利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除HOXA5基因对急性髓系白血病细胞增殖的影响

目的:通过CRISPR-Cas9基因编辑技术构建稳定敲除HOXA5基因的急性髓系白血病(AML)细胞株,明确HOXA5基因敲除对AML细胞增殖的影响,初步探索HOXA5基因在AML发病中的作用。方法:通过荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot技术分别检测血液系统非肿瘤患者与初诊AML患者骨髓单个核细胞(BMMC)中HOXA5的表达;应用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建稳定敲除HOXA5基因的AML细胞株KO-HOXA5-THP-1,通过qRT-PCR和Western blot检测KO-HOXA5-THP-1细胞中HOXA5的表达,并采用CCK-8实验检测细胞增殖情况。结果:与血液系统非肿瘤患者相比,初诊AML患者骨髓单个核细胞中HOXA5基因及蛋白水平均显著升高(P<0.05)。应用CRISPR-Cas9基因编辑技术能够获得稳定敲除HOXA5基因的细胞株,而且敲除HOXA5基因后的THP-1细胞株的增殖能力显著下降(P<0.05)。结论:HOXA5在AML细胞中高表达,敲除HOXA5能够显著影响AML细胞的增殖能力,这为急性髓系白血病的精准治疗提供了一个新的潜在治疗靶点。

HOXA5和miR-196a-5p基因环路在卵巢癌诊断及治疗中的价值

卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一,其死亡率占妇科肿瘤首位。因此,找到更准确的卵巢癌诊断及治疗方法对提高卵巢癌患者的生存率有重要意义。随着人们对卵巢癌发病机制的深入研究,同源异形盒基因A5和非编码小分子RNA-196a-5p引起了临床工作者的广泛关注,同源异形盒基因A5是同源盒基因家族中的一员,在胚胎发育及细胞分化中发挥重要的作用;非编码小分子RNA-196a-5p在癌症演变中也发挥着重要作用,这为卵巢癌今后的诊断和治疗提供了新思路。因此,本综述主要阐述同源异形盒基因A5和非编码小分子RNA-196a-5p基因环路与卵巢癌发生发展的关系,并为卵巢癌的早期诊治及判断预后提供依据。

转录因子HOXA5在乳腺癌细胞中的下游信号通路

目的探究转录因子HOXA5在乳腺癌进展中的作用。方法构建过表达HOXA5的稳定转染BT549和SUM159细胞系,在稳转BT549细胞系中利用Transwell检测细胞的转移能力;Western blotting检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平的变化;平板克隆实验检测细胞的增殖能力;转录组测序技术(RNA-seq)进一步分析HOXA5的调控基因,利用软件Cluster 3.0,Tree View和DAVID生物信息数据库(DAVID Bioinformatics Resources)以及Enrichr分析京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路,绘制热图(heatmap)。结果 BT549细胞系中,稳定转染HOXA5后的实验组细胞迁移能力显著降低(P<0.001),且上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平显著上调,间质标志物N-cadherin,Twist1、Slug蛋白表达水平显著下调;平板克隆结果表明,实验组形成的克隆数目明显减少(P<0.05),克隆大小明显降低。结论 HOXA5通过促进细胞由间质向上皮转化,抑制乳腺癌细胞迁移,并且抑制细胞增殖;HOXA5通过调节糖脂代谢途径调节癌细胞增殖,并且还通过调节细胞运动和黏附相关的基因抑制肿瘤细胞的迁移,通过肿瘤坏死因子(TNF)信号通路发挥抗肿瘤作用。总之,转录因子HOXA5对乳腺癌的发展和恶化起着显著的抑制作用。

同源异型盒基因HOXA5对小细胞肺癌细胞多药耐药性的影响

目的研究同源异型盒基因HOXA5的变化对小细胞肺癌多药耐药性的影响,并探讨其作用机制,评价其作为小细胞肺癌临床治疗靶点的可能性。方法实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测小细胞肺癌细胞H69和多药耐药细胞株H69AR中HOXA5 mRNA和蛋白水平,采用表达质粒和siRNA升高或降低HOXA5基因表达水平,CCK8法分析细胞对小细胞肺癌常用化疗药物顺铂(Cisplatin,DDP)和足叶乙甙(Etoposide,VP-16)敏感性的变化。结果 H69细胞中HOXA5 mRNA水平是耐药细胞株H69AR中的8.99倍。HOXA5 siRNA显著降低H69细胞中HOXA5的表达水平,降低了H69细胞对DDP和VP-16的敏感性。将HOXA5表达质粒稳定转染入H69AR细胞,建立稳定转染细胞株,细胞对DDP和VP-16敏感性增加。结论 HOXA5可能参与了小细胞肺癌耐药过程,可能会成为小细胞肺癌临床治疗的新靶点。

HOXA5抑制人乳腺癌细胞凋亡及其机制的研究

目的:研究HOXA5在不同侵袭转移能力乳腺癌细胞中的表达及对乳腺癌细胞生物学特性的影响,并探讨其在乳腺癌细胞中发挥作用的分子机制。方法:首先应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot的方法检测HOXA5mRNA和蛋白在侵袭转移能力不同的乳腺癌细胞及良性乳腺上皮细胞中的表达水平,应用分子克隆技术将HOXA5cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1(+),脂质体方法转染表达较低的MDA-MB-231细胞后筛选并鉴定HOXA5过表达细胞株,用流式细胞技术检测过表达HOXA5对乳腺癌细胞凋亡的影响,并用Westernblot的方法检测过表达HOXA5对凋亡相关基因p53、caspase2和caspase8表达的影响。结果:无论是mRNA水平还是蛋白水平,HOXA5在侵袭转移能力强的MDA-MB-231细胞中的表达均低于侵袭转移能力弱的MCF-7和无侵袭转移能力的乳腺良性上皮细胞MCF-10A,过表达HOXA5后乳腺癌凋亡细胞比例明显增加,由原来的8%上升到15%～16%(P<0.01)。同时,过表达HOXA5对乳腺癌细胞中p53表达无明显影响,而caspase2和caspase8活性表达明显增加。结论:HOXA5在乳腺癌细胞中表达水平与细胞侵袭转移能力呈负相关,在乳腺癌细胞中过表达HOXA5可通过增加caspase2和caspase8活性表达的途径促进乳腺癌细胞凋亡,从而达到抑癌的作用,但对乳腺癌细胞中p53的表达无明显影响。

MiR-128-3p靶向抑制HOXA5调控多形性胶质母细胞瘤的增殖、侵袭与凋亡

目的探索HOXA5在胶质母细胞瘤(GBM)中高表达的原因及miR-128-3p调控胶质母细胞瘤进展的分子机制。方法通过慢病毒转染上调或下调U87细胞中miR-128-3p的表达水平,再利用蛋白质免疫印迹法检测HOXA5的表达水平的变化来探索miR-128-3p与HOXA5在GBM中表达的相关性。利用双荧光素报告基因实验验证miR-128-3p对HOXA5的靶向抑制关系。利用miR-128-3p与HOXA5过表达的质粒转染U87细胞进行拯救实验,通过CCK-8、Transwell、流式细胞学分析与裸鼠体内实验验证miR-128-3p调控GBM增殖、侵袭及凋亡方面的分子机制。结果上调U87细胞中miR-128-3p表达后HOXA5的表达水平显著下降,下调U87细胞中miR-128-3p表达后HOXA5表达水平明显升高(P<0.05),两者表达呈显著负相关。miR-128-3p可靶向结合HOXA5基因的3’UTR区并抑制HOXA5表达。miR-128-3p+Control组U87细胞增殖、侵袭及抗凋亡能力显著下降。结论miR-128-3p可通过靶向抑制HOXA5负向调控GBM细胞的增殖、侵袭及抗凋亡能力,HOXA5在GBM中呈高表达与miR-128-3p表达水平降低有关。

HOXA5在原发性肝细胞肝癌发生发展中的作用

目的:探讨转录因子HOXA5在肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发展中的作用。方法:利用qRT-PCR、蛋白质免疫印迹实验和免疫组化探究HOXA5在HCC组织和对应癌旁组织中的表达水平。构建敲低HOXA5的稳转人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97H后应用平板克隆、CCK8、EdU检测细胞增殖能力;流式细胞术检测H2O2诱导的HCC细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭能力。蛋白质免疫印迹实验检测HOXA5敲低及过表达后对PI3K-AKT信号通路的影响。结果:HCC组织中的HOXA5表达量高于对应癌旁组织,敲低HOXA5后减弱HCC细胞增殖、侵袭以及对凋亡的抵抗能力,减弱PI3K-AKT信号通路的激活,而过表达HOXA5增强PI3K-AKT通路激活。结论:HCC组织中的HOXA5表达水平高于癌旁组织。HCC细胞中HOXA5表达水平改变可以影响其增殖、凋亡、侵袭能力,以及PI3K-AKT信号通路的状态。

HOXA5基因转录起始点上游区域高甲基化水平与神经管缺陷的关系

目的探讨同源异形盒基因转录起始点(TSS)上游区域甲基化水平与神经管缺陷(NTDs)的关系。方法采用两阶段病例对照研究设计。第一阶段选择NTDs病例10例和对照8例作为研究对象,运用全基因组甲基化芯片检测其脑或脊髓DNA全基因组甲基化水平。针对HOXA5基因差异甲基化区域,在第二阶段扩大样本量(52例病例和23例对照)进行验证。提取脑或脊髓组织DNA,使用Mass ARRAY系统的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对HOXA5基因差异性甲基化区域进行验证。结果第一阶段在全基因组甲基化芯片结果中筛选出HOXA5基因TSS上游区27个CpG位点在病例组甲基化水平高于对照组(P<0.05)。第二阶段利用Mass ARRAY系统针对上述发现的差异区域进行检测,成功检测到10个可用于分析CpG位点。NTDs病例组及其亚型脊柱裂组和无脑畸形组中甲基化水平高于对照组的CpG位点数各有7、6和2个(P<0.005)。HOXA5基因TSS上游区域病例组平均甲基化水平高于对照组[NTDs病例组:(31.3±13.9)%,对照组:(21.4±9.7)%],调整胎儿性别和孕周后OR值为1.09(1.03~1.16)。结论 HOXA5基因TSS上游区域高甲基化与胎儿神经管缺陷风险增加存在关联性。

下调HOXA5表达对胶质瘤细胞增殖能力和细胞周期的影响

目的探讨下调同源异型盒基因A5(HOXA5)表达对胶质瘤细胞增殖能力和细胞周期的影响。方法应用生信分析方法,计算机检索CGGA数据库,下载m RNAseq-693和m RNAseq-325芯片数据,获取低级别胶质瘤(WHO分级Ⅱ级)和高级别胶质瘤(WHO分级Ⅲ、Ⅳ级)HOXA5 m RNA表达及病人生存信息;以HOXA5表达水平的平均值为界限,将高级别胶质瘤分为低表达组和高表达组。体外培养人胶质瘤细胞株U87和U251,使用Lipofectamine 2000法将HOXA5 si RNAs和阴性对照si RNAs分别转染U87和U251细胞;CCK-8和平板克隆形成实验评估胶质瘤细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期;免疫印迹法检测蛋白表达水平。结果生信分析结果显示:高级别胶质瘤HOXA5表达水平均显著高于低级别胶质瘤(P<0.01);HOXA5高表达组高级别胶质瘤病人中位生存时间较低表达组明显缩短(P<0.01)。体外细胞实验结果:敲低HOXA5表达,U87和U251细胞的增殖率和克隆集落数量显著降低(P<0.01),U87和U251细胞G0/G1期细胞百分比显著增高(P<0.01),U87和U251细胞CDK4蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论胶质瘤HOXA5呈高表达,病理级别越高,表达水平越高,病人生存预后越差。敲低HOXA5表达,明显降低CDK4表达,使细胞周期停滞在G0期,明显抑制胶质瘤细胞的增殖。

良恶性病变食管组织及其邻近组织中HOXA5蛋白和mRNA的表达

【目的】探讨食管鳞癌组织中同源异型盒基因(HOX)HOXA5蛋白和mRNA的表达情况,分析HOXA5表达与食管癌患者年龄、性别及其他临床病理学特征的关系。【方法】选择31例择期手术的食管癌患者,手术切除的标本均在离体30min内分别于癌灶、癌旁3cm以内及手术残端食管黏膜组织3处取材;对各部分标本作HE染色进行病理学诊断及分型,用免疫组织化学染色方法检测HOXA5蛋白的表达,用荧光定量PCR法检测HOXA5 mRNA的表达。【结果】①HE病理组织学检测证实31例癌组织标本均为鳞癌,癌旁3cm以内的标本呈中-重度不典型增生,手术残端食管黏膜组织均为正常鳞状上皮。②在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中HOXA5蛋白阳性表达率分别为32.3%、58.1%和64.5%(P<0.05);HOXA5 mRNA的含量分别为0.97±0.46、1.76±1.03和2.37±2.11(P<0.05);HOXA5蛋白和mRNA均表现为癌组织及癌旁不典型增生组织的表达率/表达量明显高于正常食管黏膜组织。③HOXA5蛋白阳性表达率(P<0.05)、HOXA5 mRNA的含量(P<0.05)均与食管鳞癌组织的病理学分级有关,其在病理学Ⅲ级中的表达率明显高于病理学Ⅰ+Ⅱ级的;不支持HOXA5蛋白和mRNA的表达与患者的年龄、性别、浸润深度及有无淋巴结转移有关(均P>0.05)。④HOXA5蛋白表达与其mRNA的表达一致性程度良好(Kappa=0.718,P<0.05)。【结论】HOXA5蛋白和mRNA的表达在癌旁不典型增生组织、食管鳞癌组织中明显升高,它可能是食管鳞癌发生过程中的早期事件。

同源异型盒基因HOXA5对胃癌细胞BGC823侵袭能力的影响

目的检测人胃癌组织中HOXA5基因的表达情况,观察干扰HOXA5基因的表达之后,胃癌细胞BGC823的迁移和侵袭能力的变化,为阐明HOXA5在胃癌向远处转移的分子机制中提供新的思路。方法通过实时定量PCR(qRT-PCR)、Western blot以及免疫组织化学等技术,检测胃癌组织中HOXA5基因的表达。应用细胞转染的方法将HOXA5基因的过表达质粒转入胃癌细胞BGC823中,经qRT-PCR和Western blot验证HOXA5表达上调之后,利用Transwell侵袭实验检测BGC823细胞侵袭能力的变化。结果在收集的69例新鲜的胃癌组织以及相对应的癌旁组织中,免疫组织化学显示相比于癌旁组织的表达情况,胃癌组织中只有26例HOXA5的表达高于癌旁组织,比例为37.7%;qRTPCR、Western blot检测发现相对于癌旁组织,胃癌组织中HOXA5的表达水平显著下调(mRNA水平下调3倍,蛋白水平下调2倍,差异具有统计学意义,P<0.05)。BGC823细胞转染了过表达质粒之后,HOXA5的表达能够被上调。过表达了HOXA5基因的BGC823细胞的侵袭能力下降。结论在胃癌组织中HOXA5的表达下调,而在胃癌细胞BGC823中增强HOXA5的表达能够降低细胞的侵袭能力,说明HOXA5在胃癌的发生发展和侵袭、转移中发挥着抑癌基因的作用,可作为一个新的治疗靶点。

利用同源重组技术构建Hoxa5、BMP6真核表达载体及共转染成纤维细胞表达

旨在利用同源重组构建敖汉细毛羊Hoxa5、BMP6基因表达载体及共转染成纤维细胞后通过基因表达量变化研究两基因之间的相互作用关系。以敖汉细毛羊为研究对象,采集30日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成cDNA参照GenBank中Hoxa5、BMP6基因序列和pcDNA3.1序列分别设计1对含有同源臂的引物,通过PCR反应扩增获得Hoxa5、BMP6基因片段、利用SoSo试剂盒将目的片段连接到pcDNA3.1真核表达载体上。鉴定构建pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMP6重组表达载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的质粒pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMP6共转染至成纤维细胞,采用RT-PCR技术和Western Blot技术检测Hoxa5、BMP6基因单转染和共转染在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示:经酶切、测序鉴定质粒pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMP6构建成功,并且共转染成纤维细胞Hoxa5基因的表达量极显著下降,BMP6基因的表达量极显著升高且共转染组的表达量极显著地高于单转染组(P<0.01)。利用同源重组技术成功构建了敖汉细毛羊Hoxa5、BMP6基因的表达载体,并且成功共转染成纤维细胞,BMP6基因的表达量升高,Hoxa5基因的表达量极显著下降,因而初步推断基因BMP6抑制了Hoxa5基因的表达,相反地Hoxa5基因促进了BMP6基因的表达,结果可为进一步研究其功能奠定基础。

同源异型盒基因HOXA5抑制肝癌的侵袭和迁移通过调控UBC9的表达

目的:检测人肝癌及癌旁组织中HOXA5基因的表达情况,观察稳定高表达HOXA5基因的肝癌细胞MHCC97H迁移和侵袭能力的变化,探讨HOXA5调控肝癌侵袭迁移的机制,为肝癌的分子靶向治疗提供新的靶点。方法:通过实时定量PCR(qRT-PCR)、Western blot以及免疫组织化学等技术检测肝癌及癌旁组织中HOXA5基因的表达。构建稳定高表达HOXA5的肝癌细胞MHCC97H,利用划痕和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的变化。应用CHIP-Seq筛选出HOXA5潜在的靶基因,在稳定高表达HOXA5基因细胞中应用qRT-PCR、Western blot验证HOXA5与靶基因的关系。结果:新鲜的肝癌组织以及相对应的癌旁组织中,免疫组织化学显示相比于癌旁组织的表达情况,肝癌组织中HOXA5的表达低于癌旁;qRT-PCR、Western blot检测发现相对于癌旁组织,肝癌组织中HOXA5的表达水平显著下调。过表达了HOXA5基因的MHCC97H细胞的侵袭能力下降。CHIP-Seq的结果发现,HOXA5结合在UBC9的上游启动子区域。在稳定高表达HOXA5的MHCC97H细胞中,UBC9的mRNA和蛋白表达均下调。当在稳定高表达HOXA5的同时过表达UBC9时,肝癌细胞的侵袭和迁移能力部分回复。结论:在肝癌组织中HOXA5的表达下调;UBC9介导了HOXA5抑制肝癌细胞侵袭迁移的作用,这为进一步阐明肝癌发生侵袭转移过程中的分子机制提供一个新的思路,为精准治疗肝癌提供一个可能的靶点。

miR-196a调控HOXA5对人胃癌细胞MGC-803侵袭转移的影响及机制研究

目的检测miR-196a在人胃癌组织及细胞系中的表达,探讨抑制或过表达miR-196a对胃癌细胞侵袭转移能力的影响,以及其可能作用的靶基因。方法通过实时定量PCR技术检测胃癌组织及细胞系中miR-196a的表达水平,通过转染miR-196a inhibitors或mimics抑制或上调其表达,并通过定量PCR检测转染效率。利用划痕迁移实验、Transwell侵袭实验和MTT实验检测上调或下调miR-196a水平对MGC-803细胞的迁移、侵袭和增殖能力的影响。采用生物信息学及Western blotting方法验证miR-196a对靶基因HOXA5的调控机制。结果相对于正常胃黏膜组织及细胞,胃癌组织和细胞系中miR-196a的表达水平显著上调(上调约28倍,P<0.01),MGC-803细胞中转染miR-196a inhibitors或mimics能显著抑制(下降了53%,P<0.01)或上调(上调约8倍,P<0.01)miR-196a表达水平。抑制miR-196a表达能降低MGC-803细胞的迁移、侵袭和增殖能力,而上调其表达则相反。miR-196a能够负性调控HOXA5的表达。结论胃癌组织及细胞系中miR-196a的表达上调可能通过抑制HOXA5的表达显著提高胃癌细胞的侵袭转移能力,促进胃癌的发生、发展。

敖汉细毛羊Hoxa5基因质粒的构建及在成纤维细胞中表达量的研究

本研究旨在构建敖汉细毛羊Hoxa5基因的质粒及转染成纤维细胞后基因的表达量变化。试验以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成cDNA参照Gen Bank中Hoxa5基因序列信息设计1对引物,通过PCR反应扩增获得Hoxa5基因片段、将得到的Hoxa5基因连接到pGM-T载体,构建pGM-T-Hoxa5重组质粒并转化大肠杆菌(E. coli) DH5α感受态细胞提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建pcDNA3. 1-Hoxa5重组质粒,转化大肠杆菌(E. coli) DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的质粒pcDNA3. 1-Hoxa5转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Hoxa5基因在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示,经酶切、测序鉴定质粒pcDNA3. 1-Hoxa5构建成功,并且转染成纤维细胞后Hoxa5基因的表达量明显升高,且转染组的表达量显著地高于对照组(P <0. 05)。表明:成功构建了敖汉细毛羊Hoxa5基因的质粒,并且成功转染成纤维细胞,基因在细胞中过表达,结果可为进一步研究其功能奠定基础。

敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因互作研究

旨在构建敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因的质粒及共转染成纤维细胞后,通过基因表达量变化研究两基因的互作。以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成cDNA,参照GenBank中Hoxa5、BMPR1B基因序列信息分别设计1对引物,通过PCR反应扩增获得Hoxa5、BMPR1B基因片段,将得到的Hoxa5、BMPR1B基因分别连接到pEASYTM-T1载体,构建pEASYTM-T1-Hoxa5、pEASYTM-T1-BMPR1B重组质粒并转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMPR1B重组质粒,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞。其次,对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的质粒pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMPR1B共转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Hoxa5、BMPR1B基因单转染和共转染在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示,经酶切、测序鉴定质粒pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMPR1B构建成功,并且共转染成纤维细胞BMPR1B基因的表达量明显下降,Hoxa5基因的表达量明显升高且共转染组的表达量极显著地高于单转染组(P<0.01)。成功构建了敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因的质粒,并且成功共转染成纤维细胞,Hoxa5基因的表达量明显升高,BMPR1B基因的表达量明显下降,因而Hoxa5基因抑制了BMPR1B基因的表达,BMPR1B基因促进了Hoxa5基因的表达,结果可为进一步研究其功能奠定基础。

确山黑猪HOXA5基因组织表达及生物信息学分析

【目的】探究确山黑猪HOXA5基因的组织表达情况和HOXA5蛋白的结构功能。【方法】利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)技术检测HOXA5基因在确山黑猪各组织中的表达情况,并与大白猪皮下脂肪和背最长肌进行对比;以确山黑猪皮下脂肪组织为cDNA模板,克隆确山黑猪HOXA5基因编码(coding sequence,CDS)区序列,利用生物信息学软件分析确山黑猪HOXA5基因CDS区序列及其编码蛋白质的结构和功能。【结果】HOXA5基因在确山黑猪肺脏中表达量最高,其次是肝脏和皮下脂肪,且显著高于其他组织。同时,HOXA5基因在确山黑猪皮下脂肪组织中表达量显著高于大白猪。通过对确山黑猪HOXA5基因进行克隆及生物信息学分析,获得的确山黑猪HOXA5基因CDS区全长813 bp,编码270个氨基酸,与牛、绵羊、马、黑猩猩、小鼠、人和鸡的同源性分别为99.1%、99.0%、98.8%、97.8%、97.4%、95.6%和81.3%。确山黑猪HOXA5蛋白分子质量为29.28 kD,主要位于细胞核内,属于酸性、亲水性蛋白,且不具有跨膜结构和信号肽;在二级结构和三级结构中,HOXA5蛋白由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,为混合型蛋白,以无规则卷曲为主。【结论】HOXA5基因作为调控猪脂肪沉积的候选基因,在确山黑猪品种的改良中具有重要意义。

CBX4与HOXA5在慢性粒细胞白血病中的表达及相互作用研究

Polycomb group complex(Pc G)作为发挥转录抑制作用的重要表观遗传调控复合物,参与发育、衰老以及肿瘤发生等重要病生理过程。Pc G成员众多,分为PRC1与PRC2两种复合物,各组分间功能既协同,又不失特性。PRC1中的CBX4独特的结构域使其功能尤为特殊。近年发现,作为一类造血干细胞恶性克隆性疾病,白血病中常伴有Pc G基因的异常表达或者突变。本研究通过q PCR发现,在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者外周血白细胞中存在CBX4的表达明显下调,而Pc G经典靶基因HOX家族中的HOXA5则表现为上调。给予伊马替尼(Imatinib)治疗后,二者均向相反方向恢复至正常人的表达水平,并且CBX4的表达水平与CML的经典分子标志物BCR-ABL1融合基因有较好的相关性。上述结果提示,CBX4可以作为CML潜在的预后标志物。为了进一步揭示CBX4与HOXA5是否存在相互作用关系,本文通过双荧光素酶实验证实,CBX4能通过HOXA5的启动子而负调控其表达。本研究发现,CBX4与HOXA5在CML中存在负相关的异常表达,且证明CBX4可作为HOXA5的负调控因子。

HOXA5、E-cadherin、β-catenin在卵巢癌组织中的表达

目的探讨同源异型盒基因(HOXA5)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)及β-环连蛋白(β-catenin)在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学技术检测60例卵巢癌组织、31例卵巢良性肿瘤组织和31例正常输卵管、卵巢组织中的HOXA5、E-cadherin及β-catenin的表达情况,并对相关的临床病理因素进行分析。结果①HOXA5、E-cadherin及β-catenin在卵巢癌组织中的阳性表达率分别为25.0%、48.3%、41.7%;HOXA5、E-cadherin及β-catenin在卵巢良性肿瘤组织中的阳性表达率分别为51.6%、77.4%、74.2%;HOXA5、E-cadherin及β-catenin在正常输卵管、卵巢组织中的阳性表达率分别为87.1%、80.7%、77.4%;HOXA5、E-cadherin及β-catenin在卵巢癌组织的表达显著低于正常输卵管、卵巢组织(P=0.000,P=0.003,P=0.001);②HOXA5、E-cadherin及β-catenin在卵巢癌组织的阳性表达与卵巢癌的组织学分级相关(P=0.007,P=0.000,P=0.000),与年龄、组织学类型、临床分期和发生部位无关(P>0.05);③HOXA5与E-cadherin、β-catenin在卵巢癌中的表达呈正相关性(r=0.289,P=0.025;r=0.293,P=0.023)。结论 HOXA5、E-cadherin、β-catenin蛋白与卵巢癌的病理分化过程、发生进展密切相关。

miR-27a-3p靶向HOXA5基因通过Wnt/β-catenin信号通路调控糖尿病患者创面愈合

目的:研究微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)对糖尿病患者创面愈合的影响及作用机制。方法:采用qPCR和Western blot检测糖尿病患者创面愈合组织中miR-27a-3p、同源异型盒基因A5(HOXA5)mRNA和HOXA5蛋白的表达。使用高糖处理人微血管内皮细胞(HMECs),模拟糖尿病HMECs的损伤。在HMECs中转染miR-27a-3p mimic或HOXA5 siRNA,并进行高糖处理,MTT法测定细胞活力,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法测定HOXA5、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白的表达。StarBase预测结合双萤光素酶活性检测分析miR-27a-3p和HOXA5的靶向关系。在HMECs中共转染miR-27a-3p mimic和pcDNA-HOXA5,并使用高糖处理,观察其对细胞活力、迁移和侵袭能力的影响。结果:糖尿病患者创面愈合组织中miR-27a-3p的表达量明显减少,HOXA5的mRNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05)。高糖诱导的HMECs中miR-27a-3p的表达量、细胞活力、细胞迁移和侵袭数量及cyclin D1、MMP2和MMP9的蛋白水平均显著降低(P<0.05)。高表达miR-27a-3p或低表达HOXA5明显增加高糖处理HMECs的细胞活力、迁移和侵袭能力及cyclin D1、MMP2和MMP9的蛋白表达量(P<0.05)。miR-27a-3p靶向调控HOXA5表达。高表达HOXA5可以部分消除miR-27a-3p mimic对高糖处理的HMECs活力、迁移和侵袭能力以及cyclin D1、MMP2、MMP9和β-catenin蛋白表达的影响。结论:miR-27a-3p靶向HOXA5基因,并通过Wnt/β-catenin信号通路促进高糖诱导的微血管内皮细胞生长、迁移和侵袭,从而促进糖尿病患者的创面愈合。