、长链非编码RNA CRNDE(lncRNA CRNDE)的表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法收集2017年10月至2020年2月于该院住院手术的119例子宫内膜癌患者术中切除的子宫内膜癌的癌组织及癌旁组织标本。回顾性分析组织中HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相对表达水平,以及三者表达与患者临床病理特征、3年生存率的关系。结果子宫内膜癌患者癌组织HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相对表达水平均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌患者癌组织HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相对表达水平两两之间均呈正相关(r_(HOXA-AS2 vs.FOXD2-AS1)=0.384,P=0.001;r_(HOXA-AS2 vs.CRNDE)=0.576,P<0.001;r_(FOXD2-AS1 vs.CRNDE)=0.326,P=0.003)。HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE高表达组中国际妇产科学联合会分期为Ⅲ+Ⅳ期、发生淋巴结转移、浸润深度为深层、分化程度为低分化的患者所占比例高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌患者癌组织HOXA-AS2低表达组3年生存率(52/60,86.67%)高于子宫内膜癌患者癌组织HOXA-AS2高表达组(40/59,67.79%),差异有统计学意义(χ^(2)=6.039,P<0.05);子宫内膜癌患者癌组织FOXD2-AS1低表达组3年生存率(53/59,89.83%)高于子宫内膜癌患者癌组织FOXD2-AS1高表达组(39/60,65.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=10.456,P<0.05);子宫内膜癌患者癌组织CRNDE低表达组3年生存率(51/60,85.00%)高于子宫内膜癌患者癌组织CRNDE高表达组(41/59,69.49%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.079,P<0.05)。HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE是子宫内膜癌患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论子宫内膜癌的癌组织HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE的表达与患者临床病理特征及预后密切相关。

HOXA基因簇在胶质瘤中的表达分析

目的探讨HOXA基因簇各蛋白编码基因mRNA表达水平及与预后的关系。方法采用生物信息学方法分析癌症基因组图谱(TCGA)_GBMLGG数据库中669例不同级别胶质瘤和TCGA_GBM数据库中489例胶质母细胞瘤组织HOXA基因簇编码基因mRNA的表达情况,分析其与胶质瘤临床病理分级和预后的关系。纳入2011年1月至2015年12月经术后病理证实的70例胶质瘤组织和手术切除的正常脑组织20例,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测HOXA基因簇各蛋白编码基因在胶质瘤中的表达水平,并分析其与总生存时间(OS)的关系。结果HOXA基因簇由HOXA1、HOXA2、HOXA3、HOXA4、HOXA5、HOXA6、HOXA7、HOXA9、HOXA10、HOXA11、HOXA13共11个蛋白编码基因组成。TCGA_GBMLGG数据库分析显示,HOXA基因簇中11个编码基因的相对表达量随胶质瘤级别的升高而升高,在Ⅳ级胶质瘤中的相对表达量高于Ⅱ~Ⅲ级(P<0.001)。在胶质母细胞瘤组织中,除HOXA6基因外,其他10个基因的相对表达量均高于正常脑组织(P<0.001)。HOXA基因表达水平在胶质母细胞瘤组织中最高,其次为星形细胞瘤,最少为少突星形细胞瘤和少突神经胶质瘤。HOXA基因簇在IDH1野生型胶质瘤中的表达水平均高于IDH1突变型胶质瘤(P<0.001)。HOXA基因簇高表达与较短的OS有关(P<0.001)。在70例临床胶质瘤组织中,Ⅱ~Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤组织中HOXA基因簇的相对表达量高于20例正常脑组织,其表达水平随胶质瘤级别的升高而升高(P<0.05)。70例临床胶质瘤患者的中位OS为20.9个月,HOXA基因低表达组患者的中位OS明显优于高表达组(P<0.001)。结论胶质瘤组织中HOXA编码基因表达水平升高,可能参与了胶质瘤的发生、发展过程;HOXA基因簇高表达是预后不良因素,可作为预测预后的生物标志物。

HOXA11基因启动子区甲基化是胰腺癌的潜在诊断标志物

目的在胰腺癌中探讨HOXA11基因启动子区甲基化状态及其作为诊断标志物的可能性。方法应用半定量RT-PCR和甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术检测8株胰腺癌细胞系中HOXA11的表达及启动子区甲基化情况,应用MSP在216例胰腺癌组织中检测HOXA11启动子区甲基化情况,并分析HOXA11启动子区甲基化与临床病理因素之间的相关性。结果HOXA11在Panc3.11、Panc5.04、Panc10.05、BXPC3细胞中表达缺失,其MSP结果为完全甲基化。在SW1990、AsPC1中高表达,其MSP结果为非甲基化,在CFPAC1和MIAPaCa2细胞中表达减低,其MSP结果呈部分甲基化状态。应用5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza)处理细胞后,HOXA11在Panc3.11、Panc5.04、Panc10.05、BXPC3细胞中恢复表达,在CFPAC1和MIAPaCa2细胞中表达增加,在SW1990、AsPC1细胞中表达水平无明显变化。在216例原发性胰腺癌患者中,76.85%(166/216)发生HOXA11甲基化,甲基化与肿瘤分化程度相关(P<0.0003)。结论HOXA11基因在胰腺癌组织中频繁发生甲基化,其表达受启动子区甲基化调控,HOXA11甲基化是胰腺癌潜在的诊断标志物。

宫颈癌患者癌组织中lncRNA HOXA-AS2表达对患者免疫指标水平和不良生存结局的影响

目的分析宫颈癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)HOXA簇反义RNA 2(HOXA-AS2)表达对患者免疫指标水平和预后的影响。方法选取2016年1月至2017年5月于当阳市人民医院确诊为宫颈癌的95例患者作为宫颈癌(CC)组,同期40例子宫肌瘤患者作为对照组。比较两组组织(对照组为宫颈组织,CC组为宫颈癌组织)及血清HOXA-AS2水平差异。采用Pearson相关分析HOXA-AS2与宫颈癌患者免疫指标水平的相关性。Cox回归模型分析宫颈癌患者不良生存结局的影响因素。结果与对照组比较,CC组组织及血清HOXA-AS2水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。CC组患者CD8^(+)T淋巴细胞百分比、自然杀伤细胞百分比、免疫抑制酸性蛋白(IAP)水平均高于对照组,而CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)比值、CD4^(+)T淋巴细胞百分比均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织HOXA-AS2水平与IAP、CD8^(+)T淋巴细胞百分比、自然杀伤细胞百分比呈正相关(r=0.617、0.593、0.528,P<0.05),与CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)比值、CD4^(+)T淋巴细胞百分比呈负相关(r=-0.506、-0.539、-0.482,P<0.05)。分化程度为低分化、发生淋巴结转移、FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期及HOXA-AS2高表达是宫颈癌患者不良生存结局的危险因素(P<0.05)。结论HOXA-AS2在宫颈癌中表达水平升高,其与宫颈癌患者免疫指标水平密切相关,是宫颈癌患者不良生存结局的危险因素。

干扰HOXA9基因表达对BTT739细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨同源盒基因HOXA9表达对小鼠膀胱尿路上皮癌细胞系BTT739细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法免疫组化检测膀胱尿路上皮癌以及癌旁正常组织临床标本中HOXA9基因的表达情况;采用sh-RNA技术干扰BTT739细胞中HOXA9基因的表达后,进行克隆形成、CCK8、流式细胞术、Transwell和划痕等实验检测BTT739细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭等生物学特性的变化,并通过Western blot检测上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)特征因子E-cadherin、Vi⁃mentin和Snail的表达。结果膀胱尿路上皮癌组织中HOXA9基因的表达高于癌旁正常组织。sh-RNA敲低BTT739细胞中的HOXA9基因后,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降,而细胞早期凋亡百分率增高,G1、G2期比例下降,S期升高;此外,EMT特征因子E-cadherin表达增强,Vimentin和Snail的表达下降。结论HOXA9基因具有促进小鼠膀胱尿路上皮癌细胞系BTT739细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用,是膀胱尿路上皮癌潜在的免疫治疗靶点,其机制可能涉及EMT机制。

circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究

目的:探究circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究。方法:将SCC9/DDP细胞分为SCC9/DDP组、si-NC组、si-VAPA组、miR-125b组、miR-NC组、pcDNA-VAPA组、miR-HOXA7组。qRT-PCR检测细胞中circVAPA和miR-125b表达,MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测细胞耐药、增殖、侵袭和凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中HOXA7蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证VAPA、miR-125b和HOXA7的靶向关系。结果:和HOK相比,SCC9和SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显升高,miR-125b表达明显降低(P<0.05);且SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显高于SCC9细胞,miR-125b表达明显低于SCC9细胞(P<0.05)。和SCC9/DDP组相比,si-VAPA组细胞IC 50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加(P<0.05)。和miR-NC组相比,miR-125b组细胞IC 50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加(P<0.05)。靶向关系结果显示,miR-125b组荧光素酶活性明显低于miR-NC组(P<0.05);si-VAPA组细胞中miR-125b表达明显高于si-NC组(P<0.05),miR-125b组细胞中HOXA7表达明显低于miR-NC组(P<0.05)。和miR-125b组相比,pcDNA-VAPA组和miR-HOXA7组细胞IC 50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显升高,细胞凋亡能力明显降低(P<0.05)。结论:低表达circVAPA可通过调控miR-125b/HOXA7轴来逆转口腔癌细胞化疗耐药,抑制口腔癌化疗耐药细胞增殖、侵袭并诱导凋亡。

抑制lncR-HOXA-AS3表达的人前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT相关蛋白表达变化

目的观察抑制长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncR)HOXA-AS3表达的人前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞系LNCaP增殖、迁移、侵袭能力及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达变化。方法本研究受试细胞为人PCa细胞系LNCaP。将对数生长期LNCaP细胞分为2组,分别转染lncRHOXA-AS3沉默质粒si-HOXA-AS3(观察组)和阴性对照质粒si-NC(对照组),转染48 h时采用qRT-PCR法检测lncR-HOXA-AS3,分别于转染24、48、72 h时采用CCK8实验测算细胞增殖活性(光密度OD值),转染48 h时采用细胞划痕实验观察细胞迁移能力,转染48 h时采用Transwell实验观察细胞侵袭能力,转染48 h时采用WESTERN Blotting法检测两组EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)。结果与RWPE-1相比,DU-145、LNCaP、C4-2B中lncR-HOXA-AS3相对表达量均升高(P均<0.05)。与对照组相比,转染48 h时观察组细胞lncR-HOXA-AS3相对表达量降低(P<0.05)。与对照组比较,转染24、48、72 h时观察组细胞OD值降低(P均<0.05)。与对照组比较,转染48 h时观察组划痕愈合率小、侵袭穿膜细胞数目少(P均<0.05)。与对照组比较,转染48 h时观察组LNCaP细胞E-cadherin蛋白相对表达量升高,Vimentin、Fibronectin蛋白相对表达量表达降低(P均<0.05)。结论沉默lncR-HOXA-AS3表达能抑制LNCaP细胞的增殖、迁移及侵袭,其机制可能为lncRHOXA-AS3促进LNCaP细胞E-cadherin蛋白表达、抑制Vimentin及Fibronectin蛋白表达。

基于“HOXA-10”探讨氯米芬联合补肾种子汤对多囊卵巢综合征雌鼠子宫内膜容受性影响机制

目的通过氯米芬联合补肾种子汤调控“同源框基因A10(HOXA-10)”表达水平,研究其影响多囊卵巢综合征(Polycysticovarysyndrome,PCOS)雌鼠子宫内膜容受性的相关机制。方法将40只SPF级SD雌性大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、氯米芬组、补肾种子汤组、氯米芬联合补肾种子汤组,每组各8只。通过丙酸睾酮+绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin,HCG)颈背部皮下注射SD雌鼠构建PCOS动物模型。造模成功后予以氯米芬、补肾种子汤、氯米芬联合补肾种子汤药物干预,连续14 d,期间行阴道脱落涂片,并绘制大鼠体质量增长变化曲线。大鼠处死后,Elisa检测血清性激素雌二醇(Estradiol,E2)、孕酮(Progesterone,P)、促黄体素(Luteinizinghormone,LH)、促卵泡素(Follical stimulating hormone,FSH)含量,行卵巢及子宫HE染色,免疫组化观察HOXA-10在子宫组织中表达水平。结果氯米芬组、氯米芬联合补肾种子汤组与模型组比较,性激素E2、P值升高,LH/FSH比值降低,差异有统计学意义(P<0.01);氯米芬联合补肾种子汤组与氯米芬组比较,性激素E2、P值升高,LH/FSH比值降低,差异有统计学意义(P<0.05),与补肾种子汤组比较,性激素E2值升高,差异有统计学意义(P<0.01),性激素P值升高,LH/FSH比值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢HE染色见:卵巢囊状卵泡明显减少,卵泡形态稍欠规则,颗粒细胞层增厚,见少量黄体。子宫HE染色见:子宫内膜略显平坦,内膜增厚,子宫腺体增多,管腔轻度扩张,分泌物增多。氯米芬联合补肾种子汤组雌鼠HOXA-10表达水平明显高于模型组、氯米芬组及补肾种子汤组,差异有统计学意义(P<0.05)。以上指标数值增减及子宫、卵巢形态学改变以氯米芬联合补肾种子汤组最为明显,疗效最为显著。结论氯米芬联合补肾种子汤治疗PCOS雌鼠模型,疗效明显优于单纯使用氯米芬或补肾种子汤,其作用机制为通过下调LH/FSH比值,上调血清E2、P水平及子宫组织HOXA-10表达水平,改善PCOS雌鼠卵巢形态学,提升大鼠子宫内膜容受性。

Hoxa1通过MEK/ERK信号通路促进低氧下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移和表型转换的研究

背景 低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary arterial hypertension,HPH)是一种以血管阻力持续性升高和血管重塑为特征的进展性疾病。研究表明Hoxa1参与血管生成过程,但Hoxa1在调控肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中的作用尚不明确。目的 本研究旨在确定Hoxa1对PASMCs增殖、迁移和表型转化的调控作用。方法 使用Ⅱ型胶原酶消化分离培养原代大鼠PASMCs。采用1%低氧处理细胞构建低氧诱导的细胞模型,并检测24 h、48 h、72 h低氧处理的PASMCs中Hoxa1 mRNA和蛋白表达水平。采用干扰或过表达Hoxa1慢病毒下调或上调细胞中Hoxa1表达。慢病毒干扰实验分为常氧组(Normoxia)、低氧组(Hypoxia)、低氧空病毒组(Hypoxia+shRNA-NC)、低氧Hoxa1干扰病毒组(Hypoxia+shRNA-Hoxa1);慢病毒过表达实验分为对照组(Control)、过表达空病毒组(LV-NC)、过表达Hoxa1组(LV-Hoxa1)。采用EdU检测细胞增殖能力;RT-qPCR检测Hoxa1 mRNA表达;Western blot检测Hoxa1、表型转化标志蛋白、MEK/ERK信号通路蛋白表达;免疫荧光检测Hoxa1、α-actin表达;免疫共沉淀实验确定Hoxa1与MEK的相互作用。结果 成功分离培养PASMCs,并鉴定细胞表达α-SMA。低氧诱导下PASMCs中Hoxa1表达上调(P<0.05)。低氧下Hoxa1沉默抑制PASMCs增殖和迁移,而常氧下Hoxa1过表达促进PASMCs增殖和迁移(P均<0.05)。低氧下沉默Hoxa1导致Hypoxia+shRNA-Hoxa1组收缩型标志蛋白表达升高,合成型标蛋白表达降低(P<0.05)。而在常氧下过表达Hoxa1导致LV-Hoxa1组收缩型标志蛋白降低,合成型标志蛋白升高(P均<0.05)。此外,Hoxa1表达增加促进MEK/ERK信号通路激活。免疫共沉淀结果显示,Hoxa1与MEK存在相互作用。结论 Hoxa1可能通过激活MEK/ERK通路促进PASMCs增殖、迁移和表型转化。

HOXA11和CD10在子宫内膜异位症相关卵巢癌中的表达及其临床意义

目的 探讨同源盒基因A11(HOXA11)和CD10在子宫内膜异位症相关卵巢癌(EAOC)中的表达及其临床意义。方法 回顾性选取2021年5月至2022年6月入同济大学附属第一妇婴保健院接受手术治疗患者的EAOC组织标本96例作为研究对象,同时收集单纯子宫内膜异位症患者的子宫内膜组织50例作为对照。采用免疫组织化学染色法检测EAOC组织和子宫内膜异位症组织中HOXA11和CD10蛋白的表达,并比较子宫内膜异位症和EAOC组织标本中蛋白表达阳性率,分析HOXA11和CD10蛋白与临床病理特征的关系;Spearman相关性分析HOXA11与CD10的相关性;采用受试者工作特征曲线分析HOXA11和CD10对EAOC的诊断效能。结果 子宫内膜异位症中HOXA11和CD10蛋白的表达较少,EAOC中,HOXA11和CD10蛋白分布较多,主要表达在细胞膜中,呈现棕黄色或者淡黄色。EAOC组织中HOXA11和CD10蛋白表达阳性率分别为76.04%、64.58%,明显高于子宫内膜异位症组织(14.00%、30.00%),差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移患者的HOXA11表达阳性率分别为88.52%、87.10%、88.37%,均明显高于Ⅰ~Ⅱ期、高中分化、无淋巴结转移患者(54.29%、70.77%、66.04%),CD10蛋白表达阳性率分别为77.05%、80.65%、76.74%,均明显高于Ⅰ~Ⅱ期、高中分化、无淋巴结转移患者(42.86%、56.92%、54.72%),差异均有统计学意义(P<0.05)。HOXA11与CD10的表达呈正相关,差异有统计学意义(r=0.573,P=0.031)。当截断值为3.62时,HOXA11诊断EAOC的曲线面积(AUC)为0.826(95%CI:0.768~0.883),敏感度为83.16%,特异度为54.74%;当截断值为2.97时,CD10诊断EAOC的AUC为0.767(95%CI:0.699~0.835),敏感度为71.58%,特异度为58.95%;HOXA11+CD10联合检测诊断EAOC的AUC为0.871(95%CI:0.817~0.924),敏感度为86.32%,特异度为67.37%。结论 HOXA11和CD10蛋白在EAOC组织表达升高,与临床分期、分化程度、淋巴结转移密切相关,且HOXA11和CD10联合诊断具有一定的诊断效能。

肝细胞癌组织中长链非编码RNA HOXA-AS2的表达及其临床意义

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)HOXA-AS2(下文简称HOXA-AS2)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达水平及其对患者预后的影响。方法前瞻性选择2017年5月至2019年5月在南京医科大学附属淮安第一医院进行手术切除治疗的116例HCC患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR法检测HCC组织及癌旁正常组织中HOXA-AS2的表达水平,并分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果HCC组织中HOXA-AS2的相对表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。HOXA-AS2高表达组中Edmondson分级为Ⅲ~Ⅳ级者、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期者、有乙型肝炎病史者、中低分化者、有淋巴结转移者的占比均显著高于HOXA-AS2低表达组(P均<0.05)。HOXA-AS2高表达组术后3年生存率显著低于HOXA-AS2低表达组(P<0.001)。多因素Cox比例风险回归模型分析结果显示,Edmondson分级、TNM分期、分化程度、淋巴结转移及HOXA-AS2均是影响HCC患者术后生存率的独立危险因素(P均<0.05)。结论HOXA-AS2在HCC组织中表达上调,且其对于患者的预后预测具有较高价值。

沉默HOXA11-AS靶向miR-766-3p对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源异形盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)靶向微小RNA-766-3p(miR-766-3p)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响.方法以100μg/mL的ox-LDL处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)24 h建立细胞损伤模型.将HUVEC分为对照(con)组、ox-LDL组、ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-HOXA11-AS组、ox-LDL+miR-NC组、ox-LDL+miR-766-3p组、ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-NC组、ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-766-3p组.RT-qPCR检测HOXA11-AS和miR-766-3p表达.流式细胞术分析细胞凋亡.试剂盒检测LDH释放量、胞内SOD活性.ELISA法检测培养液中TNF-α、IL-1β水平.双荧光素酶报告实验确定HOXA11-AS和miR-766-3p的靶向关系.结果与con组比较,ox-LDL组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量、HOXA11-AS表达量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.05),SOD活性、miR-766-3p表达量显著降低(P<0.05).与ox-LDL+si-NC组比较,ox-LDL+si-HOXA11-AS组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05).与ox-LDL+miR-NC组比较,ox-LDL+miR-766-3p组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05).miR-766-3p是HOXA11-AS的直接靶点.与ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-NC组比较,ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-766-3p组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05).结论沉默HOXA11-AS通过靶向上调miR-766-3p表达能够抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡、氧化应激和炎性反应.

HOXA11-AS/miR-149-3p通路在肺鳞状细胞癌中的作用及机制研究

目的探究长链非编码RNA HOXA11-AS在肺鳞状细胞癌发生过程中的确切机制。方法采用定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测HOXA11-AS、miR-149-3p和SPT16表达变化。并通过MTT法检测细胞活力。双荧光素酶报告基因检测miR-149-3p与HOXA11-AS或SPT16的互作关系。结果在肺鳞状细胞癌组织和细胞中HOXA11-AS和SPT16的表达升高,而miR-149-3p的表达降低。miR-149-3p是HOXA11-AS的作用靶点,而SPT16是miR-149-3p的作用靶点。HOXA11-AS的敲低抑制了肺鳞状细胞癌细胞的增殖能力,而使用miR-149-3p抑制剂可拮抗HOXA11-AS敲低对肺鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用。此外,上调SPT16可减弱si-HOXA11-AS介导的肺鳞状细胞癌细胞的抗增殖作用。结论HOXA11-AS的敲低可通过调控miR-149-3p/SPT16轴在肺鳞状细胞癌中发挥抑癌作用。

环形RNA成纤维细胞生长因子受体1/miR-217/HOXA13轴对结肠癌进展、肿瘤免疫浸润影响研究

目的 通过构建潜在hsa_circRNA/miRNA/mRNA调控轴来明确环状RNA在结肠癌(COAD)中的潜在潜在作用机制。方法 通过CRI数据库得到环形RNA成纤维细胞生长因子受体1(circFGFR1)下游调控的候选miRNA,并在TCGA数据库中结合表达分析及预后分析确定最终候选miRNA。在miRBD数据库中进行miRNA下游靶基因的预测,并在TCGA数据库中结合表达分析及预后分析确定最终候选下游靶基因。用Cox回归法进行多因素分析,在此基础上构建列线图,进行内部验证。在TIMER数据库和TCGA数据库中分析靶基因与免疫细胞之间的相关性。采用基因集富集分析(GSEA),探讨可能的作用机制。结果 在CRI数据库选出HOXA13为最终的候选下游靶基因,且HOXA13高表达的COAD患者有更好的总生存期(OS)。列线图C-指数为0.739(0.712~0.765)。Timer数据库显示,HOXA13的表达与各类免疫细胞之间都具有较好的相关性。GSEA分析显示,HOXA13可能通过参与影响DNA甲基化,细胞周期,线粒体分裂和胆固醇生成影响COAD的生物学事件。结论 HOXA13的表达增加可以延长COAD患者的OS,可以用作COAD患者的新型预测性生物标志物,同时可能与COAD的肿瘤免疫浸润相关,并在COAD肿瘤微环境中对于肿瘤细胞发生免疫逃逸可能起着重要的抑制作用。circFGFR1/miR-217/HOXA13轴可能通过影响细胞周期来抑制结肠癌的进展,这些发现为COAD抗癌策略的开发提出一个潜在的靶点和研究机制。

LncRNAHOTAIRM1/HOXA1促进胶质瘤增殖迁移和侵袭

目的探究长链非编码RNA HOTAIRM1(LncRNA HOTAIRM1)靶向调控HOXA1对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集2020年10月至2021年12月于温州市中心医院接受手术治疗的60例胶质瘤患者的肿瘤组织及癌旁正常脑组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定并比较正常脑组织和胶质瘤组织中HOTAIRM1 mRNA和HOXA1 mRNA表达;构建干扰LncRNA HOTAIRM1的慢病毒载体(sh-HOTAIRM1)及其阴性对照载体(sh-NC)、HOXA1过表达载体(pcDNA3.1-HOXA1)及其阴性对照载体(pcDNA3.1-NC)。培养人胶质瘤细胞LN229并进行转染干预,分为对照组(无转染)、sh-HOTAIRM1组(转染sh-HOTAIRM1)、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-HOTAIRM1+HOXA1组(转染sh-HOTAIRM1和pcDNA3.1-HOXA1)、sh-HOTAIRM1+NC组(转染sh-HOTAIRM1和pcDNA3.1-NC)。采用MTT法检测转染后各组细胞增殖能力,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡水平,采用Transwell实验测定各组细胞侵袭和迁移能力。结果胶质瘤组织中HOTAIRM1 mRNA和HOXA1 mRNA的表达水平高于正常脑组织(均P<0.05);LN229细胞转染48h后,sh-HOTAIRM1组和sh-HOTAIRM1+NC组细胞中HOTAIRM1 mRNA和HOXA1 mRNA表达水平均低于对照组和sh-NC组(均P<0.05),细胞凋亡率高于对照组和sh-NC组(均P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数均少于对照组和sh-NC组(均P<0.05);sh-HOTAIRM1+HOXA1组细胞中HOXA1 mRNA表达水平高于sh-HOTAIRM1组和sh-HOTAIRM1+NC(均P<0.05),凋亡率低于sh-HOTAIRM1组和sh-HOTAIRM1+NC组(均P<0.05),细胞迁移细胞数与侵袭细胞数均多于sh-HOTAIRM1组和sh-HOTAIRM1+NC组(均P<0.05)。转染后24~72h,各组细胞增殖活性均逐渐升高(均P<0.05);在不同时间点,sh-HOTAIRM1组和sh-HOTAIRM1+NC组细胞增殖活性均弱于对照组和sh-NC组(均P<0.05),sh-HOTAIRM1+HOXA1组细胞增殖活性强于sh-HOTAIRM1组和sh-HOTAIRM1+NC组(均P<0.05)。结论LncRNAHOTAIRM1和HOXA1在胶质瘤组织中呈高表达状态,HOTAIRM1或可通过靶向调控HOXA1促进胶质瘤细胞增殖,抑制其凋亡,并增强胶质瘤细胞迁移和侵袭能力。

HOXA-10、HOXA-11、Esr2、Pgr在控制性超排卵小鼠围着床期子宫内膜表达的研究

目的:检测同源框基因HOXA-10、HOXA-11以及雌激素受体Esr2、孕激素受体Pgr在控制性超排卵(COH)小鼠围着床期子宫内膜中的表达,探讨COH对子宫内膜容受性的影响。方法:将30只SPF级雌性昆明小鼠随机分为模型组(GnRH-a+HMG+HCG)和对照组(生理盐水),每组15只,造模成功后,计算子宫脏器指数,光学显微镜观察子宫内膜组织学变化;应用RT-PCR和Real-time PCR方法检测小鼠子宫内膜中HOXA-10、HOXA-11、Esr2、Pgr mRNA的表达。结果:模型组围着床期小鼠子宫脏器指数较对照组显著降低(P<0.05),子宫内膜发育延迟,子宫内膜成熟度及厚度降低;模型组小鼠HOXA-10、HOXA-11、Pgr mRNA表达较对照组显著下降(P<0.05),而Esr2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论:COH引起HOXA-10、HOXA-11、Pgr mRNA表达下降,Esr2mRNA表达升高,致使围着床期内膜准备不足,子宫内膜容受性下降。