幽门螺杆菌Hp1188蛋白的免疫保护效果

目的研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)重组Hp1188蛋白免疫反应性及口服免疫后对小鼠的保护效果,以探讨其在制备预防性疫苗中的价值。方法纯化H.pylori重组Hp1188蛋白,Western blot鉴定其免疫反应性。将纯化的重组Hp1188蛋白作为H.pylori抗原,ELISA法检测100例临床病例血清样本的相应抗体,并与尿素呼气试验(urea breath test,UBT)和快速尿素酶试验(rapid urease test,RUT)结果进行比较,评价其临床应用的可行性。将纯化的重组Hp1188蛋白免疫小鼠后,用H.pylori悉尼株1(Sydney strain 1,SS1)攻击感染,ELISA法检测小鼠血清和小肠黏液中抗Hp1188抗体(IgG、IgA和sIgA)产生情况;胃黏膜H.pylori培养、RUT、病理组织学检查观察H.pylori定植量及炎症情况。结果重组Hp1188蛋白纯化后纯度达90%,浓度为1.0 mg/mL。Western blot分析显示,该蛋白能被H.pylori患者血清识别。血清学结果显示,Hp1188抗体试剂检测的敏感性为93.8%,特异性为94.3%。经重组Hp1188蛋白免疫后,小鼠体内IgG、IgA、sIgA含量均明显高于PBS对照组(P<0.05),H.pylori活菌定植量、RUT及病理学检查指标均明显低于PBS对照组(P<0.05),对小鼠的保护率为70%。结论Hp1188蛋白对小鼠具有免疫保护作用,本研究为研制H.pylori相关疫苗提供了试验依据。

抗幽门螺杆菌HP1188蛋黄抗体的研究

目的制备抗幽门螺杆菌(H.pylori)HP1188蛋黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY),即HP1188-IgY,了解其理化特性和生物学活性,为研制H.pylori HP1188-IgY型抗体口服制剂提供实验依据。方法用纯化的重组HP1188蛋白免疫产蛋鸡,以水稀释法结合氯仿有机沉淀法提取蛋黄抗体(HP1188-IgY),采用SDS-PAGE电泳检测其纯度,Bradford法测定蛋白含量,Western blot分析抗原特异性。间接ELISA评价HP1188-IgY对热、酸及胃蛋白酶消化作用的耐受情况。分别检测不同浓度HP1188-IgY及不同pH相同浓度HP1188-IgY对H.pylori的生长抑制试验。用MTT法检测不同浓度HP1188-IgY对H.pylori细胞毒活性的中和作用。结果 HP1188-IgY纯度约为68%,蛋白浓度为7.79mg/mL,Western blot结果显示在相对分子质量30000附近出现反应条带。HP1188-IgY具有一定的耐热性、耐酸性和耐胃蛋白酶消化的能力。HP1188-IgY在体外可抑制H.pylori生长,并具有浓度依赖性和pH依赖性。HP1188-IgY能阻断H.pylori菌体蛋白对Hela细胞的毒性作用,且该作用具有浓度依赖性。结论成功制备了HP1188-IgY,其具有良好的理化性质和生物学特性,为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的口服制剂奠定了基础。

HP1188-IgY体内抗幽门螺杆菌感染的实验研究

目的研究抗幽门螺杆菌(H.pylori)HP1188蛋黄抗体(HP1188-IgY)在小鼠体内抗感染作用。方法用Western blot法分析HP1188-IgY抗原特异性。建立H.pylori感染Balb/c小鼠的动物模型,预防组在小鼠灌喂H.pylori菌液前灌喂不同剂量(1、3、5mg/mL)的HP1188-IgY,同时设PBS对照组、阴性对照组、阳性对照组。通过小鼠胃组织H.pylori培养、快速尿素酶实验和组织学检查观察H.pylori定植情况。结果 Western blot结果显示在相对分子质量30 000附近出现反应条带。阳性对照组8周后H.pylori的感染率为100%。HP1188-IgY剂量为3mg/mL和5mg/mL时,小鼠胃黏膜的H.pylori定植量减少,炎性反应减轻(P<0.05)。随HP1188-IgY剂量的增加,感染率降低。结论该实验成功制备了HP1188-IgY,在小鼠体内能阻止H.pylori的定植,为进一步制备预防H.pylori感染的口服制剂奠定了基础。

抗幽门螺杆菌黏附素蛋黄抗体与HP1188蛋黄抗体在小鼠体内防治幽门螺杆菌感染的比较

目的比较抗幽门螺杆菌黏附素(Helicobacter pylori adhesin A,HpaA)蛋黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY)(HpaA-IgY)及抗H.pylori HP1188 IgY(HP1188-IgY)在BALB/c小鼠体内预防和治疗H.pylori感染的最低浓度,并评价治疗效果。方法Western blot鉴定HpaA-IgY及HP1188-IgY抗原特异性。制备1×10^9 CFU/mL H.pylori菌液,将BALB/c小鼠随机分为阳性对照组(灌喂H.pylori菌液0.5 mL)、阴性对照组(以布氏肉汤替换H.pylori)、预防组(先灌喂1、3、5 mg/mL HpaA-IgY或HP1188-IgY及PBS各1 mL,再灌喂H.pylori菌液0.5 mL)、治疗组(先灌喂H.pylori菌液0.5 mL,再灌喂1、3、5 mg/mL HpaA-IgY或HP1188-IgY及PBS各1 mL)。处理完成后,取各组小鼠胃组织进行H.pylori培养、快速尿素酶试验(rapid urease test,RUT)及组织学检查,观察H.pylori定植及炎症反应情况。结果经Western blot分析,HpaA-IgY及HP1188-IgY分别与重组HpaA和HP1188蛋白发生特异性结合。阳性及PBS对照组小鼠感染率均为100%。与PBS对照组比较,5 mg/mL HpaA-IgY及3 mg/mL HP1188-IgY预防组和治疗组感染率均降低,RUT、H.pylori定植及炎症程度评分均显著降低(P均<0.05),均达到较理想的预防和治疗效果。结论HpaA-IgY及HP1188-IgY对感染H.pylori小鼠均有预防和治疗双重作用,剂量选择HP1188-IgY优于HpaA-IgY。本文为制备防治H.pylori感染的口服生物制品提供了参考。