全反式维甲酸对脐血粒-单系和红系祖细胞HOXB6基因表达的调控作用

目的探讨脐血造血干祖细胞(hematopoietic stem-progenitor cell,HSPC)向粒-单系(colony form-ing unit-granulocyte-monocyte,CFU-GM)、红系(colony for mingunit-erythroid,CFU-E)增殖过程中HOXB6mRNA表达及全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对HOXB6mRNA表达的影响。方法①采用造血祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类造血干祖细胞,观察人脐血HSPC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)和促红细胞生成素(EPO)分别诱导后,在培养过程第3天,7天和12天的CFU-GM、CFU-E集落生成情况。②采用实时荧光定量PCR技术(fluorogenic quantitative reserve transcription polymerize chain reaction,FQ-RT-PCR)检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。③结果用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量(2-△△Ct)表示HOXB6基因相对表达量。结果①人类造血干祖细胞向粒单系和红系祖细胞增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均表达。②随时间延长,CFU-GMHOXB6-mRNA在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱。而在CFU-E中,HOXB6-mRNA表达在第3天,第7天,第12天均持续表达。③与正常对照组比较,ATRA可上调HOXB6基因的表达。结论①在脐血CFU-GM、CFU-E祖细胞的不同增殖阶段,HOXB6基因呈现持续稳定的表达,提示HOXB6是人类造血干祖细胞向粒单系和红系祖细胞正常增殖分化过程中的调控基因之一。②ATRA能显著上调HOXB6基因的表达。

人类巨细胞病毒对粒单系祖细胞分化过程中HOXB6、A5基因的影响

目的探讨人类造血干细胞(HSPC)向粒单系(CFU-GM)增殖过程中HOXB6、A5基因的表达情况,及人类巨细胞病毒(HCMV)对其的影响。方法采用real-timePCR技术测定正常对照组与HCMV组HSPC向CFU-GM增殖过程中HOXB6、A5基因的表达水平。结果①HOXA5基因表达多为阴性,HOXB6基因在增殖过程的第3天开始表达,第7天增高,第12天显著降低(P<0.05)。②相对于正常组,HCMV感染组HOXB6基因表达下调(P<0.05)。结论HOXA5可能不是人类HSPC向CFU-GM增殖分化过程的主控基因;HOXB6是人类HSPC向CFU-GM定向分化的主控基因之一,其表达呈现时间规律性;HCMV干扰的细胞组HOXB6表达下调的同时,其细胞集落生成较正常组差。提示HCMV可能通过调控HOXB6基因表达异常,引起造血干细胞增殖分化异常。

经人巨细胞病毒感染人脐血造血干细胞向粒-巨噬系和红系祖细胞增殖过程中HOXB6-mRNA及其基因表达(英文)

背景：造血祖细胞被人巨细胞病毒（HCMV）感染后增殖和分化能力受到抑制是否与受染细胞增殖的基因异常表达有关联？目的：观察经人类巨细胞病毒感染的人类造血干祖细胞向粒-巨噬系、红系祖细胞增殖过程中HOXB6mRNA表达。设计：观察对比实验。单位：泸州医学院附属医院分子生物学实验室。材料：所有脐血标本由泸州医学院附属医院产科提供，取自正常足月顺产新生儿断脐后的胎盘段脐血。所有新生儿母亲HBSAg阴性，常规ELISA检测抗HCMV—IgM及PCR检测HCMV—DNA均为阴性，且对本实验知情同意，实验经过医院伦理委员会批准。HCMV—AD169株由中国预防医学科学院病毒研究所提供。全反式维甲酸（ATRA）为重庆华邦制药股份有限公司产品，批号为20010126。方法：实验于2006-04／2007—04在泸州医学院附属医院分子生物学实验室完成。分离脐血单个核细胞，进行造血祖细胞培养。根据实验干预方式不同将细胞分为4组：①对照组：与HCMV组等量的IMDM培养液进行细胞培养。②HCMV组：HCMV-AD169滴度为105pfu，以0．1mL感染培养体系。③ATRA组：在培养体系分组中加入12μL ATRA，终浓度为60μmol／L。④HCMV＋ATRA组：在HCMV感染组中加入ATRA，终浓度同ATRA组。主要观察指标：分别于培养后3，7，12天收获各组细胞，采用实时荧光定量PCR技术分别检测脐血粒-巨噬系祖细胞和脐血红系祖细胞HOXB6mRNA表达水平。结果：①对照组红系祖细胞和粒-巨噬系祖细胞均表达HOXB6-mRNA，随着时间推移，表达水平增加，其中，脐血红系祖细胞表达HOXB6-mRNA于第12天达高峰，脐血粒-巨噬系祖细胞HOXB6-mRNA于第7天达高峰。②HCMV组脐血粒巨噬系祖细胞、红系祖细胞感染人巨细胞病毒后各时间点HOXB6基因表达均低于对照组，差异有显著性意义（P〈0．05）。③ATRA组各时间点脐血粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞HOXB6-mRNA表达均高于对照组，差异有显著性意义（P〈0．05）。④HCMV＋ATRA组各时间点红系祖细胞及粒-巨噬系祖细胞的HOXB6-mRNA表达均高于人巨细胞病毒组，差异有显著性意义（P〈0．05～0．01）。结论：①人类造血干祖细胞向粒单系和红系祖细胞增殖分化过程中，HOXB6-mRNA呈现持续稳定的表达。②人巨细胞病毒能使HOXB6基因表达下调。③ATRA能上调HoXB6基因的表达。

全反式维甲酸对脐血粒-单系祖细胞HOXB6基因表达的影响

目的探讨脐血造血干祖细胞(HSPC)向粒-单系(CFU-GM)增殖过程中HOXB6mRNA表达及全反式维甲酸(ATRA)对HOXB6mRNA表达的影响。方法1.采用造血祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类造血干祖细胞,观察人脐血HSPC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导后,在培养过程第3天,7天和12天的CFU-GM集落生成情况。2.采用实时荧光定量PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。3.结果用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量(2-△△Ct)表示HOXB6基因相对表达量。结果1.人类造血干祖细胞向粒单系增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均表达;2.随时间延长,CFU-GM-HOXB6-mRNA在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;3.与正常对照组比较,ATRA可上调HOXB6基因的表达。结论1.在脐血CFU-GM祖细胞的不同增殖阶段,HOXB6基因呈现持续稳定的表达,提示HOXB6是人类造血干祖细胞向粒单系正常增殖分化过程中的调控基因之一;2.ATRA能显著上调HOXB6基因的表达。

As_2O_3对脐血红系祖细胞HOXB6基因表达的调控作用

目的:探讨脐血造血干祖细胞向红系祖细胞增殖过程中HOXB6mRNA表达及As2O3对HOXB6mRNA表达的影响.方法:①采用外培养技术,以As2O3干扰造血干祖细胞,观察HSPC经促红素诱导后,CFU-E集落生成情况.②采用实时荧光定量PCR技术检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达.结果:①造血干祖细胞红系祖细胞增殖过程中,各组细胞HOXB6基因均表达.②与正常对照组比较,As2O3可下调HOXB6基因的表达.结论:①HOXB6可能是造血干祖细胞向红系祖细胞增殖分化中的调控基因之一.②As2O3能下调HOXB6基因的表达.

HOXB6在裸鼠大肠癌肝转移模型抑癌机制的实验研究

目的研究HOXB6在裸鼠大肠癌肝转移模型抑癌机制及其前临床意义。方法采用基因重组质粒pc DNA6-HOXB6转染的HT29大肠癌细胞株建立裸鼠肝转移模型,随机分为两组,即HOXB6组和对照组。制模30 d后观察两组间转移瘤形成情况及生存情况。结果 HOXB6组平均体质量、肝质量、肝转移评分及血性腹水生成率明显低于对照组,差异均有统计学意义(分别为20.04 g与23.08 g,P<0.01;1.54 g与2.22 g,P<0.01;0.60与3.80,P<0.01;0与80.0%,P<0.05);两组生存曲线分析显示,HOXB6组生存率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HOXB6可抑制裸鼠大肠癌肝转移的形成,且可作为肿瘤转移的评判指标。

全反式维甲酸对脐血红系祖细胞增殖过程中HOXB6基因表达的影响

探讨脐血造血干祖细胞向红系增殖过程中HOXB6 mRNA表达及全反式维甲酸对HOXB6 mRNA表达的影响.采用体外培养技术,以全反式维甲酸持续干扰造血干祖细胞,观察集落生成情况,采用实时荧光定量PCR技术检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平,用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量表示HOXB6基因相对表达量.结果表明,人类造血干祖细胞向红系祖细胞增殖分化过程中,各祖细胞HOXB6基因均表达,与正常对照组比较,全反式维甲酸可上调HOXB6基因的表达,说明HOXB6可能是造血干祖细胞向红系祖细胞正常增殖分化过程中的调控基因之一.

胃癌HOXB6基因异常甲基化及其表达

目的检测胃癌组织中ＨＯＸＢ６基因是否存在异常甲基化，并探讨其与基因表达及临床因素的关系。方法用联合重硫酸盐限制性分析法（ＣＯＢＲＡ法）对７种胃癌细胞系和７３例胃癌患者的胃镜下活检组织进行ＨＯＸＢ６基因的甲基化定量检测，并采用逆转录聚合酶链反应方法检测基因的表达及脱甲基化处理后基因的再表达。结果７种胃癌细胞系中有４种异常甲基化，在异常甲基化的细胞系基因表达减少或消失，并且脱甲基化处理后基因可以重新表达。７３例胃癌患者的癌部位和非癌部位的活检组织中，２０例癌组织甲基化阳性（２７．４０％），而非癌组织中无１例阳性。结论胃癌中ＨＯＸＢ６基因的异常甲基化与基因表达抑制密切相关，并且脱甲基化后基因可以再表达；胃癌组织中ＨＯＸＢ６基因异常甲基化具有高度特异性，可作为肿瘤标志物用于临床诊断。

全反式维甲酸对脐血红系祖细胞HOXB6基因表达的调控作用

目的探讨脐血造血干祖细胞(HSPC)向红系(CFU-E)祖细胞增殖过程中HOXB6mRNA表达及全反式维甲酸(ATRA)对HOXB6mRNA表达的影响。方法1.采用造血祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类造血干祖细胞,观察人脐血HSPC经促红细胞生成素(EPO)诱导后,在培养过程第3天,7天和12天CFU-E集落生成情况。2.采用实时荧光定量PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。3.结果用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量(2-△△Ct)表示HOXB6基因相对表达量。结果1.人类造血干祖细胞向红系祖细胞增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均表达;2.随时间延长,CFU-E HOXB6-mRNA表达在第3天,第7天,第12天均持续表达;3.与正常对照组比较,ATRA可上调HOXB6基因的表达。结论1.在脐血CFU-E祖细胞的不同增殖阶段,HOXB6基因呈现持续稳定的表达,提示HOXB6是人类造血干祖细胞向红系祖细胞正常增殖分化过程中的调控基因之一;2.ATRA能显著上调HOXB6基因的表达。

造血干细胞分化过程中HOXB6基因表达及干预研究

目的探讨脐血造血干细胞(HSC)向粒-单系(CFU-GM)、红系(CFU-E)和淋巴系祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中HOXB6基因的表达情况及全反式维A酸(ATRA)对其的影响。方法1.采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类脐血造血干/祖细胞,观察HSC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)和植物血凝素(PHA)分别诱导后,在培养第3天、第7天和第12天的CFU-GM、CFU-E及CFU-TL集落生成情况。2.采用实时荧光定量RT-PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血干细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。结果1.人类造血干细胞向CFU-GM、CFU-E和CFU-TL增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均有表达。2.随时间推移,CFU-GMHOXB6 mRNA在增殖分化的第3天开始表达,第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;CFU-E HOXB6 mRNA表达在第3天、第7天和第12天均持续增强;而在CFU-TL中,HOXB6 mRNA表达在第7天最强烈,第12天表达减弱。3.与对照组比较,ATRA可上调各组HOXB6基因的表达。结论1.在人脐血CFU-GM、CFU-E和CFU-TL的不同增殖分化阶段,HOXB6基因呈现持续稳定的表达,提示HOXB6基因与人类造血干细胞增殖分化过程密切相关。2.HOXB6基因在人类造血干细胞向CFU-GM、CFU-E和CFU-TL的正常增殖分化过程中呈现时间上的规律性。3.低浓度(60μmol.L-1)的ATRA能显著上调HOXB6基因的表达。

HOXB6启动人胚胎干细胞向中胚层分化

HOXB6在胚胎发育过程中发挥重要作用,但在人胚胎干细胞中胚层分化中的作用尚不清楚。该研究利用人胚胎干细胞中胚层分化模型结合RNA-seq分析发现,HOXB6在中胚层分化过程中显著上调,敲降HOXB6的表达抑制人胚胎干细胞向中胚层分化,提示HOXB6在中胚层分化过程中发挥功能。通过建立HOXB6诱导性过表达的人胚胎干细胞株发现,HOXB6过表达抑制人胚胎干细胞多能性标志分子的表达,并且显著上调中胚层标志分子的表达。该研究表明,HOXB6单独过表达能够启动人胚胎干细胞向中胚层分化,为理解人类早期发育和建立人胚胎干细胞高效诱导分化体系提供了理论依据。

Isl1在后肢发育过程中的表达及作用

目的研究Isl1在后肢发育过程中的表达及作用。方法使用Isl1-nLacZ、Isl1-Cre、HoxB6-Cre和Isl1^(f/f)小鼠模型,以及X-gal染色、骨染色、组织分析方法研究Is1l在后肢发育过程中的表达及作用。结果随着小鼠后肢开始发育,在胚胎期第10.5天,Isl1在后肢原基高表达。在胚胎逐渐发育至胚胎期第12.5天的过程中,Isl1在后肢的表达逐渐下调。在胚胎期第12.5天,Isl1仅在后肢的最后部表达。但在胚胎期第13.5、15.5天,Isl1在后肢的后半部表达明显升高,主要在后肢骨骼肌细胞中表达。Isl1-Cre谱系研究显示,lsl1参与后肢的骨和骨骼肌细胞的形成。利用HoxB6-Cre在后肢中敲除Isl1可导致突变鼠后肢发育严重异常,伴有坐骨,耻骨,腓骨和跟骨及脚趾骨发育不良或缺失,突变鼠5号脚趾缺失最多见,而1号脚趾缺失累及较少。突变鼠后肢骨骼肌细胞的中央核比例远高于对照组。结论 Isl1在小鼠后肢发育过程中动态表达,参与后肢骨骼肌细胞和骨细胞的发育,对后肢发育过程中近一远和前后轴的建立起重要作用。

经人类巨细胞病毒感染的人脐血造血干细胞向淋巴系造血祖细胞增殖分化过程中同源盒b4、b6基因的表达

目的探讨经人类巨细胞病毒(HCMV)感染的人脐血造血干细胞(HSC)向淋巴系造血祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中同源盒(hox)b4、b6基因的表达。方法取健康母亲健康足月顺产儿断脐后的胎盘段脐血,采用造血祖细胞体外培养技术,分组以HCMV-AD169病毒液和(或)全反式维A酸(ATRA)持续干预,观察其不同时间点各组细胞集落生成情况,并在鉴定为CFU-TL集落细胞后不同时间点分别提取各组细胞核糖核酸(RNA)并检测其完整性;将提取到的总RNA反转录为互补脱氧核糖核酸,在不同时间点采用实时荧光定量反转录PCR(FQ-RT-PCR)技术检测各组hoxb4、hoxb6基因的表达。结果1.培养的集落细胞经瑞-姬染色法染色,鉴定为CFU-TL。2.各组所提取的RNA结构基本完整。3.人脐血HSC向CFU-TL增殖分化过程中(体外),各组hoxb4、hoxb6基因均有表达,且随培养时间推移,hoxb4基因表达的相对水平逐渐降低;而hoxb6基因表达的相对水平在培养第7天最高,第12天降低。4.与空白对照组比较,ATRA组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平显著增高,而HCMV组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平较低。5.与HCMV组比较,HCMV加ATRA组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平较高。结论1.hoxb4、hoxb6基因在人脐血HSC向CFU-TL增殖分化过程中(体外)均有表达,提示其均与淋巴系统造血密切相关。2.HCMV能下调CFU-TLhoxb4、hoxb6基因的表达(体外),提示HCMV可能通过调控hoxb4、hoxb6基因表达异常导致造血功能异常。3.ATRA能显著上调正常CFU-TLhoxb4、hoxb6基因的表达。

人类巨细胞病毒感染对脐血红系祖细胞同源盒B6基因表达的影响

目的研究脐血红系祖细胞的HOXB6基因的表达情况以及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对红系祖细胞的HOXB6基因表达的影响,以探讨HCMV导致脐血红系祖细胞损伤的机制。方法在泸州医学院附属医院儿科以实时荧光定量PCR技术(FQ-RT-PCR)检测人类巨细胞病毒感染和(或)用全反式维甲酸(ATRA)处理后HOXB6基因的表达水平。结果人脐血红系祖细胞可表达HOXB6基因;HCMV感染后,红系祖细胞HOXB6基因的表达明显下调;ATRA能显著上调红系祖细胞HOXB6基因的表达水平,且能够在一定时间内上调HCMV感染后的红系祖细胞HOXB6基因的表达。结论HCMV感染能诱导脐血红系祖细胞HOXB6的表达下调,HC-MV有可能通过调控HOXB6基因表达异常而引起红系祖细胞的增殖障碍。