子宫内膜癌组织中lncRNA HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE的表达与患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨子宫内膜癌组织中长链非编码RNA HOXA-AS2(lncRNA HOXA-AS2)、长链非编码RNA FOXD2-AS1(lncRNA FOXD2-AS1)、长链非编码RNA CRNDE(lncRNA CRNDE)的表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法收集2017年10月至2020年2月于该院住院手术的119例子宫内膜癌患者术中切除的子宫内膜癌的癌组织及癌旁组织标本。回顾性分析组织中HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相对表达水平,以及三者表达与患者临床病理特征、3年生存率的关系。结果子宫内膜癌患者癌组织HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相对表达水平均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌患者癌组织HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相对表达水平两两之间均呈正相关(r_(HOXA-AS2 vs.FOXD2-AS1)=0.384,P=0.001;r_(HOXA-AS2 vs.CRNDE)=0.576,P<0.001;r_(FOXD2-AS1 vs.CRNDE)=0.326,P=0.003)。HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE高表达组中国际妇产科学联合会分期为Ⅲ+Ⅳ期、发生淋巴结转移、浸润深度为深层、分化程度为低分化的患者所占比例高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌患者癌组织HOXA-AS2低表达组3年生存率(52/60,86.67%)高于子宫内膜癌患者癌组织HOXA-AS2高表达组(40/59,67.79%),差异有统计学意义(χ^(2)=6.039,P<0.05);子宫内膜癌患者癌组织FOXD2-AS1低表达组3年生存率(53/59,89.83%)高于子宫内膜癌患者癌组织FOXD2-AS1高表达组(39/60,65.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=10.456,P<0.05);子宫内膜癌患者癌组织CRNDE低表达组3年生存率(51/60,85.00%)高于子宫内膜癌患者癌组织CRNDE高表达组(41/59,69.49%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.079,P<0.05)。HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE是子宫内膜癌患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论子宫内膜癌的癌组织HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE的表达与患者临床病理特征及预后密切相关。

胃癌中lncRNA HOXA-AS2的表达及其对胃癌细胞生物学行为的影响

目的分析lncRNA HOXA-AS2在胃癌组织中的表达水平及其对胃癌恶性生物学的影响。方法采用qPCR方法检测胃癌组织和胃癌细胞系中lncRNA HOXA-AS2的表达水平;通过生物信息分析在线网站Kaplan-Meier Plotter分析ln-cRNA HOXA-AS2对胃癌患者预后的影响;分析lncRNA HOXA-AS2表达水平与胃癌患者临床病理特征之间的关系;构建干扰lncRNA HOXA-AS2表达的细胞株,利用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验、分析下调lncRNA HOXA-AS2对胃癌细胞增殖能力,迁移能力,侵袭能力的影响。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中lncRNA HOXA-AS2的表达水平显著上调;与人正常胃黏膜细胞GES比较,胃癌细胞系中lncRNA HOXA-AS2的表达水平显著升高(P<0.05);生存分析表明,lncRNA HOXA-AS2的高表达与胃癌患者的不良预后相关;lncRNA HOXA-AS2的表达水平与胃癌分期,淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05);转染siRNA的胃癌细胞中lncRNA HOXA-AS2的表达水平显著下降(P<0.05),其细胞增殖、迁移和侵袭能力也显著下降(P<0.05)。结论lncRNA HOXA-AS2在胃癌中发挥癌基因的作用且与预后相关,下调lncRNA HOXA-AS2的表达可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。

肝细胞癌组织中长链非编码RNA HOXA-AS2的表达及其临床意义

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)HOXA-AS2(下文简称HOXA-AS2)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达水平及其对患者预后的影响。方法前瞻性选择2017年5月至2019年5月在南京医科大学附属淮安第一医院进行手术切除治疗的116例HCC患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR法检测HCC组织及癌旁正常组织中HOXA-AS2的表达水平,并分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果HCC组织中HOXA-AS2的相对表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。HOXA-AS2高表达组中Edmondson分级为Ⅲ~Ⅳ级者、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期者、有乙型肝炎病史者、中低分化者、有淋巴结转移者的占比均显著高于HOXA-AS2低表达组(P均<0.05)。HOXA-AS2高表达组术后3年生存率显著低于HOXA-AS2低表达组(P<0.001)。多因素Cox比例风险回归模型分析结果显示,Edmondson分级、TNM分期、分化程度、淋巴结转移及HOXA-AS2均是影响HCC患者术后生存率的独立危险因素(P均<0.05)。结论HOXA-AS2在HCC组织中表达上调,且其对于患者的预后预测具有较高价值。

lncRNA HOXA-AS2在视网膜母细胞瘤中的预后价值

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOXA-AS2在视网膜母细胞瘤组织中的预后价值。方法随机选取2018年5月就诊我科的3例视网膜母细胞瘤患儿的癌组织及同期就诊的3例正常视网膜样本,对两组间的组织样本进行lncRNA表达谱分析,筛选差异表达lncRNA。然后选择中挑选出HOXA-AS2,回顾性选取标本库中2012年1月至2017年12月就诊我科的60例视网膜母细胞瘤的手术标本进行PCR验证,根据HOXA-AS2表达水平进行分组,评估HOXA-AS2高表达组与HOXA-AS2低表达组的预后。最后预测HOXA-AS2的靶基因,并对靶基因数据集进行GO分析进行生物功能富集。结果对3例视网膜母细胞瘤和3例正常对照组的视网膜组织的lncRNA表达谱进行比较分析,共筛选出141个差异lncRNA,其中上调lncRNA共110个,下调lncRNA共31个。选择差异倍数最大的HOXA-AS2(logFC 4.54,P=3.94E-07)进一步验证。进一步搜集于2012年1月至2017年12月就诊我科的60例视网膜母细胞瘤的手术标本进行qRT-PCR验证,年龄2.5±1.8(0.6-6)岁,以HOXA-AS2表达中位值为截点进行分组,结果提示,HOXA-AS2高表达组的3年OS低于HOXA-AS2低表达组(51.2%比96.0%,P=0.006)。HOXA-AS2表达与不同性别、组织分型、肿瘤分期和视神经侵犯无关,与浸润有关,HOXA-AS2高表达组的脉络膜浸润率高于HOXA-AS2低表达组(35.5%比10.3%,P=0.021)。对视网膜母细胞瘤患儿的OS预后多因素分析,结果提示,较高的HOXA-AS2表达水平(OR=2.632,95%CI:1.228-5.641,P=0.013)是视网膜母细胞瘤患者预后(OS)的独立危险因素。运用Multi Experiment Matrix(MEM)在线数据库进行HOXA-AS2的靶基因预测,对HOXA-AS2的靶基因数据集进行GO分析,生物信息学分析结果提示主要富集于“早期胚胎发生后脑发育中前Hox基因的激活”的生物学过程中(FDR=5.60E-06)。结论视网膜母细胞瘤组织HOXA-AS2高表达可作为视网膜母细胞瘤不良预后的独立因素,有望成为视网膜母细胞瘤的预后标记物。

lncRNA HOXA-AS2靶向miR-520a-3p调控卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究长链非编码RNA HOXA-AS2(lncRNA HOXA-AS2)与微小RNA-520a-3p(miR-520a-3p)之间的靶向关系及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:q PCR检测lncRNA HOXA-AS2与miR-520a-3p在多种卵巢癌细胞(SKOV3、HO8910、OVCAR3细胞)及正常卵巢上皮细胞HOSE中的表达水平。生物信息学手段预测HOXA-AS2与miR-520a-3p之间的靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。将si-HOXA-AS2、miR-520a-3p mimic、anti-miR-520a-3p和相应对照片段分别或共转染SKOV3细胞,MTT、Transwell和Western blotting法分别检测各组SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及相关蛋白(CyclinD1、p21、p27、MMP-2、MMP-9、MMP-14)表达情况。结果:与HOSE细胞相比,多种卵巢癌细胞中HOXA-AS2均呈高表达(均P<0.05)、miR-520a-3p均呈低表达(均P<0.05);HOXA-AS2可靶向下调miR-520a-3p的表达。si-HOXA-AS2和miR-520a-3p mimics组SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭能力均较对照组均显著降低(均P<0.01),且p21、p27蛋白表达显著升高,而CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白表达显著减少(均P<0.01);si-HOXA-AS2+anti-miR-520a-3p组SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力较si-HOXA-AS2和si-HOXA-AS2+anti-miR-NC组显著增强(均P<0.05)。结论:lncRNA HOXA-AS2通过靶向抑制miR-520a-3p表达进而增强卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

下调HOXA-AS2/miR-20a通路促进皮肤鳞癌细胞凋亡并抑制其侵袭迁移

目的研究下调长链非编码RNA(lncRNA)HOXA-AS2/miR-20a通路对皮肤鳞癌细胞凋亡和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测皮肤鳞癌组织中HOXA-AS2的表达变化。在皮肤鳞癌细胞A431中转染HOXA-AS2 siRNA,MTT测定细胞增殖,克隆形成实验测定细胞克隆形成能力,流式细胞仪测定细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,采用Western blot检测MMP-2、MMP-9、C-Caspase-3蛋白表达。生物信息学软件预测HOXA-AS2和miR-20a有互补结合位点,荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。qRT-PCR检测皮肤鳞癌组织中miR-20a的表达变化。在皮肤鳞癌细胞A431中共转染HOXA-AS2 siRNA、miR-20a inhibitor,检测细胞增殖、克隆、凋亡、迁移、侵袭能力的变化。结果HOXA-AS2在皮肤鳞癌组织中的表达升高。转染HOXA-AS2 siRNA后的皮肤鳞癌细胞A431增殖、克隆、侵袭、迁移能力下降,细胞凋亡水平升高,MMP-2、MMP-9蛋白表达减少,C-Caspase-3蛋白表达增高。下调HOXA-AS2靶向促进miR-20a表达。miR-20a在皮肤鳞癌组织中的表达与HOXA-AS2负相关。miR-20a inhibitor可以逆转HOXA-AS2 siRNA对皮肤鳞癌细胞A431增殖、克隆、侵袭、迁移和凋亡作用。结论下调HOXA-AS2/miR-20a通路降低皮肤鳞癌细胞增殖、克隆、侵袭、迁移能力,诱导细胞凋亡。

脑胶质瘤干细胞衍生的外泌体lncRNA HOXA-AS2促进脑胶质瘤的增殖、迁移、侵袭和干细胞特性

背景与目的:外泌体是介导肿瘤微环境中肿瘤细胞与受体细胞间相互作用的重要信使。然而,细胞外泌体长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在脑胶质瘤干细胞(glioma stem cell,GSC)和脑胶质瘤细胞的细胞间通信中的作用尚不清楚。本研究探究外泌体衍生的lncRNA对脑胶质瘤增殖、迁移、侵袭和干细胞特性的影响。方法:从中国脑胶质瘤基因组图谱(the Chinese Glioma Genome Atlas,CGGA)和癌症基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载包含低级别脑胶质瘤(low-grade glioma,LGG)和高级别脑胶质瘤(high-grade glioma,HGG)lncRNA表达数据的数据集,识别LGG和HGG组织之间的差异表达lncRNA(differentially expressed lncRNA,DelncRNA),并分析HOXA-AS2水平与胶质瘤患者总生存期(overall survival,OS)之间的关系。从人胶质瘤细胞系SHG44中分离GSC,用流式细胞术检测CD133^(+)富集的细胞,再用蛋白质印迹法(Westernblot)检测干细胞相关蛋白(CD133、SOX2和OCT4)的表达水平。提取和识别SHG44-GSC衍生的外泌体,并用PKH26细胞膜染料进行荧光标记;再将转染了Cy3标记HOXA-AS2的SHG44-GSC与SHG44细胞进行间接共培养;后用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测SHG44-GSC和SHG44-GSC衍生外泌体中HOXA-AS2的水平。使用pLVX-IRES-PUROHOXAAS2慢病毒质粒和含靶向HOXA-AS2质粒的慢病毒shRNA进行慢病毒转染。采用细胞计数试剂盒-8(cellcountingkit-8,CCK-8)和transwell实验检测SHG44-GSC衍生的外泌体HOXA-AS2对SHG44细胞增殖和侵袭能力的影响。结果:HOXAAS2在胶质瘤中呈现高表达,且与患者较差的OS相关(P<0.01)。SHG44-GSC中CD133^(+)细胞比例明显高于SHG44细胞(P<0.0001),SHG44-GSC中干细胞相关蛋白(CD133、SOX2和OCT4)的表达水平明显高于亲代SHG44细胞(P<0.0001),并且SHG44-GSC中HOXA-AS2水平显著升高(P<0.0001)。PKH26标记的外泌体被SHG44细胞吸收,且SHG44细胞中可观察到Cy3标记的HOXA-AS2;HOXA-AS2OE转染的SHG44-GSC细胞(SHG44-GSC/HOXA-AS2OE)和SHG44-GSC/HOXA-AS2OE衍生的外泌体(SHG44-GSC/HOXA-AS2OE-Exo)中HOXA-AS2水平显著升高(P<0.01),在与SHG44-GSC/HOXA-AS2OE细胞共培养的SHG44细胞中HOXA-AS2水平显著升高(P<0.01)。SHG44-GSC/HOXAAS2 OE-Exo可显著促进SHG44细胞增殖、迁移和侵袭。结论:来自SHG44-GSC的外泌体HOXA-AS2能显著促进胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭和干细胞特性,提示HOXA-AS2可能是脑胶质瘤潜在的治疗靶点。

LncRNA HOXA-AS2在癌症中的作用

长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一类长度超过200个核苷酸的非编码转录本。越来越多的证据表明,lncRNAs在癌症的发生和发展中起着重要的调控作用。HOXA簇反义RNA 2(HOXA cluster antisense RNA 2,HOXA-AS2)是一种新型的lncRNA,其在癌症的发生、发展等过程中发挥了重要作用。本文对近年来HOXA-AS2在人类多种癌症中的表达、分子机制及相关功能进行综述,并探讨其可能的临床应用。

HOXA-AS2靶向miR-17对人脐静脉内皮细胞生物学功能以及炎症因子的影响

目的探讨HOXA-AS2对动脉粥样硬化(AS)模型细胞生物学功能以及炎症因子的影响及分子机制。方法本实验共分为4个实验;实验1:用100μg/mL的ox-LDL处理EA.hy926细胞作为ox-LDL组,正常培养的细胞作为对照组;实验2:将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2转染至EA.hy926细胞中再用100μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组;实验3:将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2、si-NC、si-HOXA-AS2分别转染至EA.hy926细胞中,记为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-HOXA-AS2组、si-NC组、si-HOXA-AS2组;实验4:将pcDNA3.1-HOXA-AS2与miR-NC、miR-17分别共转染至EA.hy926细胞中再用100μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HOXA-AS2和miR-17的表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、cleaved caspase 3蛋白表达;MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)水平;荧光素酶报告实验检测HOXA-AS2和miR-17的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果与对照组比较,ox-LDL组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平(0.23±0.02比1.02±0.10),细胞增殖率[(47.83±5.01)﹪比(100.06±10.20)﹪]均降低,细胞凋亡率[(26.81±2.47)﹪比(8.23±0.80)﹪]、P21(0.82±0.08比0.20±0.02)、cleaved caspase 3(0.67±0.06比0.14±0.01)、IL-1[(792.34±59.37)ng/L比(326.14±34.59)ng/L]和IL-6表达水平[(53.67±4.65)ng/L比(19.25±2.11)ng/L]均升高,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与ox-LDL+pcDNA3.1组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平(0.87±0.09比0.22±0.02)、细胞增殖率[(89.94±8.34)﹪比(48.21±4.86)﹪]均升高,细胞凋亡率[(12.33±1.18)﹪比(26.83±2.48)﹪]、P21(0.33±0.03比0.81±0.08)、cleaved caspase 3(0.24±0.02比0.69±0.06)、IL-1[(446.25±46.84)ng/L比(802.21±60.18)ng/L]和IL-6表达水平[(25.64±2.65)ng/L比(55.21±5.10)ng/L]均降低,差异具有统计学意义(P均<0.001)。与ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组EA.hy926细胞中miR-17表达水平(2.14±0.21比1.05±0.10)、细胞凋亡率[(23.31±2.33)﹪比(13.75±1.44)﹪]、IL-1水平[(684.26±62.38)ng/L比(451.21±43.58)ng/L]、IL-6水平[(41.29±4.37)ng/L比(26.11±2.39)ng/L]均升高,细胞增殖率[(53.67±5.46)﹪比(90.21±9.16)﹪]降低,差异具有统计学意义(P均<0.001)。HOXA-AS2与miR-17存在结合位点,荧光素酶报告实验显示,与miR-NC组比较,miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性降低(0.33±0.03比1.01±0.10,P<0.05),而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性升高(2.29±0.21比1.00±0.10,P<0.05),而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达HOXA-AS2促进细胞增殖,抑制ox-LDL引起的细胞凋亡和炎症因子的释放,其机制可能与miR-17有关。

lncRNA HOXA-AS2对视网膜母细胞瘤细胞增殖和上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA HOXA-AS2(lncRNA HOXA-AS2)对视网膜母细胞瘤细胞增殖和上皮间质转化(EMT)的影响。方法选取对数期NCI-H187人视网膜母细胞瘤细胞,采用随机数表法分为lncRNA HOXA-AS2组、对照组和空白组,分别转染pc DNA3.0-lncRNA HOXA-AS2、pc DNA3.0-NC和磷酸盐缓冲液。采用qRT-PCR检测lncRNA HOXA-AS2表达,CCK-8法检测细胞增殖指数,Annexin V FITC/PI法检测细胞凋亡指数,Transwell小室检测细胞侵袭指数,Western Blot检测Vimentin表达。结果转染后24h和48h,lncRNA HOXA-AS2组细胞的lncRNA HOXA-AS2表达水平、细胞增殖指数、细胞凋亡指数、细胞侵袭指数和Vimentin蛋白相对表达水平均高于空白组和对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论过表达lncRNA HOXA-AS2能促进视网膜母细胞瘤细胞增殖、侵袭与凋亡,利于肿瘤细胞发生EMT,抑制肿瘤细胞凋亡。

lncRNA HOXA⁃AS2在胰腺癌组织中的表达及对细胞增殖和侵袭力的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOXA簇反义RNA2(HOXA⁃AS2)在胰腺癌组织中表达,以及沉默该基因对胰腺癌细胞增殖和侵袭力的影响。方法选取2015年8月至2020年8月在我院行根治性手术治疗的胰腺癌患者97例,培养人胰腺癌PANC⁃1和AsPC⁃1细胞并分别分为si⁃HOXA⁃AS2组、si⁃Con组和空白组,分别转染干扰序列、阴性对照序列和不作任何处理,使用RT⁃PCR检测胰腺癌和癌旁组织中HOXA⁃AS2表达,以及不同组细胞中HOXA⁃AS2表达,分别使用CCK⁃8和Transwell法检测细胞增殖活性及细胞侵袭力。结果HOXA⁃AS2在胰腺癌组织中表达量为(2.21±0.20),高于癌旁组织的(1.03±0.14),差异有统计学意义(t=48.030,P<0.001);胰腺癌组织中HOXA⁃AS2表达量在不同TNM分期、分化程度和是否发生淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.05);PANC⁃1和AsPC⁃1细胞中,与si⁃Con组和空白组比较,si⁃HOXA⁃AS2组HOXA⁃AS2表达量明显降低(P<0.05),si⁃HOXA⁃AS2组24、48、72和96 h时吸光度OD值均低于si⁃Con组和空白组(P<0.05),si⁃HOXA⁃AS2组侵袭细胞数均低于si⁃Con组和空白组(P<0.05)。结论HOXA⁃AS2在胰腺癌组织中表达量升高,且与恶性进展临床指标相关,沉默其表达可减少细胞增殖、抑制细胞侵袭力。