调味品中罗丹明B的HPLC-FLD-DAD测定方法研究

建立了高效液相色谱(HPLC)-荧光检测器(FLD)-二极管阵列检测器(DAD)测定调味品中罗丹明B的方法。不同基质样品采用适宜的提取液提取后,以甲醇和0.02mol/L的乙酸铵溶液(70∶30)为流动相,经C18色谱柱分离,用荧光-二极管阵列检测器串联测定,FLD激发波长为547nm,发射波长为573nm,DAD检测波长为550nm,外标法定量。实验结果表明:罗丹明B用FLD检测在1～2000ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,定量限为0.005mg/kg;DAD检测在100～2000ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,定量限为0.5mg/kg。方法回收率在83.1%～105.1%之间,RSD为1.64%～5.42%(n=6)。该方法准确、灵敏,前处理简单,适用于调味品中罗丹明B的定性、定量分析。

HPLC-FLD法测定丹参素在家兔组织中的分布

目的：建立高效液相色谱-荧光检测（HPLC-FLD）分析方法，测定丹参素在家兔心、肝、脾、肺、肾、脑各组织中的含量．方法：家兔经丹参药材水提液灌胃后，其重要脏器的匀浆液以100mL／L高氯酸沉淀，上清液乙酸乙酯萃取，以4-羟基苯甲酸为内标，测定丹参中丹参素在组织中的含量．结果：HPLC-FLD法的检测限为0．01μg／mL，线性范围为0．05～200．00μg／mL；丹参中丹参素在家兔心、肝、脾、肺、肾、脑组织中的含量顺序为C肾〉C肝〉C心〉C肺〉C脑〉C脾．结论：建立的HPLC-FLD检测法具有特异性强，灵敏度高和定量准确等特点，可为其他样品中丹参素的测定提供参考．

HPLC-FLD法同时测定连翘不同部位中5种活性成分

目的：建立测定连翘不同部位中松脂醇β－D葡萄糖苷、表松脂醇β－D葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素和连翘酯苷5种成分的高效液相荧光定量方法（ HPLC －FLD ）。方法：采用色谱柱 Dima C18（4.6mm ×250mm，5μm），流动相甲醇（A）－水（B）梯度洗脱系统，流速1．0mL／min。木脂素类成分荧光检测激发波长为270nm，发射波长为340nm；咖啡酸苯乙醇苷类成分激发波长为320nm，发射波长为460 nm。结果：5种成分均达到基线分离，各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系（ r＞0．998）；回收率在95．68％～102．59％。结论：连翘不同部位中5种成分的定性定量测定方法准确、灵敏、实用，为连翘的质量评价提供理论依据。

HPLC-FLD法测定复方五指毛桃颗粒中补骨脂素的含量

目的建立高效液相荧光检测(HPLC-FLD)法测定复方五指毛桃颗粒中补骨脂素的含量。方法采用YMC-Pack-AM色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(34∶66),等度洗脱;流速为1.0 m L·min^(-1);FLD检测器的激发波长(Ex)为247 nm,发射波长(Em)为441 nm;柱温为30℃。结果补骨脂素进样量在3.117 0~2 992.200 0 ng(r=0.999 8)范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率为99.77%(n=9),RSD为1.38%。结论本研究所建立的HPLC-FLD法简便、准确、稳定,可用于复方五指毛桃颗粒中补骨脂素的含量测定,为复方五指毛桃颗粒的质量评价提供了参考。

HPLC-FLD法测定犬血中盐酸哌唑嗪的浓度

目的:建立测定犬血中盐酸哌唑嗪浓度的高效液相色谱法,以进行哌唑嗪制剂的犬生物利用度研究。方法:取犬血浆0.5mL,加2mol·L^(-1)氢氧化钠溶液100μL,加内标100μL(20.0μg·mL^(-1)奎宁溶液),混匀,然后加入乙醚3 mL,涡旋振荡、离心,分出有机相,40℃水浴氮气流吹干,用流动相100μL溶解残渣,取上清液20μL进行 HPLC 分析。流动相为 pH 3.6醋酸-醋酸钠缓冲液-乙腈(70:30),流速为1.0 mL·min^(-1),色谱柱为迪马公司 Diamond C_(18)柱(250mm×4.6mm,4.0μm),柱温20℃。荧光激发波长为258nm,荧光发射波长为387nm。结果:犬血浆中杂质不干扰样品的测定,犬血浆中哌唑嗪浓度在1.0～1000.0 ng·mL^(-1)范围内线性关系好(r=0.9998);最低检测浓度为1.0 ng·mL^(-1);方法的平均相对回收率大于90%;平均提取回收率高于80%;日内和日间 RSD 均小于10%。结论:所建立方法准确可靠,符合生物样品分析要求。

HPLC-FLD快速测定大豆中的多环芳烃

建立了大豆中多环芳烃的快速检测方法。采用乙腈-四氢呋喃(1+1)提取大豆中的多环芳烃,并用高效液相色谱-荧光光谱(HPLC-FLD)法测定多环芳烃含量。方法检出限和定量限分别为0.07～0.61μg/kg和0.27～2.04μg/kg,线性范围为2～200μg/kg,回收率在81.7%～96.5%之间,相对标准偏差在2.10%～10.44%之间。

HPLC-FLD法测定不同产地林蛙卵和林蛙油中雌二醇的含量

目的建立HPLC-FLD法测定林蛙卵和林蛙油中雌二醇的含量。方法采用Extend C_(18)(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-水(55∶45,V/V);流速为1.0 mL·min^(-1);柱温为40℃;荧光检测器激发波长为282 nm,发射波长为315 nm;进样量为20 μL。结果雌二醇质量浓度在0.22~21.68 μg·mL^(-1)内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999);精密度、重复性和稳定性均良好(RSD<2.0%),平均加样回收率为100.4%(RSD为1.4%)。结论该方法操作简单、准确、易重复,可用于林蛙卵和林蛙油中雌二醇的含量测定。

HPLC-FLD测定小鼠肝肿瘤组织中羟基喜树碱两种构型的浓度

目的研究羟基喜树碱两种构型在肿瘤组织中的分布和比例关系。方法采用HPLC-FLD法,内标法测定。结果肿瘤组织中羟基喜树碱与内标喜树碱峰分离良好,内源性杂质不干扰样品峰的测定,酯型羟基喜树碱的最低检测浓度为2ng·mL-1,浓度范围在2.6～2600ng·mL-1间呈线性相关,相关系数r=0.9993,样品的加样回收率分别为96.04%～98.58%,日内和日间变异均小于10%。结论本方法具有专属性,灵敏,可靠,能够满足肿瘤组织中羟基喜树碱药动学及相关研究的需要。

HPLC-FLD法测定北细辛药材中甲基丁香酚的含量

目的建立HPLC-FLD法测定北细辛中甲基丁香酚含量的方法。方法采用Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈为流动相A,0.1%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱;激发波长为270 nm;发射波长为312nm;流速为1.0 mL/min;柱温为30℃;进样量为20uL。结果甲基丁香酚浓度在1.01~101μg/mL范围与峰面积呈良好的线性关系,线性方程Y=4500X-1010.1,r=0.9997。精密度稳定性、重复性试验RSD值均≤2%,平均加样回收率为98.44%,RSD值为1.87%。结论本实验所建立的方法简便快捷、精密度和准确度高、测定结果稳定可靠,适用于北细辛药材中甲基丁香酚的定量分析。

HPLC-FLD法测定血浆中阿仑膦酸钠的浓度及药代动力学研究

目的建立血浆中阿仑膦酸钠的HPLC-FLD检测方法,并应用于药动学研究。方法采用Kromasil-C18柱（4.6 mm×150 mm,5μm）;流动相：甲醇-乙腈-柠檬酸-焦磷酸钠体系;流速：1.5 ml·min^-1;柱温：35℃;激发波长：（λex）=260 nm,发射波长：（λem）=310 nm。24名健康男性志愿者单剂量口服阿仑膦酸钠片,测定血浆药物浓度,计算药代动力学参数。结果阿仑膦酸钠在1~100 ng·ml^-1范围内线性关系良好（r=0.9999）,最低定量限为1 ng·ml^-1。阿仑膦酸钠的专属性强,日内、日间精密度和准确度良好。结论本文研究建立了阿仑膦酸钠在血浆中HPLC-FLD的检测方法,该方法灵敏、准确,可用于临床药动学及生物等效性研究。

RP-HPLC-FLD法测定盐酸氟桂利嗪片中盐酸氟桂利嗪的含量及含量均匀度

目的 RP-HPLC-FLD法测定盐酸氟桂利嗪片中盐酸氟桂利嗪的含量及含量均匀度.方法 采用DiamonsilTM C18柱（250mm×4.6mm,5μm）,以甲醇：0.02mol·L-1磷酸二氢铵（0.1%三乙胺,磷酸调pH至3.0）（70：30）为流动相,流速为1mL·min-1,激发波长260nm,发射波长310nm,柱温为25℃,进样体积10μL.结果 盐酸氟桂利嗪在6.1～122ng（r=0.9992）范围内呈良好的线性关系;平均回收率为100.07%（RSD=1.38%）;LOD和LOQ分别为2.44ng、8.13ng;3批样品的含量均匀度：A＋1.8S分别为5.644、4.194、7.160,均小于15.结论 该方法快速、准确,无内源物质干扰,可为盐酸氟桂利嗪片的质量标准的建立与完善提供科学依据,并指导临床合理用药.

RP-HPLC-FLD法测定盐酸氟桂利嗪片中盐酸氟桂利嗪的含量及含量均匀度

目的：运用反相高效液相色谱联合荧光检测器法测定盐酸氟桂利嗪片中盐酸氟桂利嗪的含量及含量均匀度。方法：采用DiamonsilTMC18柱（250mm×4.6mm，5耻m）．以甲醇：0．02mol／L磷酸二氢铵（0．1％三乙胺，磷酸调pHi3．0）（70：30）为流动相．流速为ImL／min，激发波长260nm．发射波长310nm，柱温为25℃，进样体积10μL，进行了方法学考察和盐酸氟桂利嗪的含量及均匀度测定。结果：盐酸氟桂利嗪在6．1～122ng（r=0．9992）范围内呈良好的线性关系．平均回收率为100．07％（RSD=1．38％）：LOD（1imit of detection）和LOQ（1imit of quantification）分别为2．44ng、8．13ng；盐酸氟桂利嗪片三批样品的平均标示量分别为98．27％、98．79％、99．89％，其含量均匀度A＋I．8S分别为5．644、4．194、7．160，均小于15。结论：该方法快速、准确，无杂质干扰．可为盐酸氟桂利嗪片的质量标准的建立与完善提供科学依据并指导临床合王早用药．

HPLC-FLD法同时测定丁酸氯维地平及其代谢物

研究丁酸氯维地平脂微球(CDB-LM)注射液在小鼠体内的药代动力学过程,探讨丁酸氯维地平(CDB)在体内的代谢规律。采用HPLC-FLD法同时测定CDB及其代谢物氯维地平酸(MI)在小鼠全血样品中的浓度。色谱柱Waters C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液(2∶1∶2);FLD检测波长:激发波长358 nm,发射波长440 nm。采用DAS 2.0软件分析计算出CDB和MI的药代动力学参数,所得参数采用PASW Statistics 18软件进行统计分析。结果表明,CDB和MI的半衰期分别在4 min和20 min左右。低剂量组和高剂量组的药代动力学参数依次为:CDB的CL为4.21和2.72 L·min-1·kg-1,AUC0-t为3.86和6.43 mg/L·min,MRT0-t为7.09和6.17 min。MI的CL为0.34和0.22 L·min-1·kg-1,AUC0-t为52.23和74.90 mg/L·min,MRT0-t为201.24和217.33 min。采用乙腈沉淀蛋白法处理全血样品,操作简单快速,全血中内源性杂质无干扰,方法准确可靠。体内研究结果表明,建立的HPLC-FLD法简便、灵敏,可同时测定CDB和MI的血药浓度。高、低两剂量组的血药浓度-时间曲线趋势相同,CDB在体内迅速代谢为MI。

柱前衍生HPLC-FLD法测定人血浆中羧甲司坦

目的:建立血浆样品中羧甲司坦的柱前衍生 HPLC—FLD 测定法。方法:色谱柱:Agilent C_(18),(5μm,4.6 mm×150mm);柱温:30℃;流动相:0→25 min,A～B(89:11),A:40 mmol·L^(-1)磷酸二氢钠水溶液(1 mol·L^(-1)氢氧化钠调 pH 为7.8),B:甲醇-乙睛-水(45:45:10);25→32 min A 为100%;32→40 min,A—B(89:11);流速:0.8 mL·min^(-1);检测波长:激发波长338 nm,发射波长450 nm;进样量:2.0 μL,柱温30℃。结果:最低检测限为0.1018μg·mL^(-1);线性范围为0.1018～13.00μg·mL^(-1)(r=0.9999);低、中、高3种浓度日内(n=6)、日间(n=8)RSD 分别为4.0%,2.0%,0.7%和4.2%,2.6%,0.7%;3种浓度的绝对回收率分别为92.4%,97.2%,99.4%,RSD 分别为2.4%,1.3%,0.59%;相对回收率分别为96.96%,100.45%,100.35%,RSD 分别为2.91%,2.21%,0.50%。结论:本法准确、灵敏、易于操作,可用于羧甲司坦的体内分析及临床药学研究。

HPLC-FLD法测定人血浆中马来酸氟吡汀浓度及其生物等效性研究

目的建立高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)测定马来酸氟吡汀的血药浓度,并使用该方法评价2种马来酸氟吡汀胶囊在健康人体的生物等效性。方法采用随机、开放、两周期交叉、单次口服给药的单中心试验设计。24例健康男性受试者单次口服试验制剂或参比制剂的马来酸氟吡汀0.1 g,测定其血药浓度,计算药物动力学参数并进行生物等效性评价。结果在0.023 4～1.50 mg·L-1马来酸氟吡汀浓度与峰面积线性关系良好。试验制剂与参比制剂血浆中马来酸氟吡汀的tmax为(2.0±0.8)和(2.0±1.2)h;Cmax为(1.11±0.28)和(1.25±0.29)mg·L-1;t1/2为(8.6±2.3)和(8.0±1.1)h;AUC0～t为(9.18±2.14)和(9.11±2.31)mg·h·L-1;AUC0～∞为(9.70±2.20)和(9.62±2.29)mg·h·L-1。分别以AUC0～t和AUC0～∞计算,相对生物利用度为(99.54±11.11)%和(99.52±9.63)%。结论 HPLC-FLD法可用于测定血浆中的马来酸氟吡汀浓度;马来酸氟吡汀的两制剂具有生物等效性。

氟虫腈亚砜荧光衍生化、HPLC-FLD检测方法的建立及应用

建立了氟虫腈代谢物-氟虫腈亚砜的柱前荧光衍生化方法,并将其应用于鸡蛋中的残留检测。优化后的柱前荧光衍生化反应主要条件如下:催化缩合剂为EDC/DMAP;反应溶剂为二氯甲烷;氟虫腈亚砜与荧光衍生试剂的用量比为1:8;45℃水浴中反应75 min。衍生产物为N-(3-氰基-1-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)-4-((三氟甲基)硫代)-1H-吡唑-5-基)-4-(2-(9-乙基-9H-咔唑-3-基)-1H-菲并[9,10-d]咪唑-1-基)丁酰胺(DX1),具有很高的荧光强度。衍生化产物DX1的高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FLD)的主要条件如下:C_(18)色谱柱;等度洗脱;流动相:乙腈/水(80/20,v/v);流速:1.0 mL/min;λex=310 nm,λem=404 nm;进样量20μL;柱温40℃。在上述检测条件下,氟虫腈亚砜HPLC-FLD检测方法的检测限为0.033μg/L,定量限为0.092μg/L。在此基础上,建立了鸡蛋残留氟虫腈亚砜提取和检测的HPLC-FLD方法,检测限和定量限分别达到了0.052和0.132μg/kg,精密度、稳定性和重现性在保留时间和峰面积上的RSD分别小于0.04%和2.7%,上机检测可在20 min内完成。该方法具有较好的灵敏度、精确性和可靠性,可应用于鸡蛋中残留氟虫腈亚砜的检测。

应用HPLC-FLD法测定食品中的糖精钠

目的：建立一种准确测定食品中糖精钠的方法.方法：采用HPLC-FLD法测定.结果：糖精钠的最低检测限为1.1 ng,回收率为97%,浓度为0.005～0.20 mg/ml时线性良好.结论：方法简单灵敏、准确度高,更适于糖精钠的测定.

牛血浆中乙酰氨基阿维菌素HPLC-FLD检测方法的建立

为了研究乙酰氨基阿维菌素(eprinomectin, EPR)缓释注射液在牛体内的药代动力学情况,试验建立了检测牛血浆中EPR浓度的高效液相色谱荧光(HPLC-FLD)法,并进行了系统的方法学验证,向空白牛血浆样品中加入内标阿维菌素(AVM),用乙腈沉淀蛋白质,再用固相萃取柱进行净化,洗脱液浓缩至干后以N-甲基咪唑和三氟乙酸酐对EPR及AVM进行衍生化,采用HPLC-FLD法进行检测。该检测方法所用色谱柱为Elite Hypersil ODS(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相为甲醇∶乙腈∶水=64∶32∶4;流速为1 mL/min;柱温为35℃;荧光检测器激发波长为365 nm,发射波长为463 nm。结果表明:建立的HPLC-FLD检测方法中EPR的保留时间为8.076 min, AVM保留时间为12.922 min。检测限为0.5 ng/mL,定量限为1 ng/mL。血浆样品中EPR浓度在1~100 ng/mL之间时,血浆药物浓度与峰面积之比呈良好的线性关系,线性方程为y=0.912x+0.924,相关系数(R2)为0.994 7。准确度为80.79%~119.20%,批内相对标准偏差为2.02%~11.87%,批间相对标准偏差为4.16%~10.83%。不同储存条件下血浆样品中EPR稳定性良好,符合生物样品分析的具体要求。说明试验建立的HPLC-FLD法操作简便,灵敏度高,干扰少,适用于牛血浆中EPR的检测。

油菜蜂花粉超临界提取物HPLC-FLD分析及体外清除自由基活性研究

本实验通过柱前荧光衍生HPLC-FLD对油菜蜂花粉超临界提取物(Rape bee pollen supercritical fluid extract,PSFE)中的主要成分进行了定性及定量分析,并采用超氧阴离子自由基(O-·2)体系、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)体系和羟基自由基(·OH)体系考察了PSFE提取物的体外清除自由基活性。结果表明,PSFE中含有丰富的游离脂肪酸,其中饱和脂肪酸占总游离脂肪酸的58%,不饱和脂肪酸占42%,尤其是不饱和脂肪酸C18∶3的含量最高,达到了10933.69μg/g。同时,PSFE对O-·2、DPPH·和·OH这三种典型的自由基均具有不同程度的清除作用,其中对DPPH·的清除能力高于阳性对照物L-抗坏血酸,并且随浓度的增大清除效果更显著,最高可达60.29%;而对O-·2和·OH的清除效果在实验浓度范围内最高可分别为11.99%和7.59%,比阳性对照物低。

基于HPLC-FLD靶向分析古茶树游离氨基酸积累特征

游离氨基酸是贡献茶汤鲜味的主要物质。乔木型和灌木型古茶树茶鲜叶经红茶加工工艺制成的干茶,其鲜味特征突出,但目前对古茶树茶鲜叶及制成的干茶中游离氨基酸的积累特征尚不清楚。本研究基于高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)结合化学计量学方法靶向分析乔木型、灌木型古茶树及福鼎大白茶鲜叶和干茶样品中18种游离氨基酸含量。结果表明,茶鲜叶和干茶样品中茶氨酸含量最高,且在乔木型和灌木型古茶树鲜叶中存在显著差异;干茶中鲜味氨基酸含量减少,甜味和苦味氨基酸含量变化不明显。主成分分析结果显示,茶鲜叶样品游离氨基酸含量聚类明显,而干茶则呈现重叠或分散特征。不同树型古茶树鲜叶游离氨基酸积累存在差异,加工可改变游离氨基酸代谢,促进红茶品质形成。