血浆HOXA7基因甲基化在非小细胞肺癌诊断中的应用

目的:检测非小细胞肺癌(non-small cell lungcancer,NSCLC)血浆中同源盒基因(homeobox,HOX)家族成员HOXA7基因启动子甲基化水平,并评估HOXA7甲基化与肿瘤标志物血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、糖类抗原(carbohydrate antigen199,CA199)和细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokeratin 19 fragment antigen 21-1,Cyfra21-1)水平辅助诊断NSCLC的价值。方法:选取河南省肿瘤医院2012年1月至2016年12月住院的经病理组织学确诊为NSCLC患者80例为试验组,50例健康人为对照组。采用定量甲基化特异性PCR(quantitativemethylation-specificPCR,q MSP)检测血浆HOXA7甲基化水平,电化学发光检测血浆CEA、CA199和Cyfra21-1水平。构建受试者工作特征曲线(ROC)分析各指标鉴别NSCLC的临床价值,并分析HOXA7甲基化与临床病例参数、肿瘤标志物之间的关系。结果:与健康对照组相比,NSCLC患者血浆中HOXA7基因甲基化水平异常增高(χ^2=36.972,P<0.0001),HOXA7甲基化诊断NSCLC的敏感度为68.8%(55/80),特异度为86.0%(43/50)。血浆HOXA7甲基化与性别、年龄、有无吸烟史和病理类型无关(均P>0.05),但与TNM分期有关(P<0.05),其中Ⅳ期患者血浆HOXA7甲基化水平最高。肿瘤标志物中Cyfra21-1诊断NSCLC的价值最高,敏感度为70.00%,特异度为90.00%。HOXA7甲基化联合三指标诊断NSCLC的效能最高(AUC=0.893,敏感度73.75%,特异度94%)。HOXA7甲基化与Cyfra21-1的相关系数最高(r=0.564,P<0.05)。结论:HOXA7基因甲基化水平对NSCLC的诊断有一定价值,与NSCLC的恶性程度相关,联合肿瘤标志物检测可以提高NSCLC的诊断效能。

敖汉细毛羊Hoxa7基因表达载体的构建及在成纤维细胞中的表达

为了构建敖汉细毛羊Hoxa7基因表达载体以及研究表达载体转染成纤维细胞后基因表达量的变化,试验从40日龄敖汉细毛羊肩部皮肤提取RNA并反转录成cDNA,参照GenBank中Hoxa7基因的CDS区序列设计1对引物;将PCR扩增获取的Hoxa7基因CDS片段连接到pEASYTM-T1载体上,构建pEASYTM-T1-Hoxa7克隆载体,将克隆载体转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中;从pEASYTM-T1载体上切下Hoxa7基因片段,连接到pcDNA3.1表达载体上,再次转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中;将重组表达载体pcDNA3.1-Hoxa7瞬时转染到传代的成纤维细胞中,利用实时荧光定量PCR技术、Western-blot方法检测成纤维细胞中Hoxa7基因的mRNA和蛋白表达情况。结果表明:重组表达载体pcDNA3.1-Hoxa7构建成功;瞬时转染到成纤维细胞中后, Hoxa7基因的mRNA和蛋白表达量均极显著升高(P<0.01)。说明敖汉细毛羊Hoxa7基因在成纤维细胞中能够高效表达。

胰腺癌细胞株HOXA7基因表达及其启动子区甲基化状态

目的 检测HOXA7 mRNA在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,探讨两者的相关性.方法 采用RT-PCR法检测人胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1、PANC1和SW1990细胞的HOXA7 mRNA的表达水平.采用重亚硫酸盐测序PCR（bisulfite sequencing PCR,BSP）和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法（combined bisulfite restriction analysis,COBRA）检测启动子区域甲基化状态.应用去甲基化药物5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-dC）处理各细胞株,检测处理前后细胞HOXA7 mRNA表达和甲基化状态的变化.结果 胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1和SW1990细胞均表达HOXA7 mRNA,而PANC1细胞不表达HOXA7 mRNA.CFPAC1、BxPC3、PANC1和SW1990中HOXA7启动子甲基化率分别为93.16%、90.65%、90.09%、52.30%,SW1990细胞的HOXA7甲基化率较其他三株细胞均明显降低（P值均＜0.01）.经5-aza-dC处理后,PANC1细胞的HOXA7 mRNA重新表达,BxPC3的HOXA7 mRNA表达增强;而CFPAC1和SW1990细胞的HOXA7 mRNA在5-aza-dC处理前后无明显变化.结论 胰腺癌细胞株BxPC3和PANC1细胞的HOXA7mRNA表达与启动子区甲基化状态密切相关,而CFPAC 1和SW1990细胞两者无明显相关性.