血管紧张素Ⅱ上调连接子蛋白43(Cx43)促进人肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移

目的以人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)为研究对象,探讨连接子蛋白43(Cx43)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的细胞增殖、迁移的影响。方法体外培养的对数生长期HPASMC,分为对照组、AngⅡ处理组、AngⅡ联合二甲基亚砜(DMSO)处理组及AngⅡ联合坎地沙坦处理组。采用CCK-8法检测HPASMC增殖,TranswellTM小室检测HPASMC的迁移能力,划痕实验检测其迁移能力;Western blot法检测HPASMC的Cx43蛋白及其磷酸化、骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)、SMAD家族成员2(SMAD2)、SMAD3的蛋白水平。结果与对照组相比,AngⅡ处理组OPN、PCNA蛋白表达增加,细胞增殖和迁移能力增强;与AngⅡ处理组相比,AngⅡ联合坎地沙坦处理组细胞的增殖和迁移能力降低。与对照组相比,AngⅡ处理组Cx43蛋白及其磷酸化水平均明显增加,SMAD2、SMAD3的蛋白表达增加,而AngⅡ联合坎地沙坦组各蛋白表达较AngⅡ组均明显降低。结论AngⅡ上调Cx43蛋白的表达促进HPASMC增殖和迁移,可能与激活SMAD2/3信号通路有关。

吡咯野百合碱诱导的A549细胞激活TGF-β1/SMAD2/SMAD3通路促进人肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移

目的探讨A549细胞对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖迁移的影响及其机制。方法A549细胞培养组分为对照组、二甲基甲酰胺(DMF)溶剂组、吡咯野百合碱(MCTP)组、MCTP联合转化生长因子β(TGF-β)受体阻断剂苯甲酰胺(SB431542)组。A549细胞和HPASMC共培养组分为HPASMC对照组、A549细胞与HPASMC共培养组、MCTP刺激A549细胞与HPASMC共培养组、MCTP联合SB431542刺激A549细胞与HPASMC共培养组,IL-6刺激HPASMC阳性对照组。CCK-8法检测A549细胞的增殖活性,ELISA检测A549细胞培养上清液白细胞介素6(IL-6)的水平,反转录PCR检测A549细胞SMAD家族成员2(SMAD2)、SMAD3的mRNA水平,Western blot法检测各组A549细胞TGF-β1、SMAD2、SMAD3、磷酸化的SMAD2(p-SMAD2)、p-SMAD3蛋白水平,各共培养组HPASMC的骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白水平。Transwell^TM小室和划痕实验检测各共培养组HPASMC的迁移能力。结果在A549细胞培养组中,与对照组相比,经MCTP刺激A549细胞的增殖能力减弱,IL-6分泌量增加,TGF-β1、SMAD2、SMAD3、p-SMAD2、p-SMAD3蛋白表达增加;与单用MCTP组相比,MCTP联合阻断剂SB431542组A549细胞的增殖能力增加,IL-6分泌量减少,TGF-β1、SMAD2、SMAD3、p-SMAD2、p-SMAD3蛋白表达减弱。在共培养体系中,与HPASMC组相比,A549细胞与HPASMC共培养组细胞的迁移变化不明显,PCNA、OPN蛋白表达无明显变化;与HPASMC组相比,经MCTP刺激后的A549细胞和HPASMC共培养组HPASMC细胞迁移能力增加,PCNA、OPN蛋白表达增加;与MCTP刺激后的A549细胞和HPASMC共培养组相比,MCTP联合阻断剂SB431542刺激A549细胞和HPASMC共培养组迁移能力减弱,PCNA、OPN蛋白表达减弱;与HPASMC组相比,IL-6阳性对照组HPASMC细胞迁移能力增加,PCNA、OPN蛋白表达增加。结论MCTP诱导的A549细胞激活HPASMC的TGF-β1/SMAD2/SMAD3通路增加HPASMC的IL-6分泌,促进HPASMC的增殖和迁移。

大黄素阻断SMAD2/3信号通路抑制人肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移

目的探讨大黄素对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖、迁移的影响。方法体外培养HPASMC,取对数生长期的细胞,分为对照组、TGF-β1处理组、TGF-β1联合大黄素处理组。采用CCK-8法检测HPASMC活性,Transwell^(TM)小室实验和划痕实验检测HPASMC迁移能力;免疫荧光实验检测骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,Western blot法检测HPASMC的OPN、PCNA的蛋白水平及SMAD家族成员2(SMAD2)和SMAD3的磷酸化水平。结果与对照组相比,TGF-β1处理组的OPN、PCNA蛋白表达增加,HPASMC增殖和迁移能力增强,SMAD2、SMAD3的磷酸化增强。与TGF-β1组相比,TGF-β1联合大黄素处理组HPASMC的增殖和迁移能力降低,OPN、PCNA蛋白表达减少,SMAD2、SMAD3蛋白磷酸化明显降低。结论大黄素可抑制HPASMC中TGF-β1上调OPN、PCNA蛋白的表达,抑制TGF-β1诱导的PASMC增殖和迁移,可能与抑制SMAD2/3信号通路有关。