HPK1在乳腺癌组织中的表达及HPK1过表达对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响

目的:检测造血祖细胞激酶1(HPK1)在人非特异型浸润性乳腺癌组织及乳腺癌细胞中的表达,并构建HPK1慢病毒载体以探究HPK1过表达对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用Western blot检测48例乳腺癌组织和配对癌旁组织中HPK1蛋白的表达,采用Western blot、RT-PCR法检测正常乳腺上皮细胞(MCF10A)和乳腺癌MCF-7细胞中HPK1的表达水平。PCR扩增HPK1序列,构建慢病毒p CDH-HPK1-puro重组载体,包装病毒、转染MCF-7细胞(过表达组),以感染空载体病毒的MCF-7细胞作为对照组,分别采用Western blot、RT-PCR检测2组细胞HPK1的表达水平,MTT法检测细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果:与癌旁组织相比,HPK1蛋白在乳腺癌组织中低表达(P=0.036)。与MCF10A细胞相比,HPK1蛋白及mRNA在MCF-7细胞中低表达;与对照组相比,过表达组中HPK1蛋白及mRNA的表达水平上调,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,G0/G1期细胞比例升高(P均<0.05)。结论:HPK1在乳腺癌组织及细胞中低表达,HPK1过表达可抑制MCF-7细胞增殖和诱导凋亡,并使细胞周期阻断在G0/G1期。

HPK1过表达对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:构建造血祖细胞激酶1(HPK1)慢病毒载体,探讨HPK1过表达对乳腺癌MCF-7和MDAMB-231细胞增殖和凋亡的作用,阐明其可能的机制。方法:通过过表达HPK1的慢病毒感染细胞,获得稳定表达HPK1的细胞系(MCF-7-HPK1和MDA-MB-231-HPK1),将2个细胞系分别分为3组,即空白组、对照组(空载体组)和过表达组;分别采用RT-PCR法和Western blotting法检测乳腺癌细胞中HPK1mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Transwell法分析细胞的迁移能力,Western blotting法检测caspase 3、PTEN、MMP-9、MMP-2、Ki-67和HPK1蛋白表达水平。结果:与空白组和对照组比较,乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞过表达组中HPK1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞增殖率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),穿越Matrigel的细胞数明显减少(P<0.05),MCF-7细胞周期阻断在G1期;过表达组细胞中caspase 3、PTEN蛋白表达水平上调(P<0.05),MMP-9、MMP-2、Ki-67蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:HPK1过表达可抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖及迁移并诱导凋亡,其可能与caspase 3、PTEN蛋白的表达上调及MMP-9、MMP-2和Ki-67蛋白的表达降低有关。

乳腺癌中Kif2a、HPK1表达量与癌基因、耐药性基因表达的相关性

目的:探讨乳腺癌中Kif2a、HPK1表达量与癌基因、耐药性基因表达的相关性。方法:收集在本院接受手术治疗的乳腺癌患者91例、乳腺腺瘤组患者85例,分别留取术中乳腺癌组织、乳腺腺瘤组织作为研究标本。采用荧光定量PCR法检测标本组织中Kif2a、HPK1基因,癌基因及耐药性基因的表达量,采用Pearson检验评估乳腺癌组织中Kif2a、HPK1基因表达量与癌基因、耐药性基因表达量的内在联系。结果:乳腺癌组织中Kif2amRNA的表达量高于乳腺腺瘤组织,HPK1mRNA的表达量低于乳腺腺瘤组织;癌基因DEK、iASPP-SV、Stat3、MDM2、Fra-1mRNA的表达量高于乳腺腺瘤组织;耐药性基因ESR1、MDR1、P-gp、MRP1、GST-πmRNA的表达量高于乳腺腺瘤组织,BCRP mRNA的表达量低于乳腺腺瘤组织。相关性分析发现,乳腺癌组织中Kif2a、HPK1基因表达量与癌基因、耐药性基因的表达量直接相关。结论:乳腺癌组织中存在Kif2a基因异常高表达以及HPK1基因异常低表达,参与癌基因、耐药性基因表达的调控。

HPK1在缺血性脑损伤中的作用

目的观察HPK1对SD大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体细胞的作用。方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,缺血15 min后分别灌注30 min、3 h、6 h、24 h、3天和5天。大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、缺血/再灌注给药组和缺血/再灌注溶剂对照组。缺血/再灌注给药组再分为2组,分别脑室注射100 g/L的HPK1 AS-ODNs、HPK1 MS-ODNs,每24 h注射1次,连续3天,在最后一次注射24 h后行四动脉结扎全脑缺血。使用免疫沉淀和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡。结果在大鼠海马神经元中有HPK1的表达,脑室注射AS-ODNs大鼠海马CA1区存活锥体细胞明显增多。结论HPK1反义寡核苷酸对缺血/再灌注引起的海马神经元凋亡具有保护作用。

HPK1在缺糖缺氧诱导的大鼠海马神经元凋亡中的作用

目的观察造血祖细胞激酶1(HPK1)对缺糖缺氧(OGD)诱导的大鼠海马神经元凋亡的作用。方法采用细胞免疫荧光技术通过免疫荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察HPK1是否在大鼠脑细胞中存在;采用DAPI染色技术观察HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡的作用。结果在体外培养的原代大鼠海马神经元中有HPK1的表达。HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡具有保护作用,并有剂量依赖性。结论HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡具有保护作用。

Correlation of Kif2a and HPK1 expression in breast cancer with the oncogene and drug resistance gene expression

Objective: To investigate the correlation of Kif2a and HPK1 expression in breast cancer with the oncogene and drug resistance gene expression. Methods: A total of 91 patients with breast cancer and 85 patients with breast adenoma who accepted surgical treatment in our hospital between August 2016 and February 2018 were selected, and the breast cancer tissues and breast adenoma tissues were collected respectively as the research samples. Fluorescence quantitative PCR method was used to detect the expression of Kif2a and HPK1 genes as well as oncogenes and drug resistance genes in sample tissues, and Pearson test was used to evaluate the inner link of Kif2a and HPK1 gene expression in breast cancer tissue with oncogene and drug resistance gene expression. Results: Kif2a mRNA expression in breast cancer tissues was higher than that in breast adenoma tissues whereas HPK1 mRNA expression was lower than that in breast adenoma tissues;oncogenes DEK, iASPP-SV, Stat3, MDM2 and Fra-1 mRNA expression were higher than those in breast adenoma tissues;drug resistance genes ESR1, MDR1, P-gp, MRP1 and GST- mRNA expression were higher than those in breast adenoma tissues whereas BCRP mRNA expression was lower than that in breast adenoma tissues. Correlation analysis showed that the Kif2a and HPK1 gene expression in breast cancer tissues were directly correlated with the expression of oncogenes and drug resistance genes. Conclusion: Kif2a gene is abnormally highly expressed whereas HPK1 gene is abnormally lowly expressed in breast cancer tissues, and they are involved in the regulation of oncogene and drug resistance gene expression.

HPK1在肿瘤和免疫中的研究进展

造血祖细胞激酶1 (hematopoietic progenitor kinase 1,HPK1)又名有丝分裂原激活蛋白激酶1(mitogenactivated protein kinase kinase kinase kinase 1,MAP4K1),是一种以ATP或其他核苷酸作为磷酸供体的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。HPK1参与T细胞、B细胞和树突状细胞介导的多种细胞免疫应答,在机体免疫应答中发挥重要作用。研究发现HPK1与自身免疫性疾病和肿瘤的发生发展密切相关,有望对治疗自身免疫性疾病、肿瘤转移、复发提供新靶点。本文将从HPK1蛋白的分子结构、生物学功能及肿瘤免疫过程进行综述。

造血祖细胞激酶1蛋白激酶在肿瘤中的研究进展

造血祖细胞激酶1(hematopoietic progenitor kinase 1,HPK1),也称MAP4K1,是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是哺乳动物Ste20相关蛋白激酶MAP4K家族的一员。近来研究发现,HPK1与多种肿瘤的发生、进展有关联,在一些恶性肿瘤中可能起重要作用。该文对HPK1信号通路、与肿瘤的关系以及药物研发进展做一综述,为HPK1蛋白激酶的研究提供参考。

小分子抑制剂SYH2040Y的比格犬药动学研究

目的:研究新型HPK1(造血祖细胞激酶1)抑制剂SYH2040Y在比格犬体内不同剂量下单次给药后的药动学特征和绝对生物利用度。方法:将比格犬随机分为4组,每组6只,雌雄各半,经单次灌胃(0.2、0.5、1.5 mg·kg^(-1))和静脉注射(0.2 mg·kg^(-1))给药后,分别在不同时间点收集血浆样品,采用经验证的HPLC-MS/MS方法测定其浓度,并使用Phoenix WinNonlin 8.3.5软件非房室模型计算主要的药动学参数。结果:该方法的线性范围为1.00~1000 ng·mL^(-1),批内和批间精密度试验的RSD均小于8.6%,批内和批间准确度在96.4%~104.3%,提取回收率、基质效应和稳定性均满足相关要求。犬体内试验结果显示,比格犬灌胃给予低、中、高3个剂量后,血浆中SYH2040Y的AUC0-t分别为(85.39±48.63)、(228.19±69.27)、(749.43±171.61)h·ng·mL^(-1),Cmax分别为(26.93±7.46)、(68.16±15.31)、(174.33±65.21)ng·mL^(-1),t_(max)分别(0.92±0.20)、(1.16±0.41)、(1.83±1.17)h,t_(1/2)分別为(2.93±1.49)、(2.46±0.85)、(2.20±2.21)h。结论:建立的方法简单、高效、灵敏,经测定单次给药后,SYH2040Y在比格犬体内吸收迅速,血药浓度呈现剂量依赖性,在各剂量下,其平均绝对生物利用度为43.9%,可为后续临床试验的推进及设计提供数据支持。