牙周炎伴口腔扁平苔藓中IL-17激活NF-kB调控hPDLFs促进MMPs的分泌

目的:探讨IL-17在人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中的表达对牙周炎伴口腔扁平苔藓患者中的作用及意义。方法:采用ELISA方法检测43例健康志愿者(对照组)和43例牙周炎伴口腔扁平苔藓患者(研究组)血清中IL-17蛋白表达水平及IL-17在研究组唾液中的表达水平;检测研究组牙周指标。CCK8法检测IL-17对hPDLFs细胞增殖能力的影响;qRT-PCR和ELISA方法分别检测IL-17对hPDLFs中MMP1,MMP2,MMP3和MMP9的mRNA及蛋白质表达水平影响。通过Western blot及ELISA检测IL-17对hPDLFs细胞中NF-kB P65蛋白磷酸化的影响及MMP1,MMP2,MMP3和MMP9的蛋白表达变化。结果:研究组血清IL-17水平明显高于对照组(P<0.05),唾液中IL-17水平与牙周破坏程度呈正相关。IL-17可促进hPDLFs中NF-kB P65蛋白磷酸化,并促进MMP-1,MMP-2,MMP-3和MMP-9 Mrna及蛋白的表达。结论:IL-17可通过激活NF-kB信号通路促进hPDLFs中MMP-1,MMP-2,MMP-3和MMP-9的分泌。

三种髓腔穿孔修复材料对人牙周膜成纤维细胞黏附及形态影响的体外研究

目的:研究3种常用髓腔穿孔修复材料对人牙周膜成纤维细胞附着、形态的影响。方法:在倒置相差显微镜下观察MTA、Z350纳米复合树脂、银汞合金对细胞形态的影响,并在扫描电镜下直接观察3种材料表面人牙周膜成纤维细胞的附着情况。结果:银汞合金对细胞形态的影响最大,材料周围的无细胞带面积最大(P<0.05),材料表面黏附细胞最少,大多数细胞皱缩,失去正常的细胞形态;Z350纳米复合树脂对细胞影响次之,少量细胞变圆;MTA对细胞形态的影响最小(P<0.05),与前两组相比,材料周围的无细胞带面积最小,材料表面黏附细胞多,形态良好。结论:MTA对人牙周膜成纤维细胞附着、形态影响明显小于Z350纳米复合树脂及银汞合金。

重建胶原纤维对细胞生长的影响

背景:胶原种类很多,而不同细胞只在特定类型的胶原环境中才表现出最佳的增殖和表型。目的:观察Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原对小鼠皮肤成纤维细胞、人牙周膜成纤维细胞和兔软骨细胞生长的影响。设计、时间及地点:对比观察,细胞学体外实验,于2007-09/2008-09在四川大学生物材料工程研究中心胶原研究室完成。材料:自制达到中试水平的猪皮Ⅰ型胶原和猪软骨Ⅱ型胶原。方法:分别将3种细胞在猪皮Ⅰ型胶原和猪软骨Ⅱ型胶原环境中进行体外培养,比较不同细胞在材料上的行为差异。主要观察指标:傅里叶变换红外光谱、示差扫描热分析和凝胶动力学分析比较2种胶原的热变性温度及在结构和性质上的差异;MTT法观察细胞在2种胶原环境中的黏附、增殖情况。结果:猪软骨Ⅱ型胶原和猪皮Ⅰ型胶原的热变性温度分别为105.8,87.5℃,2种胶原的官能团区相似。凝胶化曲线的对比中猪皮Ⅰ型胶原的成纤维过程较猪软骨Ⅱ型胶原迅速。MTT值显示细胞生长初期,小鼠皮肤成纤维细胞在软骨Ⅱ型胶原环境表现了较好的黏附性,但是更适于在猪皮Ⅰ型胶原上生长;人牙周膜成纤维细胞与小鼠皮肤成纤维细胞对胶原纤维的反应恰好相反。兔软骨细胞第2天在两种胶原上的黏附相似,第4天时在猪软骨Ⅱ型胶原环境中表现出较大的细胞生长密度。结论:不同细胞对Ⅰ,Ⅱ型胶原纤维表现了不同的时间依赖性,但猪软骨Ⅱ型胶原环境更接近于软骨生长的真实环境,更有利于软骨细胞朝特定方向分化,使软骨细胞维持稳定的表型。

高糖对人牙周膜细胞的生物学作用

目的:检测高糖环境对体外培养的人牙周膜细胞(hPDLF)增殖、总蛋白合成、碱性磷酸酶活性(ALP)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)和骨钙素(OCN)分泌的影响以及胰岛素在此过程中的调节作用,为探讨糖尿病型牙周炎的发病机制及治疗方法提供理论依据。方法:采用含不同糖浓度(5.5、15、25、35、45mmol/L)的培养基培养hPDLF,各组均采用胰岛素作为治疗对照。孵育24h后,采用CCK-8法检测不同糖浓度对细胞增殖的影响;同时检测其对细胞蛋白质合成、ALP活性、Col-Ⅰ和OCN分泌的影响。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:低浓度的葡萄糖对hPDLF增殖及其他生物学活性无显著影响,随浓度的增高,葡萄糖能够浓度依赖性抑制hPDLF的增殖,减少蛋白质合成及Col-Ⅰ分泌,抑制ALP活性及OCN分泌,这一效应可被胰岛素所抑制。结论:高糖可抑制hPDLF生物学活性,胰岛素能拮抗这种抑制作用。

内毒素对人牙周膜成纤维细胞超微结构的影响

具核梭杆菌和牙髓类杆菌100μg/ml浓度可使体外培养的人牙周膜成纤维细胞线粒体膜破裂、溶酶体膜受损、细胞出现大量空泡表明细胞功能受损。

米诺环素对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的:通过检测米诺环素对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)增殖、蛋白合成、Ⅰ型胶原分泌、碱性磷酸酶活性、骨钙素水平的影响,探讨米诺环素局部给药的效应浓度范围。方法:将不同浓度的米诺环素(0、10、20、40、100、200mg/L)分别作用于第5代(P5代)hPDLF,孵育1、4、7、10、14d后,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,以及对细胞碱性磷酸酶活性、蛋白质合成、Ⅰ型胶原分泌、骨钙素分泌的影响。实验结果采用SPSS13.0软件包进行分析。结果:10～200mg/L米诺环素显著促进P5代hPDLF的增殖活性(P<0.05),100mg/L为最大效应浓度;20～200mg/L明显促进P5代hPDLF蛋白质合成及Ⅰ型胶原分泌(P<0.05);10mg/L显著促进碱性磷酸酶活性(P<0.05),20～200mg/L显著抑制碱性磷酸酶活性(P<0.05);40～200mg/L显著抑制骨钙素分泌(P<0.05)。结论:在10～20mg/L的浓度范围内,米诺环素刺激P5代hPDLF细胞增殖,促进细胞分化,促进蛋白质合成,促进Ⅰ型胶原分泌,对hPDLF分泌骨钙素无抑制作用。10～20mg/L可作为米诺环素局部给药的效应浓度范围。

抑制Akt/PKB信号通路促进缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞凋亡

目的:研究Akt/PKB信号通路对缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)凋亡的影响。方法:用MTT法、流式细胞术、q RT-PCR、Western blot、Lipofectamin 2000转染技术等测定hPDLFs在常氧和缺氧条件下的细胞增殖率、凋亡率、Akt/PKB信号通路和HIF-1α的表达。结果:与常氧条件相比,缺氧显著提高HIF-1α的表达,抑制细胞增殖并促进其凋亡,同时抑制Akt/PKB信号通路。在缺氧的条件下,抑制Akt/PKB信号通路的表达能够且显著抑制hPDLFs的增殖并促进其凋亡。结论:抑制Akt/PKB信号通路能促进缺氧诱导的hPDLFs凋亡。

RAGE阻断剂FPS-ZM1对高糖环境人牙周膜成纤维细胞增殖、迁移的影响

目的:通过FPS-ZM1封闭RAGE功能,观察拮抗RAGE对于高糖环境下hPDLFs增殖、迁移的影响,探讨将RAGE作为药物靶点改善高糖环境下牙周膜损伤修复的可行性。方法:采用Western Blot检测高糖环境中hPDLFs细胞RAGE的表达,利用不同浓度FPS-ZM1体外培养hPDLFs细胞,分别通过CCK-8实验和划痕实验测定细胞的增殖能力和迁移能力。结果:高糖环境下hPDLFs的RAGE表达明显升高。FPS-ZM1对hPDLFs的增值有明显的促进作用,以250nM时促增值效果最好,且FPS-ZM1组细胞迁移能力大于无FPS-ZM1组。结论:在一定浓度范围内,FPS-ZM1能促进高糖环境hPDLFs的增殖和迁移。

橙油和桉树油溶剂对人牙周膜成纤维细胞增殖抑制作用的实验研究

目的:检测橙油和桉树油对人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)的增殖抑制作用。方法:通过组织块消化法获取并培养hPDLFs,应用倒置显微镜观察细胞形态;噻唑蓝方法检测不同浓度的橙油、桉树油及氯仿(阳性对照)对细胞增殖能力的影响。结果:浓度为0. 1%的橙油、桉树油及氯仿(对照)培养h PDLFs 1、6及12 h后,对其增殖能力无影响;浓度为1%的橙油、桉树油及氯仿对牙周膜成纤维细胞增殖有抑制作用,橙油抑制作用最低。结论:3种有机溶剂中橙油对h PDLFs增殖的影响最小。

白细胞介素17通过激活p38MAPK信号通路调控人牙周膜成纤维细胞RANKL和OPG的表达

目的使用p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂确定白细胞介素17(IL-17)是否通过该通路参与调控人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)和护骨因子(OPG)的表达。方法组织块法分离培养HPDLF,20 ng/mL IL-17分别刺激0、20、40、60、80 min,Western blot法检测HPDLF磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白水平。HPDLF随机分为空白对照组、二甲基亚砜(DMSO)组、p38MAPK抑制剂SB203580组、IL-17组、IL-17联合DMSO组、IL-17联合SB203580组。IL-17及联合处理组,分别添加10μmol/L SB203580、20 ng/mL IL-17。实时定量PCR检测HPDLF的RANKL、OPG mRNA水平,Western blot法检测RANKL蛋白水平、ELISA检测OPG蛋白含量。结果p-p38MAPK蛋白水平在IL-17刺激后的0~60 min内随时间增加,在60 min时达到最高,在80 min时下降。IL-17可上调HPDLF中RANKL mRNA及蛋白表达,下调OPG mRNA和蛋白表达。较单纯使用IL-17刺激,添加SB203580通路抑制剂后,RANKL mRNA和蛋白水平均降低,OPG的mRNA水平升高。结论IL-17通过激活p38MAPK信号通路,上调HPDLF的RANKL表达,抑制OPG mRNA表达。

骨形成蛋白2基因转染的人牙周膜成纤维细胞超微结构观察

目的 观察稳定表达骨形成蛋白 2 (bonemorphogeneticprotein 2 ,BMP 2 )的人牙周膜成纤维细胞 (humanperiodontalligamentfibroblasts ,HPDLFs)的超微结构。方法 用脂质体转染法将BMP 2表达载体转染至HPDLFs ,以原位杂交和免疫组化法检测BMP 2的稳定表达 ,透射电镜观察细胞的超微结构。结果 转染BMP 2基因的HPDLFs内质网池普遍扩张 ,细胞内基质膜泡和髓鞘样结构明显增加 ,细胞间广泛分布胶原原纤维。结论 转染BMP

Bio-Oss胶原牙周药物缓释支架的初步研究

目的:探讨以Bio-Oss胶原作为支架材料在牙周缓释药物中应用的生物基础。方法:将第4代人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)与Bio-Oss胶原进行体外复合培养,扫描电镜及激光共聚焦扫描显微镜观察细胞与材料的黏附情况。结果:HPDLFs黏附于Bio-Oss胶原支架材料上,细胞沿胶原纤维的方向充分伸展,并伸出伪足黏附、包绕纤维。部分复层细胞沿胶原孔隙内部生长,孔隙内有基质分泌。结论:体外培养的HPDLFs能在Bio-Oss胶原支架材料表面黏附并增殖,该复合体具有良好的生物相容性。