lncR-HOXA-AS3靶向miR-29a对前列腺癌细胞凋亡和自噬的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncR)HOXA-AS3和微小RNA-29a(miR-29a)对前列腺癌(PCa)细胞凋亡、自噬的影响。方法 体外培养人PCa细胞(DU-145、LNCaP、C4-2B)和人正常前列腺细胞RWPE-1,采用RT-qPCR法检测细胞中lncR-HOXA-AS3和miR-29a表达。应用双荧光素酶报告基因实验验证lncR-HOXA-AS3和miR-29a之间的靶向调控关系。取对数生长期LNCaP细胞,分为si-NC组、si-HOXA-AS3组、si-HOXA-AS3+anti-miR-NC组和si-HOXA-AS3+anti-miR-29a组,利用脂质体转染法分别将si-NC、si-HOXA-AS3、si-HOXA-AS3+anti-miR-NC、si-HOXA-AS3+anti-miR-29a转染至各组LNCaP细胞,应用RT-qPCR法检测各组细胞中lncR-HOXA-AS3和miR-29a表达,应用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,应用Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3及自噬相关蛋白LC3II、LC3I、Beclin 1表达。结果 与正常前列腺细胞相比,人PCa细胞中lncR-HOXA-AS3表达均明显升高(P均<0.05),而miR-29a表达均降低(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因显示lncR-HOXA-AS3能靶向miR-29a抑制荧光素酶活性(P<0.05)。与si-NC组比较,si-HOXA-AS3组LNCaP细胞lncR-HOXA-AS3表达降低(P<0.05),miR-29a表达升高(P<0.05),细胞凋亡率升高(P均<0.05),Caspase-3、LC3Ⅱ/LC3I及Beclin 1蛋白表达升高(P均<0.05)。与si-HOXA-AS3+anti-miR-NC组比较,si-HOXA-AS3+anti-miR-29a组LNCaP细胞miR-29a表达下降(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Caspase-3、LC3Ⅱ/LC3I及Beclin1蛋白表达下降(P均<0.05)。结论 抑制lncR-HOXA-AS3表达能靶向调控miR-29a基因促进PCa细胞凋亡和自噬。

抑制lncR-HOXA-AS3表达的人前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT相关蛋白表达变化

目的观察抑制长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncR)HOXA-AS3表达的人前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞系LNCaP增殖、迁移、侵袭能力及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达变化。方法本研究受试细胞为人PCa细胞系LNCaP。将对数生长期LNCaP细胞分为2组,分别转染lncRHOXA-AS3沉默质粒si-HOXA-AS3(观察组)和阴性对照质粒si-NC(对照组),转染48 h时采用qRT-PCR法检测lncR-HOXA-AS3,分别于转染24、48、72 h时采用CCK8实验测算细胞增殖活性(光密度OD值),转染48 h时采用细胞划痕实验观察细胞迁移能力,转染48 h时采用Transwell实验观察细胞侵袭能力,转染48 h时采用WESTERN Blotting法检测两组EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)。结果与RWPE-1相比,DU-145、LNCaP、C4-2B中lncR-HOXA-AS3相对表达量均升高(P均<0.05)。与对照组相比,转染48 h时观察组细胞lncR-HOXA-AS3相对表达量降低(P<0.05)。与对照组比较,转染24、48、72 h时观察组细胞OD值降低(P均<0.05)。与对照组比较,转染48 h时观察组划痕愈合率小、侵袭穿膜细胞数目少(P均<0.05)。与对照组比较,转染48 h时观察组LNCaP细胞E-cadherin蛋白相对表达量升高,Vimentin、Fibronectin蛋白相对表达量表达降低(P均<0.05)。结论沉默lncR-HOXA-AS3表达能抑制LNCaP细胞的增殖、迁移及侵袭,其机制可能为lncRHOXA-AS3促进LNCaP细胞E-cadherin蛋白表达、抑制Vimentin及Fibronectin蛋白表达。

HOXA-AS3通过调控HOXA6/7基因对人肺腺癌细胞增殖凋亡作用机制

目的研究HOXA-AS3通过调控HOXA6/7基因对人肺腺癌细胞增殖凋亡的作用机制。方法人肺腺癌细胞株经培养后随机分为LA组(单纯人肺腺癌细胞株)和EX组(HOXA-AS3转染的人肺腺癌细胞株)。使用TUNEL法、CCK-8法、划痕实验、Western blot法及RT-PCR法分析两组细胞凋亡、增殖、迁移能力、HOXA6/7蛋白表达及HOXA6/7 mRNA表达的差异。结果TUNEL法结果表明LA组细胞凋亡较EX组多且分布明显稀疏(P<0.05);CCK-8检测结果表明EX组细胞的增殖数量明显高于LA组(P<0.05);划痕实验显示,与EX组相比,LA组无细胞区域宽度较大,表明其细胞迁移能力较低;Western blot法对两组细胞内HOXA6/7蛋白的免疫印迹分析显示,EX组的HOXA6/7蛋白表达明显上升(P<0.05);RT-PCR结果显示,EX组的HOXA6/7 mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论HOXA-AS3激活HOXA6/7基因的表达,加快人肺腺癌细胞的增殖、迁移,促进疾病发展。深入研究HOXB6/7基因对肺腺癌的作用机制可为控制肺腺癌的发展与转移提供临床帮助。

干扰lncRNA HOXA-AS3负调控miR-340-5p对小细胞肺癌细胞DMS114/DDP顺铂耐药性的影响

目的探讨长链非编码RNA HOXA-AS3(lncRNA HOXA-AS3)对小细胞肺癌耐药性细胞DMS114/DDP的影响及其对微小RNA-340-5p(miR-340-5p)的调控作用。方法采用qRT-PCR法检测肺癌组织及癌旁组织中HOXA-AS3、miR-340-5p的表达量;体外培养小细胞肺癌细胞DMS114,采用顺铂浓度递增法建立耐药细胞DMS114/DDP,分别将si-NC、si-HOXA-AS3、si-HOXA-AS3与anti-miR-NC、si-HOXA-AS3与anti-miR-340-5p转染至DMS114/DDP细胞;采用qRT-PCR法检测细胞中HOXA-AS3、miR-340-5p的表达量;采用CCK-8法检测细胞存活率及计算顺铂IC_(50)值;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测HOXA-AS3、miR-340-5p的靶向关系。结果肺癌组织中HOXA-AS3的表达水平升高(P<0.05),miR-340-5p的表达水平降低(P<0.05);不同浓度的顺铂处理后DMS114细胞、DMS114/DDP细胞存活率逐渐降低(P<0.05),且DMS114/DDP细胞IC_(50)值高于DMS114细胞(P<0.05);与DMS114细胞比较,DMS114/DDP细胞中HOXA-AS3的表达水平升高(P<0.05);转染si-HOXA-AS3可明显降低细胞活力(P<0.05),提高凋亡率(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实HOXA-AS3可靶向结合miR-340-5p;共转染si-HOXA-AS3与anti-miR-340-5p可明显提高细胞活力(P<0.05),降低凋亡率(P<0.05)。结论干扰HOXA-AS3表达可抑制细胞增殖及促进细胞凋亡进而增强DMS114/DDP细胞顺铂敏感性,其作用机制可能与上调miR-340-5p的表达有关。

下调长链非编码RNAHOXA-AS3靶向促进微小RNA-29b对结肠癌细胞LOVO凋亡和奥沙利铂敏感性的影响

目的探讨下调长链非编码RNA(lncRNA)HOXA-AS3靶向促进微小RNA-29b(miR-29b)对结肠癌细胞LOVO凋亡和奥沙利铂敏感性的影响。方法实时聚合酶链反应测定结肠癌细胞LOVO、SW1116、HCT116、SW620和正常结肠上皮细胞NCM460中HOXA-AS3表达变化。结肠癌细胞LOVO分成control组、si-NC组、si-HOXA-AS3组、L-OHP+si-NC组、L-OHP+si-HOXA-AS3组、si-HOXA-AS3+Anti-miR-NC组、si-HOXA-AS3+Anti-miR-29b组、L-OHP+si-HOXA-AS3+Anti-miR-NC组和L-OHP+si-HOXA-AS3+Anti-miR-29b组。采用MTT实验、流式细胞术和Western blot分别分析细胞增殖、凋亡以及细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达情况。生物学信息学软件预测HOXA-AS3的靶miRNA,荧光素酶活性测定试剂盒验证HOXA-AS3和miR-29b的靶向关系。结果与正常结肠上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞LOVO、SW1116、HCT116、SW620中HOXA-AS3表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结肠癌细胞LOVO中HOXA-AS3表达水平均高于结肠癌细胞SW1116、HCT116、SW620,差异有统计学意义(P<0.05)。与control组、si-NC组比较,si-HOXA-AS3组结肠癌细胞LOVO增殖活性降低,凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-HOXA-AS3组、L-OHP+si-NC组比较,L-OHP+si-HOXA-AS3组结肠癌细胞LOVO增殖活性降低,凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-HOXA-AS3+Anti-miR-NC组比较,si-HOXA-AS3+Anti-miR-29b组结肠癌细胞LOVO增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。与L-OHP+si-HOXA-AS3+Anti-miR-NC组比较,L-OHP+si-HOXA-AS3+Anti-miR-29b组结肠癌细胞LOVO增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。下调HOXA-AS3靶向促进miR-29b表达。结论下调HOXA-AS3可通过靶向促进miR-29b诱导结肠癌细胞LOVO凋亡并提高奥沙利铂敏感性。

LncRNA HOXA-AS3通过miR-218-5p调控USP3对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨长非编码RNA HOXA簇反义RNA 3(LncRNA HOXA-AS3)通过miR-218-5p调控泛素特异性肽酶3(USP3)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:体外培养人前列腺上皮细胞和人前列腺癌细胞系DU-145、PC-3、22RV1,将DU-145细胞分为对照组、LncRNA HOXA-AS3过表达组、LncRNA HOXA-AS3敲低组、共转染阴性对照组、LncRNA HOXA-AS3敲低+miR-218-5p inhibitor组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和免疫印迹法检测LncRNA HOXA-AS3、miR-218-5p与USP3的表达;采用免疫荧光染色检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达比值(Bax/Bcl-2);采用免疫印迹法检测增殖(PCNA、Cyclin D1)与凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)的表达;采用双荧光素酶报告基因实验检测前列腺癌细胞中LncRNA HOXA-AS3对miR-218-5p的靶向调节。结果:与人前列腺上皮细胞相比,DU-145、PC-3、22RV1细胞的LncRNA HOXA-AS3、USP3的mRNA与蛋白表达升高,miR-218-5p表达降低(均P<0.05)。与对照组比较,LncRNA HOXA-AS3过表达组LncRNA HOXA-AS3、USP3的mRNA与蛋白表达、细胞活力、集落生成率、PCNA与Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达升高,miR-218-5p表达、凋亡细胞比例、细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、Bax蛋白表达降低(均P<0.05);LncRNA HOXA-AS3敲低组的细胞LncRNA HOXA-AS3、USP3的mRNA与蛋白表达、细胞活力、集落生成率、PCNA与Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达降低,miR-218-5p表达、凋亡细胞比例、凋亡率、Bax/Bcl-2、Bax蛋白表达升高(均P<0.05)。与LncRNA HOXA-AS3敲低组比较,LncRNA HOXA-AS3敲低+miR-218-5p inhibitor组的USP3的mRNA与蛋白表达、细胞活力、集落生成率、PCNA与Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达升高,miR-218-5p表达、凋亡细胞比例、细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、Bax蛋白表达降低(均P<0.05)。共转染miR-218-5p mimics和野生型LncRNA HOXA-AS3报告质粒的相对荧光素酶活性降低(0.34±0.06 vs.1.01±0.22,P<0.05)。结论:敲低LncRNA HOXA-AS3可通过上调miR-218-5p而降低USP3表达,从而抑制前列腺癌细胞增殖,并促使其凋亡。